长白山鹅膏菌肽类毒素的HPLC分析

采用HPLC法对长白山地区分布的10种鹅膏菌中的-鹅膏毒肽(-amanitin)、鹅膏毒肽(-amanitin)和鬼笔毒肽(phalloidin)3种毒素的含量进行了测定。结果表明:白鹅膏(A.verna)和鳞柄白鹅膏(A.virsa)中含有-amanitin和-amanitin两种毒素,二者-amanitin的含量分别为 1861.85g/g和2477.02g/g,均高于欧洲产毒鹅膏(A.phalloides)中的含量(1607g/g)而接近灰花纹鹅膏Amanita fuliginea中的量(2633.80g/g)。毒鹅膏A.phalloides中含有3种毒素,并且菌蕾中的含量高于成熟子实体,尤其菌蕾中Phalloidin的含量(1113.35g/g)是灰花纹鹅膏成熟子实体中(432.5g/g)的3倍。     

长白山鹅膏菌肽类毒素的HPLC分析*

采用HPLC法对长白山地区分布的10种鹅膏菌中的-鹅膏毒肽(-amanitin)、鹅膏毒肽(-amanitin)和鬼笔毒肽(phalloidin)3种毒素的含量进行了测定。结果表明:白鹅膏(A.verna)和鳞柄白鹅膏(A.virsa)中含有-amanitin和-amanitin两种毒素,二者-amanitin的含量分别为 1861.85g/g和2477.02g/g,均高于欧洲产毒鹅膏(A.phalloides)中的含量(1607g/g)而接近灰花纹鹅膏Amanita fuliginea中的量(2633.80g/g)。毒鹅膏A.phalloides中含有3种毒素,并且菌蕾中的含量高于成熟子实体,尤其菌蕾中Phalloidin的含量(1113.35g/g)是灰花纹鹅膏成熟子实体中(432.5g/g)的3倍。     

长白山鹅膏菌肽类毒素的HPLC分析

采用HPLC法对长白山地区分布的10种鹅膏菌中的α-鹅膏毒肽（α-amanitin)、β鹅膏毒肽（β-amanitin)和鬼笔毒肽（phalloidin)3种毒素的含量进行了测定。结果表明：白鹅膏（A.verna)和磷柄白鹅膏（A.virsa)中含有α-amanitin和β－amanitin两种毒素,二者β－amanitin的含量分别为1861．85μg/g和2477.02μg/g,均高于欧洲产毒鹅膏（A.phalloides)中的含量（1607μg/g）而接近灰花纹鹅膏Amanita fuliginea中的量（2633.80μg/g)。毒鹅膏A.phalloides中含有3种毒素,并且菌蕾中的含量高于成熟子实体,尤其菌蕾中Phalloidin的含量（1113.35μg/g)是灰花纹鹅膏成熟子实体中（432．5μg/g）的3倍。     

气升式液体培养假褐云斑鹅膏菌丝及毒素检测分析

采集并组织分离到假褐云斑鹅膏Amanita pseudoporphyria的纯培养菌丝。培养发现其在琼脂培养基上生长形态与一般蕈菌有差别。摇瓶液体培养条件下,假褐云斑鹅膏菌丝体干重为0.626g/L,在气升式反应器内假褐云斑鹅膏菌丝体干重可达到1.629g/L。反应器培养的菌丝体毒素的HPLC分析表明菌丝体内含有鹅膏毒肽,而不含有鬼笔毒肽。结果表明可以通过液体培养鹅膏菌丝体来生产鹅膏毒素。     

东北地区非鹅膏属真菌中鹅膏肽类毒素的分布

本文采用高效液相色谱（HPLC）法对采自中国东北地区的95份非鹅膏属真菌样本进行鹅膏肽类毒素（α-amanitin、β-amanitin、phalloidin）检测。为获得更准确的实验结果,对57份阳性反应样品利用UPLC-MS/MS进一步测定,值得注意的是,测定结果中褶纹丝盖伞Inocybe leiocephala确认同时含有以上3种毒素。本研究通过检测鹅膏肽类毒素在非鹅膏属真菌中的分布,对误食中毒事件的发生起到一定程度的预防和警示作用,另一方面筛选出含有鹅膏肽类毒素的新型毒菌资源,为毒菌资源的开发利用提供基础资料。     

