神经营养素3和脑源性神经生长因子在大鼠脊髓中的定位表达

神经营养素3（NT－3）和脑源性神经生长因子（BDNF）是神经生长因子（NGF）的同源物,体外实验表明NT－3和BDNF能促进感觉神经元和交感神经元的存活,但是NT－3和BDNF在脊髓中的生物学作用和定位分布还不十分清楚。本用免疫组化ABC法观察了NT－3和BDNF的免疫阳性反应物在大鼠脊髓中的分布。结果表明：呈NT－3样免疫阳性反应的胶质细胞分布于脊髓的后索、侧索和前索中;免疫反应阳性的神经元主要见于脊髓前角,少数见于脊髓后角。BDNF位于大鼠的脊髓前角动物神经元;在脊髓Ⅱ板层中还可见较多的BDNF免疫反应阳性的神经终末。提示NT－3和BDNF在维持脊髓神经元和胶质细胞的生理功能中可能起重要作用。     

切断猫L2背根后脊髓Ⅱ板层一氧化氮合酶的表达变化

采用NADPH-d酶组织化学方法,观察一氧化氮合酶(NOS)在成年猫脊髓L2节段板层的分布,并探讨切断L2背根对Ⅱ板层NOS含量的影响.结果显示,NOS主要分布于正常成年猫脊髓Ⅱ板层的神经膨体及少数神经元胞浆内.切断L2背根10天后,手术侧Ⅱ板层NOS的平均灰度较非手术侧明显增加(P＜0.05),神经膨体密度则较非手术侧明显减少(P＜0.01),这表明,切断背根可致相应节段脊髓Ⅱ板层NOS含量明显减少.提示NOS在成年猫脊髓Ⅱ板层的生理和病理变化中可能有其功能意义.     

切断猫L_2背根后脊髓Ⅱ板层一氧化氮合酶的表达变化

采用 NADPH- d酶组织化学方法 ,观察一氧化氮合酶 (NOS)在成年猫脊髓 L2 节段板层的分布 ,并探讨切断 L2背根对 板层 NOS含量的影响。结果显示 ,NOS主要分布于正常成年猫脊髓 板层的神经膨体及少数神经元胞浆内。切断L2 背根 10天后 ,手术侧 板层 NOS的平均灰度较非手术侧明显增加 (P<0 .0 5 ) ,神经膨体密度则较非手术侧明显减少 (P<0 .0 1) ,这表明 ,切断背根可致相应节段脊髓 板层 NOS含量明显减少。提示 NOS在成年猫脊髓 板层的生理和病理变化中可能有其功能意义     

BDNF和NT—3在鸡胚脊髓发育中的表达——免疫组织化学研究

探讨脑源性神经营养因子（BDNF）和神经营养因子3（NT－3）在脊髓发育中的表达。取Hamburger 30期和40期鸡胚腰段脊髓制作20μm厚冰冻切片,分别用BDNF和NT－3抗体行ABC免疫组化染色。观察BDNF、NT－3样免疫阳性反应物（BDNF－IR、NT－3－IR）在两时相脊髓的分布。结果显示：30期组,BDNF－IR主要分布于脊髓腰段腹角神经元的核周质及神经突起内。NT－3－IR则仅限于腹角前群神经元,胞核、胞浆均梁色;40期组,BDNF－IR除腹角染色外,还扩展至整个脊髓肖解神经元及神经突起。另外,亦见一些BDNF－IR的胶质细胞。与之类似,NT－3－IR除分布于腹角前群神经元外,中间带、背角内亦出现了些NT－3阳性神经元。结果表明：BDNF和NT－3在脊髓的表达随发育进程由腹角向背角扩展。提示：BDNF和NT－3的生理作用与脊髓的发育有关。     

