急性淋巴细胞白血病CD34+CD38-细胞在NOD/SCID小鼠体内的自我更新与增值能力

目的 探索急性淋巴细胞白血病(ALL)患者CD34+ CD38-细胞移植到NOD/SCID小鼠体内建立白血病的可行性、自我更新与增殖潜能.方法 分选并鉴定ALL患者骨髓CD34+ CD38-细胞及对照CD34- CD38+细胞后,经尾静脉分别注射104个细胞于亚致死剂量射线照射的NOD/SCID小鼠体内,连续监测小鼠状态以及外周血血象改变,对濒死或死亡小鼠进行骨髓检查、肝脾病理学检查.结果 接种从ALL患者分选的CD34+ CD38-细胞到NOD/SCID小鼠体内后4周,小鼠外周血白细胞上升,到8周左右达高峰,约15×109～20× 109/L,原始及幼稚淋巴细胞明显增多.骨髓象显示以原始及幼稚淋巴细胞增生为主,约为40％,且肝脾组织也有白细胞浸润,明显高于接种了对照组CD34- CD38+细胞的NOD/SCID小鼠.结论 ALL患者CD34+CD38-细胞可以成功移植NOD/SCID 小鼠,在小鼠体内增殖形成白血病,说明该群细胞具有自我更新和增殖的潜能,可作为探索白血病起始细胞研究的重要载体.     

急性淋巴细胞白血病CD34~+ CD38~-细胞在NOD/SCID小鼠体内的自我更新与增殖能力

目的探索急性淋巴细胞白血病(ALL)患者CD34+CD38-细胞移植到NOD/SCID小鼠体内建立白血病的可行性、自我更新与增殖潜能。方法分选并鉴定ALL患者骨髓CD34+CD38-细胞及对照CD34-CD38+细胞后,经尾静脉分别注射104个细胞于亚致死剂量射线照射的NOD/SCID小鼠体内,连续监测小鼠状态以及外周血血象改变,对濒死或死亡小鼠进行骨髓检查、肝脾病理学检查。结果接种从ALL患者分选的CD34+CD38-细胞到NOD/SCID小鼠体内后4周,小鼠外周血白细胞上升,到8周左右达高峰,约15×109～20×109/L,原始及幼稚淋巴细胞明显增多。骨髓象显示以原始及幼稚淋巴细胞增生为主,约为40%,且肝脾组织也有白细胞浸润,明显高于接种了对照组CD34-CD38+细胞的NOD/SCID小鼠。结论 ALL患者CD34+CD38-细胞可以成功移植NOD/SCID小鼠,在小鼠体内增殖形成白血病,说明该群细胞具有自我更新和增殖的潜能,可作为探索白血病起始细胞研究的重要载体。     

CD34+和CD34-细胞在NOD/SCID小鼠体内的造血重建

利用非肥胖糖尿病型重症联合免疫缺陷型(NOD/SCID)小鼠模型, 比较了新鲜及培养后的CD34+和CD34-细胞在体内植入及重建造血能力。从新鲜脐血及培养后的单个核细胞(MNC)中分离出CD34+和CD34-细胞, 经尾静脉输注入经亚致死剂量照射的NOD/SCID小鼠体内, 6周后处死存活的小鼠, 取其骨髓、脾脏和外周血细胞, 分别进行细胞表型分析、造血集落形成单位和人特异性基因的检测。经检测, 输注CD34+细胞和混合细胞的小鼠, 其体内CD45+细胞及人源各系血细胞的含量相近, 两者均远远高于输注CD34-细胞的小鼠。输注培养后CD34-细胞的小鼠饲养6周后全部死亡,输注培养后CD34+细胞的小鼠存活率约为66.7%, 而输注培养后混合细胞的小鼠全部存活, 且在两组存活的小鼠体内均能检测到CD45+细胞及人源各系血细胞。结果表明: 无论是新鲜还是培养后的CD34+细胞均具有在NOD/SCID小鼠体内植入和重建造血能力, 而CD34-细胞不具有该能力, 但CD34-细胞与CD34+细胞同时输注有助于提高小鼠的存活率, 说明其对CD34+细胞在小鼠体内发挥植入和造血重建能力有一定的辅助作用。     

