黄芩苷对嗜水气单胞菌生物膜形成的影响及体内外的抑菌作用

[目的] 探讨中药单体黄芩苷对嗜水气单胞菌在体内外生长及生物膜形成的影响。[方法] 体外实验中,利用牛津杯法检测抑菌圈直径,结晶紫法检测生物膜的形成,通过泳动实验检测黄芩苷对嗜水气单胞菌运动性的影响,紫外吸收法检测细胞膜完整性,用透射电镜技术观察黄芩苷对细菌形态的影响。体内实验利用草鱼为对象检测黄芩苷对嗜水气单胞菌增殖的影响。[结果] 黄芩苷在体外对嗜水气单胞菌有明显的抑菌效果,通过对生物膜的研究发现黄芩苷对生物膜形成具有抑制作用,并同时抑制其运动性。同时黄芩苷可以破坏细胞结构,并增加了细胞膜通透性。体内实验结果显示黄芩苷对嗜水气单胞菌具有清除作用,且具有一定的浓度依赖性。[结论] 黄芩苷在体内外均具有抑制嗜水气单胞菌增殖的作用,有望在水产养殖病害防治工作中得到应用。     

黄芩苷抗炎作用机制的研究进展

黄芩苷(baicalin)是由黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)根部分离而来的黄酮类物质,为黄芩的主要活性成分。黄芩苷药理作用广泛,具有良好的抗炎效果,其主要机制包括调节肠道菌群、抑制核因子κB(NF-κB)核转位、增加相关microRNA的表达、抑制自噬、调节Treg/Th17平衡等。现综述黄芩苷抗炎症作用机制的最新研究进展,为其深入研究及在临床上的应用提供依据。     

黄芩苷抑制H5N1禽流感病毒进入的机制研究

研究黄芩苷抑制H5N1禽流感假病毒的活性及其作用机理。采用H5N1假病毒检测体系,观察黄芩苷对不同H5N1禽流感假病毒株进入的抑制作用;并结合VSVG假病毒为阴性对照,判定黄芩苷是特异性的作用于H5N1禽流感病毒的进入环节;采用血凝抑制实验、ELISA实验分析其作用机理,采用MTT法测定黄芩苷毒性。黄芩苷能特异性的抑制A/Anhui/1/2005,A/Xinjiang/1/2006,A/Hong Kong/156/1997,A/Qinghai/59/2005,A/Thailand/Kan353/2004,A/Viet Nam/1194/2004 H5N1禽流感假病毒株的进入,IC50分别为65.76±5.61μM、54.98±4.38μM、46.81±5.12μM、32.88±4.18μM、63.30±1.59μM、43.23±3.43μM;黄芩苷对血凝素HA2亚基有抑制作用,IC50为35.86±3.09μM。黄芩苷在体外具有抑制H5N1禽流感进入的作用,其作用机制为抑制血凝素HA2亚基。     

黄芩苷对肺癌细胞A549增殖和迁移的作用研究

肿瘤恶化的根本原因是肿瘤细胞的过度增殖和转移,黄芩苷作为一种黄酮类天然药物,对保护血管功能、抑菌、消炎等都具有良好的效果。本研究观察不同浓度黄芩苷对体外培养人肺癌A549细胞的增殖和迁移的作用,探讨黄芩对肿瘤细胞转移的调控作用,以期开发黄芩苷作为肿瘤抑制药物的重要潜能。将0μm/L、20μm/L、40μm/L、60μm/L、80μm/L和100μm/L的黄芩苷处理细胞6 h,采噻唑蓝(MTT)、Tranwell小室迁移、显微形态观察等细胞学方法检测不同浓度的黄芩苷对细胞增殖和迁移的影响。结果显示,与对照组相比,不同浓度的黄芩苷均能抑制肺癌细胞的增殖和迁移,且抑制作用呈剂量依赖效应,80μm/L和100μm/L的黄芩苷能显著抑制肺癌细胞的增殖效率(p0.01)。我们得出这样的结论,黄芩苷对肺癌细胞的增殖和迁移具有抑制作用,且抑制效果与药物使用剂量正相关,黄芩苷对于肿瘤治疗效果的研究具有重要意义,有望成为高效抑制肿瘤发生的候选药物。     

