流行性出血热疫苗研究进展

<正>目前肾综合症出血热在全世界每年约有15万病例,死亡率为3～10%,主要分布在欧亚大陆,近年来发现东南亚和非洲国家亦有此病发生。自1978年李镐汪首先分离到出血热病毒后各国各地从野鼠、家鼠、试验大鼠或其他动物及病人标本分离到许多病毒株。我国自1981～1982年先后从黑线姬鼠和褐家鼠分离到出血热病毒后,全国各地亦从不同动物和人体分离到许多病毒株,并对这些病毒株进     

从轻型出血热疫区的褐家鼠分离到与流行性出血热有关的病原因子

从轻型出血热疫区的褐家鼠肺组织,用非疫区黑线姬鼠和E-6细胞同时分离到与EIIF相关的轻型出血热的病原因子,进一步证实褐家鼠为轻型出血热病原的一种重要宿主动物。并证明E-6细胞可用来直接从轻型出血热原始标本分离病毒,为该病病原学诊断、流行病学调查提供了一个简便而又比较安全的试验手段。     

黑线姬鼠种群结构与携带汉坦病毒相关性

汉坦病毒(Hantavirus,HV)是肾综合症出血热(Hemorrhagic fever with renal syndrome,HFRS)的主要病原体之一,HV的主要宿主动物为黑线姬鼠(Apodemus agrarius).针对西安市HFRS的持续高发病率,2010年7月-9月对西安市HFRS 疫区捕获的110只黑线姬鼠(阳性62只)进行年龄、性别鉴定.通过病毒RNA提取分析,发现黑线姬鼠雌雄个体携带病毒无显著差异,但是不同年龄段黑线姬鼠携带汉坦病毒却具有显著差异,年龄结构与病毒携带具有极显著的相关性.     

Balb/c乳鼠感染流行性出血热病毒后脑、肺的超微结构观察

流行性出血热为自然疫源性疾病。1978年Lee等用间接免疫荧光法,从黑线姬鼠鼠肺细胞中检出朝鲜出血热病毒,我国宋干等从黑线姬鼠、褐家鼠中分离出流行性出血热病毒,并证明可适应于     

SARS冠状病毒的分离培养与鉴定

采集急性期病人的咽拭子或漱口液,用Vero、Vero E6、MDCK、Hela、Hep-2等传代细胞,人胚肺二倍体细胞(HEL)和人胚肺(HP)细胞分离培养严重急性呼吸系统综合症(SARS)的病原体。结果用Vero、Vero E6、MDCK和HP细胞从标本中分离到一株病毒。间接免疫荧光试验发现,恢复期病人血清可与所分离的病毒起反应,在胞膜和胞浆中出现翠绿色荧光;中和试验结果表明,恢复期病人血清能中和病毒对细胞的致细胞病变作用;电镜下可观察到冠状病毒样颗粒;RT-PCR法可扩增到冠状病毒特异性基因片段,且其核苷酸序列与国内外发表的SARS冠状病毒(SARS-Cov)相应的基因序列相符,同源性达到100％。从传染性非典型肺炎病人的漱口液中分离到SARS冠状病毒,这种病毒与传染性非典型肺炎密切相关。     

SARS冠状病毒的分离培养与鉴定

采集急性期病人的咽拭子或漱口液,用Vero 、Vero E6、MDCK、Hela 、Hep-2等传代细胞,人胚肺二倍体细胞(HEL)和人胚肺(HP)细胞分离培养严重急性呼吸系统综合症(SARS)的病原体.结果用Vero、Vero E6、MDCK和HP细胞从标本中分离到一株病毒.间接免疫荧光试验发现,恢复期病人血清可与所分离的病毒起反应,在胞膜和胞浆中出现翠绿色荧光;中和试验结果表明,恢复期病人血清能中和病毒对细胞的致细胞病变作用;电镜下可观察到冠状病毒样颗粒;RT-PCR法可扩增到冠状病毒特异性基因片段,且其核苷酸序列与国内外发表的SARS冠状病毒(SARS-Cov)相应的基因序列相符,同源性达到100%.从传染性非典型肺炎病人的漱口液中分离到SARS冠状病毒,这种病毒与传染性非典型肺炎密切相关.     

肾综合征出血热Vero细胞疫苗毒种的选育及生物学特性研究

在肾综合征出血热(HFRS)疫苗Vero细胞毒种研制中,将肾综合征出血热(HFRS)病毒PS-6(Ⅰ型)、L99(Ⅱ型)在Vero细胞上连续传代,并对其病毒滴度、免疫原性、传代稳定性等进行检测。结果显示,两株病毒在Vero细胞上传代适应后,病毒滴度达8.5 lgCCID50/m l,免疫原性检查,将病毒灭活制成疫苗免疫家兔的血清中和抗体效价>1:10,其他检测符合规程要求。因此,适应的PS-6(Ⅰ型)和L99(Ⅱ型)毒种可用于制备Vero细胞出血热疫苗。     

