miR-20a靶向CCND1作用PI3K/AKT信号通路抑制皮肤鳞状细胞癌的发展

摘要 目的：探究miR-20a与CCND1蛋白在皮肤鳞状细胞癌（CSCC）中的作用关系,以及其可能涉及的信号通路分子机制。方法：分别收集皮肤鳞状细胞癌患者的皮肤癌组织及其邻近正常皮肤组织,采用qRT-PCR分析组织中miR-20a和CCND1基因表达水平。为探究miR-20a对CSCC细胞的影响,将SCL-1细胞分为对照组（不转染）、miR-NC组（转染miR-NC）和miR-20a mimics组（转染miR-20a mimics）;为探究CCND1与PI3K/AKT信号通路的关系,将SCL-1细胞分为对照组（不转染）、si-NC组（转染si-NC）和si-CCND1组（转染si-CCND1）;为探究miR-20a与CCND1间的作用关系及对CSCC细胞的影响,将SCL-1细胞分为miR-NC组（转染miR-NC）、miR-20a mimics组（转染miR-20a mimics）、mimics+pcDNA组（共转染miR-20a mimics和pcDNA）和mimics+CCND1组（共转染miR-20a mimics和pcDNA-CCND1）。采用Western blot分析p-AKT、AKT、p-PI3K、PI3K和GSK-3β蛋白表达水平;采用MTT检测细胞增殖情况;采用流式细胞术检测细胞凋亡情况;采用Transwell分析细胞迁移和侵袭情况;采用双荧光素酶报告基因检测分析miR-20a与CCND1的靶向关系。结果：CSCC癌组织和SCL-1中miR-20a均低表达,CCND1高表达。与对照组和miR-NC组比较,miR-20a mimics组SCL-1细胞增殖水平以及侵袭和迁移数量均降低（P<0.05）,SCL-1细胞凋亡水平升高（P<0.05）,PI3K和AKT蛋白磷酸化水平降低（P<0.05）。TargetScanHuman数据库分析和双荧光素酶报告基因检测结果显示miR-20a与CCND1存在靶向作用关系。与对照组和si-NC组比较,si-CCND1组SCL-1细胞中CCND1和GSK-3β蛋白表达水平以及PI3K和AKT蛋白磷酸化水平均降低（P<0.01）。与miR-20a mimics组或mimics+pcDNA组比较,mimics+CCND1组SCL-1细胞增殖水平以及侵袭和迁移数量均升高（P<0.05）,SCL-1细胞凋亡水平降低（P<0.05）,PI3K和AKT蛋白磷酸化水平均升高（P<0.05）。结论：过表达miR-20a可能通过靶向抑制CCND1的表达而抑制PI3K/AKT信号通路的激活,从而抑制CSCC细胞的增殖、侵袭和迁移,并促进癌细胞凋亡。     

微小RNA-451a对胰腺癌BxPc3细胞增殖、侵袭及迁移的影响

摘要 目的：研究微小RNA（miR）-451a对胰腺癌BxPc3细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法：体外培养BxPc3细胞,将不同浓度（50、100 和 200 μmol/L）miR-451a模拟物（mimic）转染至胰腺癌细胞株BxPc3中,利用荧光定量聚合酶链式反应（ PCR）法检测miR-451a的表达,MTT增殖实验检测不同浓度miR-451a对细胞增殖的影响,细胞划痕实验检测不同浓度miR-451a对细胞迁移能力的影响,Transwell实验检测不同浓度miR-451a对细胞侵袭能力的影响。Western blot法检测不同浓度 miR-451a转染后BxPc3细胞p-PI3K、p-AKT、TGF-β和p-smad2/3 蛋白的表达情况。结果：转染不同浓度miR-451a mimic后,胰腺癌BxPc3细胞内miR-451a的相对表达量明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）。过表达miR-451a后,BxPc3细胞的增殖能力明显减弱,细胞迁移能力明显减弱,细胞侵袭能力明显减弱,差异均有统计学意义（P<0.05）。相比于0 μmol/L 组,转染50、200 μmol/L miR-451a后BxPc3 细胞p-PI3K、p-AKT、TGF-β和p-smad2/3蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,并且p-PI3K、p-AKT、TGF-β和p-smad2/3蛋白表达水平变化具有浓度依耐性。结论：miR-451a能抑制胰腺癌BxPc3细胞株的增殖、迁移、侵袭能力。     

