人肌肌酸激酶胍变性时的失活与构象变化的比较研究

应用二阶导数光谱、紫外差吸收光谱和荧光光谱等监测手段,研究了人肌肌酸激酶在盐酸胍溶液中的构象变化。二阶导数光谱结果表明,若以6M盐酸胍中肌酸激酶酪氨酸残基的暴露程度为100％,则天然酶酪氨酸残基的暴露程度只有2％。而紫外差吸收光谱和荧光光谱的变化与兔肌肌酸激酶的结果相似。比较不同胍浓度下人肌肌酸激酶的失活与构象变化,表明酶的失活先于构象变化。同时还测定了不同浓度胍溶液中人肌酶的失活与构象变化的速度常数。结果表明以几种方法测定的构象变化均为单相的一级过程,而酶的失活却呈现了由快慢两相组成的一级反应过程。比较同浓度胍溶液中的失活速度与构象变化速度,发现酶失活的快相反应速度常数比构象变化的速度常数大1—2个数量级,慢相速度常数与构象变化速度常数相近。上述结果进一步支持了酶的活性部位构象柔性的观点。     

青蛙的发生

本文的叙述适用于一般蛙的发生;不过其中提到胚的长度和某些器官发生的开始时期,在19毫米胚长以前,多半是用黑斑蛙做根据,而且有不少地方是根据我们自己的材料,因为对黑斑蛙的发生,我们已积累了一些不完全的记录. 在教学上用蛙卵做脊椎动物发生的观察材料,是最合适的,因为它的主要发生过程可以代表一般脊椎动物;而且有些地方是很典型的,例如原肠形成,神经管形成等;明白了蛙的发生     

PAR对氨基酰化酶不可逆抑制动力学研究

本文将邹氏的在酶的活性修饰剂存在下的底物反应动力学理论应用于氨基酰化酶被金属螯合剂PAR脱锌而失活的动力学研究。通过对不同浓度的PAR存在下底物反应过程和含有PAR的不同浓度的底物中酶促反应的分析,讨论了PAR对氨基酰化酶的脱锌机制。这一过程很可能按如下机制进行:首先,PAR与酶分子活性部位的锌结合,形成一复合物,这一步是较快的反应,然后发生一个可逆的构象变化,最后是不可逆的去锌步骤。锌的存在显然稳定了酶活性部位的构象,而这正是酶活性所必需的。     

一种热稳定的人胎盘源促细胞生长因子

胎盘细胞中含有丰富的生物学活性物质.通过在 90℃温度下酸性介质抽提、乙醇沉淀、DE-52阴离子交换层析、高效液相色谱层析,从人胎盘组织中分离纯化得到一种热稳定的小分子量促细胞生长因子.该物质对人羊膜细胞、小鼠成纤维细胞、小鼠骨髓瘤细胞等多种细胞有较高的刺激生长活性.这种物质被称为人胎盘源促细胞生长因子Ⅰ(Human Placental Growth Factor-I,简称HPGF-1),它是一种分子量为1900的肽类物质,是由一条含有10个氨基酸残基的肽链和非肽部分组成的化合物.肽链部分的分子量为1195,其氨基酸组成已被测定,N-末端残基为 Phe.非肽部分的分子量为692. 该因子的等电点为6.8.     

DTNB对人肌肌酸激酶不可逆抑制作用的研究

本文研究了DTNB对人肌肌酸激酶的不可逆抑制作用.研究结果表明,与兔肌肌酸激酶不同,人肌肌酸激酶分子中有四个可反应SH.用邹承鲁作图法定量处理结果表明,在这四个可反应的SH中,有一个快反应SH,两个慢反应SH且这两个慢反应SH是酶的必需基团,此外还有一个反应很慢的SH.用邹承鲁提出的在抑制剂存在条件下,酶活性不可逆改变动力学方法,测定了一系列动力学常数,并对DTNB的作用机制进行了探讨.     

胍和脲溶液对氨基酰化酶活性和构象的影响

 本文研究了不同浓度盐酸胍和脲溶液对猪肾氨基酰化酶活性和构象的影响。研究结果表明,在低浓度的胍和脲溶液中(小于2mol/L),酶分子的整体构象变化的程度与活力变化的程度基本是平行的;而在高浓度的胍和脲溶液中(2mol/L以上),失活程度稍大于构象变化的程度。这些结果与分子量和亚基组成基本相同,但不含金属配基的肌酸激酶的结果,以及小分子量的胰凝乳蛋白酶和牛胰核糖核酸酶的结果相比较来看,可以认为配基锌离子的存在对酶分子的活性部位区域构象的稳定作用有一定的贡献,致使氨基酰化酶的活性部位的构象状态不象后三种酶那样脆弱。同时,我们还发现锌离子的存在对酶分子整体构象的稳定性上贡献很小。     

肌酸激酶在低浓度脲溶液中失活也非二聚体解聚所致

本文用兔肌肌酸激酶(MM)和兔脑肌酸激酶(BB)杂化的方法;研究了肌酸激酶在脲溶液中的解聚情况.结果表明在低浓度的脲溶液中二聚体没有或者很少解聚,而此时酶已经失去大部分或全部活性.因此可以认为在低浓度脲溶液中酶的失活也非二聚体解聚所致,进一步支持了酶分子活性部位柔性的观点.     

肌酸激酶在低浓度脲溶液中失活也非二聚体解聚所致

本文用兔肌肌酸激酶(MM)和兔脑肌酸激酶(BB)杂化的方法;研究了肌酸激酶在脲溶液中的解聚情况.结果表明在低浓度的脲溶液中二聚体没有或者很少解聚,而此时酶已经失去大部分或全部活性.因此可以认为在低浓度脲溶液中酶的失活也非二聚体解聚所致,进一步支持了酶分子活性部位柔性的观点.     

氨基酰化酶Ⅰ的必需半胱氨酸巯基

本文用DTNB和IAM修饰了猪肾氨基酰化酶Ⅰ的半胱氨酸巯基,用Koshland和邹承鲁作图法定量处理的结果都表明,酶分子中有二个巯基为酶的必需巯基。