PEDF蛋白在子痫前期患者胎盘上的表达及意义

目的:研究子痫前期患者胎盘组织中色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)的表达,探讨PEDF在子痫前期发病中的作用。方法:选取2012年3月至2013年3月在我院产科住院剖宫产的20例子痫前期孕妇作为研究对象,另选取同期正常分娩的孕妇20例作为对照组。采用Western blot、免疫荧光组织化学方法检测子痫前期患者和正常对照组妇女胎盘组织中PEDF和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达,并通过免疫荧光方法计数胎盘微血管密度(MVD)。结果:同正常对照组相比,子痫前期患者胎盘组织中PEDF表达升高,而VEGF表达则减少。PEDF与VEGF组织表达位置大致相同。子痫前期患者胎盘组织中PEDF表达与24h尿蛋白定量呈正相关,与VEGF表达及MVD计数呈负相关;VEGF表达与MVD计数呈正相关。结论:PEDF与子痫前期疾病发生发展及病情轻重程度有关;PEDF可能是通过影响胎盘血管的重铸,而参与子痫前期疾病的发生发展。     

子痫前期患者血清对脐静脉内皮细胞CD40和NF-κB表达的影响

目的:研究CD40和NF-κB在子痫前期患者组的脐静脉内皮细胞(HUVEC)中的表达,探讨其在子痫前期发病过程中的作用。方法:应用子痫前期患者组的血清冲击人HUVEC株,电镜下观察HUVEC的形态变化,流式细胞仪下测定细胞的凋亡,用RT-PCR方法检测HUVEC中CD40和NF-κB的表达情况。结果:1电镜下正常孕妇组HUVEC呈"铺路石"状单层镶嵌排列,子痫前期组HUVEC形态呈典型损伤改变,细胞稀疏,细胞核与细胞浆分界模糊不清,胞浆中有暗色颗粒。2流式细胞仪测定子痫前期组HUVEC的细胞凋亡较正常组明显升高,差异有显著意义(P0.05);3 RT-PCR测定显示子痫前期患者组HUVEC中CD40m RNA及NF-Bm RNA水平均较正常组明显升高,差异有显著意义(P0.05);4子痫前期组及对照组的CD40和NF-k B表达均呈显著性正相关。结论:CD40和NF-κB的激活均参与了子痫前期的发病机制,并在其中发挥重要作用。     

子痫前期患者血清对脐静脉内皮细胞CD40 和NF-kB 表达的影响

目的：研究CD40 和NF-资B 在子痫前期患者组的脐静脉内皮细胞（HUVEC）中的表达,探讨其在子痫前期发病过程中的作 用。方法：应用子痫前期患者组的血清冲击人HUVEC 株,电镜下观察HUVEC 的形态变化,流式细胞仪下测定细胞的凋亡,用 RT-PCR 方法检测HUVEC中CD40 和NF-资B 的表达情况。结果：①电镜下正常孕妇组HUVEC呈" 铺路石" 状单层镶嵌排列, 子痫前期组HUVEC形态呈典型损伤改变,细胞稀疏,细胞核与细胞浆分界模糊不清,胞浆中有暗色颗粒。②流式细胞仪测定子 痫前期组HUVEC的细胞凋亡较正常组明显升高,差异有显著意义（P<0.05）;③ RT-PCR 测定显示子痫前期患者组HUVEC 中 CD40mRNA 及NF- BmRNA 水平均较正常组明显升高,差异有显著意义（P<0.05）;④ 子痫前期组及对照组的CD40 和NF- kB表 达均呈显著性正相关。结论：CD40和NF-资B 的激活均参与了子痫前期的发病机制,并在其中发挥重要作用。     

