苹果蠹蛾8个烟碱型乙酰胆碱受体基因的克隆与生物信息学分析

烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptors,n AChRs)能够快速介导胆碱能突触传递,并在许多认知功能障碍性疾病的过程中发挥作用。昆虫的烟碱型乙酰胆碱受体是新烟碱类等杀虫剂的重要作用靶标,而且靶标抗性是昆虫产生抗药性的一个重要机制。本文利用生物信息学结合现代分子生物学技术,以新疆石河子地区的苹果蠹蛾种群为材料,克隆获得了8个烟碱型乙酰胆碱受体n AChR亚基基因的c DNA全长序列,并对这8个亚基基因的序列进行了生物信息学分析。研究结果有助于进一步深入解析苹果蠹蛾对新烟碱类杀虫剂的靶标抗性机制,进而为开发新型靶标药剂提供科学依据和理论基础。     

淋巴细胞上的非神经性乙酰胆碱系统

尽管乙酰胆碱作为神经递质存在于哺乳动物神经系统中的事实已广为人知,但近年来在淋巴细胞等非神经性组织和细胞中也发现了乙酰胆碱。淋巴细胞具备一个独立的非神经性乙酰胆碱系统,包括:乙酰胆碱、胆碱酯酶、胆碱乙酰转移酶、毒蕈碱乙酰胆碱受体和烟碱能乙酰胆碱受体等组分。免疫系统与淋巴细胞胆碱能系统之间可以相互作用。免疫刺激后的淋巴细胞可增强胆碱能系统的表达;激活后的乙酰胆碱受体参与淋巴细胞的免疫调节。淋巴细胞上胆碱能系统的这些发现将为相关疾病的研究和寻找有效的防治药物提供新的研究思路。     

淋巴细胞上的非神经性乙酰胆碱系统

尽管乙酰胆碱作为神经递质存在于哺乳动物神经系统中的事实已广为人知,但近年来在淋巴细胞等非神经性组织和细胞中也发现了乙酰胆碱。淋巴细胞具备一个独立的非神经性乙酰胆碱系统,包括:乙酰胆碱、胆碱酯酶、胆碱乙酰转移酶、毒蕈碱乙酰胆碱受体和烟碱能乙酰胆碱受体等组分。免疫系统与淋巴细胞胆碱能系统之间可以相互作用。免疫刺激后的淋巴细胞可增强胆碱能系统的表达;激活后的乙酰胆碱受体参与淋巴细胞的免疫调节。淋巴细胞上胆碱能系统的这些发现将为相关疾病的研究和寻找有效的防治药物提供新的研究思路。     

一氧化氮和烟碱型乙酰胆碱受体在大鼠学习记忆中的联合作用

本文旨在探讨一氧化氮(NO)和烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptor,nAChR)在大鼠学习记忆过程中的相互作用。大鼠侧脑室注射NO前体左旋精氨酸(L-Arg)(L-Arg组)或α7nAChR激动剂氯化胆碱(choline chloride,CC组),以及联合注射L-Arg和氯化胆碱(L-Arg+CC组),和先给予α7nAChR拮抗剂甲基牛扁亭(methyllycaconitine,MLA)再联合注射L-Arg和氯化胆碱(MLA+L-Arg+CC组)、先给一氧化氮合酶抑制剂Nω-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)再联合注射L-Arg和氯化胆碱(L-NAME+L-Arg+CC组),侧脑室注射生理盐水(NS组)作为对照。用Y型迷宫刺激器检测大鼠的学习和记忆行为能力;用NO试剂盒、免疫组织化学和Western blot分别检测大鼠海马NO含量和α7nAChR及神经元型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,nNOS)的表达。结果显示,L-Arg+CC组与L-Arg或CC组比较,Y迷宫学习和记忆行为能力均明显增强,同时大鼠海马NO含量、nNOS和α7nAChR表达的光密度值均明显增多;而MLA+L-Arg+CC或L-NAME+L-Arg+CC组与L-Arg+CC组相比较,大鼠学习和记忆行为能力明显减弱,并且海马NO含量及nNOS和α7nAChR的表达均降低。以上结果表明,侧脑室联合应用L-Arg和氯化胆碱可明显提高其单独应用时的大鼠海马NO含量及nNOS和α7nAChR表达,并增强大鼠学习和记忆行为能力;而提前阻断α7nAChR或抑制nNOS后,其联合应用L-Arg和氯化胆碱的效应也得到了抑制。因此推测,NO和nAChR在学习记忆中可能存在着相互协同作用。     