黄芩苷对血管平滑肌细胞增殖的调控作用及相关信号通路研究

血管平滑肌细胞(VSMC)过度增殖是多种血管疾病发生的根本原因,黄芩苷作为一种传统植物天然药物,具有抗菌、消炎以及保护血管等多种功能。本研究采用细胞学及分子生物学手段,通过CCK-8法检测不同浓度的黄芩苷(0μmol/L,50μmol/L和100μmol/L)对VSMC增殖的作用,同时测定增殖细胞核抗原PCNA的转录水平,进一步对VSMC增殖进行基因水平上的验证。同时,对MAPK信号通路中的关键因子ERK的表达量进行定量检测,分析黄芩苷调控VSMC增殖的信号通路。结果显示黄芩苷对VSMC增殖具有抑制作用,且呈药物剂量依赖效应;此外,VSMC中ERK的表达水平也随黄芩苷使用浓度增大而降低,从而推测黄芩苷可能通过调控ERK介导的相关信号途径实现对VSMC增殖的阻抑,达到防止血管发生病变的目的。此研究对保护血管功能和开发治疗血管疾病新药物具有积极的意义,也为代谢工程在天然药物开发方面的应用提供理论依据和实践基础。     

黄芩苷对人肝癌细胞增殖抑制及放疗增敏作用

目的:探讨黄芩苷对人肝癌细胞Hep G2增殖抑制及放疗增敏作用。方法:以人肝癌细胞株Hep G2为研究对象,用CCK-8法和流式细胞仪检测黄芩苷对肝癌细胞增殖的影响和肝癌细胞放射敏感性的改变。结果:CCK-8法检测黄芩苷对Hep G2的生长有显著抑制作用且具有剂量依赖性,与阴性对照组对比差异有统计学意义(P0.05)。黄芩苷能使处于G0/G1、G2/M期的细胞减少,S期细胞增加。同时,黄芩苷对Hep G2放疗具有增敏作用。结论:黄芩苷可抑制人肝癌细胞增殖,可能与影响细胞周期有关;黄芩苷能增强肝癌细胞放射敏感性。     

黄芩苷对巨细胞病毒神经系统感染小鼠学习记忆功能及海马中细胞凋亡的调节作用

新生儿感染巨细胞病毒(Cytomegalovirus,CMV)能够引起中枢神经系统不可逆损害,遗留神经功能缺损,危害较大,但缺乏有效的防治手段。黄芩苷是中药材黄芩中的黄酮类活性物质,具有抗凋亡、抗氧化、抗炎等功能,对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤具有保护作用。基于此,本研究将黄芩苷用于小鼠巨细胞病毒(Mouse cytomegalovirus,MCMV)感染新生KM小鼠的干预,并探究黄芩苷对MCMV感染后中枢神经损害的保护作用。为研究黄芩苷对MCMV神经系统感染小鼠学习记忆功能及海马中细胞凋亡的调节作用,本研究将新生KM小鼠随机分为对照组、MCMV组、黄芩苷组、黄芩苷+U0126组,后三组腹腔注射MCMV病毒悬液以获得MCMV神经系统感染模型,MCMV组给予生理盐水灌胃,黄芩苷组给予黄芩苷灌胃,黄芩苷+U0126组则给予黄芩苷灌胃及U0126腹腔注射。比较四组学习记忆功能指标及海马组织中MCMV载量、细胞凋亡率、凋亡基因表达量、信号通路基因表达量。结果显示:与对照组比较,MCMV组小鼠的逃避潜伏期明显延长(P0.05),穿平台次数明显减少(P0.05),海马组织中MCMV-DNA载量、细胞凋亡率及bax、cleaved-caspase-3的表达量明显增加(P0.05),海马组织中bcl-2、p-MEK1、p-ERK1/2的表达量明显降低(P0.05);与MCMV组小鼠比较,黄芩苷组小鼠的逃避潜伏期明显缩短(P0.05),穿平台次数明显增多(P0.05),海马组织中MCMV-DNA载量无明显变化(P0.05),海马组织的细胞凋亡率及bax、cleaved-caspase-3的表达量明显降低(P0.05),海马组织中bcl-2、p-MEK1、pERK1/2的表达量明显增加(P0.05);与黄芩苷组比较,黄芩苷+U0126组小鼠的逃避潜伏期明显延长(P0.05),穿平台次数明显减少(P0.05),海马组织中MCMV-DNA载量无明显变化(P0.05),海马组织的细胞凋亡率及bax、cleaved-caspase-3的表达量明显增加(P0.05),海马组织中bcl-2、p-MEK1、p-ERK1/2的表达量明显降低(P0.05)。综上,黄芩苷能够改善MCMV神经系统感染小鼠的学习记忆功能,通过激活MEK1/ERK1/2途径抑制海马中细胞凋亡是其可能的分子机制。     