不同来源的肾综合征出血热病毒对Vero细胞的致病变作用

前文报道,肾综合征出血热病毒76-118株能使Vero细胞产生病变。本文报道76-118株和另11株不同来源的肾综合征出血热病毒(H537、A9、H5、R178、HB55、R22、Z10,沟3、L99、A16和J10)对Vero细胞的致病变作用(CPE )。其中除沟3株外,大部分毒株在感染Vero细胞后的第一代即可见明显的CPE。CPE的特点与76-118株相似,主要是感染细胞粘聚、融合,形成网状结构。CPE能被特异性抗HFRS病毒血清和型特异性单克隆抗体所中和抑制,但不能被特异性抗呼肠孤病毒Ⅲ型免疫血清所中和抑制。HFRS病毒对Vero细胞的致病变作用,对进一步研究HFRS病毒的某些生物学特性及实验方法等均有重要意义。     

肾综合征出血热双价纯化疫苗（Vero细胞）安全性的研究

在肾综合征出血热（HFRS）双价纯化疫苗（Vero细胞）的研制中,对病毒培养用Vero细胞致瘤性和试制疫苗的过敏原性进行了动物实验研究,结果表明,病毒培养用Vero细胞无致瘤性,三批试制疫苗无过敏原性。说明用Vero细胞为培养介质的HFRS双价纯化疫苗是安全的。     

多克隆和单克隆抗体鉴定有肾综合征出血热病毒的四种血清型

<正> 前言 有肾综合征出血热(HFRS)病毒广泛地分布于欧亚大陆、日本、美洲和非洲。斯堪的纳维亚、苏联、中国和朝鲜是人类HF-RS疾病的地方性流行疫区。朝鲜出血热(KHF)的病因汉坦(Hantaan)病毒76-118株是由Lee等人于1978年从黑线姬鼠(A-podemus agrarius)分离到。1975年以来,日本从一些HFRS病例联想到与实验室大鼠     

严重急性呼吸综合征(SARS)患者不同组织中冠状病毒的分离和鉴定

严重急性呼吸综合征(SARS)自2002年11月在中国广东爆发后,已迅速蔓延成为全球性传染疾患。为了了解SARS冠状病毒的特征,对先前SARS冠状病毒PCR检测呈阳性的来自广东的3份尸检肺组织标本、2份尸检脾组织标本：来自北京的2份咽拭子标本和1份血清标本,利用10种不同的细胞系分离病毒。结果显示,上述标本在感染细胞后,分别可在293、Vero—E6、Vero、RD和HeLa细胞系中产生细胞病变(CPE)。不同标本在上述细胞系中致CPE的能力不同,但CPE出现的时间和病变形态学特征无显著性差异。以恢复期SARS病人血清为抗体,用间接免疫荧光法对感染后细胞培养的检测,冠状病毒RT-_PCR对感染后细胞RNA的检测,初步证明分离的病毒为冠状病毒。结果再次证明冠状病毒为SARS的病原,它具有较广泛的器官分布和细胞感染能力。血清中SARS冠状病毒的分离,高度提示在SARS发病过程中存在有病毒血症。     

东北三省6株肾综合征出血热病毒生物学性状的研究

肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome,HFRS)是我国重点防治的急性传染病,对于流行于不同地区的汉坦病毒(hanatavirus)进行分离和系统地鉴定,可以为HFRS的防治提供科学依据,特别是对流行株血清型及基因型的确定,是研制疫苗和确定防治重点及对策的重要前提,也为研究我国汉坦病毒的遗传和进化特征奠定了基础。研究对6株流行于东北三省的汉坦病毒进行了全面鉴定,其中H8205、H8207株为人源性汉坦病毒,其余均为鼠源性汉坦病毒。研究表明,6株病毒具有病毒型别明确,抗原性较为广谱,免疫原性好,在Vero细胞上适应能力强及病毒滴度高,以及来源及传代历史清楚等特点,适合作为双价HFRS纯化灭活疫苗候选毒株,并且可建立起完善和合格的生产用毒种库,为我国生产以Vero细胞为基质的双价肾综合征出血热纯化灭活疫苗奠定了坚实的基础。     

流行性出血热病毒在黑线姬鼠和大白鼠中水平与垂直感染的研究

南朝鲜型出血热(KHF)病毒是1976年李镐旺等人在南朝鲜京几道洞斗川邑松内里采集的黑线姬鼠的肺组织里首次发现的。其抗原能与出血热恢复期病人的血清发生特异反应。1978年,李氏从KHF病人血液中分离出同样的抗原,并在黑线姬鼠体上传代培养成功。1981年,French等人首次将这种病毒在人的肺癌组织培养     