α7烟碱型乙酰胆碱受体在胆碱能抗炎通路中的作用机制及应用现状

胆碱能抗炎通路是一条神经-免疫调节通路,以中枢神经系统的迷走神经为起点,以神经递质乙酰胆碱为基础,以免疫细胞膜表面的α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7 nicotinic acetylcholine receptor, α7 nAChR)为关键作用位点。其中,电信号与化学信号相互转化,激活JAK-STAT3、PI3K-Akt等信号通路,抑制NF-κB的核转位,进而抑制促炎因子的释放,促进抑炎因子的释放,调节和控制机体的炎症,具体的作用机制正在研究中。研究表明,可以通过使用药物激活α7 nAChR和电刺激迷走神经这2种方法,激活胆碱能抗炎通路。其中,激活α7 nAChR具有操作简便、创伤小和效果显著等优势。常用药物有选择性激动剂,例如PNU282987和GTS-21等,非选择性激动剂例如烟碱。多项研究显示,该方法在脓毒症、缺血再灌注、胃肠炎、骨关节炎和自身免疫病等外周器官炎性疾病治疗中都具有一定的效果。α7 nAChR作为胆碱能抗炎通路的关键作用位点,成为许多炎性疾病的潜在治疗靶点,本文对胆碱能抗炎通路中的α7 nAChR所涉及的抗炎机制、通路激活方式,以及其近年来在炎性疾病中的应用进行了综述,为未来研究其具体作用机制和新的治疗靶点提供参考。     

α7烟碱型乙酰胆碱受体在烟碱成瘾不同阶段发挥的作用及其作用机制

烟碱是烟草中备受关注的致瘾性物质,是吸烟者持续使用烟草制品的主要原因之一。Alpha7烟碱型乙酰胆碱受体(alpha7 nicotinic acetylcholine receptor,α7nAChR)在中枢神经系统广泛存在,其功能涵盖学习记忆、认知障碍、神经退行性疾病和药物成瘾等多个方面。近年来,大量研究报道了调控α7nAChR对实验动物在烟碱成瘾形成及戒断阶段行为学的影响,明确了α7nAChR在烟碱成瘾机制中发挥的重要作用。本文主要综述了α7nAChR在烟碱成瘾不同阶段发挥的作用及其作用机制,以期为相关研究者进一步的深入研究提供理论支持。     

大鼠皮质星形胶质细胞尼古丁型乙酰胆碱受体的表达

该文研究了尼古丁型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptors,n ACh Rs)不同亚单位在大鼠大脑星形胶质细胞的表达情况。分离新生大鼠大脑皮质培养原代星形胶质细胞并纯化、传代鉴定后,运用RT-PCR方法、蛋白质印迹法检测正常大鼠大脑皮质星形胶质细胞n ACh Rs不同亚单位的表达情况。结果显示,α2、α3、α4、α7、β2等n ACh Rs亚单位在星形胶质细胞均有表达,而β3 n ACh Rs亚单位在星形胶质细胞没有表达,为深入研究星形胶质细胞的功能提供了可能。     

烟碱暴露对成瘾相关烟碱型乙酰胆碱受体的影响及调控机理

烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptors, nAChRs)是由5个亚基组合形成的配体门控离子通道。根据亚基组成和排列的不同, nAChRs存在多种亚型。由于结构与乙酰胆碱相似,烟碱也是nAChRs的激动剂。大量研究表明,烟碱能影响nAChRs的表达和活性。同时, nAChRs又介导了烟碱成瘾的机制。文中基于最新的研究成果,简要综述了nAChRs的类型、分布和测定方法,并重点阐述了烟碱调控nAChRs表达的机制以及nAChRs在烟碱成瘾过程中的介导作用。     

