白念珠菌生物膜体内外模型研究进展

白念珠菌引起的慢性难治性感染与其形成的生物膜密切相关,生物膜的诸多生物学特征明显不同于游离菌.合适的生物膜模型的构建对于研究白念珠菌生物膜的形成机制以及药物干预至关重要.该文结合作者自身的研究,对目前国内外关于白念珠菌生物膜体外、体内多种模型的构建方法作一综述.     

白念珠菌生物膜及其研究进展

白念珠菌生物对多种传统抗真菌药物高度耐药,日益增多的白念珠菌生物膜相关感染引起抗真菌药物治疗的失败加重了患者及社会的经济负担,这已经成为临床医生所面临的重要问题.该文旨在阐明白念珠菌生物膜的临床重要性,并从多方面阐述白念珠菌生物膜的结构特点、形成机制、防治现状的最新研究进展,为白念珠菌的研究及临床防治策略提供参考.     

白念珠菌生物膜与侵袭及耐药

为了解近年来白念珠菌(Candida a lbicans)表面生长及生物膜形成研究的动向和进展,本文从几个方面阐述了白念珠菌表面生长和生物膜形成的生理病理学及其抗真菌耐药性的特征。包括白念珠菌宿主表面黏附、菌丝转换基因、微菌落定量感触调节、外分泌酶降解作用、菌丝地形趋向性和抗真菌耐药形成机制。结论提示,白念珠菌生物膜形成是其表面生长的重要结构,是临床上医疗植入物发生血源性白念珠菌感染传播的主要诱因,也是抗真菌耐药形成的重要因素,具有重要的病理学和生物学意义。     

牡丹皮水煎剂对体外白念珠菌生物膜的抑制作用

研究牡丹皮水煎剂对体外白念珠菌生物膜的影响。体外构建白念珠菌生物膜并采用XTT减低法评价牡丹皮水煎剂对白念珠菌成熟生物膜影响以及包被生物材料对白念珠菌生物膜形成的影响。结果显示,牡丹皮水煎荆对白念珠菌悬浮菌MIC为1．56mg／mL;对白念珠菌生物膜SMIC50与SMIC50分别是3．12和6．25mg／mL;药物包被96孔板对白念珠菌生物膜形成有一定的抑制效应。实验表明牡丹皮水煎剂对体外白念珠菌生物膜有较强抑制作用。     

转录因子在白念珠菌生物膜形成过程中的调控机制

近年来随着白念珠菌发病率增加,耐药率也日渐上升,其中白念珠菌生物膜的形成是其耐药原因之一,生物膜的形成需经过4个阶段,每个阶段由不同转录因子调控,共同促进生物膜的发育。该文主要概括在生物膜形成各个阶段中转录因子可能的作用机制,以便了解白念珠菌生物膜的调控机制,进而为白念珠菌临床治疗提供新的视野。     

靛玉红、蛇床子素抗外阴阴道念珠菌病混合菌生物膜作用的研究

目的研究中药有效成分靛玉红、蛇床子素抗外阴阴道念珠菌病混合菌生物膜的作用。方法体外建立白念珠菌（Candidaalbicans）铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa,P．a）混合菌生物膜（Biofilm,BF）,XTT减低法及形态学观察白念珠菌混合茵生物膜的形成过程;形态学观察、活菌计数法评价中药有效成分靛玉红（indirubin）、蛇床子素（Ostho）对白念珠菌混合菌生物膜的最小抑膜浓度（SMIC）,并经扫描电镜确认。结果白念珠菌混合菌48h能形成成熟的生物膜;62．5mg／L浓度的靛玉红能抑制白念珠菌混合菌生物膜的形成。500mg／L浓度的蛇床子素未见有抑制白念珠菌混合菌生物膜的作用。结论靛玉红由于具有抗生物膜的作用,可用于预防外阴阴道念珠菌病的复发。     

白念珠菌生物膜的研究

细菌生物膜相关感染发病率不断上升,且治疗困难,已受到广泛的关注。对于真菌,生物膜以及生物膜在真菌感染与耐药性产生过程中的作用只是近年来才受到国内外学者与临床专家的关注,目前的研究多集中在念珠菌属。本文综述了白念珠菌生物膜的形成与特征、影响因素、耐药性的分子机制等几方面内容。     

