人血清载脂蛋白AⅡ的分离纯化及其抗血清的制备

本文应用超迷离心,盐酸胍处理、DEAE-Sepharose CL-6B离子交换柱层析分离纯化了人血清载脂蛋白AⅡ。经等电聚焦电泳、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫电泳等鉴定,其纯度达到电泳纯和免疫纯。以此载脂蛋白AⅡ纯品免疫家兔产生的抗血清,效价较高,特异性强,与载脂蛋白AⅠ、B、CⅠ、CⅡ、CⅢ、E和白蛋白没有交叉反应。     

视黄醇结合蛋白的分离纯化及其抗血清的制备

建立了经硫酸铵分级、DEAE-Sephadex A25柱、Sephadex G200柱、Ultrogel ACA44柱和 Sephadex G100柱层析分离纯化人血浆视黄醇结合蛋白的方法.经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,其纯度达到电泳纯.以此电泳纯的视黄醇结合蛋白免疫家兔得到了高效价的抗血清.     

人肝脏特异的F抗原分离纯化及其抗血清制备

取新鲜的人肝脏,充分洗涤,制备匀浆,上清液经Sephadex-G200、DE52层析,聚丙烯酰胺凝胶电泳,得到电泳纯Ｆ抗原,并免疫制备抗血清.     

纯大鲵粉对小鼠抗疲劳作用及免疫功能的影响

目的 考察纯大鲵粉对小鼠免疫功能的影响和抗疲劳作用.方法 纯大鲵粉小鼠灌胃,检测免疫器官指数、血清溶血素含量、脾抗体细胞生产数、碳粒廓清指数、耳肿胀度,研究对小鼠免疫功能的影响.测定小鼠负重游泳时间,检测血乳酸、血清尿素氮及肝糖原含量,研究其抗疲劳作用.结果 纯大鲵粉能增加小鼠免疫功能,延长小鼠游泳时间,降低血乳酸变化幅度,提高肝糖元储备,降低尿素氮含量.结论 纯大鲵粉具增强小鼠免疫功能和抗疲劳作用.     

制备免疫纯乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的一种综合方法

本文报告包括胃蛋白酶消化、DEAE纤维素离子交换层析、亲和层析、凝肢过滤等四个工序的生产纯HBsAg的综合方法。所得产品经对流电泳、琼脂免疫扩散、免疫电泳等法检查,不含正常人血清蛋白质(HuSP)成份,用来免疫动物可获得不合抗-HuSP高效价的单特异性抗HBs血清,因而证明了它是免疫纯品。本法所需条件一般,而且结果比较稳定。从100毫升HBsAg阳性血清(对流电泳效价1：16)一般可以制得纯HBsAg 13毫升(对流电泳效价1：16,0.3—0.4毫克／毫升),即3．9—5．2毫克。     

三种鸡形目雉科禽类卵黄抗体的纯化及二抗的制备

目的 纯化三种鸡形目雉科的禽类孔雀、鹌鹑、贵妃鸡的卵黄抗体IgY,并且免疫家兔制备抗血清。方法 采用了水稀释法,HiTrap IgYPurification HP免疫亲和层析法和硫酸铵沉淀法纯化IgY。免疫家兔制备抗血清,免疫双扩散法测定效价。Protein-A亲和纯化兔抗IgY血清IgG。结果 经亲和纯化和盐析纯化,得到了孔雀、鹌鹑、贵妃鸡的卵黄抗体IgY,经SDS-PAGE检测为电泳纯,孔雀、鹌鹑、贵妃鸡的卵黄抗体IgY的相对分子质量约为180×10^3。免疫后经Protein-A亲和纯化后获得了兔抗IgY的IgG。结论 证实了孔雀、鹌鹑、贵妃鸡的卵黄抗体IgY的存在及其特性。雉科鸡形目禽类卵黄抗体的纯化方法 相似,可以推广到鸡形目其它禽类的卵黄抗体的纯化中,获得的抗血清可以进一步进行标记和今后抗原的检测。     

核糖核酸酶抑制因子的制备及其在红细胞中的检测

应用Sepharose-RNase亲和层折柱从人胎盘中分防核糖核酸酶抑制因子(RI),纯化约1000倍,得率为43％。纯RI与Freund佐剂1:1稀释,免疫家免,获得抗血清,效价为1:8。经琼脂糖双扩散法和免疫分析,证明红血球中有特异性RI。存在于红细胞胞浆中,红细胞膜上不存在RI。     