VEGF和SDF-1 的协同作用对内皮祖细胞增殖与迁移的影响

目的:研究血管内皮生长因子(VEGF)和基质衍生因子-1(SDF-1)的协同作用对高血压脑出血患者内皮祖细胞(EPCs)增殖迁移能力的影响。方法:采集急性期高血压脑出血患者与健康对照的外周静脉血,分离培养外周血中的EPCs。用分别含有不同VEGF与SDF-1的培养基处理患者外周血分离的EPCs,Western blot检测各组细胞以及患者和对照中VEGF和SDF-1的蛋白表达。MTT法检测细胞增值能力,Transwell法检测细胞迁移能力,分别转染VEGF-si RNA与SDF-1-si RNA至各组细胞观察抑制VEGF和SDF-1对EPCs增殖迁移能力的影响。结果:VEGF和SDF-1在患者中的表达显著高于健康对照组。VEGF和SDF-1对EPCs的增殖和迁移能力有促进作用,且在其协同作用下效果显著。抑制VEGF或SDF-1显著降低VEGF和SDF-1对EPCs增殖迁移能力的促进作用。结论:VEGF和SDF-1的协同作可促进急性期高血压脑出血患者EPCs的细胞增殖能力和迁移能力,对患者血管修复提供新的治疗方向。     

阿托伐他汀对冠心病患者内皮祖细胞中microRNA-221/222水平的影响

目的:观察冠心病患者内皮祖细胞中microRNA-221/222表达情况,探讨阿托伐他汀对其表达的影响。方法:本研究入选20例稳定型冠心病患者作为治疗组以及20例条件齐同的非冠心病患者作为对照组,治疗组予阿托伐他汀(20mg/d)治疗6个月,实验前及阿托伐他汀治疗6个月后分别采集外周血提取内皮祖细胞行体外培养,应用RT-PCR检测内皮祖细胞中microRNA-221/222水平。结果:冠心病组患者microRNA-221/222表达水平明显高于非冠心组病患者,冠心病组患者microRNA-221/222表达水平与内皮祖细胞的数量呈负相关,经阿托伐他汀干预6个月后,冠心病组患者内皮祖细胞的数量较基线时明显增加,而microRNA-221/222水平显著降低。结论:阿托伐他汀可增加冠心病患者内皮祖细胞的数量以及降低冠心病患者内皮祖细胞中microRNA-221/222水平。     

解整合素金属蛋白酶19(ADAM19)与子痫前期的相关性研究

通过对孕妇胎盘组织和外周血中解整合素金属蛋白酶19(ADAM19)的检测,探讨ADAM19与子痫前期发病的关系.将病人分为研究组(子痫前期组)和对照组(正常妊娠组),子痫前期组病人中早发型50例,晚发型44例,对照组病人50例.于临近分娩时取静脉血,分娩后取胎盘组织,应用免疫组织化学技术和免疫印迹技术对胎盘组织中ADAM19蛋白进行检测,用ELISA法检测两组血浆中ADAM19的水平.结果显示,胎盘组织中ADAM19分布在多种滋养层细胞中,包括细胞滋养层细胞、合体滋养层细胞和一些绒毛间质结缔组织细胞、毛细血管中,其阳性信号定位于细胞膜上和细胞质中;ADAM19的蛋白表达正常胎盘中为0.34±0.03,晚发型子痫前期组为0.53±0.02,早发型子痫前期组为0.82±0.03,三者间比较差异均有统计学意义(P<0.01).正常孕妇血浆中ADAM19为(4.52±0.10)μg/L,晚发型子痫前期为(4.32±0.11)μg/L,早发型子痫前期(3.78±0.10)μg/L.早发型子痫前期组与对照组比较有统计学差异(P<0.001),晚发型子痫前期组与对照组比较无统计学差异(P>0.05),早发型与晚发型子痫前期比较有统计学差异(P<0.001).结果表明,子痫前期胎盘组织中ADAM19过度表达可能与子痫前期的发生和发展有关,ADAM19有可能作为预测子痫前期发病的分子标志.     