人CD34^＋和CD34^-细胞在NOD／SCID小鼠体内的造血重建

利用非肥胖糖尿病型重症联合免疫缺陷型(NOD/SCID)小鼠模型,比较了新鲜及培养后的CD34 和CD34-细胞在体内植入及重建造血能力.从新鲜脐血及培养后的单个核细胞(MNC)中分离出CD34 和CD34-细胞,经尾静脉输注入经亚致死剂量照射的NOD/SCID小鼠体内,6周后处死存活的小鼠,取其骨髓、脾脏和外周血细胞,分别进行细胞表型分析、造血集落形成单位和人特异性基因的检测.经检测,输注CD34' 细胞和混合细胞的小鼠,其体内CD45 细胞及人源各系血细胞的含量相近,两者均远远高于输注CD34-细胞的小鼠.输注培养后CD34-细胞的小鼠饲养6周后全部死亡,输注培养后CD34 细胞的小鼠存活率约为66.7%,而输注培养后混合细胞的小鼠全部存活,且在两组存活的小鼠体内均能检测到CD45 细胞及人源各系血细胞.结果表明:无论是新鲜还是培养后的CD34 细胞均具有在NOD/SCID小鼠体内植入和重建造血能力,而CD34-细胞不具有该能力,但CD34-细胞与CD34 细胞同时输注有助于提高小鼠的存活率,说明其对CD34 细胞在小鼠体内发挥植入和造血重建能力有一定的辅助作用.     

hu-PBL-SCID小鼠体内人淋巴细胞状况及其对人肺癌移植瘤转移的影响

将人外周血淋巴细胞经腹腔移植于T、B细胞严重联合免疫缺陷的SCID小鼠后,成功地建立了hu - PBL- SCID小鼠模型。在移植后4 周,其小鼠血清中存在人免疫球蛋白,其脾淋巴细胞中,所检测的8 种免疫表型人淋巴细胞亚群均存在,表明人淋巴细胞在SCID小鼠体内出现了增殖或重建。但hu- PBL- SCID小鼠及未免疫重建的SCID小鼠体内人肺巨细胞癌PLA- 801DL的生长及转移情况未见明显差异,提示hu- PBL- SCID小鼠体内的人淋巴细胞不具有明显的抗肿瘤活性。     

不同临床类型乙型病毒感染者外周血T细胞亚群与血清HBVDNA载量及HBeAg滴度相关性分析

目的：探讨慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染患者外周血T细胞亚群与血清HBVDNA载量及HbeAg滴度的关系。方法：选取103名HBV感染患者和20名健康者为研究对象。流式细胞术检测外周血T细胞亚群,聚合酶链式反应及酶免疫分析法分别检测血清HBVDNA载量及HbeAg滴度。结果：慢性乙型肝炎患者和慢性HBV携带者外周血CD3可、CD4T淋巴细胞亚群百分数低于健康对照组,结果有统计学意义（P〈0．05或0．01;而CD8＋T细胞亚群则呈现相反趋势,结果亦有统计学意义（P〈0．05或0．01）。HBeAg阴性组中,HBVDNA水平与CD8T细胞亚群百分数呈正相关（r=0．567,P〈0．01）,与CD47CD8＋T细胞亚群百分数比值呈负相关（r=-0．601,P〈0．01）,而与CD3＋T、CD4＋T细胞亚群百分数无相关性。HBeAg阳性组中,HBVDNA水平及HbeAg滴度与cD3＋1r、cD41、CD8叮细胞百分数及CD47CD8＋T细胞百分数均无相关性（P〉0．05）。结论：不同临床类型的慢性乙型肝炎病毒感染患者外周血T细胞亚群存在不同程度细胞免疫功能降低和细胞免疫调节异常。HbeAg阴性的HBV感染患者,其血清HBVDNA水平与外周血T淋巴细胞免疫存在相关性。     