miR-101a在乙型肝炎病毒相关性肝纤维化患者中的表达及对肝星状细胞的影响

摘要 目的：探究miR-101a在乙型肝炎病毒（HBV）相关性肝纤维化患者中的表达及对肝星状细胞（HSC）的影响。方法：根据肝纤维化程度将HBV相关性肝纤维化患者进行分组（S0组、S1组、S2组、S3组和S4组）,健康受试者作为健康对照组。通过RT-PCR检测肺组织中miR-101a的表达,并分析miR-101a与疾病严重程度的关系。使用重组人TGF-β1处理人肝星状细胞系LX-2,并对LX-2细胞转染阴性对照 miRNA模拟物（NC-mimic组）、miR-101a模拟物（miR-101a-mimic组）、阴性对照 miRNA抑制剂（NC-inhibitor组）或miR-101a抑制剂（miR-101a-inhibitor组）,未转染的细胞作为对照组,然后通过RT-PCR或蛋白质印迹检测激活HSC及ECM产生的关键基因（α-SMA、COL1A1、COL1A2和COL3A1）和蛋白（a-SMA、collagen I和collagen III）的表达水平。将SD大鼠随机分为4组：对照组、CCl4组、Ad-control组和Ad-miR-101a组,对大鼠腹腔注射CCl₄（1 mL/kg体重）诱导肝纤维化模型,每周3次,共4周。然后将5×10⁹感染单位的携带miR-101a的重组腺病毒（Ad-miR-101a）或对照腺病毒（Ad-control）经尾静脉注射到大鼠中。4周后,通过苏木精和伊红（H＆E）和Masson三色染色评估肝脏形态和纤维化,通过免疫组化染色评估肝脏α-SMA、E-cadherin、vimentin、Smad4或p-Smad2/3的表达。结果：与健康受试者相比,HBV相关肝纤维化患者肝组织中miR-101a的表达水平明显降低,并且miR-101a的表达水平随着患者的严重程度升高而降低（P<0.05）。与未处理的细胞相比,miR-101a在TGF-β1处理的LX-2细胞中以浓度和时间依赖性方式显著下降（P<0.05）。与未处理的细胞相比,5 ng/mL TGF-β1处理LX-2细胞中的α-SMA、COL1A1、COL1A2和COL3A1 mRNA表达水平及a-SMA、collagen I和collagen III 蛋白表达水平均显著升高（P<0.05）。与对照组相比,miR-101a-mimic组的α-SMA、COL1A1、COL1A2、COL3A1和TGF-β1 mRNA和a-SMA、collagen I、collagen III、TGF-β1、Smad3和p-Smad3蛋白表达均下调（P<0.05）。与对照组相比,Ad-miR-101a组大鼠肝组织中E-cadherin的表达上调,但α-SMA、vimentin、Smad4和p-Smad2/3的表达下调（P<0.05）;Ad-miR-101a组大鼠的肝组织形态基本恢复正常,肝组织纤维化程度低于CCl₄组。结论：miR-101a水平与乙型肝炎病毒相关性肝纤维化严重程度相关,上调miR-101a可能通过抑制HSC的活化及上皮间质转化发挥抗纤维化作用。     

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨miR-613对宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移与侵袭的影响

摘要 目的：研究基于Wnt/β-catenin信号通路探讨微小RNA（miR）-613对宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移与侵袭的影响。方法：体外培养宫颈癌SiHa细胞和正常宫颈上皮细胞H8,检测细胞中miR-613表达。根据转染miR-613 mimic浓度不同,将SiHa细胞分为0 μmol/L组,100 μmol/L和200 μmol/L组。MTT法检测细胞增殖情况,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力。蛋白免疫印迹法检测miR-613表达对Wnt/β-catenin信号通路蛋白β-catenin、Vimentin、E-cadherin和MMP9表达的影响。结果：宫颈癌SiHa细胞中miR-613表达水平均显著低于正常宫颈上皮细胞H8,差异有统计学意义(P<0.05)。转染miR-613 mimic后,100 μmol/L、200 μmol/L 组SiHa细胞中miR-613表达水平显著上调,并且具有浓度依赖性(P<0.05)。与0 μmol/L组相比,100 μmol/L、200 μmol/L组的SiHa细胞增殖,迁移,侵袭能力均明显下降,并且具有浓度依赖性(P<0.05)。免疫印迹结果,与0 μmol/L组相比,100 μmol/L、200 μmol/L各浓度组的SiHa细胞Wnt/β-catenin信号通路蛋白β-catenin、Vimentin和MMP9表达显著下调,E-cadherin表达显著上调,并且具有浓度依赖性(P<0.05)。结论：miR-613能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制人宫颈癌细胞系SiHa细胞的增殖,迁移和侵袭。     