块磷鹅膏的培养条件及所产Amanitins毒素的分析

采集并组织分离到块磷鹅膏Amanita spissa的纯培养菌丝。探讨了各种培养条件对块磷鹅膏菌丝生长的影响,实验结果表明,在28℃,pH 6.0,避光的条件下块磷鹅膏的菌丝体生长最好。液体反应器人工培养块磷鹅膏获得成功,其液体培养的菌丝体干重在摇瓶中为0.893g/L,在气升式反应器内可达到2.33g/L。固体斜面培养和气升式反应器液体培养的菌丝体的HPLC分析表明菌丝体内含有鹅膏毒肽,而不含有鬼笔毒肽。两种培养条件下菌丝体的-αamanitin毒素含量略有不同,固体斜面菌丝体为26.02μg/gDCW、反应器培养菌丝体为15.25μg/gDCW。通过抑芽法试验也证明固体和液体培养菌丝体中含有-αamanitin,且具有和子实体中-αamanitin相同的生物学活性。结果表明有可能通过液体大规模培养鹅膏菌丝体来生产鹅膏毒素。     

我国28种鹅膏菌主要肽类毒素的检测分析

利用高效液相色谱(HPLC)技术对产于我国的28种鹅膏菌的主要肽类毒素(鹅膏毒肽和鬼笔毒肽)进行了检测分析,并和采于欧洲(德国)的毒鹅膏。Amanita phalloides作对照,结果表明,3种东亚所特有的鹅膏菌(灰花纹鹅膏、致命鹅膏和黄盖鹅膏白色变种)和欧洲毒鹅膏所含毒素种类多、含量高,其子实体菌盖部位主要毒素总量分别达到12583．7μg／g、8152．6μg／g、1058．2μg／g、7456．2μg／g干重子实体,这4种鹅膏菌可称之为剧毒鹅膏菌。其它25种鹅膏菌中有10种检测出含有微量鹅膏毒肽,含量在19．5μg／g—151．2μg/g之间。在4种剧毒鹅膏菌中,子实体组织部位不同,毒素含量以及鹅膏毒肽和鬼笔毒肽在其中的分布也不一样,菌盖中的毒素含量最高,菌柄的毒素含量次之,菌托中的毒素含量最低;对于灰花纹鹅膏、致命鹅膏和黄盖鹅膏白色变种,无论在菌盖、菌柄和菌托中,鹅膏毒肽类毒素的含量都高于鬼笔毒肽类毒素,尤其以α-amanitin的相对含量最高;而在欧洲毒鹅膏中,菌盖、菌柄和菌托中都以鬼笔毒肽为主,尤其以phallacidin的相对含量最高,并且从菌盖至菌柄到菌托,鬼笔毒肽的相对含量依次增加。     

β-鹅膏毒肽的反相高效液相色谱分离纯化

用反相高效液相色谱,以0.02mol/L醋酸铵-乙腈为流动相的梯度洗脱模式,在295nm吸收值的条件下,灰花纹鹅膏菌Amanitafuliginea的肽类毒素可以被成功的分离和纯化。单个肽类毒素的鉴定是用反相高效液相色谱和质谱同时进行。用这一方法可从灰花纹鹅膏菌中分离纯化出β-鹅膏毒肽(β-amanitin),产量可达到:1158靏/g(干重),产品纯度达98%以上,回收率为95.3%。β-鹅膏毒肽的分子量为919.3Da。这个方法可用于其它鹅膏菌肽类毒素的分离纯化。     