黄芩苷作为一种抗生物制剂的过敏反应的研究

通过黄芩苷抗生物制剂过敏反应的研究,在不影响疫苗免疫效果的前提下,解决注射生物制剂引起的过敏反应问题,为生物制品与天然药物相结合开辟了一条新路。采用生物制品过敏试验常规检测方法。黄芩苷使用安全,抗过敏作用明显,具有抑制肥大细胞脱颗粒和降低毛细血管通透性作用。黄芩苷与生物制品相结合,初步试验结果表明有抗动物过敏反应的效果。     

黄芩苷对结肠癌细胞凋亡的影响及作用机制

黄芩苷在多种肿瘤中具有较高的抗肿瘤活性,然而,其在结肠癌中的抗肿瘤作用尚不清楚。本研究考察了黄芩苷对人结肠癌细胞系RKO的增殖和凋亡的影响,并探讨了其相关作用机制。研究发现,黄芩苷可按照剂量依赖性方式和时间依赖性方式抑制结肠癌细胞增殖及集落形成能力。流式细胞术显示,与对照细胞相比,黄芩苷处理后的RKO细胞的凋亡率显著增加(5.6%vs 33.6%)。RT-PCR和Western blotting检测显示,黄芩苷处理可显著增加结肠癌RKO细胞中DKK1 (Wnt信号通路的关键负调节因子) mRNA和蛋白表达水平。相反,黄芩苷处理则显著抑制结肠癌RKO细胞中c-Myc和β-catenin (DKK1的下游靶基因)的m RNA和蛋白表达。敲低DKK1后明显阻断了黄芩苷诱导的结肠癌细胞中DKK1蛋白的上调。此外,敲低DKK1逆转了黄芩苷对其下游基因c-Myc和β-catenin的抑制作用。黄芩苷处理后,结肠癌细胞中miR-217的表达显著下调。RT-PCR和Western blotting结果显示,下调miR-217显著促进DKK1的mRNA和蛋白表达。综上所述,本研究表明黄芩苷可通过抑制结肠癌细胞增殖并诱导细胞凋亡来发挥其抗肿瘤作用,黄芩苷通过激活结肠癌细胞中DKK1来抑制Wnt信号通路。此外,黄芩苷通过下调结肠癌细胞中miR-217的表达来上调DKK1的表达,从而起到抗癌作用。     

人肠道菌对黄芩苷的生物转化

本研究利用体外培养人体肠道菌转化黄芩苷,探索转化方法及模型;用醇沉法提取了黄芩苷转化酶,即β-D-葡萄糖醛酸苷酶,并探讨了酶促影响因素;通过高效液相色谱检测产物黄芩素。经实验确定,黄芩苷转化培养液经超声波处理后,在转化液中有黄芩素检出。实验得知,转化酶为胞内酶,该酶的最适反应温度为55℃,最适pH为6.0,Ca2+、Mg2+和Cu2+对酶促反应具有促进作用,而Fe2+则具有抑制作用,Zn2+浓度在l mmol/L时起促进作用,在5 mmol/L时起抑制作用。     