糖尿病视网膜病变患者内皮祖细胞的数量变化分析

目的:研究糖尿病视网膜病变患者内皮祖细胞(EPCs)的数量变化,从而探讨内皮祖细胞是否参与了糖尿病微血管病并发症的发生发展。方法:选择与年龄、性别相匹配的患者,共124例,其中健康对照组62例,单纯糖尿病组31例(DM组),糖尿病背景期视网膜病变15例(DM+NPDR组),糖尿病增殖期视网膜病变组16例(DM+PDR组)。采用密度梯度离心法从人外周血分离出单个核细胞,通过流式细胞仪检测内皮祖细胞数量。结果:与健康对照组相比,DM组、DM+NPDR组、DM+PDR组的外周血EPCs的数量明显减少(P0.05)。DM+NPDR组与DM组相比,外周血EPCs数量无统计学差异(P0.05)。DM+PDR组与DM组相比,外周血EPCs数量显著增加(P0.05)。结论:EPCs参与了糖尿病微血管并发症的发生发展,有望在临床治疗中成为潜在的治疗靶点。     

葡萄糖调节蛋白78在子痫前期中的表达及其意义

目的：探讨葡萄糖调节蛋白78（GRP78）mRNA及蛋白在胎盘组织的表达水平及其与子痫前期的发病关系。方法：选择2010年1月-2010年12月在南京医科大学第一附属医院江苏省人民医院产科住院的子痫前期患者35例（子痫前期组）,以同期正常孕妇35例为对照组。采用RT-PCR技术、蛋白印迹（western-blot）法和免疫组化检测两组孕妇胎盘组织中GRP78的mRNA与蛋白表达水平差异。结果：子痫前期组患者胎盘组织中GRP78mRNA与蛋白表达水平均显著高于相应孕周正常妊娠组。结论：子痫前期能够诱导GRP78表达,CHOP/GADD153表达的增高与子痫前期的发病有关。     

葡萄糖调节蛋白78在子痫前期中的表达及其意义

目的:探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)mRNA及蛋白在胎盘组织的表达水平及其与子痫前期的发病关系。方法:选择2010年1月-2010年12月在南京医科大学第一附属医院江苏省人民医院产科住院的子痫前期患者35例(子痫前期组),以同期正常孕妇35例为对照组。采用RT-PCR技术、蛋白印迹(western-blot)法和免疫组化检测两组孕妇胎盘组织中GRP78的mRNA与蛋白表达水平差异。结果:子痫前期组患者胎盘组织中GRP78mRNA与蛋白表达水平均显著高于相应孕周正常妊娠组。结论:子痫前期能够诱导GRP78表达,CHOP/GADD153表达的增高与子痫前期的发病有关。     

应用实时荧光定量RT-PCR检测宫颈癌及其外周血中VEGF表达的研究

目的:研究血管内皮生长因子在宫颈癌患者癌和癌旁组织及外周血循环细胞中的表达情况,分析其在肿瘤生长与转移中的作用。方法:采用基于TaqMan探针技术的实时荧光定量RT-PCR法检测了50例宫颈癌患者癌及癌旁组织和40例正常宫颈组织标本中VEGF mRNA的表达情况及其对应的外周血中的VEGF mRNA表达,分析其与临床病理参数之间的关系。结果:宫颈癌组织及癌旁组织中VEGF mRNA的表达水平无明显差异,但均与正常宫颈组织的表达水平差异有显著性;宫颈癌组织中VEGF mRNA的表达与肿瘤的组织学类型无明显的相关性;而与肿瘤的临床病理分期、病理分化程度、淋巴结转移、肿瘤直径、深肌层浸润间均呈显著的正相关。宫颈癌患者外周血中VEGF的表达明显高于对照组水平,与淋巴结是否转移密切相关,但与其他临床病理参数无关。结论:实时荧光定量RT-PCR可以敏感且特异性的检测出宫颈癌组织及外周血中VEGF mRNA的表达,且方法准确可靠,操作方便,在肿瘤的微转移的诊断监测方面有一定的应用价值。VEGF有可能成为治疗恶性肿瘤的一个潜在的分子靶点。     