细胞工程

用伍合在弗氏完全佐剂内的半纯乳酸乳杆菌羹汤亚种(Lae才obaeilloslactf:subspct'omo:)Wgz蛋白酶经腹腔注射免疫B人LB/c小鼠。3周后再用o.lmg蛋白酶经静脉强     

γ-谷氢酰转肽酶的纯化及其特性的研究

从胎肝和肝癌组织中纯化的 GGTP,经4%—30% PAGE 鉴定氛明分成二部分,其中第一部分活力最强,经亲和层析柱吸附后,免疫动物获纯的抗血清.该部分 GGTP 经10% PAGE 显示一条带,其分子量为92kD,pI 值为4.2.但经 SDS-PAGE 则显示二条蛋白带,其分子量分别为64kD 和27kD.酶免疫抑制试验表明该抗血清对 GGTP Ⅱ,Ⅱ’具有抑制作用,双扩散免疫试验产生单一沉淀线,并互相融合在一起.说明二种组织来源的 GGTP 的免疫学特性相一致.     

平菇子实体钙调素的分离纯化及其与猪脑钙调素的生物活性比较

平菇萃取液经酸性沉淀、热变性、Phenyl-Sepharose CL-4B疏水亲和层析和DEAE-Cellulose 52离子交換层析分冉出了电泳纯的真菌钙调素。在比较钙调素对磷酸二酯酶活化的能力和ELISA实验的免疫亲和力对发现,平菇钙调素与猪脑钙调素的生物活性有较大差异,提示在钙调素定量测定中有必要考虑到标准钙调素与样品钙调素之间的同源性差异。     

高效单价特异抗A型肉毒兔血清的制备

目前关于纯的肉毒类毒素及其抗血清的制备研究较少。纯抗原及纯抗血清不仅对肉毒毒素结构和功能的研究起重要作用,而且对于提高类毒素的免疫效果与抗毒素的治疗效果;减     

艰难梭菌荚膜多糖的提纯和分析

本文采用改进的丙酮法制备了艰难梭菌荚膜多糖。制备的荚膜多糖纯品含荚膜多糖达72％,在Sepharope-4B凝胶层析中,该英膜多糖的分配系数(Kd)为0.77。经对流免疫电泳法鉴定,纯化后的荚膜多糖仍保持着原性,用制备的艰难梭菌荚膜多糖免疫小白鼠,经间接法ELISA检测,未见抗荚膜多糖抗体明显增高。     

豌豆铁蛋白的纯化及其抗血清的制备

干豌豆种子粗提物经MgCl2 盐析、AcA2 2 凝胶过滤和DEAE 纤维素阴离子交换柱层析等方法进行纯化 ,以邻菲咯啉显色法检测铁蛋白 ,最后获得纯的铁蛋白 .纯化的铁蛋白在PAGE上显示一条带 ,SDS PAGE显示该蛋白仅含 2 8kD一条亚基 .纯化的豌豆铁蛋白免疫兔 7周后 ,琼脂糖双扩散法检测抗血清效价达 1∶32 .用分级盐析法纯化抗血清 ,纯化后的抗体用琼脂糖双扩散法对大豆铁蛋白粗提物有免疫交叉反应     

亲和层析法纯化霍乱毒素及其B亚单位

利用GM1偶联活化的Sephadex G50或扰CT IgG偶联活化的Sepharose 4B,我们已成功地建立了两种亲和层析纯化CT和CT-B的方法,获得了纯化产品。受体亲和柱对CT-B和CT的分离效率分别为71.6％或48.3％,抗体亲和柱分别为50％或51.7％。纯化产物经SDSPAGE、PAGE分析表明均达到亲和层析电泳纯级。GM1-ELISA、CHO细胞测毒加间接免疫荧光检测、家兔肠段结扎试验和家兔免疫保护试验结果提示纯化产物具有良好的生物学活性。这种有效而简单的方法可推广应用于CT或CT相关毒素的纯化。     

免疫粘附血凝试验用乙型肝炎表面抗原特异性抗血清的制备

免疫粘附血凝(IAHA)试验检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)敏感性高,但需要HBsAg单价特异性抗血清(anti-HBs),否则易出现假阳性反应。为获得单价anti-HBs。在没有纯HBsAg供免疫的情况下多采用亲和层析法;即将正常人血清蛋白经溴化氰联结于珠状琼脂糖凝胶,装柱后,将动物抗血清穿流过柱,以吸收其中抗正常人血清蛋白抗体。所获单价anti-HBs即可     

