不同有机磷酸酯磷酰化乙酰胆碱酯酶活性中心的构象…

通过观察２倍肟化合物ＨＩ－６和ＨＧＧ－４２及它们的４位肟异构体对不同有机磷毒剂抑制的ＡＣｈＥ的重活化作用发现塔崩、梭曼、沙林等有机磷毒剂磷酰化的ＡＣｈＥ活性中心的构象可能存在着明显差异；又从变构剂Ｃ１０和丙吡啶对ＴＭＢ４重活化这几种毒剂磷酰化ＡＣｈＥ的影响中证实塔崩磷酰化ＡＣｈＥ活性中心构象与沙林、梭曼和ＶＸ３种毒剂磷酰化的ＡＣｈＥ明显不同。     

人脑及红细胞膜乙酰胆碱酯酶的芳基酰胺酶活性

采用联合亲和层析法从人小脑及红细胞膜中纯化了ＡＣｈＥ,纯化的人脑及红细胞ＡＣｈＥ在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上呈一主带,分子量约为６６０００。人脑ＡＣｈＥ制备酯酶与酰胺酶比活性分别为１２９９与１４３Ｕ／ｍｇ,人红细胞ＡＣｈＥ制备分别为４５８４与７４７Ｕ／ｍｇ。人脑及红细胞ＡＣｈＥ制备的酯酶与酰胺酶活性最适ｐＨ较接近,在ｐＨ７．５－８．０之间,酯酶活性底物ＡＴＣｈ对其芳基酰胺酶活性有抑制作用。ＩＣ_（５０）分别为１０．２×１０~（－３）及３×１０~（－３）ｍｏｌ／Ｌ。梭曼对其酯酶及酰胺酶活性均有明显抑制作用,说明二者均需活性中心丝氨酸参与。     

乙酰胆碱在刺激SⅡ区影响C类纤维传入诱发的SⅠ区电反应…

电刺激猫大脑皮层体感Ⅱ区对隐神经Ｃ类纤维传入引起的体感Ｉ区诱发电位有抑制和易化作用。在ＳＩ区局部用阿托品能部分地阻断电刺激ＳⅡ区对Ｃ－ＣＥＰ的抑制作用,但对易化作用的影响不明显;而用六烃季铵能阻易化作用,但对抑制作用的影响却不明显,在ＳＩ区局部应用０．０１％乙酰胆碱对Ｃ－ＣＥＰ有易化作用,用０．１％ＡＣｈ则有抑制作用。结果提示,ＡＣｈ可能参与ＳⅡ区对ＳＩ区Ｃ－ＣＥＰ的影响,通过ＳＩ区的胆碱能Ｍ受体     

神经肌接头上产生持续性去极化时小终板电位的变化

实验在大鼠膈肌标本上观察梭曼处理后,终板区持续性去极化（ｓｕｓｔａｉｎｅｄｄｅｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ,ＳＤ）产生时小终板电位（ＭＥＰＰ）的变化,以分析产生ＳＤ的机理。静息时,加入５．５μｍｏｌ／Ｌ梭曼后,ＭＥＰＰ的频率、幅度和下降时间常数分别是加药前的１．８,１．３和３．０倍（Ｐ＜０．０１）。间接强直刺激时,记录到ＳＤ,ＳＤ过程中不仅终板电位消失,ＭＥＰＰ也完全消失。ＳＤ之后一定时间ＭＥＰＰ恢复出现,然后其频率逐渐增高。从ＳＤ开始到ＭＥＰＰ明显恢复的时间与强直刺激参数有关,５０Ｈｚ×１ｓ和５０Ｈｚ×０．１ｓ强直刺激时,分别为２９．７±０．７ｓ和１１．７±３．０ｓ。结果表明,在乙酰胆碱酯酶活性被抑制后,静息时突触前自发ＡＣｈ释放增加;刺激神经时,突触后对ＡＣｈ反应性降低甚至失去反应性,是产生ＳＤ的主要机理。     

甲基毒死蜱对红细胞乙酰胆碱酯酶的抑制作用及其与膜脂相互关系

以人红细胞膜为材料,研究了甲基毒死蜱与膜上乙酰胆碱酯酶的相互作用及其与膜脂的关系。结果显示,甲基毒死埤对人红细胞ＡＣｈＥ有明显的抑制作用,与膜温育３０ｍｉｎ,其半数抑制浓度约为０．１０ｍｍｏｌ／Ｌ。动力学分析表明,其抑制作用为非竞争性。０．２％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００并不改变ＡＣｈＥ对甲基毒死蜱的敏感性,亦即ＡＣｈＥ上甲基毒死蜱的作用部位与其所处的脂质微环境无关。     

