变链素活性与变形链球菌基因多态性的关系研究

目的探讨变链素的活性与变形链球菌(MS)基因多态性的关系。方法在AP-PCR基因分型的基础上,选择来自单基因型定植的个体50株MS为单基因型组,另50株来自多基因型共同定植的个体为多基因型组,用平板法检测2组菌株产生变链素对10个指示株的抑制情况,T-检验比较2组菌株抑菌环和抑菌谱的均数差异。结果所有的实验株(100%)均可产生抑制6~8个指示株的变链素,抑菌环和抑菌谱在不同个体之间变异,组间均数的比较不具有显著性(P值分别是0.12,1.79)。结论多基因型MS定植的口腔,在产生变链素方面似乎不具有优势。     

汉族与维吾尔族儿童封闭型不同龋敏感中变形链球菌乳酸脱氢酶遗传多态性研究

目的探讨汉族与维吾尔族儿童封闭型不同龋敏感中变形链球菌乳酸脱氢酶活性与ldh基因多态性及龋病发生的关系。方法从前期实验分离的维吾尔族与汉族儿童口腔变形链球菌中筛选出:维吾尔族儿童封闭型口腔变形链球菌高龋组变形链球菌35株[龋失补牙数(dmft)≥5],无龋组变形链球菌37株[龋失补牙数(dmft)=0];27株表现乳酸脱氢酶高活性,24株低活性;汉族儿童口腔中分离的高龋和无龋变形链球菌各35株,高活性和低活性各25株,使用特异引物扩增细菌组DNA,获得结构基因ldh,进行聚合酶链反应-限制性内切酶多态性分析。结果维吾尔族儿童封闭型和汉族儿童MseⅠ酶切ldh-RFLP表现A、B两种基因型;而MnlⅠ、DdeⅠ、NlaⅢ和AluⅠ消化扩增产物未发现多态性。MseⅠ产生的B基因型菌株在维吾尔族儿童封闭型,汉族儿童高龋组的检出均高于无龋组(P0.05),A、B两种基因型在不同酶活性组的分布不同(P0.05),高酶活性组B基因型菌株的比例高于低酶活性组;A、B基因型在维吾尔族儿童封闭型和汉族高龋组、无龋组,高酶活性组和低酶活性组的检出比较差异无统计学意义(P0.05)。结论变形链球菌乳酸脱氢酶基因多态性在维吾尔族与汉族儿童并未表现出差异性,ldh基因多态性与变形链球菌乳酸脱氢酶活性及龋高敏感性相关。ldh基因分布与酶活性及乳牙龋具有正相关性。     

液体培养基中天然变链素的纯化

目的 从变形链球菌临床株的液体培养基中分离纯化变链素,为进一步从分子水平研究变链素奠定基础.方法 通过抑菌活性检测,从变链临床株中选择出抑菌活性较强的菌株.用氯仿抽提法从该菌株的培养液中粗提变链素,经固相萃取和反相高效液相色谱(RP-HPLC)对粗提物进行纯化.结果 获得变链素活性较强的菌株"1G".从其200 ml液体培养基中粗提出变链素约15 μg,经固相萃取柱洗脱,再经过RP-HPLC 2次纯化,得到有抑菌活性的成分,此为纯化的变链素.结论 变链素分子量小,分离提纯步骤复杂,本实验得到纯化的变链素,为下一步研究变链素的氨基酸序列和基因序列奠定了基础.     

维吾尔族不同龋敏感儿童变形链球菌临床分离株表面蛋白V区遗传多态性研究

目的比较维吾尔族高龋和无龋儿童变链菌临床分离株表面蛋白V区遗传多态性与其合成水不溶性葡聚糖的关系。方法选取课题组前期实验所得的维吾尔族高龋儿童合成水不溶性葡聚糖能力较强的变形链球菌临床株18株和无龋儿童合成水不溶性葡聚糖能力较弱临床株12株。提取全菌DNA,经PCR扩增其表面蛋白可变区V区编码基因SrV~+后,利用限制性内切酶DdeⅠ进行限制性片段长度多态性分析。结果经DdeⅠ酶切后,高产糖组变链菌出现了4种基因型,低产糖组出现了3种基因型。这几种基因型在不同产糖组中的分布不同(P0.05)。结论维吾尔族不同龋敏感儿童变形链球菌临床分离株SrV~+基因的遗传多态性可能是其合成水不溶性葡聚糖能力出现差异的因素之一。     

武汉市306名儿童牙菌斑中变形链球菌的血清型

本试验共检测了306例5～6岁学龄前儿童牙菌斑中的变形链球菌,在其中208名患龋齿病儿童的牙菌斑中分离出304株变形链球菌,用双向琼脂扩散法进行血清学鉴定,c、e、f血清型有259株,占所分离的变链菌总数的85.19%,其中c型206株占68%,e型37株占12%,f型16株占5%。在有龋组和无龋组牙菌斑中变链菌培养阳性率比较,有龋组变链菌培养阳性率明显高于无龋组(P<0.01)。本试验提示变链菌是武汉地区龋齿病的重要致病因素之一;武汉地区龋齿病的儿童中感染的变形链球菌血清型以c型为主。     