肾综合征出血热实验动物模型的研究和应用

建立肾综合征出血热(HFRS)疾病动物模型是进一步深入研究其发病机理、药物筛选、疫苗制备、临床治疗的迫切需要。最早用于肾综合征出血热病毒(HFRSV)分离和实验研究的动物是非疫区黑线姬鼠,以后相继发现实验饲养的一些动物对HFRSV亦很敏感。目前有二种动物模型:一种为感染动物模型,供分离和培养病毒及感染试验用;另一种为致病模型,主要用于发病机理,疫苗制备及实验治疗等方面的研究。细胞培养分离病毒成功之后,大大简化了病毒的培养和扩增,然而体外细胞感染不可能代替完整的动物机体对病毒感染的反应性。因此建立一个     

一种诊断肾综合证出血热的新方法——血凝与血凝抑制试验

第四军医大学微生物教研室和安徽省医学科学研究所病毒室共同协作,首次用国内分离出的毒株建立了肾综合证出血热(HFRS)病毒血凝与血凝抑制试验。该法首先将国内各代表毒株和朝鲜出血热(KHF)病毒76/118株适应于乳鼠,在此基础上,参照汤一苇等报导的方法加以简化,从感染乳鼠脑中制备血凝素。对国内主要代表毒株血凝活性进行了研究。     

苏联欧洲疫区有肾综合征出血热病毒对实验动物和野生动物的适应

<正>来自朝鲜HFRS疫区啮齿动物中的HFRSV(H-aemorrhagic Fiver with Renal Syndrome Virus)已在自然宿主野鼠类——黑线姬鼠(Apodemus agrarius)群中适应成功,并能连续传代。在苏联欧洲HFRS疫区发现的几种啮齿动物中,已检测出有肾综合征出血热病毒抗原,可是这种病毒主要是贮藏于保存宿主的棕背(鼠平)(Clethrionomys glareolus)野鼠中。本文试图介绍以实验室纯系化的棕背(鼠平)、西伯利亚旅鼠——草原兔尾鼠(Lagurs Laurs)、欧洲大鼠——纹背毛(足庶)鼠(Phodopus Sungorus)黑线姬鼠、Wistar大白鼠以及无胸腺的小鼠对HFRS苏联欧洲地区株适应的结果。实验室纯系化的棕背(鼠平)系从1968年以来,尚未发现有HFRSV自发感     

多聚酶链反应技术鉴别肾综合征出血热病毒血清型的初步研究

肾综合征出血热(HFRS)为一组抗原性密切相关的布尼亚科汉坦病毒引起的急性传染病。在我国存在至少两种临床表现、动物宿主及流行特征截然不同的血清型别,即血清Ⅰ型(汉坦型)和血清Ⅱ型(汉城型)。这两型病毒间的血清学定型已有报道。近年来,除啮齿类动物外,从临床病人以及非啮齿类动物体内也分离到了HFRS病毒。同时出现两类型别毒株共存,以及从家鼠体内分离到野鼠型毒株或从野鼠体内分离到家鼠型毒株的复杂情形。为此,准确检定并鉴别不同来源毒株型别,将为深入了解其病原学、流行病学以及制定疫苗生产策略提供重要信息。     

光敏生物素标记cDNA探针在肾综合征出血热实验诊断中的初步应用

本文用光敏生物素标记的R3 cDNA探针杂交检测了HFRS患者外周血淋巴细胞、血清和尿沉淀细胞中HFRS病毒核酸。结果42份淋巴细胞标本中30份为阳性,48份血清标本中有24份出现阳性杂交信号,81份尿沉淀细胞标本中53份为阳性,表明将此光敏生物素标记的cDNA探针用于HFRS实验诊断和致病机理的研究是可行的。     

2006年广州登革热病原体的分离鉴定及其生物学性质的观察

目的：对2006年广州流行登革热病原进行分离鉴定及生物学性质研究。方法：采用传代蚊细胞微量培养方法对2006年广州登革热病原进行分离,并通过脑内途径观察其对乳鼠的致病性;经间接免疫荧光和RT-PCR技术,对患者血清标本中的病毒特异抗体及新分离的病原体进行检测和鉴定;将此次分离的病原体与1980年分离的同型毒株进行生物学性质比较。结果：从57份患者血清标本中分离出10株病毒,在传代蚊细胞中可产生稳定的细胞病变并对乳鼠致病;其基因组为登革1型病毒特异的RNA分子,经鉴定为登革1型病毒;此次分离的登革1型病毒与1980年分离的同型毒株在致细胞产生病变的时间和严重程度,蚀斑的大小、形态以及致乳鼠发病的时间等生物学性质上有所不同。结论：2006年广州流行登革热病原为登革1型病毒,且与1980年分离的同型毒株在生物学性质方面存在明显差异。     

大林姬鼠体内流行性出血热病毒的分离与鉴定

本文报告用A-549细胞从5份流行性出血热(EHF)免疫荧光(IF)阳性的中国东北林区的大林姬鼠鼠肺中分离出两株与EHF相关的病原体,现已稳定传至第10代。用第8代感染细胞制成滴片标本,经IF染色检查,细胞浆内有特异性颗粒荧光。并对其中一株(A54)进行了系统鉴定,经特异性阻断试验、过