内皮素—1对大鼠排卵前卵泡颗粒细胞产生孕酮的影响

本文用离体细胞体外孵育法研究了内皮素－１（ＥＴ）对大鼠排卵前卵泡颗粒细胞孕酮生成的影响及其作用机理。结果发现,ＥＴ能显著抑制ｈＣＧ刺激下的孕酮产生,抑制作用在浓度为１０－８ｍｏｌ／Ｌ时,即有显著意义（Ｐ＜０．０５,ｎ＝６）,至１０－７ｍｏｌ／Ｌ时则有非常显著的意义（Ｐ＜０．０１,ｎ＝６）;不同浓度ＥＴ（１０－７—１０－７ｍｏｌ／Ｌ）,对颗粒细胞基础孕酮的产生无明显影响。进一步研究表明,ＥＴ对ｈＣＧ刺激下孕酮生成的抑制作用,在用免抗人内皮素抗血清（ＥＴ－Ａ）１：１０００及ｃＡＭＰ后能明显被逆转。实验中还观察到,ＥＴ使颗粒细胞ＬＨ／ｈＣＧ受体数下降,亲和力降低。本文结果提示,ＥＴ可能为卵巢内的一种局部调节肽,通过作用于ＥＴ受体,干扰ＬＨ／ｈＣＧ受体功能和ｃＡＭＰ生成而抑制颗粒细胞孕酮的产生。     

人脑和人血清胆碱酯酶三维结构的计算机模拟研究

本文以同源的电鳐胆碱酯酶（Ｔ．ＡＣｈＥ）的三维结构为模板,模拟预测了人脑和血清胆碱酯酶（Ｈ。ＡＣｈＥ和Ｈ．ＢｕＣｈＥ）的三维结构和活力中心的组成。指Ｔ．ＡＣｈＥ,Ｈ．ＡＣｈＥ和Ｈ．ＢｕＣｈＥ宁间结构差异,并讨论了ＡＣｈ和Ｈ。ＡＣｈＥ的对接（ｄｏｃｋｉｎｇ）。Ｈ。ＡＣｈＥ和Ｈ．ＢｕＣｈＥ三维结构的确定将为进一步深入研究它的中毒机理和合理药物设计提供靶子。     

选择性切除交感神经对大鼠心内神经节中去甲肾上腺素、乙酰胆碱和NPY的影响

为了探讨心内神经节中去甲肾上腺素（ＮＡ）、乙酰胆碱（ＡＣｈ）和ＮＰＹ的相互作用,本实验应用６－ＯＨ－ＤＡ选择性切除大鼠心脏交感神经纤维,然后应用荧光和酶组织化学法、免疫组织化学结合图像分析法观察了大鼠心内神经节ＮＡ、ＡＣｈＥ活性和ＮＰＹ的变化。结果显示：实验组大鼠心内神经节中儿茶酚胺荧光反应阳性和ＮＰＹ免疫反应（ＮＰＹ－ＩＲ）阳性的神经纤维明显减少,ＡＣｈＥ阳性神经纤维明显增多,ＡＣｈＥ反应性神经元积分光密度增加,而儿茶酚胺荧光反应和ＮＰＹ－ＩＲ阳性神经元变化不明显。结果提示：１．交感神经化学切除后大鼠心内神经节中ＮＡ、ＡＣｈＥ活性和ＮＰＹ出现不同的变化,体现了心脏交感神经和副交感神经的相互抑制作用;２．心内神经节可能含有两种性质的ＮＰＹ,即交感性和非交感性ＮＰＹ。     

人脑及红细胞膜乙酰胆碱酯酶的芳基酰胺酶活性

采用联合亲和层析法从人小脑及红细胞膜中纯化了ＡＣｈＥ,纯化的人脑及红细胞ＡＣｈＥ在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上呈一主带,分子量约为６６０００。人脑ＡＣｈＥ制备酯酶与酰胺酶比活性分别为１２９９与１４３Ｕ／ｍｇ,人红细胞ＡＣｈＥ制备分别为４５８４与７４７？ｍｇ。人脑及红细胞ＡＣｈＥ制备的酯酶与酰胺酶活性最适ｐＨ较接近,在ｐＨ７．５＝８．０之间,酯酶活性底有抑制作用。ＩＣ５０１０．２×１０＾－３及３×１０＾－３ｍ     

