淡色库蚊敏感品系与敌百虫抗性品系乙酰胆碱酯酶同工酶在发育过程中的变异

本文从电泳和酶活力两个方面观察和分析了淡色库蚊(Culex pipiens pullens Coq.)的敏感品系(SEN)和敌百虫抗性品系(RD)的AchE同工酶在整个发育过程中不同性别及身体不同部位产生的变异,从中获得了一些颇有意义的结果。 1.从SEN品系与RD品系AchE同工酶在整个发育过程中的比较发现,AchE质和量上的变异与敌百虫抗性的产生密切相关。 2.一切品系的各个发育阶段,在凝胶相同的位置上都有一条相同的AchE酶带,这是主带。 3.在SEN品系和RD品系的雌成蚊中,有一条活力很高的AchE慢带,此带仅在雌成蚊的胸部存在,显示了性别和部位差异,称它为特征性慢带。此带的活力,RD品系高于SEN品系。 4.以三带喙库蚊(Culex tritaeniorhychus)的敏感品系及其抗双硫磷品系与淡色库蚊作比较,发现其雌、雄成蚊中除共有的主带外,还有一条较主带稍慢的AchE带,此带相当于淡色库蚊雌成蚊中的特征性慢带,但不存在性别差异,此带的泳动速度要略快于特征性慢带。 5.雌成蚊胸部的特征性慢带轻胰蛋白酶的限制性处理后,泳动位置发生改变,变动后的新位置恰与三带喙库蚊慢带的位置相同。两种库蚊在进化上似乎存在着某种联系。位移后的特征性慢带活性未变。 6.用伴性红眼区分幼虫性别后发现,淡色库蚊不同性别的幼虫和蛹,都存在1—3条向正极移动但活     

二化螟对杀螟硫磷产生抗性的机理

本文就二化螟Ckilo suppressalis Walker对杀螟硫磷抗性发生的机理进行了较为全面的研究。活体增效作用研究表明,脱叶磷(DEF)和氧化胡椒基丁醚(PBO)对抗性种群可分别增效1.3和34.8倍。这表明了多功能氧化酶(MFO)活性增强,而似乎与水解酶的活性无关。对寓体解毒酶的进一步研究表明,抗性和敏感种群的非特异性酯酶活力无明显差异,但羧酸酮酶(CarE,加入10^-4mol/L的毒扁豆碱)和MFO的活力在抗性种群中有所增高。R种群幼虫CarE活力分别是s的2.42和2.92倍(以a-和β-乙酸萘酯为底物);R种群幼虫MFO的O-脱甲基作用的活力为s幼虫的1.43倍(以对硝基茴香醚为底物);R幼虫乙酰胆碱酯酶(AChE)对乙酰胆碱的活力是s的1.3倍,两者相差不大。但从米氏常数K_m)和最大反应速度(V_max)看,R幼虫是s幼虫的1.9和1.6倍;以对氧磷为抑制剂的R幼虫150是s幼虫的2倍。这些表明了R和s的AChE是不同的。研究结果还表明,二化螟对杀螟硫磷抗性的机理至少包括：(1)CarE活性的增高;(2)MFO的O-脱甲基活力的增高和(3)AChE敏感性的降低等。     

二化螟对杀螟硫磷产生抗性的机理

本文就二化螟Ckilo suppressalis Walker对杀螟硫磷抗性发生的机理进行了较为全面的研究。活体增效作用研究表明,脱叶磷(DEF)和氧化胡椒基丁醚(PBO)对抗性种群可分别增效1.3和34.8倍。这表明了多功能氧化酶(MFO)活性增强,而似乎与水解酶的活性无关。对寓体解毒酶的进一步研究表明,抗性和敏感种群的非特异性酯酶活力无明显差异,但羧酸酮酶(CarE,加入10^-4mol/L的毒扁豆碱)和MFO的活力在抗性种群中有所增高。R种群幼虫CarE活力分别是s的2.42和2.92倍(以a-和β-乙酸萘酯为底物);R种群幼虫MFO的O-脱甲基作用的活力为s幼虫的1.43倍(以对硝基茴香醚为底物);R幼虫乙酰胆碱酯酶(AChE)对乙酰胆碱的活力是s的1.3倍,两者相差不大。但从米氏常数K_m)和最大反应速度(V_max)看,R幼虫是s幼虫的1.9和1.6倍;以对氧磷为抑制剂的R幼虫150是s幼虫的2倍。这些表明了R和s的AChE是不同的。研究结果还表明,二化螟对杀螟硫磷抗性的机理至少包括：(1)CarE活性的增高;(2)MFO的O-脱甲基活力的增高和(3)AChE敏感性的降低等。     