肝细胞生长因子对骨髓内皮祖细胞的动员作用

目的: 分析肝细胞生长因子(HGF)能否动员骨髓内皮祖细胞,以及动员的内皮祖细胞能否参与创伤修复时的血管新生和内皮修复.方法: 将腺病毒HGF载体(adenovirus vector encoding HGF gene, Ad-HGF)经尾静脉注射到Balb/c小鼠体内,用ELISA方法检测血浆HGF水平的变化;用流式细胞术检测外周血CD34 细胞含量变化;对外周血单个核细胞进行分离、培养,并对生长的细胞克隆进行内皮细胞表面标志Tie-2、vW因子的免疫组化检测.建立雌性小鼠CCl4肝损伤模型,静脉移植HGF处理后雄性小鼠外周血单个核细胞到其体内,4 W后利用原位杂交技术检测新生肝组织中是否存在雄性细胞.结果: 注射Ad-HGF能明显提高小鼠血浆的HGF水平,并使外周血中以CD34、Tie-2和vW因子等为标志的内皮祖细胞的数量显著增多.这些细胞参与肝损伤修复时的血管新生.结论: HGF对骨髓内皮祖细胞具有明显的动员作用.     

血浆FA、ET-1、Hcy、VEGF水平与妊娠高血压综合征的相关性研究

目的:研究叶酸(FA)、内皮素(ET-1)、同型半胱氨酸(Hcy)和血管内皮生长因子(VEGF)与妊娠高血压综合征的相关性。方法:选择2013年1月~2016年9月在我院进行诊治的妊娠高血压综合征患者80例,分为妊娠期高血压组即A组(40例)以及子痫前期、子痫组即B组(40例),60例正常晚期孕妇为C组,60例正常非孕妇为D组,分别检测各组的血浆FA、ET-1、Hcy和VEGF水平,并进行相关性分析。结果:四组间血浆FA、ET-1和Hcy水平相比,B组的血浆FA和VEGF水平最低(P0.05),ET-1和Hcy水平最高(P0.05);妊娠高血压综合征的妇女血浆FA和VEGF水平均低于正常晚期孕妇,ET-1和Hcy水平明显高于正常晚期孕妇(P0.05);多因素logistic回归分析显示FA、ET-1、Hcy、VEGF水平是妊娠高血压综合征的危险因素。结论:妊娠期FA缺乏引起血浆Hcy水平的升高可能与妊娠高血压综合征的发病及病情发展有关,VEGF可能是妊娠高血压综合征发生、发展的一个重要危险因素。     

过氧化氢对内皮祖细胞凋亡相关蛋白表达的影响

目的:比较不同浓度过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)对人外周血来源的内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)生存能力的改变及其对凋亡相关蛋白表达的影响。方法:采用密度梯度离心法和差速贴壁法从人外周静脉血中分离培养内皮祖细胞。选取传代后第3代EPCs作为研究对象,以终浓度分别为50μmol/L、100μmol/L、150μmol/L、200μmol/L、300μmol/L和400μmol/L的过氧化氢处理内皮祖细胞12 h,同时设立正常处理对照组。CCK-8法检测各组内皮祖细胞生存能力的差异;Western blot分析各组内皮祖细胞中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和p53的蛋白表达情况。结果:与对照组相比,在浓度为50μmol/L、100μmol/L和150μmol/L过氧化氢处理组中细胞存活能力逐渐增强,促凋亡蛋白Bax、p53随之下调,抗凋亡蛋白Bcl-2则显著上调;在浓度为200μmol/L、300μmol/L和400μmol/L过氧化氢处理组中细胞生存能力相对于正常对照组逐渐减弱,促凋亡蛋白Bax、p53表达水平逐渐增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平下降。结论:过氧化氢对内皮祖细胞存活能力和凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、p53表达的影响均呈双相性变化。     

血管内皮标记物及血管内皮生长因子在胸水细胞中的表达和意义

探讨CD31、CD34、CD105及VEGF在胸水中的表达.应用免疫细胞化学染色,免疫荧光染色,Western-blot技术检测200例非小细胞肺癌患者胸水、30例增生胸水和20例炎性胸水中CD31、CD34、CD105及VEGF的表达.CD31、CD34、CD105及VEGF在非小细胞肺癌胸水中的表达量明显高于增生和炎性胸水表达(P＜0.05).非小细胞肺癌胸水患者CD31、CD34、CD105及VEGF高表达,并且在存在着肿瘤细胞血管样管型结构中表达量明显高于未发现肿瘤细胞血管样管型的胸腔积液.检测CD31、CD34、CD105及VEGF在胸腔积液中的表达情况可能对判断患者的预后有一定价值.     