白念珠菌生物膜及其形成的抑制性因素研究进展

白念珠菌易于在医学植入材料上形成生物膜,生物膜较其游离细胞具有更强的侵袭力并对传统的抗真菌药耐药。该文就近年来抗白念珠菌生物膜的药物及生物膜形成的抑制性因素研究进展作一综述。     

白头翁汤正丁醇提取物对白念珠菌VVC临床株体外生物膜形成的抑制作用

目的探讨白头翁汤正丁醇提取物(Butyl alcohol extract of Bai Tou Weng decoction,BAEB)对分离自外阴阴道念珠菌病(vulvovaginal candidiasis,VVC)的白念珠菌临床分离株(以下简称VVC临床株)生物膜形成的影响。方法采用微量稀释法测定BAEB对白念珠菌的最低抑菌浓度(Minimal Inhibitory Concentration,MIC);甲基四氮盐(XTT)还原法测定BAEB对白念珠菌生物膜代谢活性的影响,Time-kill法检测BAEB对白念珠菌活菌数的影响;结晶紫染色法测定BAEB对白念珠菌生物膜生物量(Biomass)的影响;扫描电镜(SEM)观察BAEB对白念珠菌生物膜形态结构的影响;激光共聚焦显微镜(CLSM)检测BAEB对白念珠菌生物膜荧光信号强度的影响;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测生物膜相关基因UME6、PES1和HSP90的转录水平变化。结果 BAEB对12株白念珠菌的MIC在64~256μg/mL之间,对白念珠菌生物膜的SMIC80(抑制80%生物膜形成的最低药物浓度)为1 024μg/mL或以上;Time-Kill曲线显示在12h之后,512、1 024μg/mL浓度的BAEB对白念珠菌均具良好的杀伤作用;结晶紫染色法表明512、1 024μg/mLBAEB能够减少其生物膜生物量;SEM观察到1 024μg/mL BAEB能够有效抑制白念珠菌在不同黏附介质上生物膜的完整度;CLSM显示512、1 024μg/mL的BAEB可以明显降低生物膜荧光信号强度;qRT-PCR检测显示在256、512、1 024μg/mL的BAEB作用下,UME6转录水平分别下调了72%、71%、77%,在512、1 024μg/mL的BAEB下HSP90转录水平上调了2.23和3.31倍,而PES1未有明显变化。结论 BAEB可以抑制白念珠菌VVC临床株体外生物膜的形成。     

铜绿假单胞菌脂多糖对白念珠菌生物膜形成的影响

目的研究铜绿假单胞菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对白念珠菌生物膜形成不同时期的影响。方法甲基四氮盐(XTT)减低法用于检测铜绿假单胞菌LPS对白念珠菌生物膜形成不同阶段生成量的影响,利用倒置显微镜观察生物膜形态学改变。结果铜绿假单胞菌对白念珠菌生物膜形成的影响具有阶段差异性和浓度差异性。结论铜绿假单胞菌LPS抑制白念珠菌生物膜菌丝的形成。     

穿心莲内酯体外抗白念珠菌生物膜作用的初步研究

目的研究穿心莲内酯对体外白念珠菌生物膜的影响。方法采用XTT减低法评价穿心莲内酯对白念珠菌生物膜及其黏附性的影响;镜下观察该药对白念珠菌生物膜的形态学影响;细胞毒性试验检测该药的毒副作用。结果穿心莲内酯对白念珠菌生物膜的SMIC50、SMIC80分别是250、1000μg/ml;1000μg/ml及100μg/ml时对白念珠菌的早期黏附及菌丝生长有抑制作用;对人细胞毒性较弱。结论穿心莲内酯对体外白念珠菌生物膜有显著的抑制作用。     