淡色库蚊对敌百虫的抗药性研究——抗性谱及联合作用

1973年采集于上海闸北区的淡色库蚊幼虫在室内以敌百虫选育抗性品系(RD品系)获得成功,F₁₂代的LC₅₀已为室内正常品系(SEN)的240多倍。RD品系的抗性谱表明,对有机磷杀虫剂均具有不同程度的交互抗性;对有机氯如DDT、丙体666和氨基甲酸酯类等杀虫剂无明显的交互抗性;对天然除虫菊和拟除虫菊酯类有低度的负交互抗性。并测定了29种药剂与敌百虫混用对RD品系和SEN品系的增效作用。还测定了对敌百虫有较高交互抗性的杀虫剂分别与TPP,TOCP、稻瘟净、异稻瘟净和增效醚混用后的增效作用。     

乙酰胆碱酯酶敏感性的变化与家蝇抗药性的关系

结合抗性机理, 对四个家蝇(Musca domestica vicina)品系头部的乙酰胆碱酯酶(AchE)对底物和抑制剂反应的动力学进行了研究.结果表明, AchE敏感性的降低是引起两个有机磷药剂(OP)抗性品系DDVP-R和Trichl-R对OP交互抗性的一个主要因子.Trichl-R对二氯苯醚菊酯无抗性, 而二氯苯醚菊酯抗性品系2Cl—R对所测定的OP有负交互抗性, 并且它的AchE对OP的敏感性较正常品系(NP)AchE的敏感性要高.AchE敏感性的变化, 反应在酶结构上, 主要是酶对抑制剂的亲和性(K_d)的变化, 而磷酸化速率(K₂)影响不大.同时对AchE的底物和抑制剂结合位点及结构变化进行了分析和探讨.     

可见分光光度法测定人尿中痕量1-萘酚

目的:建立一种可见分光光度法单独测尿中痕量1-萘酚的新方法。方法:在碱性介质中,1-萘酚（1-NAP）与氯霉素作用生成蓝色物质导致体系的吸光度增加,2-NAP不干扰测定。结果:该蓝色产物的最大吸收波长λmax=472.0nm,其吸光度与1-NAP摩尔浓度在7.64×10^-7mol/L～6.31×10^-4mol/L范围内线性关系良好,线性回归方程为△A=0.3146C+0.0239,相关系数r=0.9973,检出限为2.29×10^-7mol/L,相对标准偏差RSD为3.25%～6.42%,加标回收率为95.3%～105.7%。结论:本方法灵敏、简单、快速、易于推广,用于人尿中1-NAP含量的单独测定结果满意。     

北方温带森林不同海拔梯度土壤碳矿化速率及酶动力学参数温度敏感性

采集长白山脉龙岗支脉老秃顶子南坡3个不同海拔梯度森林(岳桦林、针阔混交林、红松林)土壤,进行室内温度梯度培养试验,研究土壤碳矿化速率(C_min)和土壤β-1,4-葡萄糖苷酶(β_G)动力学参数及温度敏感性.结果表明： 海拔和温度对C_min均有显著影响,3种森林土壤C_min均随着培养温度升高而增加,且岳桦林土壤C_min最高.3种森林土壤碳矿化速率温度敏感性\[Q₁₀(C_min)\]大小为岳桦林>红松林>针阔混交林,但差异不显著.3种森林土壤β_G动力学参数最大反应速率(V_max)和米氏常数(K_m)均随培养温度升高而增加,V_max的温度敏感性\[Q₁₀(V_max)\]为1.78～1.90,K_m的温度敏感性\[Q₁₀(K_m)\]为1.79～2.00.岳桦林Q₁₀(V_max)/Q₁₀(K_m)值显著高于红松林和针阔混交林,表明高海拔岳桦林土壤有机碳水解酶动力学参数受温度升高影响最大.     