纯蛇粉有何药用价值

纯蛇粉内含有20多种氨基酸和锌、铁、钙等矿物质及元素,具有广泛的生理、药理及保健作用,可全面调节人的神经系统、内分泌系统和免疫系统.具有清热解毒、消炎止痛、止痒除疾、祛斑护肤等功效.对皮肤不适者,如牛皮癣、痤疮、神经性皮炎、皮肤瘙痒、黄褐斑、粉刺、湿疹等,有很好的辅助疗效.经常服用纯蛇粉,可全面调节人体的免疫功能,增强机体的抵抗力,特别适用于体弱多病及免疫力低下的老人、妇女、儿童食用.美国的科研机构研究表明,纯蛇粉经提炼加工后用于戒毒,疗效显著,显效率达90%.这一发现表明,蛇粉产品确实有着不可估量的市场前景和产业前景,将对人类有着深远的社会意义.     

一种分离人血浆脂蛋白(a)的简便方法

短时间超速离心(4h)结合抗人 apo(a)免疫亲和层析分离纯化了人血浆 Lp (a),所得制品经聚丙烯酰胺凝胶电泳和 double-decker 火箭免疫电泳等鉴定为纯品.与国外常规分离 Lp (a)的方法相比,该法具有简便,经济,提纯周期短和 Lp (a)纯度高等优点,得率提高一倍以上.     

肺炎克雷伯氏菌荚膜多糖的提取纯化及其对细胞免疫活性的影响

采用液体深层培养得肺炎克雷伯氏菌Kp9株发酵液,研究确立了菌体快速裂解条件:NP40 1%和胰蛋白酶25 0IUg菌体,50℃作用1h ,然后加入溶菌酶80μg/mL ,56℃作用1h ;裂解液经超滤浓缩和有机溶剂沉淀获得多糖粗品;多糖粗品先后经CTAB吸附分离,DEAE-SepharoseFastFlow离子交换和SephacrylS 30 0HR凝胶过滤纯化,得分子量分布相对均一的多糖纯品,产品得率为0.25 1g/L。采用淋巴细胞转化实验分别探讨了多糖粗品和纯品的免疫活性,研究显示荚膜多糖具有高效的体外细胞免疫活性,并具有典型的双向免疫调节作用。研究结论为肺炎克雷伯氏菌荚膜多糖的开发奠定了前期基础。     

大肠杆菌合成的乙型肝炎病毒核心抗原的研究Ⅱ．HBcAg的提纯

本文报道HBcAg基因工程菌MM206株的粗提物通过DEAE柱后,基因表达产物HBcAg与核酸及大部分细菌蛋白分开后,再经凝胶过滤和亲和层析作进一步提纯。经DEAE层析和亲和层析获得的纯制品聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱显示一主带和两小带。从sepharose 4B柱和亲和层析柱洗出的HBcAg,ELIsA检测证明其比活性分别比粗制品高40倍和100倍,以纯制的HBcAg注射家兔,在6只接受免疫的动物中均产生有抗一HBc,能与从人肝提取的HBcAg产生特异的免疫反应,这表明大肠杆菌合成的HBcAg在动物体内具有生物学活性。     

重组蛋氨酸裂解酶的表达、复性及活性研究

探索以包涵体形式表达的重组蛋氨酸裂解酶的纯化、复性方法,并对其活性进行检测。将阴道毛滴虫蛋氨酸裂解酶重组表达载体PET-15b-mgl1转化大肠杆菌BL21,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,并对表达条件进行优化,获得大量表达。通过对包涵体的纯化及复性研究,检测重组蛋氨酸裂解酶的免疫活性及酶活性。Western blotting结果表明,重组蛋氨酸裂解酶免疫小鼠制备的多抗可以和从阴道毛滴虫中提取的天然蛋氨酸裂解酶发生特异性反应。活性检测结果显示复性蛋氨酸裂解酶有活性,复性效率达到25%左右。以包涵体形式表达的蛋氨酸裂解酶经变性、纯化及复性后,获得大量有活性的酶,为深入了解其结构、功能及酶学性质,开展其在临床检测中的应用研究奠定基础。