MLL3基因对宫颈癌细胞放射敏感性和DNA损伤修复能力的影响

摘要 目的：探究髓系/淋巴系或混合谱系白血病3基因（myeloid/lymphoid or mixed-lineage leukemia 3,MLL3）对宫颈癌细胞生长、转移、放射敏感性的影响。方法：选择60例宫颈鳞癌患者的癌组织及配对癌旁组织,采用实时定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测检测MLL3 mRNA水平。体外培养SiHa细胞,将其分为以下5组：Control组（不转染）、NC-sh组（转染阴性对照shRNA慢病毒）、MLL3-sh组（转染MLL3 shRNA慢病毒）、NC-OE组（转染阴性对照过表达慢病毒）和MLL3-OE组（转染MLL3过表达慢病毒）。进一步采用2300EX直线加速器9 MeV ?茁射线照射细胞建立放射抵抗SiHa细胞（SiHaR）,然后将其分为：NC-sh组、MLL3-sh组、8 Gy+NC-sh组和8 Gy+MLL3-sh组。NC-sh组和MLL3-sh组细胞不照射,8 Gy+NC-sh组和8 Gy+MLL3-sh组细胞用9 MeV β射线照射8 Gy。采用MTT法检测细胞增殖情况;Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡;Transwell检测细胞侵袭能力;qRT-PCR检测MLL3、共济失调毛细血管扩张征突变基因（ATM）、ATM-Rad3相关基因（ATR）、乳腺癌易感基因（BRCA1）和RAD50双链断裂修复蛋白（RAD50）的mRNA水平;Western blot检测MLL3、Bcl-2相关X蛋白基因（Bax）、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因（Bcl-2）、cleaved caspase 3、基质金属蛋白酶（MMP）2、MMP9和γ-H2AX的表达;免疫荧光染色检测γ-H2AX的表达。结果：与癌旁组织相比,宫颈鳞癌组织中的MLL3 mRNA水平显著降低（P<0.001）。与NC-sh组比较,MLL3-sh组SiHa细胞的MLL3 mRNA和蛋白相对表达量降低,细胞活力升高,细胞凋亡率、Bax和cleaved caspase 3蛋白相对表达量降低,Bcl-2蛋白相对表达量升高,侵袭细胞数量、MMP2和MMP9蛋白相对表达量升高（P<0.05）。与NC-OE组比较,MLL3-OE组SiHa细胞的MLL3 mRNA和蛋白相对表达量升高,细胞活力降低,细胞凋亡率、Bax和cleaved caspase 3蛋白相对表达量升高,Bcl-2蛋白相对表达量降低,侵袭细胞数量、MMP2和MMP9蛋白相对表达量降低（P<0.05）。与SiHa细胞相比,SiHaR细胞中的MLL3 mRNA和蛋白相对表达量均升高（P<0.001）。与8 Gy+NC-sh组比较,8 Gy+MLL3-sh组SiHaR细胞的细胞活力降低,γ-H2AX的蛋白相对表达量和γ-H2AX foci数目升高,ATM、ATR、BRCA1和RAD50的mRNA水平降低（P<0.05）。结论：宫颈癌细胞MLL3的表达下调促进了其生长和转移,但降低DNA损伤修复能力,提高宫颈癌细胞的放射敏感性。     