几种杀虫剂对棉铃虫头部酯酶的联合抑制作用

测定了几种药剂及其组合对棉铃虫Helicoverpa armigera头部酯酶活性的独立与联合抑制作用。结果显示：久效磷、敌百虫、呋喃丹对酯酶活性抑制中浓度分别为:2.4443×10^-6、3.4562×10^-7、2.6302×10^-5mol/L。药代动力学分析结果显示:久效磷与呋喃丹对酯酶抑制方式为竞争性抑制,敌百虫为非竞争性抑制。久效磷+敌百虫与敌百虫+呋喃丹两种药剂组合处理后,对酯酶抑制均增强,抑制中浓度分别为:1.0846×10^-6、5.1786×10^-6mol/L,对酯酶的抑制作用属非竞争性抑制作用。而久效磷+呋喃丹组合对酯酶抑制活性相加,为竞争性抑制作用。结果说明杀虫剂与酯酶的药代动力学互作对混剂的酯酶的抑制作用方式和活性具有重要影响。     

氯氰菊酯异构体对黑胸大蠊神经钠钾通道的调制作用

用电生理油间隙、单纤维、电压钳位技术研究了氯氰菊酯顺、反异构体对黑胸大蠊[Periplaneta fulginosa(Serville)]中枢神经大轴突钠通道的调节抑制作用,并探讨了反式异构体与钾通道的作用关系.结果证明:1.2×10^-3mol/L顺式异构体作用于钠通道,先使其开放,然后抑制.2.出现钠尾电流,表明有更多数量的钠通道处于开放状态.3.5.4×10^-4mol/L反式异构体可阻滞迟缓钾通道并降低钾电流I_K的峰值.     

淡色库蚊中抗性相关羧酸酯酶的纯化及其生化性质

在库蚊Culex pipiens品系中,非专一性酯酶活性的升高是对有机磷杀虫剂产生抗性的重要机理之一。应用SDS/PAGE,比较淡色库蚊Culex pipiens pallens抗敌百虫品系(RD)、敏感型品系(S)和抗苄呋菊酯品系(PY)中可溶性总蛋白质带型,显示RD中含有一条特异蛋白带,其它两个品系中未检出。在RD成虫匀浆液总蛋白中含量高达2.1%。分子量测定为66 kD。应用柱层析法分离得到了较纯的纯品。以α-NA为底物测得K_m=64.1 mmol/L,V_max=249.8 mmol/(L·mg·min)。与羧酸酯酶相比较：其K_m值小于已报道的抗性品系及非抗性品系A-酯酶和B-酯酶。V_max值比已报道抗性品系A-酯酶低,比B-酯酶高。较高浓度的敌百虫并不能抑制其酶活,属于A-酯酶。在昆虫体内可能主要通过结合隔离作用(sequestration)提高昆虫对有机磷的耐受性,对有机磷杀虫剂水解作用的可能性也不能排除。     

马拉硫磷和敌百虫混用和轮用的研究:淡色库蚊的酯酶同功酶与抗性的关系

用马拉硫磷和敌百虫单独处理30代和31代的淡色库蚊,见到对马拉硫磷和敌百虫的抗性分别为敏感品系的286和303倍,而以马拉硫磷和敌百虫轮用(32代)和混用(31代)处理的品系对马拉硫磷和敌百虫的抗性均在70倍以下。 离体酶的活性测定和酯酶同功酶的酶谱分析均表明,抗性品系体内羧酸酯酶活力高于敏感品系;酸性磷酸酯酶和乙酰胆碱酯酶的活力两者差异不显著,可见马拉硫磷和敌百虫的抗性主要和羧酸酯酶活力的增长有关。     

杀虫双和杀螟丹选育对小菜蛾抗药性的形成及其抗性机制

用杀虫双和杀螟丹在实验室以点滴法处理小菜蛾Plutella xylostella L.四龄幼虫,以连续继代药剂淘汰选育其抗药性。至35代,药剂汰选的小菜蛾对杀虫双和杀螟丹的抗药性较选育前正常品系分别提高了51倍和25倍。其抗药性的形成发展均呈S形,可认为已成为抗性品系。以有机磷、氨基甲酸酯、拟除虫菊酯及有机氮等11种杀虫剂测试抗杀虫双小菜蛾品系和抗杀螟丹小菜蛾品系对常用药剂的敏感度结果表明：对杀虫双、杀螟丹和杀虫环之间有较严重的正交互抗性;对敌敌艮、马拉硫磷和杀螟松有轻微交互抗性产生;对溴氰菊酯、氯氰菊酯、氯菊酯和灭多威、久效威等药剂更加敏感,呈负交互抗性。用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)法测定表明,抗药性产生与特异性酯酶的形成有一定关系。用比色法和酸度法测定,抗性品系的乙酰胆碱酯酶(AchE)活性降低,羧酸酯酶(CarE)活性无差异。加增效剂Pb和SV₁：于四龄幼虫表皮,对抗杀虫双小菜蛾晶系分别有6.28及1.45倍的增效作用;对抗杀螟丹小菜蛾品系分别有4.85及1.39倍的增效作用,可见多功能氧化酶(MFO)为小菜蛾抗杀虫双和抗杀螟丹的重要因子。     

