A STUDY OF THE PENETRATION OF MAMMALIAN CELLS BY DEOXYRIBONUCLEIC ACIDS

Tritium-labeled deoxyribonucleic acid (DNA) from pneumococci and from human leukocytes was added to growing cultures of HeLa cells at 37°C. Autoradiography revealed an extensive localization of tritium in the nuclear regions. The label could not be removed by treatment with ribonuclease or dilute perchloric acid, but quantitative removal from the cells could be effected with deoxyribonuclease. Chemical and radioactivity determinations on nucleic acids isolated from the exposed HeLa cells revealed the presence of tritium in all 4 DNA bases. About 12 µg. of tritiated DNA was recovered from 6 x 10⁶ HeLa cells which had been exposed for 24 hours to 240 µg. of the human DNA. From this, it is concluded that the amount of DNA, or its degradation products, taken up by the cells was equivalent to at least 10 per cent of the normal HeLa cell complement.     

DNA CONTENT OF PURIFIED PREPARATIONS OF MOUSE PURKINJE NEURONS ISOLATED BY A VELOCITY SEDIMENTATION TECHNIQUE

Abstract— The DNA content of mouse Purkinje neurons was investigated employing a biochemical approach. Material for the biochemical assay was provided by means of a sedimentation velocity separation technique which yields bulk quantities of well-preserved Purkinje perikarya in a high degree of purity. The same amount of DNA/cell was recorded for mixed cerebellar cell somata (7·6 ± 0±2 pg/cell), as for the Purkinje perikarya enriched fractions (7±2 & 0·2 pg/cell). No evidence could be found for the existence of a tetraploid DNA complement in mouse Purkinje neurons despite indications to the contrary from a parallel cytophotometric study.     

表达毒素源性大肠杆菌定居因子抗原CS6的一组基因的克隆

人源毒素源性大肠杆菌(Enterotoxigenic E.Coil ETEC)是引起婴幼儿及旅游者腹泻的主要致病菌。ETEC的致病因子包括定居因子抗原 (Colonization factor antigens,CFAs)和肠毒素。大多数ETEC菌株均能产生抗原特异的菌毛,介导细菌与宿主小肠粘膜表面并在粘膜表面上受体的结合,使得细菌能定殖于粘膜表面并在粘膜的功能性清除中存活下来。已经报道的定居因子抗原包括CFA/Ⅰ,CFA/Ⅱ、CFA/Ⅲ、CFA/Ⅳ(PCF8775)、PCF09和PCFO159等。CFA/Ⅰ和CFA/Ⅲ均由单一的菌毛亚基构成,CFA/Ⅱ、CFA/Ⅳ则由多种表面抗原(colisurface antigen,CS)复合而成。所有的CFA/Ⅳ阳性菌株均表达CS6抗原,其中有些同时表达CS4或CS5抗原。CS4和CS5都是直径6～7nm的菌毛,能引起人和牛血红细胞的甘露糖抗性的凝集反应(MRHA)。迄今为止,没有观祭到CS6明显的菌毛结构,CS6也不能引起MRHA阳性反应。然而动物实验的结果表明,CS6是CFA/Ⅳ复合抗原中一种对定居作用最重要的抗原”,。本研究组已经通过分子克隆的手段获得了能分别表达CFA/Ⅰ和CS3抗原的重组菌株,用于人源ETEC疫苗的研究。本文报道了表达CS6菌毛抗原的DNA片段的克隆,并用免疫吸附制备的CS6抗血清测定了重组菌株表达的菌毛蛋白。     

一种用分子杂交技术检测谷氨酸生产菌溶原性的方法

谷氨酸生产菌用于发酵生产谷氨酸和其他氨基酸,由于外源噬菌体污染或者由溶原菌内诱导出的噬菌体污染,往往给工业发酵带来严重的危害,于是测定谷氨酸生产菌是否为溶原菌便成了当务之急。本文以溶原菌E.coli K_(12)为研究模型,首先用~(32)P标记的λDNA作探针,建立了检测溶原菌株的分子诊断方法,继而通过寄主菌株从生产环境样品中分离筛选到7_6和7_(?)两大类共20多株噬菌体。由该两类噬菌体制得的~(32)P-7_(?)和7_(?)探针,可分别与以生产谷氨酸的棒杆菌B_9、7338和T_(?)三个菌株为寄主,从环境样品中分离的18个和6个噬菌体分离物杂交。而采用缺口翻译系统制备的7_(?)和7_(?)混合探针,或混合使用7_(?)和(?)探针,使得检测方法更为简便易行。通过Southern Blot技术和菌落杂交对菌DNA的分析,结果表明三个寄主菌株均不是所分离的噬菌体的溶原菌。最后,本文还就烈性噬菌体和温和噬菌体之间的同源性与分子诊断的可行性作了初步探讨。     