烟碱样乙酰胆碱受体的离子通道特性

烟碱样乙酰胆碱受体(AChR)是一种配基门控性离子通道,由5个亚单位(α_2βγα)构成。利用非洲蟾蜍卵母细胞的表达系统可以研究AChR的通道特性和各亚单位所起的作用。电鳗电器官AChR和小牛肌AChR之间门控特性的差别,主要是由δ亚单位决定的;而小牛肌成年型AChR与胚胎型AChR之间的差别,则由ε亚单位决定。     

d-尼古丁对血管平滑肌细胞迁移的影响

为了在分子水平上揭示吸烟导致动脉粥样硬化的机制,探讨了烟草致病的主要成分d-尼古丁对豚鼠大脑基底动脉血管平滑肌细胞GbaSM-4迁移作用的影响。应用Boyden小室实验发现,d-尼古丁具有促进GbaSM-4细胞迁移的作用。免疫荧光染色显示,在d-尼古丁作用下有GbaSM-4细胞伪足内肌动蛋白表达和分布增加的现象。为了进一步阐明d-尼古丁促进平滑肌细胞迁移作用的分子机制,应用RT-PCR方法检测到在GbaSM-4细胞内有α7型烟碱乙酰胆碱受体的表达。应用烟碱乙酰胆碱受体的特异性抑制剂甲基牛扁碱和肌肉收缩的关键酶——肌球蛋白轻链激酶（myosin light chain kinase,MLCK）抑制剂ML-9作用GbaSM-4细胞后,发现d-尼古丁对GbaSM-4细胞的诱导迁移作用被明显的抑制。采用RNA干扰技术,成功地使GbaSM-4细胞内MLCK的表达水平下调,观察到d-尼古丁对GbaSM-4细胞的诱导迁移作用也被明显的抑制。上述研究结果表明,d-尼古丁以趋化因子的作用促进血管平滑肌细胞迁移,其分子机制可能与α7型烟碱乙酰胆碱受体和MLCK等因素有关,这一发现为揭示吸烟导致动脉粥样硬化提供了实验依据。     

α7烟碱型胆碱能受体调节胆管癌细胞化疗敏感性的相关探讨

目的：观察尼古丁对胆管癌细胞QBC939化疗敏感性影响,并初步探讨其作用靶点。方法：应用MTT法检测α7烟碱型胆碱能受体激动剂尼古丁及其阻断剂仪银环蛇毒素（α-BTX）干预后的人胆管癌细胞QBC939经5-FU处理后存活增殖能力变化,应用单克隆平板试验观察尼古丁及α银环蛇毒素对5-FU处理后细胞克隆形成率变化。结果：经5-fu处理后,尼古丁刺激组（终浓度分别为10-3g／L、10-4g／L、10-5g／L）细胞存活率分别为128％、124％、118％,细胞存活率较阴性对照组明显升高,并呈一定的浓度依赖性,而α银环蛇毒素刺激组（2ug／mL）、尼古丁α银环蛇毒素联合组细胞存活率分别为92％、94％、93％、92％。尼古丁刺激组（6．2±0．40）的克隆形成能力明显高于α银环蛇毒素刺激组（3．2±0．20）、联合组（3．2±0．20）及对照组（3．4±0．33）;结论：尼古丁可明显降低胆管癌细胞对化疗药物的敏感性,其可能是通过α7烟碱型胆碱能受体发挥化疗抵抗效应。     

丁氏双鳍电鳐电器官乙酰胆碱受体膜微囊的分离

本文报告了从丁氏双鳍电鳐电器官中分离纯化膜结合烟碱样乙酰胆碱受体的简便方法。比活性达1750nmolα-毒素结合点/克蛋白质,无乙酰胆碱酯酶活性,可避免它的干扰。电镜检查发现受体的膜结合物成微囊状,直径约0.1—0.3μα-毒素结合试验及聚丙烯酰胺凝胺电泳结果证明具有烟碱样胆碱能受体性质,适于受体功能和性质的研究。     