下调lncRNA MCF2L-AS1靶向miR-33b-5p抑制胃癌细胞增殖、迁移、侵袭并促进凋亡

摘要 目的：探讨lncRNA MCF2L-AS1对胃癌细胞恶性生物学行为的影响及分子机制。方法：选取45例胃癌患者的癌组织及癌旁正常组织,或培养胃黏膜上皮细胞GES-1、胃癌细胞HGC-27,采用RT-qPCR检测MCF2L-AS1和miR-33b-5p的表达水平。采用双荧光素酶报告实验检测MCF2L-AS1和miR-33b-5p的靶向关系。将HGC-27细胞分为si-NC组、si-MCF2L-AS1组、mimic NC组、miR-33b-5p mimic组、si-MCF2L-AS1+inhibitor NC组、si-MCF2L-AS1+miR-33b-5p inhibitor组,分别转染si-NC、si-MCF2L-AS1、mimic NC、miR-33b-5p mimic或共转染si-MCF2L-AS1+inhibitor NC、si-MCF2L-AS1+miR-33b-5p inhibitor。采用MTT实验检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,克隆形成实验检测细胞克隆形成数,Transwell实验检测迁移和侵袭细胞数。结果：与癌旁正常组织或GES-1细胞相比,胃癌组织或HGC-27细胞中MCF2L-AS1表达水平升高、miR-33b-5p表达水平降低,差异均有统计学意义（P<0.05）。MCF2L-AS1可靶向调控miR-33b-5p。下调MCF2L-AS1或过表达miR-33b-5p,miR-33b-5p表达水平升高,HGC-27细胞凋亡率升高,但细胞增殖、克隆形成数、迁移和侵袭数均减少,差异均有统计学意义（P<0.05）。抑制miR-33b-5p可减弱下调MCF2L-AS1对HGC-27细胞的生物学作用。结论：下调MCF2L-AS1通过上调miR-33b-5p抑制胃癌细胞增殖、迁移、侵袭并促进凋亡;MCF2L-AS1通过靶向调控miR-33b-5p表达进而参与胃癌细胞的恶性生物学行为。     

时钟基因Bmal1促进血管平滑肌细胞增殖

摘要 目的：观察时钟基因Bmal1的过表达对血管平滑肌细胞增殖的影响,进一步探讨生物节律对于血管发育的具体影响。方法：采用包装GV341-Bmal1载体的慢病毒转染的方法构建大鼠胸主动脉平滑肌细胞（A7R5）稳定转染Bmal1的细胞系,实时定量PCR和细胞爬片Bmal1的免疫荧光染色的方法判断所构建细胞系是否稳定过表达Bmal1,细胞爬片Ki67的免疫荧光染色的方法观察时钟基因Bmal1的过表达对血管平滑肌细胞增殖的影响。结果：实时定量PCR结果显示稳定转染Bmal1组细胞Bmal1的表达是对照组的11.2倍（P<0.01）;细胞爬片的免疫荧光染色结果显示稳定转染Bmal1组细胞BMAL1的表达明显升高（P<0.05）,且稳定转染Bmal1组Ki67阳性细胞比例明显升高（P<0.05）。结论：通过慢病毒转染的方法成功构建了血管平滑肌细胞稳定转染Bmal1的细胞系,细胞片Ki67的免疫荧光染色结果显示Bmal1的过表达促进了血管平滑肌细胞的增殖。     

miR-1298表达对PC-12细胞糖氧剥夺/复氧损伤的影响及其机制研究

摘要 目的：通过体外细胞培养探讨miR-1298对缺血缺氧性神经损伤的调节作用。方法：首先通过细胞活性检测和乳酸脱氢酶（LDH）细胞毒性法确定大鼠PC-12细胞糖氧剥夺/复氧（OGD/R）的造模效果,同时采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测细胞miR-1298的表达差异。体外转染miR-1298mimic、mimic NC、miR-1298 inhibitor和inhibitor NC至大鼠PC-12细胞系,检测mimic、mimic NC、inhibitor、inhibitor NC的转染效率。经过OGD/R处理后将细胞分为Control组、OGD/R组、mimic组、mimicNC组、inhibitor组和inhibitorNC组。流式细胞术检测各组PC-12细胞凋亡的情况,免疫印迹试验（Western blot）检测各组PC-12细胞凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2基因（BCL-2）和Bcl-2相关的x基因（Bax）表达的情况。结果：PC12细胞经过OGD/R处理后,其细胞存活率与Control组比明显下降且LDH漏出率明显上升（均P<0.05）;模型细胞中miR-1298相对表达量明显低于Control组（P<0.05）。转染24小时后mimic组细胞中miR-1298的相对表达量明显高于mimicNC组（P<0.05）;mimic组细胞凋亡率低于mimicNC组,而inhibitor组细胞凋亡率高于inhibitor NC组（均P<0.05）;mimic组的BCL-2表达量较mimicNC组升高,而BAX表达量下降,inhibitor组与inhibitorNC组相比,BCL-2表达量下降,而BAX表达量上升,差异均有统计学意义（均P<0.05）。结论：miR-1298通过抑制细胞凋亡减轻PC-12细胞OGD/R的损伤。     