抗有机磷三带喙库蚊的酯酶研究

本文主要利用聚丙烯酰胺凝胶电泳及离体酶学技术研究抗有机磷三带喙库蚊(Culex tritaeniorhynchus Giles)与各种水解酶系的关系.结果表明:三带喙库蚊抗性品系的羧酸酯酶活性明显高于敏感品系.此外,酯酶同功酶谱显示抗性品系有一染色很深的高活性羧酸酯酶带E₄,而胆碱酸酶活性测定结果表明抗性与敏感品系无明显差异.因此本实验证明,该蚊对有机磷杀虫剂之所以产生高度抗性.其主要原因与羧酸酯酶的活力增加有关.这和我们生物测定结果完全一致.     

羧酸酯酶和酸性磷酸酯酶在抗有机磷和敏感淡色库蚊发育期的变化

本文研讨羧酸酯酶(CarE)和酸性磷酸酯酶(ApE)在抗马拉硫磷(RM)、抗敌百虫(RD)和敏感(s)品系淡色库蚊Culex pipiens pallens不同发育期中的变化,以及某些杀虫剂和抑制剂对α-醋酸萘酯羧酸酯酶(α-NA CarE)的抑制作用。RD和s品系不同发育期的ApE变化情况如下:(1)RD和S品系间无明显差异;(2)幼虫发育期的ApE水平较低,而在变态期的ApE活性突然上升为最高,表明ApE可能参与蚊虫的发育和分化。RM、RD和S品系的CarE水平在幼虫期随虫龄增长而增高。RM和S品系的CarE活性比维持在20—35倍,RD品系在10—25倍,但三个品系的CarE活性在变态期突然下降。新羽化成蚊的CarE活性出现一个很高的峰。羽化后十天内CarE活性有一定的波动,十天后CarE活性逐渐下降,但仍高于幼虫期和蛹期。此外还讨论了对氧磷、敌敌畏、速灭威、毒扁豆碱、TPP和异稻瘟净对RM、RD和S品系α-NA CarE的抑制作用。     

Susceptibility and detoxifying enzyme activity in two spider mite species (Acari: Tetranychidae) after selection with three insecticides

Changes in the susceptibility and detoxifying enzyme activity were measured in laboratory strains of Banks grass mite, Oligonychus pratensis (Banks), and twospotted spider mite, Tetranychus urticae Koch, that were repeatedly exposed to three insecticides. Three strains of each mite species were exposed to one of two pyrethroids, bifenthrin, and lambda-cyhalothrin, or an organophosphate, dimethoate, for 10 selection cycles at the LC60 for each insecticide. A reference or nonselected strain of each mite species was not exposed to insecticides. After 10 cycles of exposure, susceptibility to the corresponding insecticides, bifenthrin, lambda-cyhalothrin, and dimethoate, decreased 4.5-, 5.9-, and 289.2-fold, respectively, relative to the reference strain in the respective O. pratensis strains, and 14.8-, 5.7-, and 104.7-fold, respectively, relative to the reference strain in the respective T. urticae strains. In the bifenthrin-exposed O. pratensis strain, there was a 88.9-fold cross-resistance to dimethoate. In the dimethoate-exposed T. urticae strain, there was a 15.9-fold cross-resistance to bifenthrin. These results suggest that there may be cross-resistance between dimethoate and bifenthrin. The reduced susceptibility to dimethoate remained stable for three months in the absence of selection pressure in both mites. The decrease in susceptibility in the O. pratensis strains exposed to bifenthrin, lambda-cyhalothrin, and dimethoate was associated with a 4.7-, 3.0-, and 3.6-fold increase in general esterase activity, respectively. The decrease in susceptibility in the T. urticae strains exposed to bifenthrin and lambda-cyhalothrin was associated with a 1.3- and 1.1-fold increase in general esterase activity, respectively. The mean general esterase activity was significantly higher in the pyrethroid-exposed O. pratensis and T. urticae strains than in the nonselected strain. There was no significant increase in esterase activity in the dimethoate-exposed T. urticae strain. The decrease in susceptibility to insecticides was also associated with reduced glutathione S-transferase 1-chloro-2, 4-dinitrobenzene conjugation activity, but this did not appear to be related to changes in insecticide susceptibility. These results suggest that in these mites, the general esterases may play a role in conferring resistance to pyrethroids. However, some other untested mechanism, such as target site insensitivity, must be involved in conferring dimethoate resistance.     