原代培养成骨细胞烟碱型乙酰胆碱受体α1亚基免疫阳性物质表达的初步研究

采用原位杂交和免疫细胞化学的方法检测原代培养的SD大鼠成骨细胞烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinicacetylcholinereceptor,nAChR)α1亚基的表达,结果显示nAChRα1亚基mRNA和蛋白质在原代培养的SD大鼠成骨细胞上呈阳性表达,提示骨内可能存在胆碱能神经和突触样结构,调控骨组织的各种生理活动。     

抑制乙酰胆碱酯酶对乙酰胆碱受体也有影响

通常认为,乙酰胆碱酯酶(AChE)通过水解乙酰胆碱(ACh)影响突触传递。抑制AChE.ACh水解减少,其突触后效应增强。然而,Fossier等最近在加利福尼亚海螺(aplysia Californica)的离休口腔神经节(buccal、ganglion)制备发现,抑制AChE对乙酰胆碱受体(AChR)也有影响。Fossier等在生理营养液连续灌流下,固定该制备突触前、后神经元的膜电位,并维持突触后神经元的Cl~-翻转电位不变,观察灌流液中添加各种AChE抑制剂后该神经节中的胆碱能中间神经元对胆碱类激动剂的突触后电流(PSC)反应的变化。发现:经有机磷类AChE抑制剂处理后,该制备不仅对ACh的PSC反应增强为静息电流的269±32%,而且对不被AChE水解的卡巴可(carbachol)的反应也增强为176±7%。经氨基甲酸酯类AChE抑制剂普鲁斯的明(prostigmine)和肟类化合物contrathion(AChE有机磷中毒的复活剂,也是一种迅速可逆的AChE强抑制剂)处理后,其PSC反应类似。     

视黄酸X受体α促进猪前体脂肪细胞分化

采用细胞转染、油红O染色、油红O染色提取法、GPDH活性测定、semi-qRT-PCR等方法研究了视黄酸X受体α (retinoic acid X receptor α, RXRα)在猪原代前体脂肪细胞分化中的作用及其机理.结果表明,转染pRXRα-EGFP促进了猪前体脂肪细胞RXRα 的表达,脂肪细胞分化能力随之增强, 脂肪细胞GPDH活性、分化转录因子PPARγ和C/EBPαmRNA表达水平均显著升高(P<0.05). 结果提示,RXRα可能通过调控过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferators-activated receptor-γ, PPARγ)和CAAT/增强子结合蛋白家族（CCAAT/enhancer binding proteins, C/EBP）C/EBPα 基因表达变化促进猪前体脂肪细胞分化.     

α7 nAChR在上皮组织的表达及其功能的研究进展

α7 nAChR是配体门控离子通道蛋白超家族的典型代表,烟碱型乙酰胆碱受体的一个重要亚型,是复杂的五聚体跨膜蛋白,介导Na+、Ca2+流入,K+流出,尤以对Ca2+通透性高。α7 nAChR分布广泛且功能多样,不仅分布于中枢和外周神经系统,介导神经元的快速突触传递,其在许多非神经元细胞和组织中亦有表达,包括内皮细胞,支气管上皮细胞,皮肤角蛋白细胞,膀胱上皮细胞,血管平滑肌等,并参与其功能调节及功能障碍相关疾病的病理生理过程,如可调节细胞质运动和细胞间黏附,细胞增殖,血管生成以及肿瘤的侵袭和迁移。本文主要介绍烟碱型乙酰胆碱受体α7亚型在不同胚层来源的上皮组织细胞中的表达及其功能特征,以期通过激活或抑制α7 nAChR的表达来降低与其密切相关疾病的发生率。     

麦长管蚜烟碱型乙酰胆碱受体基因的克隆和序列分析

昆虫烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptor, nAChR)是杀虫剂的重要作用靶标之一。本研究利用简并引物PCR和半巢式PCR技术从麦长管蚜Sitobion avenae (Fabricius)中克隆nAChR基因,成功地获得了5个α型nAChR亚基的cDNA片段。根据5个α亚基片段设计特异引物,结合快速扩增cDNA末端(RACE)技术,成功克隆了5个α型亚基的全长,并发现α5亚基有两种存在形式,它们仅在胞外区有一段175 bp的片段有差异。序列分析发现,这些基因均具有nAChR基因家族的典型特征,并与已报道的其他昆虫的烟碱型乙酰胆碱受体的相应亚基具有很高的同源性。该研究为进一步利用基因表达技术研究昆虫nAChR的天然亚基组成,以及分析麦长管蚜对新烟碱类杀虫剂的靶标抗性,奠定了基础。     