神经生长因子家族成员NGF、BDNF、NT-3和NT-4在猫L6脊髓的分布

采用免疫组织化学方法观察神经生长因子家庭成员NGF,BDNF、NT3和NT4在成年猫L6脊髓的分布。结果;在L6脊髓灰质均可见四种生长因子的免疫阳性细胞,这些细胞主要是腹角及凝角深部的大神经元及背角浅层的小神经元,灰质内亦内NGF,NT3及NT4阳性的胶质细胞,但数量多少不等,其中NT3者最多,其次是NGF,NT4者最少,此外,Ⅱ板层内还可见较多BDNF及少量NT-3阳性神经膨体,本文结果表明,在成年猫脊髓存在NGF,BDNF、NT3和NT4,但其分布有差异。     

NGF,BDNF和NT-3在培养鸡胚背根节神经元的表达

目的　探讨NGF ,BDNF ,NT - 3在体外培养鸡胚背根节神经元中的表达变化。方法　采用NGF ,BDNF ,NT - 3的兔抗血清分别对培养前后的鸡胚背根节神经元以免疫组化ABC法染色。观察NGF、BDNF和NT - 3在培养前、后鸡胚背根节神经元的表达情况 ,计数并比较培养前、后三种因子免疫阳性神经元百分数。结果　未培养的神经元 ,NGF ,BDNF ,NT - 3的阳性神经元百分数分别是 :10 %± 3%,2 7%± 5 %,2 9%± 7%。培养 48小时后 ,NGF ,BDNF ,NT - 3的阳性神经元百分数分别是 :77%± 6 %,6 4%± 7%,2 4%± 7%。结论　培养后NGF ,BDNF的表达较未培养者增加 (P <0 0 1) ,而NT - 3者则有减少 (P <0 0 5 )。提示在体外培养的鸡胚背根节神经元NT - 3的表达有不同于NGF和BDNF的调节方式。     

神经生长因子家族成员NGF、BDNF、NT-3和NT-4在猫L6脊髓的分布

采用免疫组织化学方法观察神经生长因子家庭成员NGF、BDNF、NT3和NT4在成年猫L6脊髓的分布.结果在L6脊髓灰质均可见四种生长因子的免疫阳性细胞,这些细胞主要是腹角及背角深部的大神经元及背角浅层的小神经元.灰质内亦内NGF、NT3及NT4阳性的胶质细胞,但数量多少不等.其中NT3者最多,其次是NGF,NT4者最少.此外,Ⅱ板层内还可见较多BDNF及少量NT-3阳性神经膨体.本文结果表明,在成年猫脊髓存在NGF、BDNF、NT3和NT4,但其分布有差异.     

去部分背根后猫脊髓Ⅱ板trKC表达的变化

目的　探讨部分去背根猫脊髓 板 (L3 、 L5) trk C的表达变化。方法　将 15只成年猫分正常组、单侧备用根术 (切除一侧 L1 - L5,L7- S2 背根节 ,保留 L6备用根 )后 3天和 10天组 (n=5 )。取各组脊髓 L3 、L5节段制作 2 0 μm冰冻切片 ,用 trk C兔抗血清以免疫组织化学 ABC法染片 ,观察 tr KC在脊髓 板层的分布 ,测量各组 板层 tr KC的平均灰度。结果　在正常组 tr KC阳性物主要分布于脊髓腹角中间带及背角深部的神经元。而 板层仅见 tr KC匀质状阳性染色。去部分背根后 3天 ,手术侧 L3 、 L5脊髓 板层 tr KC的平均灰度均较非手术侧及正常组者增加 (P<0 .0 5 )。 10天时 ,手术侧 L5平面 tr KC的平均灰度已恢复到近对侧和正常对照组水平 (P>0 .0 5 ) ,而 L3 平面仍较对侧及正常组者高 (P<0 .0 5 ) ,但已较3天者减少 (P<0 .0 5 )。去部分背根后 3天 ,手术侧 L3 、 L5脊髓 板层 tr KC的含量均较非手术侧及正常组者减少。 10天时 ,手术侧 L5平面 tr KC的含量已恢复近对侧及正常水平 ,而 L3 平面虽有恢复 ,但仍未达正常者水平。结论　 tr KC的表达变化可能与脊髓可塑性有关。     