不同温度下锐劲特对受马拉硫磷抑制的麦穗鱼AChE活性恢复的影响

研究了１５～１７℃、２０～２２℃下,０．０１ｍｇ／Ｌ锐劲特对被１ｍｇ／Ｌ马拉硫磷抑制的麦穗鱼（Ｐｓｅｕｄｏｒａｓｂｏｒａ ｐａｒｖａ）脑乙酰胆碱酯酶（ＡＣｈＥ）活性恢复的影响。结果表明：在１５～１７℃,经４８ｈ抑制,ＡＣｈＥ被抑制了４０％,恢复１４４ｈ后,处理组与无锐劲特对照都恢复到了空白对照的８０％以上。在此温度下锐劲特对ＡＣｈＥ活性恢复的影响不明显;而在２０～２２℃下,经相同的处理时间,ＡＣｈＥ被抑制了７０％,恢复２４０ｈ后,处理组与无锐劲特对照都只恢复到了对照的７０％。其间于１４４、１９２ｈ,ＡＣｈＥ活性差异达显著水平（Ｐ〈０．０５）,说明了在此温度下锐劲特对ＡＣｈＥ活性恢复的影响。文中还讨论了恢复研究的意义。     

重组人脑乙酰胆碱酯酶的基因表达和生化毒理学性质

人脑乙酰胆碱酯酶的全长cDNA序列克隆到真核高效表达载体pcDNA3.1中 ,并将pcDNA AChE转染人胚肾细胞株 2 93细胞 ,进行rhAChE的暂时表达 .真核细胞表达的rhAChE的生化性质与天然人脑AChE十分相似 .rhAChE的Km 值约为 137μmol L ;有过量底物抑制现象 ;可被胆碱酯酶抑制剂huperzineA和eserine抑制 (IC50 分别为 2 5× 10 -8mol L和 1 0× 10 -7mol L) ;肟类化合物HI 6 (10 -4 mol L)可以有效地重活化被sarin(10 -6mol L及 10 -7mol L)抑制的rhAChE ,4h内重活化率分别达 86 %和 97% .rhAChE反复冻融 3次 ,酶活性没有损失 .     

His-tag的人胞浆磷脂酶A_2的C2结构域的表达、纯化及性质

带有His tag的人胞浆磷脂酶A2 的C2结构域高效表达 ,用内源荧光的变化测定了其稳定性和其与钙离子结合的结合常数 .结果表明 ,带有His tag的C2结构域仍可有效用于研究其折叠及其与钙离子的协同性结合 ,温度从 2 2℃升高到 35℃时 ,C2结构域和钙离子结合的协同性程度显著增强 .     

黑翅土白蚁乙酰胆碱酯酶最佳反应体系的建立及药剂敏感度比较

用正交试验方法研究了酶浓度、底物浓度、反应体系pH值、反应温度、反应时间5个因素对黑翅土白蚁Odontotermes formosanus (Shiraki)乙酰胆碱酯酶(AChE)活性测定的影响。通过对正交试验结果进行极差和方差分析,明确了测定黑翅土白蚁AChE活性的最适反应条件是酶浓度为12.5 g/L,底物浓度为8 mmol/L,pH值8.0,反应温度40℃,反应时间5 min。此外,研究了6种药剂对黑翅土白蚁体内AChE活性的影响。结果表明：灭多威、辛硫磷、三唑磷、丙溴磷、马拉硫磷和氧化乐果6种药剂对黑翅土白蚁AChE抑制中浓度(IC₅₀)分别为3.52×10^-4,1.86×10^-3,5.13×10^-3,9.55×10^-4,8.81×10^-3,和1.39×10^-2 mol/L。在3.3×10^-7～5×10^-3 mol/L的浓度范围内,上述6种药剂对黑翅土白蚁体内AChE活性的抑制作用都具有明显的剂量效应关系。     

INHIBITION OF ACETYLCHOLINESTERASE IN VITRO BY PENTYLENETETRAZOL1

Abstract—The effect of pentylenetetrazol (PTZ) on acetylcholinesterase (E.C.3.1.1.7) was studied in vitro. The kinetics of the reaction were studied on AChE in crude homogenates of rat brain and in purified preparations from Electrophorus electricus. The K_m for rat brain AChE was 1·22 × 10^-4m, with a V_max of 1·37 μmol/g/min whereas the K₄ for competitive inhibition of the enzyme by PTZ was 4·7 × 10^-3m. The commercially purified enzyme exhibited a K_m of 1·73 × 10^-4m and a K_i of 1·00 × 10^-3m.     