光质对悬浮培养黄岑细胞生长及黄岑苷积累的影响

研究了不同光质、光强和光期对悬浮培养黄芩(Scutellaria baicalensis)细胞的生长、细胞中苯丙氨酸氨基裂解酶(PAL)活性及黄芩苷含量的影响。白光、紫外光、红光和蓝光对悬浮培养黄芩细胞PAL活性和黄芩苷含量有不同的影响。白光、紫外光和蓝光对PAL活性和黄芩苷的积累具有诱导促进作用,其中紫外光的促进作用最强,白光和蓝光的促进作用较弱,而红光照射对PAL活性和黄芩苷的积累有一定的抑制作用。在0-60μmolm-2s-1紫外光照射强度范围内,PAL活性和黄芩苷含量随着紫外光照射强度的增加而显著提高。实验结果同时表明,红光照射显著促进黄芩细胞的生长,紫外光抑制黄芩细胞的生长,而蓝光和白光对悬浮培养黄芩细胞生长的促进作用不明显。与黑暗(对照)相比,每天8h光照强度为60μmolm-2s-1的紫外光、16h光照强度为50μmolm-2s-1的红光交替处理,在培养12d后,细胞的鲜重和黄芩苷含量为对照的1.16和3.2倍,黄芩苷的产量达到439mgL-1,是对照的3.8倍。     

汉黄芩苷通过调节抗氧化基因表达和机体代谢延长果蝇寿命

为探究汉黄芩苷是否具有抗衰老作用,本研究以果蝇为模型,考察汉黄芩苷对果蝇自然寿命的影响。采用RT-PCR和UPLC-MS/MS 代谢组学技术,探索汉黄芩苷发挥抗衰老作用的潜在机制。结果显示,0.02和0.5 mg/mL 汉黄芩苷均可整体延长果蝇寿命,并能够分别延长果蝇平均寿命5.64%和5.39%,延长最高寿命2.74%和5.12%;与30 d组相比,汉黄芩苷能够显著上调果蝇体内抗氧化酶基因SOD1、SOD2和CAT的表达水平,下调MTH的表达水平。果蝇代谢组学分析共找到17个潜在生物标志物,主要参与氨基酸代谢（D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代谢,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢,精氨酸和脯氨酸代谢,缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸代谢）和能量代谢（氮代谢）。该结果表明,汉黄芩苷延缓衰老与上调抗氧化基因表达和调控不同代谢途径有关。     

黄芩苷通过降低活性氧生成抑制血管平滑肌细胞伪足形成和迁移北大核心CSCD

已知黄芩苷(baicalin)通过削弱肌动蛋白相关蛋白(actin-related protein,Arp)2/3复合物的活性抑制血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)伪足形成和迁移,然而,其抑制该信号途径的机制尚不明确。本研究证明,黄芩苷通过抑制VSMC活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成降低Arp2/3活性,发挥阻止细胞伪足形成和迁移的功能。分别利用TRITC-鬼笔环肽和ROS荧光探针标记VSMCs,结果显示,黄芩苷能显著抑制血小板源性生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)-BB诱导的VSMC伪足形成和迁移,伴有ROS生成减少。用超氧物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)清除胞内过氧化物后,PDGF-BB引发的VSMC伪足形成被逆转,且该过程与降低皮层肌动蛋白微丝(F-actin)成核蛋白Arp2/3活性有关。免疫沉淀分析结果进一步表明,黄芩苷降低p47phox磷酸化水平,与ROS生成减少相一致。体内的实验也表明,黄芩苷(70 mg/kg/d)能有效抑制球囊损伤诱导的大鼠颈总动脉ROS生成。以上结果表明,黄芩苷通过抑制NADPH氧化酶介导的ROS生成,降低细胞皮质区F-actin成核活性,阻止细胞伪足形成、迁移,进而发挥血管保护作用。     