BDNF，NT-3在猫背根神经元的自分泌和旁分泌作用初探—原位杂交和免疫组织化学研究

探讨脑源性神经营养因子 (BDNF)、神经营养因子 3 (NT- 3)在成年猫背根节 (DRG)神经元是否存在自分泌或旁分泌作用方式。用特异的 trk B、 trk C抗体及 BDNF、 NT- 3的 c RNA探针 ,以免疫组化及原位杂交双标法观察了成年猫 L6DRG神经元 BDNF m RNA与 trk B、 NT- 3 m RNA与 trk C的关系 ,以了解 BDNF、 NT- 3在成年猫 L6 DRG神经元有无自分泌或旁分泌作用。结果表明 ,在成年猫 L6 DRG BDNFm RNA阳性细胞主要是部分中、小神经元 (4 2～ 5 7μm,<42μm) ,而 trk B阳性细胞则主要是部分大神经元 (>5 7μm)。未见双标的 BDNF m RNA和 trk B阳性神经元 ,但见一些双标的卫星细胞。与BDNF者比较 ,大多数大神经元既表达 NT- 3 m RNA,又表达 trk C。这表明在成年猫 L6 DRG神经元 ,NT- 3可能存在自分泌方式。但本文的结果未证明 BDNF在成年猫 L6 DRG神经元存在自分泌。     

脑源性神经营养因子在大鼠后足切割疼痛中的作用

目的:观察脑源性神经营养因子(BDNF)对大鼠后足切割疼痛的影响。方法:采用纵行切割大鼠后足作为疼痛模型,运用免疫组织化学与免疫荧光双标记方法,观察大鼠后足切割后不同时间点(1-72hr)BDNF在相应节段背根神经节与脊髓内表达的变化。腹腔或鞘内注射BDNF抗体中和内源性BDNF后,以Von Frey尼龙纤维刺激后足行机械痛敏评价。结果:大鼠后足切割后1-24hr内,BDNF在切割侧L42-L5脊髓后角表达明增加,BDNF主要位于后角神经元内与神经末梢,星形胶质细胞与小胶质细胞内未见明显表达;在L42-L5背根神经节,BNDF免疫阳性细胞百分比在切割后1-24hr内也明显增加,增加的主要为大直经神经元;鞘内给予BDNF抗体可明显增加大鼠后足切割后的缩足阈值,而腹腔给予BDNF抗体对大鼠的缩足阈值影响较小。结论:BDNF参与了大鼠后足切割后机械痛敏的过程。     

针刺对部分背根切断后猫脊髓Ⅱ板层SP、CCK、L－ENK和5－HT神经纤维可塑性的影响──免疫组化定量分析

本研究用免疫组化结合图像分析观测了针刺对切除一侧Ｌ１－Ｓ２背根（保留Ｌ６背根）猫脊髓Ｌ５Ⅱ板层内含Ｐ物质（ＳＰ）、胆囊收缩素（ＣＣＫ）,亮氨酸脑啡肽（Ｌ－ＥＮＫ）和５－羟色胺（５－ＨＴ）神经纤维可塑性的影响。结果如下：非针刺组手术侧Ⅱ板层ＳＰ和ＣＣＫ阳性面积分别为非手术侧的７７％和４６％,而针刺组手术侧ＳＰ已恢复到非手术侧水平,ＣＣＫ为非手术侧的６６％,均比非针刺组明显增加。术后３０天再切断Ｌ６备用根后两组动物手术侧ＳＰ和ＣＣＫ阳性面积显著下降,表明针刺促进备用根中ＳＰ和ＣＣＫ神经纤维发生可塑变化;手术切断背根上Ｌ－ＥＮＫ阳性面积无影响,而针刺后有所增加,表明针刺能影响中间神经元的Ｌ－ＥＮＫ神经纤维发生可塑性变化;背根切断后下行投射的５－ＨＴ阳性面积明显增加,而针刺无进一步促进作用。     