肿瘤干细胞标记物CD133与miR-429在大肠癌组织中的表达及其相关性研究

目的：检测CD133不同亚群大肠癌细胞HT-29的miR-429表达情况,探讨miR-429及CD133的表达与肿瘤的发生发展之间的关系。方法：采用荧光活化细胞分选法（FACS）分选出CD133不同亚群细胞,实时荧光定量PCR分别检测两组细胞miR-429的表达,合成miR-429寡核苷酸和阴性对照miRNA并分别转染CD133＋和CD133＋两个亚群细胞。再将细胞种植于非肥胖糖尿病／严重联合免疫缺陷（NOD／SCID）小鼠体内构建移植瘤模型,不同时间测量肿瘤体积和重量,RT—PCR及蛋白质印迹检测CD133＋和CD133＋两组肿瘤CD133mRNA和蛋白质表达。结果：血清检出CD133＋细胞为67．9％,miR-429的表达量是CD133＋细胞的（1．83±0．91）倍（P〈0．05）,CD133＋比例与miR-429表达呈负相关（r=0．591,P〈0．05）;miR-429＋／CD133＋组的移植瘤体积及重量与对照组比较有统计学差异（P〈0．05）,且miR-429＋/CD133＋组成瘤时间较对照组晚约2周,但miR-429＋/CD133＋组的移植瘤CD133表达量低,与阴性对照组比较无明显差异（P〉0．05）。结论：miR-429可能作为CD133的负性调控因子,具有抑制肿瘤生长的作用,但miR-429与CD133在肿瘤发生、发展过程中的作用机制有待进一步研究阐明。     

Simvastatin与rhG—CSF促进兔颈总动脉球囊损伤后内膜修复的实验研究

目的：观察辛伐他汀及重组人粒细胞集落刺激因子（rhG—CSF）在兔颈总动脉内膜损伤后对血管壁变化及外周血中CD34＋细胞含量的影响。方法：雄性新西兰大白兔48只,随机均分为：单纯损伤组,辛伐他汀组,rhG—CSF组及辛伐他汀和rhG—CSF联合组（简称联合组）,建立兔左颈总动脉内膜球囊导管损伤模型,术后给予辛伐他汀（10mg／kg／d经胃灌入）及rhG．CSF（100μg／a皮下注射）干预治疗,每组分别于术前1d、术后7d、14d、21d、28d抽取静脉血2ml,经流式细胞仪检测外周血中CD34＋细胞含量;4周后处死所有动物取损伤段血管,弹力纤维染色,计算内膜厚度、中膜厚度、管腔面积（S）、内膜面积（si）、中膜面积（Sm）TLSi／Sm比值评价血管再狭窄程度。结果：①术前4组之间相比外周血CD34＋细胞含量无明显差异（P〉0．05）;术后7d时各组外周血CD34＋细胞含量最高,后逐渐下降,28d较低,但仍高于术前含量;rhG—CSF组及联合组与对照组相比外周血CD34＋细胞明显增多（P〈O．01,P〈0．01）;术后7d、14天时辛伐他汀组与单纯损伤组相比外周血cD34＋细胞无明显差别（P〉0．05）。术后21d、28天时辛伐他汀组与单纯损伤组相比外周血CD34＋细胞有显著差异（P〈0．05）。②与单纯损伤组相比辛伐他汀组、rhG—CSF组及联合组Si／Sm比值明显减小（P〈0．05）;辛伐他汀组和rhG—CSF组两组间比较无显著差别（P〉0．05）;联合组分别与辛伐他汀组、rhG-CSF组比较血管内膜增生更少,具有显著性（P〈0．01,P〈0．01）,结论：本实验研究发现辛伐他汀可促进损伤内膜修复及预防血管再狭窄,长期服用可以增加外周血CD34＋细胞;rhG—CSF可明显增加外周血CD34＋细胞及预防血管在狭窄;辛伐他汀与rhG—CSF联合用药可明显增加外周血CD34＋细胞、加速内皮修复与预防再狭窄,较单一用药具有更好的疗效。     