β—鹅膏毒肽的反相高效液相色谱分离纯化

用反相高效液相色谱,以0．02mol/L醋酸铵—乙腈为流动相的梯度洗脱模式,在295nm吸收值的条件下,灰花纹鹅膏菌Amanita fuliginea的肽类毒素可以被成功的分离和纯化。单个肽类毒素的鉴定是用反相高效液相色谱和质谱同时进行。用这一方法可从灰花纹鹅膏菌中分离纯化出β-鹅膏毒肽(β-amanitin),产量可达到：1158μg／g(干重),产品纯度达98％以上,回收率为95．3％。β-鹅膏毒肽的分子量为919．3Da。这个方法可用于其它鹅膏菌肽类毒素的分离纯化。     

我国28种鹅膏菌主要肽类毒素的检测分析*

利用高效液相色谱(HPLC)技术对产于我国的28种鹅膏菌的主要肽类毒素(鹅膏毒肽和鬼笔毒肽)进行了检测分析,并和采于欧洲(德国)的毒鹅膏Amanita phalloides作对照,结果表明,3种东亚所特有的鹅膏菌(灰花纹鹅膏、致命鹅膏和黄盖鹅膏白色变种)和欧洲毒鹅膏所含毒素种类多、含量高,其子实体菌盖部位主要毒素总量分别达到12583.7μg/g、8152.6μg/g、1058.2μg/g、7456.2μg/g干重子实体,这4种鹅膏菌可称之为剧毒鹅膏菌。其它25种鹅膏菌中有10种检测出含有微量鹅膏毒肽,含量在19.5μg/g-151.2μg/g之间。在4种剧毒鹅膏菌中,子实体组织部位不同,毒素含量以及鹅膏毒肽和鬼笔毒肽在其中的分布也不一样,菌盖中的毒素含量最高,菌柄的毒素含量次之,菌托中的毒素含量最低;对于灰花纹鹅膏、致命鹅膏和黄盖鹅膏白色变种,无论在菌盖、菌柄和菌托中,鹅膏毒肽类毒素的含量都高于鬼笔毒肽类毒素,尤其以α-amanitin的相对含量最高;而在欧洲毒鹅膏中,菌盖、菌柄和菌托中都以鬼笔毒肽为主,尤其以phallacidin的相对含量最高,并且从菌盖至菌柄到菌托,鬼笔毒肽的相对含量依次增加。     

7种鹅膏菌属真菌肽类毒素的HPLC分析(英文)

利用HPLC法对长白山地区分布的7种鹅膏属真菌成熟子实体中的α鹅膏毒肽(αamanitin)、β鹅膏毒肽(βamanitin)和鬼笔毒肽(phalloidin)的含量进行了测定。结果表明:芥橙黄鹅膏(Amanitasubjunquillea)和橙黄鹅膏(Amanitaaff.citrina)中均含有3种毒素,其中芥橙黄鹅膏的α鹅膏毒肽含量为2395.91μg/g、β鹅膏毒肽含量为1653.75μg/g和鬼笔毒肽含量为405.26μg/g;橙黄鹅膏的分别为1121μg/g、4244μg/g和9442μg/g。芥橙黄鹅膏白色变种(Amanitasubjunquilleavar.abla)中含有β鹅膏毒肽,其含量为614.00μg/g。其他5种鹅膏中均未检测到上述3种毒素。     

Effects of aluminum on membrane fluidity of the mycorrhizal fungus Amanita muscaria

The effect of aluminum on the ordering and dynamics of lipid molecules in plasmalemma was studied by electron paramagnetic resonance via the membrane-inserted reporter spin label molecules (methyl ester of 5-doxyl-hexadecanoic acid) in situ in mycelia of the ectomycorrhizal fungus Amanita muscaria . It was found, first, that the plasmalemma is structured into coexistent regions of lipids with different ordering and dynamics, and second, that aluminum stress is accompanied by the corresponding relative decrease of the proportion of the less ordered membrane domains. This effect is opposite to that found previously for Lactarius piperatus , where the membrane responded by an increase of the portion of the less ordered membrane domains. Such qualitatively diverse effects of aluminum at the membrane level is of interest as it coincides with the opposite effect on growth, i. e. inhibition of Amanita muscaria and stimulation of Lactarius piperatus .     