海拔高度对2型糖尿病患者循环内皮祖细胞及低氧诱导因子的影响*

目的: 探讨不同海拔地区2型糖尿病患者循环内皮祖细胞数量及相关检测指标的变化情况,为2型糖尿病血管并发症的研究和治疗提供依据。方法: 选取386 m低海拔地区(咸阳市)和1 520 m高海拔地区(兰州市)各一家医院内被诊断的2型糖尿病患者(25人/29人)和健康体检者(20人/20人)。用全自动生化分析仪检测两组人群的血脂、血糖和糖化血红蛋白指标,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的浓度,用流式细胞仪测定外周血循环内皮祖细胞(EPCs)的数量。结果: 无论在低海拔还是高海拔地区,糖尿病组较健康组循环EPCs数量降低(P＜0.01),体质指数(BMI)、腰臀比(WHR)、甘油三酯(TG)、空腹血糖(FBG)及糖化血红蛋白含量(HbAlc)增高(P＜0.05);与低海拔组相比,无论高海拔的糖尿病患者还是健康者,HIF-1α的表达水平均明显增加(P＜0.05),而循环EPCs数量明显降低(P＜0.05),且有循环EPCs数量健康者高于2型糖尿病无血管并发症者高于2型糖尿病伴血管并发症者的表现(P＜0.05)。结论: 海拔高度增加,2型糖尿病(T2DM)患者体内HIF-1α表达水平增加,循环EPCs数量降低,且与其血管病变程度密切相关。因此有望通过对高海拔地区T2DM患者进行EPCs的移植来实现对糖尿病血管并发症的预防和改善。     

sHLA-G在子痫前期患者的表达及意义

目的：检测子痫前期患者sHLA—G水平,探讨母血sHLA—G的水平和妊娠高血压疾病的关系。方法：采用酶联免疫吸附法检测20例正常孕妇晚期和20例子痫前期患者血清sHLA—G水平。结果：在正常妊娠组sHLA—G血清中的水平为10．72&#177;3.40ng／mL;子痫前期组为9.46&#177;1.5．10ng／mL。子痫前期组sHLA—G水平明显低于正常妊娠晚期组,差异有显著性意义（P〈0．05）。结论：sHLA-G可能与子痫前期患者的发病有关系。     

孕期营养与早发型子痫前期的关系

目的:探讨早发型子痫前期与孕期营养的关系,为早发型子痫前期的预防提供参考依据。方法:选择2011年10月~2013年10月我院收治的早发型子痫前期患者(发病孕周34周)60例为A组,晚发型子痫前期患者(发病孕周≥34周)58例为B组,以及同时期门诊产检孕周34周的正常孕妇40例为C组,产检孕周≥34周的正常孕妇40例为D组,检测和比较各组孕妇的血清总蛋白、血红蛋白含量、血细胞压积水平。结果:A组血清总蛋白、血红蛋白含量、血细胞压积均显著低于B和C组,差异均有统计学意义(P0.05);而C组血清总蛋白、血红蛋白含量、血细胞压积与D组比较无明显统计学差异(P0.05)。结论:早发型子痫前期的发生可能与孕期低蛋白血症、贫血相关,加强孕妇孕期的营养可能有助于预防早发型子痫前期的发生。     