PI3K/AKt/mTOR信号通路介导黄芩苷抑制增生性瘢痕组织成纤维细胞的增殖

黄芩苷作为一种黄酮类成分可通过抑制细胞增殖、促进凋亡发挥抗肿瘤作用,但它是否对异常增生的瘢痕具有抑制增生的作用尚不清楚.本研究探讨黄芩苷抑制人增生性瘢痕组织成纤维细胞增殖的分子机制. 采用MTT比色法检测不同浓度的黄芩苷（2.24×10-2 ～ 2.24×102 mmol/L）对体外培养的增生性瘢痕组织成纤维细胞增殖的抑制作用.发现浓度为2.24×100～2.24×102 mmol/L黄芩苷处理组明显抑制增生性瘢痕组织成纤维细胞的增殖（P<0.05）.转染后的荧光素酶报告基因活性检测、RT-PCR及Western印迹分析技术检测其mRNA水平及细胞的帽状依赖翻译的表达.2.24×102 mmol/L黄芩苷处理后,黄芩苷作用组的mRNA水平并无明显差异（P>0.05）;增生性瘢痕成纤维细胞的帽状依赖结构的翻译明显被黄芩苷所抑制.采用Western印迹分析检测被黄芩苷干预的增生性瘢痕组织成纤维细胞的增殖相关的蛋白的表达;m7GTP琼脂糖珠沉淀结合蛋白4E-BP1与eIF4E的变化.发现增殖相关的蛋白mTOR、p70S6K、S6、4EBP1、eIF4E及其上游的AKT表达明显下调（P<0.05）,而PTEN表达明显上调.p-AKT(Ser473)、p-mTOR(Ser2448)、p-S6(Ser235/236)、p-4EBP1(Thr37/ 46)、p-PTEN（T380/S382/383）磷酸化水平下降（P<0.05）.在黄芩苷作用下的增生性成纤维细胞中的游离的4E-BP1明显减少（P<0.05）,而与eIF4E结合的4E-BP1明显增加（P<0.05）黄芩苷诱导游离的4E-BP1与eIF4E结合,从而抑制帽状依赖蛋白翻译.以上结果说明,黄芩苷可通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制人增生性瘢痕组织成纤维细胞的增殖.     

连翘苷和黄芩苷对表皮葡萄球菌生物膜抑制作用的研究

目的通过中药有效成分连翘苷和黄芩苷分别对表皮葡萄球菌生物膜抑制作用的研究,为表皮葡萄球菌生物膜引起的相关感染提供新的治疗途径。方法体外构建表皮葡萄球菌生物膜,XTT减低法评价连翘苷、黄芩苷对表皮葡萄球菌初始黏附及生物膜内细菌代谢的影响,显微镜下观察用药后表皮葡萄球菌生物膜形态和结构改变。结果连翘苷和黄芩苷对表皮葡萄球菌生物膜的早期黏附均无抑制作用;连翘苷对表皮葡萄球菌生物膜菌的SMIC50为31.25μg/ml,而黄芩苷对表皮葡萄球菌生物膜菌的代谢无影响;在显微镜下观察,连翘苷使部分表皮葡萄球菌被膜的形态发生改变,而黄芩苷对其形态影响不显著。结论连翘苷对表皮葡萄球菌生物膜的初始黏附阶段无抑制作用,对生物膜菌的代谢和生物膜形态均有显著影响;黄芩苷对表皮葡萄球菌生物膜无显著作用。     

丁香花蕾油作为微乳的油相促进黄芩苷透皮吸收的研究

目的:黄芩苷作为黄芩的主要成分之一,其制剂虽应用广泛,但存在较多缺点,如水溶液不稳定、口服吸收差、生物利用度不高及药物体内半衰期短等从而导致用药剂量大且频繁给药。本文目的是研究丁香花蕾精油及其微乳对黄芩苷体外经皮渗透性的影响。方法:采用Valia-Chien扩散池,以生理盐水为接受液,不同浓度的丁香花蕾精油以及以丁香花蕾精油作为微乳的油相及促进剂进行大鼠离体皮肤的体外渗透实验。结果:黄芩苷微乳的平均粒径为41.3±5.1 nm,多分散指数为0.18,表明该制剂粒径小且均一。微乳(不含丁香花蕾精油)、丁香花蕾精油及含丁香花蕾精油的微乳对黄芩苷均有不同程度的增渗作用。其中,含丁香花蕾精油的微乳对黄芩苷的促渗作用最强。结论:丁香花蕾精油以及以丁香花蕾精油作为微乳的油相对黄芩苷均有一定的促进渗透作用。     