miR-10a通过FBXW7-ZEB2轴调控非小细胞肺癌肿瘤化疗耐药的动物实验研究

摘要 目的：通过动物实验,具体探讨微小RNA（miR-10a）通过含F-框WD重复域蛋白7（FBXW7）-E盒锌指结合蛋白2（ZEB2）轴调控非小细胞肺癌的肿瘤化疗耐药作用。方法：非小细胞肺癌模型小鼠（n=42）随机平分为三组-模型组、miR-10a组与环磷酰胺组,模型组给予生理盐水0.2 mL腹腔注射,环磷酰胺组给予环磷酰胺20 mg/kg腹腔注射,miR-10a组给hsa-miR-10a mimics 15 mg/kg 联合环磷酰胺20 mg/kg腹腔注射,1次/d,持续给药14 d。结果：miR-10a组与环磷酰胺组治疗第7 d与第14 d的肿瘤体积低于模型组,miR-10a组低于环磷酰胺组（P<0.05）。miR-10a组与环磷酰胺组治疗第14 d与第28 d的瘤体质量低于模型组,抑瘤率高于模型组,miR-10a组与环磷酰胺组对比差异也有统计学意义（P<0.05）。miR-10a组与环磷酰胺组治疗第14 d与第28 d的肿瘤细胞凋亡指数高于模型组,miR-10a组高于环磷酰胺组（P<0.05）。miR-10a组与环磷酰胺组治疗第14 d与第28 d的血清FBXW7、ZEB2含量低于模型组,miR-10a组低于环磷酰胺组（P<0.05）。miR-10a组与环磷酰胺组治疗第14 d与第28 d的FBXW7、ZEB2 mRNA与蛋白相对表达水平低于模型组,miR-10a组低于环磷酰胺组（P<0.05）。结论：过表达miR-10a能抑制非小细胞肺癌小鼠的FBXW7-ZEB2轴的激活,抑制血清FBXW7、ZEB2的表达,从而促进肿瘤细胞凋亡,改善肿瘤化疗耐药性,促进缩小肿瘤体积。     

miR-613通过靶向VEGFA抑制神经胶质瘤细胞的增殖、侵袭和血管生成

摘要 目的：旨在探究miR-613在胶质瘤中的表达及对细胞增殖、侵袭和血管生成的影响。方法：根据细胞转染将实验分组为对照miRNA组（Control组）、miR-613模拟物组（mimics组）和miR-613 mimics+VEGFA组（VEGFA组）。采用逆转录定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测胶质瘤细胞和组织中miR-613和VEGFA mRNA的表达水平;采用荧光素酶报告基因分析miR-613与血管内皮生长因子（VEGF）的关系;采用Western blotting检测VEGFA蛋白的表达水平;通过体外实验检测转染细胞的增殖能力、侵袭能力和管状形成能力。结果：与正常组织样本相比,胶质瘤I-II期组样本的肿瘤细胞呈现异形,具有深核染色,并且肿瘤细胞密度适度较低,而胶质瘤III-IV期组样本的肿瘤细胞的核分裂活跃,具有明显的微血管增殖和明显的细胞异型性;miR-613在胶质瘤I-IV期组织样本中显著降低（P<0.05）。在U87和U251细胞系的VEGFA-WT组中,与Control组相比,mimics组的荧光素酶活性显著降低（P<0.05）。与Control组相比,U87和U251细胞系中mimics组VEGFA的mRNA和蛋白表达水平均显著降低（P<0.05）。克隆形成实验、血管生成实验和细胞侵袭实验结果表明,与Control组相比,mimics组的克隆形成数量、细胞侵袭数、内皮细胞HUVEC的管状形成数和Ang-2蛋白表达水平均显著降低（P<0.05）;与mimics组相比,VEGFA组克隆形成数量、细胞侵袭数、内皮细胞HUVEC的管状形成数和Ang-2蛋白表达水平均显著升高（P<0.05）。结论：miR-613通过靶向VEGFA抑制了神经胶质瘤细胞的侵袭、增殖和血管生成,提示miR-613可能成为未来治疗胶质瘤的潜在靶点。     