大肠杆菌不同菌株基因组DNA的多态性分析

从大肠杆菌K12菌株JM109基因组克隆了两段DNA重复序列,长度为0.9和0.6kb,分别命名为ECR-1和ECR-6。以ECR-1和ECR-6重复序列作DNA多态性分析的探针,可以鉴别大肠杆菌非常相近的菌株。表明ECR-1和ECR-6 DNA序列可用于大肠杆菌菌株的分类、流行病学和微生态学研究以及大肠杆菌各种致病菌株的临床诊断。     

用ribozyme抑制增殖细胞核抗原的表达对HaLa细胞增殖的影响

增殖细胞核抗原(PCNA)是DNA聚合酶δ的辅助蛋白,它是细胞染色体DNA复制所必需的。人工设计的ribozyme具有可特异地切割PCNA mRNA的性质,将此ribozyme的自修剪体内表达质粒导入HeLa细胞,从细胞总RNA中分离相应部分能在体外切割靶RNA片段,证明此表达质粒在细胞内能表达出有活性的ribozyme分子。与对照相比,导入ribo-zyme表达质粒的HeLa细胞进入S期的时间从12 h推迟到20 h,而突变ribozyme的对照表明反义抑制对细胞进入S期的影响较小(推迟到15 h)。证明该ribozyme能有效抑制He-La细胞DNA复制,同时亦证明PCNA对于细胞DNA复制及细胞周期进程的重要性。     

小鼠的克隆着丝粒(SFA)DNA的鉴定

着丝粒是真核染色体上的重要细胞器,是真核染色体作为基因载体行使其遗传功能的关键结构.着丝粒DNA首先是从酵母中分离克隆并被用以构建酵母人工染色体.鉴于真核有丝分裂机制研究和构建高等动物人工染色体研究的需要,从分离和检定过的小鼠着丝粒DNA库中筛选出了6#着丝粒DNA(SFADNA),并用荧光原位杂交法(FISH)对其进行了在染色体上的定位检定.用缺口平移法和PCR法分别标记了SFA DNA和SFA DNA中的小鼠寡份卫星DNA作为探针,分别与小鼠腹水癌细胞和小鼠L929细胞进行原位杂交;并用荧光抗体显示杂交信号的位置.结果,SFA DNA在两种细胞的中期染色体上的杂交信号都位于亚末端的初级缢痕处,表现为单一粗大的斑块.寡份卫星DNA在两种细胞的中期染色体上的杂交信号亦都位于亚末端的初级缢痕处,但极大多数的斑点均表现为成对的细小斑点.初级缢痕正是染色体着丝粒所在的特征性部位.故以上结果说明定位于该部位的克隆的6#SFA DNA,和其中的小鼠寡份卫星DNA都来源于小鼠着丝粒DNA.     

用TnV分离粘细菌发育回复突变株

fruA∷TcΩ5 is a development deficient strain of M.Xamthus.Transposon TnV was used to randomly mutagenize various sites of fruA ∷TcΩ5 chromosome.Fruiting body formation was restored in one TnV insertion mutant,designated XM1206.The TnV\|inserted DNA fragment from XM1206 chromosome was cloned,which may be served as a probe to isolate the corresponding allele from wild\|type strain.     

非缺失型α地中海贫血基因的克隆化分离

从一例基因型为αα~T/—的血红蛋白H病患者的手术切除脾制备了染色体DNA,用BamHⅠ水解后,回收14±1kb的DNA片段,作为插入体。以λEMBL_4噬菌体经非超离心法制备基因组DNA作为替换载体。经BamHⅠ水解回收左右臂,与α地贫脾DNA 14kb片段连接,包装、传染后,得10~4—10~5重组噬菌体/μg。以人α珠蛋白基因特异的探针作Benton原位杂交,M4×10~3克隆中筛出两个含α珠蛋白基因序列的克隆株。其中一株扩增后制备的重组DNA经酶解图谱及Southern印迹杂交鉴定,中间可替换部分含有14kb的人α珠蛋白基因组DNA。从而在我国首次从中国地贫病人中,以基因工程的方法,分离了克隆化的非缺失型α地贫基因,为研究其结构与功能打下了重要基础。     

家蚕病原球孢白僵菌的原生质体再生回复及核型分析

家蚕病原球孢白僵菌（Beauveriabassiana）原生质体的分离制备、性状及再生回复,并用脉冲凝胶电泳（PFGE）技术分析了其核型。以6mg／mLDriselase为酶解液,0.7mol／LNaCl液（pH5.8）为渗透压稳定剂,在30℃下轻轻振荡处理幼嫩菌丝1．5h,是原生质体分离的适宜条件。原生质体的无核率为26．5％,有核率为73.5％,其中单核率为53.5％。再生回复的形式可观察到三种,其培养基的渗透压稳定剂以0.7mol／L葡萄糖较为适当。球孢白僵菌至少具有6条染色体,估算大小为2.5～6.6Mb,核型大小为26.5Mb。