苦参-蛇床子药对提取物对白念珠菌VVC临床株的抑制作用研究

目的本文着重研究苦参-蛇床子药对提取物(Extract of Sophorae Flavescentis Radix — Cnidii Fructus Couplet medicines,ESCC)对白念珠菌VVC临床株的抑制作用。方法 实验通过微量液基稀释法检测ESCC对白念珠菌的MIC 80;XTT减低法检测ESCC对白念珠菌VVC临床株细胞增殖活性的影响;倒置显微镜分别在4 h、8 h、12 h观察ESCC对白念珠菌VVC临床株酵母-菌丝二相性转换的影响;扫描电子显微镜观察ESCC对白念珠菌VVC临床株生物膜形成的影响;微孔板观察ESCC对白念珠菌VVC临床株成熟生物膜的影响;qRT-PCR检测ESCC对白念珠菌VVC临床株菌丝和生物膜形成相关基因的影响。结果 实验结果显示,ESCC具有一定的抗真菌作用,MIC 80 在512~1024 μg/mL之间,可显著降低白念珠菌VVC临床株细胞增殖活性;ESCC可抑制白念珠菌VVC临床株酵母-菌丝二相性转换,并可影响成熟生物膜的完整性。PCR结果显示ESCC可显著降低 ALS1 、 ASL3 、 HWP1 等基因转录水平。结论 本实验研究表明,苦参-蛇床子1∶1药对水提物可通过下调白念珠菌菌丝和生物膜形成相关基因转录水平,从而抑制酵母-菌丝二相性转换,影响其代谢活性,抑制生物膜的形成,并可破坏完整生物膜的完整性,从而起到抗真菌作用。     

大黄酚体外抗白念珠菌生物膜作用的研究

目的研究大黄酚对体外白念珠菌生物膜的影响。方法采用XTT减低法评价大黄酚对白念珠菌的生物膜及黏附性的影响;镜下观察该药对白念珠菌生物膜的形态学影响;细胞毒试验检测该药的毒副作用。结果大黄酚对白念珠菌生物膜的SMIC50、SMIC80分别为125、1000μg/ml;100μg／ml及1000μg/ml含量浓度的大黄酚对自念珠菌的早期黏附及菌丝生长有抑制作用;大黄酚对人细胞毒性较弱。结论大黄酚对体外白念珠菌生物膜有较强的抑制作用。     

胡桃楸提取物对体外白念珠菌生物膜形成的影响

目的研究胡桃楸提取物对白念珠菌生物膜形成的影响。方法采用甲基四氮盐（XTT）还原法评价胡桃楸提取物对白念珠菌的生物膜形成及黏附性的影响。镜下观察胡桃楸提取物对白念珠菌生物膜的形态学影响。结果胡桃楸提取物抑制白念珠菌生物膜50％及90％的最小抑制药物浓度（SMIC50、SMIC90）分别为15．2μg、23．4μg。胡桃楸提取物作用浓度大于20μg时对该菌细胞黏附有抑制作用。30μg胡桃楸提取物可完全抑制白念珠菌生物膜的形成。结论胡桃楸提取物对体外白念珠菌生物的膜形成有较强的抑制作用。     

白念珠菌致病性研究进展

白念珠菌是一种重要的条件致病菌,多在体表及黏膜宿主共栖生存,可引起皮肤黏膜及内脏的广泛感染。白念珠菌是单细胞假菌丝酵母菌,形态上具有双相性,即菌丝相和孢子相。其中菌丝相更易黏附和入侵宿主组织,是该菌在体内的主要致病形式。白念珠菌的致病机制与多种因素如黏附、芽管、水解酶、生物膜、群体感应等有关。该文综述了白念珠菌致病机制的研究新进展。     

荧光定量PCR检测不同状态下白念珠菌CPH1、EFG1基因的表达

目的 检测转录因子CPH1和EFG1基因在游离态及生物膜态呼吸道白念珠菌临床分离株的表达差异,探讨其在生物膜形成过程中的作用.方法 选取10株白念珠菌临床分离株,分别提取游离态及生物膜态白念珠菌总RNA,用荧光定量PCR的方法测定两种状态下CPH1和EFG1基因的表达,用△△Ct的方法计算其相对表达量.结果 白念珠菌生物膜态转录因子EFG1的表达是游离态表达水平的1.42 ～7.14倍,差异有显著意义(P＜0.05),而转录因子CPH1的表达有8株菌生物膜态较游离态增高,1株降低,1株无明显变化,差异无显著意义(P＞0.05).结论 白念珠临床株转录因子CPH1和EFG1参与生物膜形成的调控,并需在体内实验中进一步研究.     