hu-PBL-SCID小鼠体内人淋巴细胞状况

将人外周血淋巴细胞经腹腔移植于T、B细胞严重联合免疫缺陷的SCID小鼠后,成功地建立了hu-PBL-SCID小鼠模型。在移植后4周,其小鼠血清中存在人免疫球蛋白,其脾淋巴细胞中,所检测的8种免疫表型人淋巴细胞亚群均存在,表明人淋巴细胞在SCID小鼠体内出现了增殖或重建。但hu-PBL-SCID小鼠及未免疫重建的SCID小鼠体内人肺巨细胞癌PLA-801DL的生长及转移情况未见明显差异,提示hu-PBL-SCID小鼠体内的人淋巴细胞不具有明显的抗肿瘤活性。     

旋毛虫在小鼠体内发育及T淋巴细胞亚群变化的动态观察

目的观察IL-2对感染旋毛虫小鼠免疫功能的影响及旋毛虫在小鼠体内的发育。方法小鼠感染旋毛虫后,分别采用ELISA和流式细胞仪检测小鼠不同时期外周血中IL-2含量、CD4^＋及CD8^＋T淋巴细胞的百分率。取小鼠不同部位肌肉观察旋毛虫的发育和分布。结果小鼠感染旋毛虫后1～5周IL-2的含量较正常组明显增加。小鼠感染旋毛虫后1～6周,CD4^＋T细胞较正常组明显减少,CD8^＋T淋巴细胞明显增多,CD4^＋／CD8^＋比值明显下降。旋毛虫幼虫主要分布在小鼠的膈肌,其次为咬肌,舌肌最少。结论IL-2对感染旋毛虫小鼠早期具有一定的免疫抑制作用,小鼠感染旋毛虫后21d即可检出旋毛虫,35～42d密度达最高。     

人体微生态系统与人类宏基因组计划

介绍了微生态系统的基本概念和人体基本的微生态系统,阐述了其对人类的意义;介绍了人类宏基因组计划基本知识和研究方法.     

Delineation of Interfaces on Human Alpha-Defensins Critical for Human Adenovirus and Human Papillomavirus Inhibition

Human α-defensins are potent anti-microbial peptides with the ability to neutralize bacterial and viral targets. Single alanine mutagenesis has been used to identify determinants of anti-bacterial activity and binding to bacterial proteins such as anthrax lethal factor. Similar analyses of α-defensin interactions with non-enveloped viruses are limited. We used a comprehensive set of human α-defensin 5 (HD5) and human neutrophil peptide 1 (HNP1) alanine scan mutants in a combination of binding and neutralization assays with human adenovirus (AdV) and human papillomavirus (HPV). We have identified a core of critical hydrophobic residues that are common determinants for all of the virus-defensin interactions that were analyzed, while specificity in viral recognition is conferred by specific surface-exposed charged residues. The hydrophobic residues serve multiple roles in maintaining the tertiary and quaternary structure of the defensins as well as forming an interface for virus binding. Many of the important solvent-exposed residues of HD5 group together to form a critical surface. However, a single discrete binding face was not identified for HNP1. In lieu of whole AdV, we used a recombinant capsid subunit comprised of penton base and fiber in quantitative binding studies and determined that the anti-viral potency of HD5 was a function of stoichiometry rather than affinity. Our studies support a mechanism in which α-defensins depend on hydrophobic and charge-charge interactions to bind at high copy number to these non-enveloped viruses to neutralize infection and provide insight into properties that guide α-defensin anti-viral activity.