菜蚜茧蜂对甲胺磷和灭多威的抗性机制

采用试管药膜法测定了菜蚜茧蜂 Diaeretiella rapae 对甲胺磷和灭多威的抗性及增效剂的增效作用,并测定了菜蚜茧蜂和菜缢管蚜 Lipaphis erysimi 乙酰胆碱酯酶动力学参数、解毒酶活性及增效剂对菜蚜茧蜂酶活性的体内抑制作用。福州地区菜蚜茧蜂已对甲胺磷和灭多威产生5.6和9.1倍的抗性,胡椒基丁醚、磷酸三苯酯和马来酸二乙酯对两种杀虫剂的抗性品系均有显著增效作用,胡椒基丁醚的作用最为显著。胡椒基丁醚对抗性菜蚜茧蜂杀虫剂敏感性的增效作用远高于对敏感菜蚜茧蜂的影响。3种增效剂对菜蚜茧蜂乙酰胆碱酯酶均无抑制作用;磷酸三苯酯和胡椒基丁醚对羧酸酯酶,马来酸二乙酯对谷胱甘肽S转移酶有显著抑制作用。抗性和敏感菜蚜茧蜂乙酰胆碱酯酶的米氏常数K_m）、最大反应速度（V_max）、羧酸酯酶及谷胱甘肽S转移酶活性值相近,但敏感菜蚜茧蜂乙酰胆碱酯酶的双分子速度常数（K_I）值远高于抗性的。此外,对菜蚜茧蜂和菜缢管蚜乙酰胆碱酯酶、羧酸酯酶和谷胱甘肽S转移酶进行了比较研究。结果表明菜蚜茧蜂对甲胺磷和灭多威的低水平抗性与乙酰胆碱酯酶的不敏感性及解毒酶的解毒代谢有关。     

Esterase B1 activity variation within and among insecticide resistant, susceptible and heterozygous strains of Culex quinquefasciatus (Diptera: Culicidae)

Amplification of the esterase B1 gene of Culex quinquefasciatus Say results in high titers of an esterase enzyme that confers resistance to organophosphate insecticides. Esterase activity of individuals was measured in samples from an organophosphate resistant strain (Tem-R), a susceptible strain (S-Lb), and their reciprocal F1 progeny. Within-strain variation, as measured by coefficients of variation, was fairly consistent between sexes within strains and among strains (average, 12%). On average, individuals from the Tem-R strain had about 120 times the esterase activity of individuals from the S-Lab strain. The mean esterase activities of the F1 strains were significantly higher than the average of the Tem-R and S-Lab strain mean esterase activities, suggesting enhanced expression of the amplified esterase B1 genes in F1 individuals. Reciprocal F1 strains did not differ significantly in esterase activity or resistance, indicating that maternal effects do not influence either of these measures in these strains. The levels of esterase activity of the strains are discussed in relation to their resistance.     

Mechanisms of insecticide resistance in the aphid Nasonovia ribisnigri (Mosley) (Homoptera: Aphididae) from France.

Nasonovia ribisnigri, a main pest of salad crops, has developed resistance to various insecticides in southern France, including the carbamate pirimicarb and the cyclodiene endosulfan, two insecticides widely used to control this aphid. Here we have investigated the mechanisms of resistance to these two insecticides by studying cross-resistance, synergism, activity of detoxifying enzymes, and possible modifications of the target proteins. Resistance to pirimicarb was shown to be mainly due to a decreased sensitivity of the target acetylcholinesterase; this modification conferred also, resistance to propoxur but not to methomyl and the two tested organophosphates (acephate and paraoxon). Endosulfan resistance was associated with a moderate level of resistance to dieldrin, and resistance to both insecticides was due, in part, to increased detoxification by glutathione S-transferases (GST). The endosulfan resistant strain displayed the same amino acid at position 302 of the Rdl gene (GABA receptor) as susceptible aphids (e.g. Ala), indicating that the Ala to Ser (or to Gly) mutation observed among dieldrin resistant strains of other insect species was not present.