薰衣草精油对白念珠菌体外抗菌活性及生物膜的影响

目的研究薰衣草精油对白念珠菌的体外抗菌活性和生物膜的影响,为临床真菌感染的治疗提供实验依据。方法采用纸片扩散法、连续稀释法测定薰衣草精油对白念珠菌的敏感性、最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC);采用XTT法检测其抑制白念珠菌生物膜50%细胞活性的浓度(SMIC50),镜下观察对生物膜形态的影响。结果白念珠菌对薰衣草精油高度敏感,薰衣草精油对白念珠菌的MIC为12.5μL/mL,MBC为25μL/mL;对生物膜的SMIC50是100μL/mL,对白念珠菌的菌丝生长有抑制作用。结论薰衣草精油在体外对白念珠菌有抑菌作用。     

中药水提物对白念珠菌生物膜抑制作用的研究

目的研究中药水提物对体外白念珠菌生物膜的影响。方法体外构建白念珠菌生物膜,微量稀释法测定中药提取物对白念珠菌浮游菌最低抑菌浓度（M IC）,XTT减低法评价中药提取物对白念珠菌生物膜SM IC（SM IC80,SM IC50）及对白念珠菌黏附能力的影响。结果野菊花、土槿皮和决明子SM IC80为125 mg/m l,其余中药SM IC80为250或500 mg/m l;地肤子SM IC50为7.81 mg/m l,川芎、苏梗、藿香和决明子SM IC50为15.63 mg/m l,其他中药SM IC50在62.5~250 mg/m l。10味中药在100 mg/m l时均能显著抑制白念珠菌细胞的黏附,10 mg/m l时地肤子、苏梗和苦参对黏附仍具抑制作用。结论该10味中药水提物对体外白念珠菌生物膜有较强抑制效应。     

黄芩苷联合氟康唑对白念珠菌生物膜的抑制作用研究

目的：探讨中药有效成分黄芩苷（ baicalin,BA）联合氟康唑（ fluconazole,FLC）对白念珠菌（ Candida albicans,C． albicans）生物膜的抑制作用。方法通过棋盘法考察BA联合FLC对白念珠菌浮游菌与生物膜的部分抑菌浓度指数（ FI?CI）;通过时间?杀菌曲线检测两药联合对白念珠菌标准株（C．albicans SC5314）的杀菌作用;以XTT减低法和干重法检测两药联合对白念珠菌SC5314生物膜代谢及生物量的影响;采用扫描电镜（ Scanning electron microscopy,SEM）和激光共聚焦显微镜（ Confocal laser scanning microscopy,CLSM）观察两药联合对白念珠菌SC5314生物膜形态结构的影响;以水?烃法检测两药联合对白念珠菌SC5314生物膜细胞表面疏水性（ cell surface hydrophobicity,CSH）的影响;通过实时荧光定量PCR （ quan?titative real time PCR,qRT?PCR）检测两药联合对白念珠菌生物膜和CSH相关基因表达的影响。结果黄芩苷与氟康唑联用抗白念珠菌浮游菌的FICI介于0．28～0．75之间,对生物膜的FICI介于0．16～0．5之间,表现为协同作用;SEM和CLSM在生物膜结构上验证了两药的协同效果;两药联合可降低生物膜表面疏水性,以及使ALS1、ALS3、EAP1、SUN41和CSH1分别下调6％、51％、24％、13％和39％。结论黄芩苷具有协同氟康唑抗白念珠菌生物膜作用。     

白念珠菌生物膜相关基因研究进展

近年来，以白念珠菌为主的真菌感染发生率呈逐年上升趋势。白念珠菌病已经成为影响人类生活质量、威胁生命健康的重要疾病之一。目前，临床上常用的抗真菌药物很少有令人满意的疗效，其主要原因之一在于白念珠菌容易形成生物膜（biofilm）。生物膜是细菌或真菌附着于活体组织或非活体组织表面、