Geminiviruses: a tale of a plasmid becoming a virus

Background  

Geminiviruses (family Geminiviridae) are small single-stranded (ss) DNA viruses infecting plants. Their virion morphology is unique in the known viral world – two incomplete T = 1 icosahedra are joined together to form twinned particles. Geminiviruses utilize a rolling-circle mode to replicate their genomes. A limited sequence similarity between the three conserved motifs of the rolling-circle replication initiation proteins (RCR Reps) of geminiviruses and plasmids of Gram-positive bacteria allowed Koonin and Ilyina to propose that geminiviruses descend from bacterial replicons.     

Testing a Primary and a Secondary Endpoint in a Group Sequential Design

Summary We consider a clinical trial with a primary and a secondary endpoint where the secondary endpoint is tested only if the primary endpoint is significant. The trial uses a group sequential procedure with two stages. The familywise error rate (FWER) of falsely concluding significance on either endpoint is to be controlled at a nominal level α. The type I error rate for the primary endpoint is controlled by choosing any α‐level stopping boundary, e.g., the standard O'Brien–Fleming or the Pocock boundary. Given any particular α‐level boundary for the primary endpoint, we study the problem of determining the boundary for the secondary endpoint to control the FWER. We study this FWER analytically and numerically and find that it is maximized when the correlation coefficient ρ between the two endpoints equals 1. For the four combinations consisting of O'Brien–Fleming and Pocock boundaries for the primary and secondary endpoints, the critical constants required to control the FWER are computed for different values of ρ. An ad hoc boundary is proposed for the secondary endpoint to address a practical concern that may be at issue in some applications. Numerical studies indicate that the O'Brien–Fleming boundary for the primary endpoint and the Pocock boundary for the secondary endpoint generally gives the best primary as well as secondary power performance. The Pocock boundary may be replaced by the ad hoc boundary for the secondary endpoint with a very little loss of secondary power if the practical concern is at issue. A clinical trial example is given to illustrate the methods.     

Vegetation as a component of a non-nested hierarchy: a conceptual model

Abstract. A general conceptual model of vegetation based on hierarchy theory is presented. The model emphasizes that prediction of vegetation requires consideration of both mechanisms of vegetation change and the constraints within which it occurs. The mechanisms of vegetation change are the responses to and effects upon their surroundings of individual plants. The most general constraints upon vegetation are aspects of the environment not affected by vegetation over successional time, and the pool of species within dispersal range. Examples of such environmental factors include macroclimate and soil parent material. In some cases, vegetation may alter important labile environmental factors such as soil nutrient and water availability. Some vegetation compositions appear to be resistant to changes in the general constraints. Due to both sources, there are multiple possible vegetation compositions given the same general constraints. Disturbance is defined as an abrupt change in the constraints on the vegetation resulting in a change in the vegetation's state or dynamics. Both the recognition of disturbance and the distinction between independent and labile environmental factors depend on the spatial and temporal scale of observation. For example, a particular wildfire at a given stand may be a disturbance, whereas at a larger scale of observation the same event may contribute to the wildfire regime, part of the constraints at that scale. Similarly, levels of soil organic matter may constrain vegetation over short time scales, due to influencing availability of water and nutrients. Over long time scales, the vegetation itself is a primary determinant of soil organic matter content. This model contains elements of both the initial, holistic theory of vegetation and recent, reductionistic approaches. It reiterates the need to considerboth mechanisms and constraints, stressed by contemporary and earlier workers. Hierarchy theory provides new insights concerning sufficient conditions for prediction, possible limits on predictability, and appropriate research strategy.     

Transformation of a psychrotrophic bacterium with a plasmid from a mesophile

The psychrotrophic bacteriumBacillus psychrophilus was transformed with the broadhost-range plasmid pC194. The ability of the transformant to express chloramphenicol (CAM) resistance and the possible effects of such expression on the physiology of the psychrotroph were examined. The transformant exhibited growth rates, filament formation at elevated temperatures, synthesis of cold shock proteins and cold acclimation proteins, similar to the parentalB. psychrophilus.