黄芩黄酮总苷元提取新方法的研究

研究黄芩黄酮总苷元提取制备新方法。以黄芩苷的酶解率为评价指标,筛选黄芩酶液制备的pH值;以黄芩苷提取率为评价指标,采用正交实验对影响黄芩提取的加水量、煎煮时间和煎煮次数进行优选;确定黄芩黄酮总苷元提取制备方法为:黄芩粗粉以pH3水搅拌提取0.5 h,过滤,得到黄芩酶液;药渣投入12倍量沸水中,调pH6煎煮两次,每次0.5 h,过滤,合并滤液,加入上述黄芩酶液,调pH6,于50℃酶解6 h,过滤,沉淀干燥,即得黄芩黄酮总苷元提取物。该方法简便可行,黄芩素提取率约为80%,提取工艺稳定,为从黄芩中提取黄芩黄酮总苷元提供参考方法。     

黄芩苷通过降低活性氧生成抑制血管平滑肌细胞伪足形成和迁移

已知黄芩苷（baicalin）通过削弱肌动蛋白相关蛋白（actin-related protein, Arp）2/3复合物的活性抑制血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell, VSMC）伪足形成和迁移,然而,其抑制该信号途径的机制尚不明确。本研究证明,黄芩苷通过抑制VSMC活性氧（reactive oxygen species,ROS）生成降低Arp2/3活性,发挥阻止细胞伪足形成和迁移的功能。分别利用TRITC 鬼笔环肽和ROS荧光探针标记VSMCs,结果显示,黄芩苷能显著抑制血小板源性生长因子（platelet derived growth factor, PDGF）-BB诱导的VSMC伪足形成和迁移,伴有ROS生成减少。用超氧物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）清除胞内过氧化物后,PDGF-BB引发的VSMC伪足形成被逆转,且该过程与降低皮层肌动蛋白微丝（F-actin）成核蛋白Arp2/3活性有关。免疫沉淀分析结果进一步表明,黄芩苷降低p47phox磷酸化水平,与ROS生成减少相一致。体内的实验也表明,黄芩苷（70 mg/kg/d）能有效抑制球囊损伤诱导的大鼠颈总动脉ROS生成。以上结果表明,黄芩苷通过抑制NADPH氧化酶介导的ROS生成,降低细胞皮质区F-actin成核活性,阻止细胞伪足形成、迁移,进而发挥血管保护作用。     

温度和相对湿度对黄芩苷吸湿性的影响和模型拟合研究

黄芩苷是从黄芩根部提取的黄酮类化合物,具有抗菌、利尿、抗炎、解痉和抗肿瘤作用,它含有羟基、羧基等极性基团,因此会吸附空气中水蒸气而具有吸湿性。本文研究温度和相对湿度对黄芩苷吸湿性的影响并对其吸湿数据进行模型拟合,结果表明低温和高湿度导致黄芩苷具有较高的平衡吸湿量和较大的吸湿速度;1st Opt软件统计分析得出吸湿动力学双指数模型、吸附等温线Peleg模型拟合效果较好。     

黄芩苷对STZ诱导糖尿病大鼠肾组织保护作用实验研究

目的探讨黄芩苷对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠肾组织的保护作用及其相关机制。方法将用STZ造模成功的糖尿病大鼠48只,随机分为模型组、黄芩苷低、中、高剂量组,每组12只,另设空白组12只。持续给药18周。给药结束后测血糖、24小时尿蛋白总量、血浆及肾组织中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的含量、转化生长因子β1(TGF-β1)。结果与模型组比较,黄芩苷中、高剂量组能明显降低糖尿病大鼠血肌酐和24小时尿蛋白量,降低血浆中AngⅡ的含量,减少TGF-β1的表达。结论黄芩苷对糖尿病大鼠肾组织具有较好的保护作用,其机制可能通过降低糖尿病大鼠血浆中AngⅡ含量,抑制TGF-β1过度表达,改善肾小球毛细血管和基底膜的通透性,对糖尿病大鼠肾脏起保护作用。