切断部分背根对脊髓Ⅱ板层c-jun,c-fos表达的影响——免疫组织化学研究

目的：探讨c-fos、c-jun与脊髓可塑性的关系,方法：将成年雄猫25只分为正常组、假手术后3天组,假手后10天组,单侧备用根术（切除一侧L1－L5,L7－S2北根节,保留L6为备用根）后3天组和单侧备用根术后10天组（每组5只）。取各组动物的L5脊髓用4％多聚醛固定后制作20μm厚冰冻切片,每例动物间隔5张切片,分别用c-fos（稀释度1：3000,Sigma）,c-jun（稀释度1：1000,Santa Cruz)抗体行ABC免疫组化染色,DAB棕色反应显色,结果：正常组及假手术组猫脊央灰质各层内,c-jun的免疫阳性反应物主要出现在神经元胞核,但胞浆亦有弱阳性反应。部份去背根后3天及10天,单侧各用根手术组Ⅱ板层c-jun阳性神经元的数量及反应强度均正常组及假手术明显增多（P＜0．05）,但术后3天与10天组间无显差异（P＞0．05）。与c-jun比较,各组脊髓内均未见c-fos的阳性细胞。结论：切断部分背根导致脊髓Ⅱ板层c-jun表达上调,提示c-jun可能与脊髓Ⅱ板层可塑性有关。     

ALS转基因小鼠脊髓中miRNA-132表达减少BDNF表达增加

目的研究miRNA-132和脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)在肌萎缩侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)转基因小鼠脊髓中的表达变化,探讨miRNA-132、BDNF在ALS发病中的作用。方法取SOD1-G93A ALS转基因鼠发病早期(95d)、中期(108d)和晚期(122d)脊髓组织,应用qRT-PCR及原位杂交(hybridization in situ, ISH)技术检测miRNA-132的表达及定位,应用qRT-PCR及Western blot技术检测BDNF在mRNA及蛋白水平变化,免疫荧光技术检测BDNF在脊髓中的表达及分布,以同窝野生型鼠作为对照。结果与野生型鼠比较,miRNA-132在ALS转基因鼠脊髓组织表达下降,miRNA-132阳性信号主要定位脊髓前角细胞胞体;在ALS转基因鼠脊髓组织BDNF mRNA及蛋白水平均增高,BDNF免疫阳性细胞主要表达于脊髓前角神经元,表达信号明显增强。结论 miRNA-132、BDNF可能在ALS发病过程中发挥了重要作用。     

周围神经损伤后外源性GDNF对神经元的保护作用

采用硅管套接大鼠切断的坐骨神经模型 ,局部给予胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF) ,应用尼氏染色、酶组织化学染色方法 ,观察到外源性GDNF能减少脊髓修复侧前角运动神经元死亡的数目 ,降低脊髓前角运动神经元及脊神经节感觉神经元中胆碱酯酶 (CHE)及酸性磷酸酶 (ACP)变化的幅度。这表明外源性GDNF能保护周围神经切断后引起的神经元损伤。     

GDNF对体外运动神经元和感觉神经元的影响

目的:探讨胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对正常胎鼠脊髓运动神经元(SMN)和背根神经节神经元(DRG)生长活性的作用.方法:建立大鼠胚胎SMN和DRG单细胞培养体系,观察1 μg/L、10 μg/L、50 μg/L和100 μg/L GDNF对SMN和DRG存活及突起生长的影响.结果: GDNF组培养的SMN和DRG存活数目明显增加,神经元突起长度比对照组明显增长,且具有剂量依赖趋势.结论: GDNF对正常大鼠胚胎发育期运动神经元和感觉神经元具有神经营养作用.     