α7nAChR在上皮组织的表达及其功能的研究进展

α7 nAChR是配体门控离子通道蛋白超家族的典型代表,烟碱型乙酰胆碱受体的一个重要亚型,是复杂的五聚体跨膜蛋白,介导Na^＋、Ca^2＋流入,K^＋流出,尤以对Ca^2＋通透性高。α7 nAChR分布广泛且功能多样,不仅分布于中枢和外周神经系统,介导神经元的快速突触传递,其在许多非神经元细胞和组织中亦有表达,包括内皮细胞,支气管上皮细胞,皮肤角蛋白细胞,膀胱上皮细胞,血管平滑肌等,并参与其功能调节及功能障碍相关疾病的病理生理过程,如可调节细胞质运动和细胞间黏附,细胞增殖,血管生成以及肿瘤的侵袭和迁移。本文主要介绍烟碱型乙酰胆碱受体α7 亚型在不同胚层来源的上皮组织细胞中的表达及其功能特征,以期通过激活或抑制α7 nAChR的表达来降低与其密切相关疾病的发生率。     

丁氏双鳍电鳐(Narcine timlei)电器官烟碱型乙酰胆碱受体(AChR)某些生化性质的研究

本文报道了丁氏双鳍电鳐（Narcine timlei）电器官烟碱型乙酰胆碱受体蛋白（AChR）的某些生化性质。纯化的AChR经聚丙烯酰胺梯度（4％—30％）凝胶电泳,呈现一个主要蛋白带,经测定,表观分子量为440,000,与~（125）I-α-Bgt-AChR复合物的分子量相一致。等电聚焦电泳测得纯化AChR和~（125）I-α-BgtAChR的等电点（pI）分别为4.9和5.2;经SDS—聚丙烯酰胺梯度（4％—30％）凝胶电泳,纯化的AChR解离成三个主要亚基蛋白带,它们的表观分子量分别为38,000,42,000和66,000,其中前两个亚基的含量很高,约占总数75％。氨基酸组成分析表明,丁氏双鳍电鳐电器官AChR由18种氨基酸组成,（色氨酸未测定）,其中酸性氨基酸含量很高,占总数的20％以上,说明纯化的AChR是一个复杂结构的酸性蛋白大分子。     

α7-nAChR基因敲除小鼠海马神经元突触传递和神经网络的电生理表型（英文）

研究显示,含有α7亚基的烟碱型乙酰胆碱受体(α7 nicotinic acetylcholine receptor,α7-nAChR)基因敲除(α7 KO)的小鼠表现出很少的功能表型。本文旨在研究α7 KO对小鼠海马电生理特征的影响。用标准胞外场电位记录评估α7 KO对小鼠海马CA3-CA1突触传递的影响,用穿孔膜片钳记录检测小鼠海马单个神经元γ-氨基丁酸A型受体(γ-aminobutyric acid A-type receptor, GABA_A-R)的电生理学表型。结果显示,与野生型小鼠相比,α7 KO小鼠海马CA1神经元场兴奋性突触后电位(field excitatory postsynaptic potential, fEPSP)斜率显著降低,卡巴胆碱诱发的θ振荡显著减少。在给予GABA_A-R激动剂蝇覃醇(muscimol)条件下,与野生型小鼠相比,α7 KO小鼠海马CA1和CA3神经元I–V曲线均向去极化方向明显移动。以上结果提示,α7KO小鼠海马CA3-CA1突触传递显著受损,GABA_A-R成熟显著延迟,表明α7-nAChR基因缺失可显著改变海马的电生理功能,这可能为α7-nAChR在海马功能和海马相关疾病中作用的理解提供了新的认识。