变形链球菌中的次级代谢产物及其在口腔生物被膜中的生态功能

口腔生物被膜是由数百种微生物构成的复杂微生物群体。变形链球菌作为其中的重要一员,被认为是引起龋病的主要病原菌。变形链球菌在牙齿表面以生物被膜形式生长的能力和它产酸耐酸的特点赋予其致龋性。不同的变形链球菌菌株之间保留了多样的次级代谢形式,这是与宿主长期共进化的结果。迄今为止,变形链球菌中报道的次级代谢产物包括10种细菌素(又称变链素)和一种聚酮/非核糖体肽类化合物。这些化合物多样的活性形式暗示了它们参与口腔生物被膜中跨种间和跨界间的相互作用。未来随着变形链球菌菌株数目的增加和更多菌株全基因组序列的完成,可以预见会有更多新颖活性次级代谢产物的出现。对变形链球菌次级代谢的研究不仅有助于治疗和预防口腔疾病,而且新颖活性次级代谢产物的发现对新药的研发也具有重要意义。     

儿童牙齿表面的菌群分布与龋齿的关系

本实验从幼儿园和小学一年级的学生中选择５－８岁的无龋齿和有龋齿的儿童各４５例,进行牙齿表面的菌群分布与龋齿关系的研究,结果在有龋组中分离到变形链球菌８株,放线菌６株及拟杆菌２６株,而在无龋组中未分离到变形链球菌,分离到放线菌１株,拟杆菌１４株,两组比较,以上三种菌有显著差异（Ｘ２检验Ｐ＜０．０５）。说明除变形链球菌是主要的致龋菌外〔１,２〕,还应考虑放线菌和拟杆菌在龋齿发生上的作用。此外,我们还发现两组的兼性厌氧菌的分布也有所不同,无龋组中分离到棒状杆菌２９株,而有龋组中分离到棒状杆菌１１株,小肠结肠炎耶尔森氏菌７株,两组也有明显差异,故我们认为龋齿发生的原因可能是多方面的,就病原菌来说,也可能是多种细菌的混合作用,从两组兼性厌氧菌与无芽胞厌氧菌的分布不同来看,亦应考虑龋齿的发生与口腔内生态平衡有关     

维吾尔族不同龋敏感儿童变链菌临床分离株不同生存状态合成胞外多糖能力的研究

目的比较维吾尔族不同龋敏感儿童变链菌临床分离株生物膜状态和浮游状态致龋能力的差异。方法根据析因实验设计分组,选取课题组前期分离鉴定的维吾尔族儿童变链菌临床株27株,其中17株高龋菌株[龋失补牙数（dmft）≥5],10株无龋菌株[龋失补牙数（dmft）=0]。分别在24孔板静止培养以及在试管内摇动培养。采用蒽酮法测定高龋组与无龋组分别在生物膜状态和浮游状态下合成胞外多糖的量。使用SPSS 17.0软件包对实验结果进行析因分析。结果高龋组生物膜状态下合成水溶性与非水溶性葡聚糖量分别为（0.3011±0.0398）mg/mL、（0.3711±0.0372）mg/mL,高于浮游状态的（0.2300±0.0438）mg/mL、（0.2356±0.0568）mg/mL,无龋组生物膜状态下合成水溶性与非水溶性葡聚糖分别为（0.2067±0.0264）mg/mL、（0.3489±0.0537）mg/mL,高于浮游状态的（0.1489±0.0325）mg/mL、（0.1578±0.0227）mg/mL,差异有统计学意义（P〈0.05）。并且高龋组合成胞外多糖量均高于无龋组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论维吾尔族高龋儿童变链菌临床分离株的高致龋力可能与其携带有合成胞外多糖能力较强的菌株有关。     

儿童口腔内变形链球菌、乳酸杆菌的检出情况分析

调查评估年龄<12岁儿童口腔内变形链球菌及乳酸杆菌的检出情况及其与龋病的相关性。100例纳入实验的受试者根据不同龋敏感程度分为无龋组(DMFS=0)50人,高龋组(DMFS≥6)50人,按照不同龋敏感度、不同部位采集样本,用乳酸杆菌选择性培养基Rogosa和变形链球菌选择性培养基MSB,将乳酸杆菌和变形链球菌分离,经形态学及生化鉴定。统计2种细菌在不同分组中的检出率及不同致龋菌病例数,研究二者的致龋相关性。乳酸杆菌在100例研究对象中乳酸杆菌在龋坏深层检出率最高76%与光滑面(40%)、窝沟(48%)及唾液(40%)检出率比较有统计学意义(P<0.05),而龋坏深层变形链球菌检出率46%与光滑面(84%)、窝沟(68%)及唾液(78%)检出率比较最低(P<0.05);高龋人群变形链球菌检出率88%,乳酸杆菌检出率为76%均较无龋组相应细菌检出率26%、28%差异有统计学意义(P<0.05)。变形链球菌和乳酸杆菌随着龋敏感度的增加,乳酸杆菌和变形链球菌检出率增高;在龋坏深层更适于乳酸杆菌生长,且其对变形链球菌有一定的抑制作用。     