吗啡对备用根大鼠脊髓Ⅱ板层背根终未的影响——抗氟化物酸性磷酸酶组化定量研究

应用酶组化方法和图象分析探讨脊髓Ⅱ板层无髓传入纤维终末标记物——抗氟化物酸性磷酸酶(fluoride-resistant acid phoshatase,FRAP)活性的变化,从而了解吗啡对备用根大鼠的侧支出芽有无促进作用。结果显示:备用根大鼠手术侧L_3、L_4和L_5节段Ⅱ板层FRAP阳性反应物面积因切除了大部分腰段背根于17天时下降到最低水平,于34天时L_3平面开始回升,即其阳性面积比17天时增大5倍多。吗啡备用根大鼠17天时其术侧Ⅱ板层阳性反应物面积也降到最低水平,唯L_3Ⅱ板层的阳性面积比17天备用根者大4倍,表明17天时阳性面积已开始回升;而到34天时术侧L_4Ⅱ板层阳性面积比17天时增大75％,比34天备用根大鼠增大一倍。表明吗啡促进了背根无髓纤维的侧支出芽,而出芽的纤维更快地分布到L_4节段,稍后也分布到L_4节段Ⅱ板层。     

肝细胞生长因子在正常大鼠腰段脊髓和背根神经节的表达

目的:观察肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)在大鼠脊髓和背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)的表达。方法:取健康成年6只SD大鼠运用免疫组织化学染色技术检测HGF在腰段脊髓、背根神经节内的表达和分布。结果:在L4-6段脊髓,HGF免疫阳性产物可见于各板层神经元,尤以脊髓前角运动神经元明显;在DRG中,HGF免疫阳性物质可见于以大、中型为主的神经元的胞浆及突起中。结论:脊髓和背根神经节内的HGF通过与受体c-Met结合可能在神经再生及突触可塑性方面起一定作用。     

基因重组神经营养蛋白-3在中国仓鼠卵巢细胞中的表达

建立了能表达基因重组NT 3的中国仓鼠卵巢 (CHO)细胞系 ;通过Southernblot分析表明克隆细胞染色体中有明显的NT 3基因插入 ;用DotELISA和Westernblot实验证实了目的蛋白的表达及其分子量约为 1 4ku .利用EIA方法测定了阳性细胞株表达NT 3的量平均为 2 1 0 0ng/( 1 0 ⁶细胞·48h) ;rNT 3可促进鸡E8背根神经节神经突起生长 ,其长度与rNT 3浓度有明显的量效关系 ;rNT 3的EC5 0 值为 1 6 .7ng/mL ;单克隆抗体 3W3可中和所表达的rNT 3的生物活性 .     

功能性ghrelin受体在内脏迷走和脊髓传入神经通路中的表达

本文在mRNA和蛋白水平观察了功能性ghrelin受体(growth hormone secretagogue receptor type la,GHS-Rla)在大鼠内脏迷走及脊髓传入神经通路中的表达.结果显示:(1)GHS-Rla免疫反应阳性神经元及GHS-Rla mRNA分布于背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)及结状神经节(nodose ganglion,NG).(2)应用免疫双标技术观察到DRG和NG中都有一些GHS-Rla免疫反应阳性神经元,同时降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)染色呈阳性,显示GHS-Rla和CGRP共存于同一神经元,表明内脏传入神经元存在许多亚核群.(3)应用荧光金(fluorogold)标记的神经逆行追踪技术对从胃投射到DRG和NG的神经元进行免疫组织化学染色,观察到一些表达CGRP的GHS-Rla免疫反应阳性神经元也被荧光金染色.上述实验结果证实了GHS-Rla在迷走神经和脊髓传入神经元中的表达,提示ghrelin参与了胃.脑轴的调节.     

神经营养因子与神经干细胞

生长因子在神经干细胞的增殖,分化和存活过程中有重要作用。神经营养因子是其中的一类,它包括神经生长因子（NGF）家族,胶质源性神经营养因子（GDNF）家族和其它神经营养因子。NGF家族包括NGF,BDNF,NT－3,NT－4／5和NT－6。这一家族可促进epidermic growth facter(EGF)反应 海马及前脑室管膜下区神经干细胞的存活和分化。GDNF家族包括GDNF,NTN,PSP和ART。GDNF家族促神经发育的作用主要在外周,它促进肠神经嵴前体细胞的存活和增殖,且对外周感觉神经的发育至关重要。其它生长因子如bFGF和EGF,它们能促进神经干细胞增殖和存活;CNTF和LIF等在神经干细胞的分化中也有重要作用。