四种血清学方法检测烟草TMV、CMV的比较

本文应用ELISA－异种动物抗体双夹心法（DSM－ELISA）、ELISA－A蛋白酶联法（SPA－ELISA0、ELISA－斑点免疫法（Dot-ELISA)和葡萄球菌凝集法（SA－test)等四种血清学方法检测TMV、CMV感染的烟草病叶,结果以Dot-ELISA法灵敏度最高,其检测病叶粗汁液的稀释度为1：1280－2560,其次是DSM－ELISA和SPA－ELISA,均为1：640,SA－test灵敏度较低,为1：80。SPA－ELISA的非特异性反应比DSM－ELISA低,用健康汁液附抗血清,可以明显降低Dot-ELISA和SA-test的非特异性反应。     

梅毒螺旋体重组抗原酶联免疫吸附试验的建立及应用

建立梅毒螺旋体重组抗原酶联免疫吸附试验（ELISA）,用于梅素血清学诊断和调查。其法,用表达的重组抗原IPN17和TmpA,建立检测血清特异抗体的间接ELISA,并与其它检测方法比较,分别检测梅毒参比血清、病人及献血员血清。其结果,敏感性、特异性均为100％。新建ELISA与TPHA的总符率为95．7％,明显高于RPR与TPHA的总符合率（89．1％）。献血员人群抗体阳性率为0．3％－0．69％,健康人群中抗体阳性率较低。     

双抗体夹心ELISA法检测肾综合征出血热汉滩病毒糖膜蛋白

用双抗体夹心ELISA法检测肾综合征出血热（HFRS）汉滩病毒LRI株糖膜蛋白（GP）,并用SDS－PAGE电泳对ELISA检测结果进行验证,实验结果显示,双抗体夹心ELISA法特异性强,重复性好,简便易行,是HTN病毒糖膜蛋白较为理想的检测方法,对HFRS疫苗的生产和质量控制有重要意义。     

PCR—ELISA检测HBV DNA的研究

目的：建立一种敏感、特异的乙型肝炎病毒（HBV）DNA检测方法。方法：应用PCR扩增技术和核酸杂交技术结合酶促显色技术（即PCR－ELISA技术）来检测血清中的HBV DNA。结果：应用PCR－ELISA技术能够检出许多PCR琼脂张胶电泳所检测不到的HBV DNA,大大地提高了检出率,而且,特异性强。结论：PCR－ELISA方法灵敏度高,行异性强,检测结果数据化,不受主观因素的影响。     

应用F（ab′）2—酶联吸附分析法检测大麦黄花叶病毒

F(ab′）2酶联免疫吸附分析法（F(ab′）2－ELISA）成功地用于大麦黄花叶病毒（BaYMV)的常规检测和诊断,其步骤是先用稀释1000－4000倍的抗血清F(ab′）2包被反应板,加待测样品和稀释1000倍的同种抗血清或IgG,然后再加入A蛋白碱性磷酸酯酶和底物,测定OD值。比较试验表明,ELIS稀释缓冲液加入1％小牛血清或1％全脂奶粉,BaYMV的测检灵敏度可提高达2．5－5．0ng/ml,病叶汁液检测终浓度为稀释1600－3200倍。我国BaYMV分离物与英国分离物的血清学性质完全一致。BaYMV在大麦病株中以叶部含量较高,茎中含量次之,根部测不出病毒。检测和诊断田间样品,即使有的样品已不断鲜,也均能得到满意的结果。此方法也成功地用于大麦温和花叶病毒（BaMMV)、小麦黄花叶病毒（WYMV）、燕麦花叶病毒（OMV）和燕麦金色条纹病毒（OGSV）等禾谷多粘菌传麦毒的检测,这5种病毒的血清学关系研究表明,除BaYMV和WYMV之间具有血清学关系以外,其余彼此均不反应。     

大鼠仙台病毒ELISA、间接免疫荧光和免疫印迹三种检测方法比较

目的比较ELISA（enzyme-linked immunosorbent assay）、IFA（immuno-fluorescence assay）和WB（Western blot）三种方法在大鼠仙台病毒血清学检测中的差异。方法仙台病毒蛋白抗原经凝胶电泳分离转移后用于血清学检测的WB方法;使用IFA、ELISA方法对20份无菌大鼠、227份SPF大鼠以及63份清洁级大鼠送检血清样品进行检测,阳性及可疑样品用WB方法进行了验证。结果 20份无菌大鼠血清样品被3种方法检测为仙台病毒抗体阴性;SPF级大鼠样品被IFA方法判定为阴性,1.32%（3/227）被ELISA方法判定为阳性,其中有2/3被WB确认为阳性;ELISA、IFA和WB在清洁级大鼠样品中检出仙台病毒的阳性率分别为为18.12%、11.34%和15.87%。结论三种检测方法灵敏度从高到低依次为ELISA、WB和IFA。WB方法可作为IFA和ELISA难以确定结果的替代方法。     