伊犁黑蜂蜂胶对口腔主要致龋细菌及生物膜生长的实验研究

目的研究伊犁黑蜂蜂胶对口腔常见致龋细菌及其生物膜生长的影响,观察其防龋效果。方法 (1)通过液体稀释法测定伊犁黑蜂蜂胶对口腔常见致龋菌的最小抑菌浓度(MIC)及最小杀菌浓度(MBC);(2)生物膜形成抑制试验测定伊犁黑蜂蜂胶对口腔常见致龋菌的最小生物膜形成抑制浓度(MBIC50);(3)通过结晶紫染色法测定伊犁黑蜂蜂胶对口腔常见致龋菌的最小生物膜清除浓度(MBEC);结果(1)伊犁黑蜂蜂胶对变形链球菌、远缘链球菌、嗜酸乳杆菌、血链球菌、粘性放线菌和内氏放线菌的最低抑菌浓度分别是0.78、0.39、1.56、0.39、0.20和0.20 mg/mL,最低杀菌浓度分别为1.56、0.78、3.125、0.78、0.39和0.39mg/mL;(2)伊犁黑蜂蜂胶对变形链球菌、远缘链球菌、血链球菌、粘性放线菌和内氏放线菌的MBIC50分别是0.39、0.39、0.39、0.05和0.10mg/mL;(3)伊犁黑蜂蜂胶对变形链球菌、远缘链球菌、血链球菌、粘性放线菌和内氏放线菌的MBEC分别是6.25、1.56、3.1256、0.78和0.78mg/mL。结论伊犁黑蜂蜂胶对口腔主要致龋细菌的生长具有抑制作用,能够抑制主要致龋细菌单菌生物膜的形成,并具有一定清除作用,是具有一定防龋效果的天然药物。     

Trimethylsilyl-sugar profiles of Streptococcus milleri and Streptococcus mitis

Seventy strains of 'viridans-group' streptococci were analysed gas chromatographically after preparation of trimethylsilyl ethers of their cellular sugars. The resulting profiles were evaluated as a possible aid to taxonomy. Glycerol, glucose, galactose, N-acetyl-glucosamine and N-acetylmuramic acid were found in all strains, in varying amounts. Rhamnose was the major neutral sugar in most strains, other than representatives of Streptococcus mitis, which invariably had ribose and usually anhydroribitol but no rhamnose. One strain of Strep. mitis possessed arabitol. Some strains of Strep. mitis and 'Strep. milleri' were alone in containing N-acetylgalactosamine. A combination of N-acetylgalactosamine and rhamnose in the absence of ribose was diagnostic for strains of 'Strep. milleri'.     

Resistance mechanism of chloramphenicol in Streptococcus haemolyticus, Streptococcus pneumoniae and Streptococcus faecalis.

The chloramphenicol resistance of Streptococcus haemolyticus, Streptococcus pneumoniae and Streptococcus faecalis isolated from clinical materials was proved to be due to an inactivating enzyme produced by these bacteria. The inactivated products of chloramphenicol were identified as 1-acetoxy, 3-acetoxy and 1,3-diacetoxy derivatives by thin-layer chromatography and infrared spectroscopy. The responsible enzyme was thus confirmed to be chloramphenicol acetyltransferase. The enzyme was inducible. It was partially purified by ammonium sulfate precipitation, DEAE-cellulose chromatography and gel filtration on Sephadex G-150. The enzymes obtained from S. haemolyticus, S. pneumoniae and S. faecalis have been compared with the conclusion that they are identical with respect to molecular weight (approximately 75,000-80,000), optimum pH and heat stability.     

Trimethylsilyl-sugar profiles of Streptococcus milleri and Streptococcus mitis

Seventy strains of 'viridans-group' streptococci were analysed gas chromatographically after preparation of trimethylsilyl ethers of their cellular sugars. The resulting profiles were evaluated as a possible aid to taxonomy. Glycerol, glucose, galactose, N-acetyl-glucosamine and N-acetylmuramic acid were found in all strains, in varying amounts. Rhamnose was the major neutral sugar in most strains, other than representatives of Streptococcus mitis , which invariably had ribose and usually anhydroribitol but no rhamnose. One strain of Strep, mitis possessed arabitol. Some strains of Strep. mitis and ' Strep. milleri ' were alone in containing N-acetylgalactosamine. A combination of N-acetylgalactosamine and rhamnose in the absence of ribose was diagnostic for strains of ' Strep. milleri '.     

Prophage-Cured Derivatives of Streptococcus lactis and Streptococcus cremoris

Prophage curing was achieved in Streptococcus lactis and Streptococcus cremoris, and the cured derivatives were shown to be indicators for their temperate bacteriophages. Relysogenization of these cured derivatives completed the first formal demonstration of the lysogenic state in lactic streptococci.