云南楚雄致命鹅膏中环肽毒素的检测与分析

采用反相高效液相色谱法对采自云南楚雄双柏县的致命鹅膏在3个不同生长期中不同部位的6种环肽毒素含量进行了检测和分析。结果表明,致命鹅膏含有α-, β-鹅膏毒肽、羧基三羟鬼笔毒肽和羧基二羟鬼笔毒肽,未检出γ-鹅膏毒肽和二羟鬼笔毒肽。生长期毒素总量最高（9.3mg/g）、从成熟期（7.5mg/g）到衰老期（6.5mg/g）逐渐降低,但鬼笔毒肽的相对含量随着年龄增长而逐渐增加,鹅膏毒肽与鬼笔毒肽比值从生长期、成熟期到衰老期分别为2.6、1.4和0.9。在3个不同发育阶段中,4种毒素含量从菌盖、菌柄到菌托逐渐降低,而鬼笔毒肽的相对含量逐渐增加。α-鹅膏毒肽和β-鹅膏毒肽在生长期菌盖中含量最高,分别为7.4mg/g和3.1mg/g,而羧基三羟鬼笔毒肽和羧基二羟鬼笔毒肽在衰老期的菌盖中含量最高,分别为2.8mg/g和2.1mg/g。     

桔青霉生产核酸酶的发酵条件研究

对通过紫外线和60Co两次育种得到的桔青霉W48高产菌株培养基的单组分和发酵条件进行了优化,最后又用正交实验对培养基的各组分的浓度进行了优化。得到了产酶量最高的培养基组分(质量分数)是:KH2PO40.05%,K2HPO40.03%,酵母膏+蛋白胨0.7%,CaCl20.02%,MgSO40.04%,ZnSO40.03%,葡萄糖5%,pH5.5。最佳发酵条件是:接种量10%,装液量50 mL,摇床转速180 r/min,温度30℃,发酵时间66 h。用最佳培养基和最佳发酵条件发酵生产核酸酶的酶活力为758.10 U/mL,原始菌种产核酸酶的酶活力为272.26 U/mL,提高了2.78倍。     

Ribosomal biosynthesis of α-amanitin in Galerina marginata

Amatoxins, including α-amanitin, are bicyclic octapeptides found in mushrooms (Agaricomycetes, Agaricales) of certain species in the genera Amanita, Galerina, Lepiota, and Conocybe. Amatoxins and the chemically similar phallotoxins are synthesized on ribosomes in Amanita bisporigera, Amanita phalloides, and Amanita ocreata. In order to determine if amatoxins are synthesized by a similar mechanism in another, distantly related mushroom, we obtained genome survey sequence data from a monokaryotic isolate of Galerinamarginata, which produces α-amanitin. The genome of G. marginata contains two copies of the α-amanitin gene (GmAMA1-1 and GmAMA1-2). The α-amanitin proprotein sequences of G. marginata (35 amino acids) are highly divergent from AMA1 of A. bisporigera except for the toxin region itself (IWGIGCNP in single-letter amino acid code) and the amino acids immediately upstream (N[A/S]TRLP). G. marginata does not contain any related toxin-encoding sequences besides GmAMA1-1 and GmAMA1-2. DNA from two other α-amanitin-producing isolates of Galerina (G. badipes and G. venenata) hybridized to GmAMA1, whereas DNA from the toxin non-producing species Galerinahybrida did not. Expression of the GmAMA1 genes was induced by growth on low carbon. RNASeq evidence indicates that both copies of GmAMA1 are expressed approximately equally. A prolyl oligopeptidase (POP) is strongly implicated in processing of the cyclic peptide toxins of A. bisporigera and Conocybe apala. G. marginata has two predicted POP genes; one, like AbPOPB of A. bisporigera, is present only in the toxin-producing isolates of Galerina and the other, like AbPOPA of A. bisporigera, is present in all species. Our results indicate that G.marginata biosynthesizes amatoxins on ribosomes by a pathway similar to Amanita species, involving a genetically encoded proprotein of 35 amino acids that is post-translationally processed by a POP. However, due to the high degree of divergence, the evolutionary relationship between AMA1 in the genera Amanita and Galerina is unclear.