应用siRNA技术探讨MCF-7乳腺癌细胞分泌的VEGF对树突状细胞的影响

为探讨MCF-7乳腺癌细胞分泌的血管内皮生长因子（ vascular endothelial growth factor, VEGF）对树突状细胞（dendritic cell, DC）功能及其分化的影响,针对VEGF基因设计siRNA（small interfering RNA, siRNA),采用脂质体转染法以100 nmol/L最佳转染浓度导入MCF-7乳腺癌细胞（siRNA组）,以脂质体Lipofectamine　2000TM转染MCF-7 乳腺癌细胞培养上清培养正常DC作为对照（对照组）,采用ELISA法检测经siRNA 干扰VEGF基因后的MCF-7 乳腺癌细胞分泌的VEGF因子含量, Western 印迹检测VEGF蛋白表达,以探讨siRNA的基因沉默效果;以siRNA组和对照组培养上清分别培养外周血单个核细胞,用流式细胞仪检测所诱导DC表型CD1a、CD80、CD83、CD86和HLA-DR的表达,用MTT法检测转染前后两组DC 诱导的细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocyte, CTL）对MCF-7细胞的细胞毒作用.结果显示,MCF-7 乳腺癌细胞培养上清能明显抑制正常DC分化成熟及抗原递呈能力,干扰VEGF基因后MCF-7 乳腺癌细胞培养上清对DC的影响明显降低,CD80、CD83、CD86和HLA-DR的表达较对照组显著升高,而CD1a表达下降（P＜0.01）.转染前后DC 诱导的CTL对MCF-7细胞的杀伤活性有明显差异（P＜0.01）.由此可见,siRNA可靶向抑制MCF-7乳腺癌细胞VEGF的表达,下调VEGF后的MCF-7 细胞上清对DC分化成熟及功能的抑制作用明显降低,从而推测VEGF在肿瘤的发生、发展和免疫抑制方面可能起着重要的作用.     

热休克蛋白27和热休克因子1在子痫前期胎盘表达及意义

目的:研究热休克蛋白27(heat shock protein 27,HSP27)与热休克因子l(heat shock factor 1,HSFl)在子痫前期孕妇胎盘中的表达情况.方法:选择2011年6月-2012年6月在南京医科大学第一附属医院产科住院分娩的子痫前期患者21例(子痫前期组),以同期分娩的正常孕妇21例(正常妊娠组)作为对照组,采用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组化(Immunohistochemistry)、蛋白印迹法(Western Blotting)检测两组孕妇胎盘HSP27mRNA和蛋白的表达以及HSF1蛋白表达水平,分析其是否存在组间差异.结果:子痫前期组胎盘中HSP27mRNA表达(3.28±0.34)高于正常妊娠组(1.87±0.22)和蛋白的表达明显增高,HSF1蛋白表达增高,差异具有统计学意义;HSF1与HSP27呈正相关关系(r=0.73,P＜0.05).结论:胎盘中HSF1是HSP27表达的主要调控因子.     

AMD3100对apoE-/-小鼠骨髓源性内皮祖细胞增殖、迁移和黏附的影响

探讨AMD3100对apoE-/-小鼠骨髓内皮祖细胞的动员作用及其增殖、迁移和黏附的影响.12只8周龄雄性apoE-/-小鼠随机分为AMD3100组(2.5 mg/(kg·2d))和对照组(PBS 0.1 ml/2d),高脂高胆固醇饲料喂养12周后,差速贴壁法结合微孔法分离培养小鼠骨髓细胞,免疫荧光鉴定CD133/VEGFR-2双阳性细胞为内皮祖细胞;MTT比色法、Transwell、黏附试验分别检测细胞的增殖、迁移和黏附能力;通过计数典型内皮祖细胞克隆形成单位,观察次级集落单位的大小及细胞密度,检测各组内皮祖细胞的克隆形成能力;RT-PCR和Western blot检测内皮祖细胞上CXCR4 mRNA和蛋白质表达水平.与对照组比较,AMD3100组骨髓源性内皮祖细胞的增殖、迁移、黏附和克隆形成能力均显著低于对照组,其CXCR4mRNA和蛋白质表达均显著低于对照组.结果表明:持续注射AMD3100可抑制骨髓源内皮祖细胞的增殖、迁移、黏附和克隆形成能力,并下调CXCR4的表达.