几种常见花生病毒血清学关系的研究

花生是世界上重要的经济作物,中国也是个花生消费大国,但是常有8种重要的花生病毒危害,包括花生斑驳病毒（PMV）、花生条纹病毒（PStV）、花生丛簇病毒（GRV）、花生丛矮病毒（PCV）、著茄斑萎病毒（TSWV）、花生芽枯病毒（BNN）、花生矮化病毒（PSV）和黄瓜花叶病毒（CMV）。70年代以来在全国各地多次爆发花生病毒病,并引起大面积减产,经济损失巨大,因而花生病毒的检测和转基因花生抗毒株的选育变得尤为重要［‘－’］。本研究应用免疫双扩散和酶联免疫法（ELISA）Z4几种花生病毒的血清学关系进行了研究。三材料与方法…     

生物技术在植物病害诊断中的应用

1 免疫技术 1.1 酶联免疫法 Voller[1]和Clark[2]等早在70年代中期就将现代血清学技术——酶联免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)应用于植物病毒的检测.ELISA与血清学技术相比具有明显的优越性,可灵敏地大规模定量检测植物提取液中病毒蛋白的含量,这一技术现已成为植物病毒病害诊断的标准方法[3].以后,人们对ELISA技术在检测速度、表确性以及仪器装备等方面进行了改进,使之更加趋于完善.除此之外,其它一些以抗体为基础的检测技术如放射免疫检测、免疫荧光技术、免疫显微镜检技术等也用于植物病害的诊断.     

结核分枝杆菌重组38kD蛋白用于新疆南疆维吾尔族和 湖南湘中汉族血清学诊断的研究

目的：对结核分枝杆菌38kD 蛋白编码基因进行克隆表达及纯化,建立基于重组38 kD 蛋白的酶联免疫吸附法(ELISA)检测 结核病人血清标本,评价重组38 kD蛋白用于结核病血清学诊断抗原的价值。并比较分析其在汉族和维吾尔族人群中的血清学 诊断的差异。方法：用PCR方法扩增38 kD 蛋白的编码基因, 构建重组质粒, 转化到大肠杆菌BL21 中,经IPTG诱导表达, 得到纯 化的38 kD 蛋白,建立以38 kD蛋白为包被抗原的ELISA,并检测临床确诊的结核病人血清标本。结果：ELISA 检测结核病患者 血清标本的维吾尔族阳性率为34%（52/153）,汉族为52.4%（65/124）,两者对比有统计学差异（X2＝9.538,P＜0.005）。在阴性对照 中的维吾尔族特异度为96.4%（159/165）,汉族为98. 8%（130/133）,结果无统计学意义（X2＝0.111,P＞0.5）。结论：重组38kD 蛋白 用于血清学诊断的敏感度在维吾尔族和汉族中有差异,而其诊断特异度无差别。     

梅毒螺旋体重组抗原的表达及在梅毒血清学诊断中的应用

目的：克隆、表达梅毒螺旋体（Treponema pallidum, Tp）膜蛋白TpN47、TpN17、TpN44.5和TpN15,建立双抗原夹心ELISA法,探讨其在梅毒血清学诊断中的应用。方法：应用聚合酶链反应法（PCR）从Tp全基因组中扩增4个目的片段,克隆到载体pET-HT-JKM中,在BL21(DE3)plysS菌中诱导表达,Ni-NTA亲和层析法纯化重组蛋白,辣根过氧化物酶标记,双抗原夹心酶联免疫吸附法检测人血清中的特异性IgM和IgG抗体。结果：成功表达了4种重组蛋白用作ELISA包被和酶标抗原检测国家Tp参比血清,特异性和灵敏度均为100％;检测385份临床血清样本,结果与TPPA法相比符合率达到99％（P＜0.01）,灵敏度和特异性分别为98.2%（162/165）和99.5%（219/220）。结论：表达的4种重组抗原具有很好的生物活性,为理想的梅毒的血清学诊断用抗原。以这4种表达蛋白为基础建立的双抗原夹心ELISA法灵敏度高,特异性好,而且方法简单,结果客观,易于自动化操作,值得临床大力推广。