一种菊酯类复合剂对黑胸散白蚁体内CarEs和Ca-ATPase活性的影响

以黑胸散白蚁Reticulitermes chinensis Snyder为试验材料,研究了一种白蚁防治复合剂中的主要成分对白蚁体内羧酸酯酶（CarEs）和钙 腺苷三磷酸酶（Ca-ATPase）的影响。结果表明：氯菊酯在终浓度为1.66×10^-4 mol·L^-1以下时,对羧酸酯酶无明显抑制作用;八氯二丙醚和壬基酚聚氧乙烯醚在此浓度下都对羧酸酯酶表现出明显抑制作用,其IC₅₀分别为7.1148×10^-5 mol·L^-1和7.3373×10^-4 mol·L^-1;氯菊酯对Ca-ATPase表现出较强抑制作用,IC₅₀为5.11×10^-7 mol·L^-1。认为Ca-ATPase是黑胸散白蚁体内拟除虫菊酯类杀虫剂作用的主要靶标之一。     

落叶松幼苗过氧化氢酶动力学的初步研究

采用碘量法对4种落叶松幼苗的过氧化氢酶（CAT）动力学进行了研究。结果表明：在25℃、pH 7.0下,落叶松幼苗CAT活性为48.8～77.9 U·g^-1 FW;Km值为8.3×10-2～2.38×10^-1 mol·L^-1;Vmax为0.071～0.200 μmol·min^-1;CAT最适温度15～25℃,对温度的适应范围华北落叶松和兴安落叶松宽,长白落叶松和太白落叶松的窄;CAT最适pH值为7.0。太白落叶松对pH适应范围最窄,其可能是退化的物种。     

单链尿激酶型纤溶酶原激活剂Kringle结构域催化功能探讨

 Kringle(K)结构域广泛存在于与凝血和纤溶相关的各种因子中 .虽然 K结构域在一级结构上是一种比较保守的结构域 (与其他结构域相比 ) ,但是 K结构域的功能在各种因子中的作用有很大的区别 .为探讨单链尿激酶型纤溶酶原激活剂 (scu- PA)的 K结构域功能 ,构建了在 scu- PA的 K结构域的 1 1 8位 Gly与 1 1 9位 Leu之间插入 PRGDWR序列的突变体 (称为 insert mutant B,In B) ,并测定了野生型 scu- PA与 In B的纤溶相关反应的动力学常数 . scu- PA与 In B水解 S- 2 4 4 4反应的 Km 值无明显变化 (分别为 60 .4与 56.8μmol·L-1) ,而 In B的 kcat值 (0 .33s-1)比 scu- PA的 kcat值 (7.31 s-1)降低很多 ;In B激活纤溶酶原反应的 Km 值 (0 .397μmol· L-1)比 scu- PA Km 值(0 .648μmol·L-1)降低 40 % ,但 kcat值 (0 .0 1 65s-1)比 scu- PA的 kcat值 (0 .0 62 6s-1)降低 74% .以上结果说明 :K结构域主要与反应活性相关 ,而与酶及底物的亲和性无关 .     

两种土壤含水率下匙羹藤的光合及水分利用率的初步研究

采用便携式LI-6400光合测定系统,对生长于两种土壤含水率下的当年生匙羹藤光合特性及其水分利用率进行研究。结果表明:(1)匙羹藤叶片的光饱和点(LSP)200～400μmol.m-2.s-1,光补偿点(LCP)12.1880～12.5593μmol.m-2.s-1,表观量子利用效率(α)0.0472～0.0508mol.mol-1,为阳生植物,但具有较强的弱光利用能力。(2)叶片CO2补偿点为70.97～73.75μmol.mol-1,CO2饱和点在1115.51～1687.99μmol.mol-1,羧化效率7.35×10-3～8.64×10-3μmol.m-2.s-1,表明匙羹藤为C3型植物。(3)上午10:00左右和下午4:00左右是匙羹藤水分利用率的最高时段。(4)含水率高时饱和净光合速率(Pm)、表观光合量子利用效率(α)、光饱和点都比含水率低时高,但光补偿点却比含水率低时低,说明匙羹藤利用弱光的能力较强,能有效地利用全日照的强光,光合潜力较大,生长较好;含水率低时匙羹藤的CO2补偿点较低,说明匙羹藤能利用较低的外界CO2浓度;最大水分利用效率较高,表明含水率低时匙羹藤的节水潜力较大。     

Effects of 2-pyridine aldoxime methochloride on cerebral acetylcholinesterase activity and respiration in cats poisoned with sarin

2-pyridine aldoxime methochloride (2-PAM Cl) has been reported to be only marginally effective in reactivating brain acetylcholinesterase (AChE) in animals poisoned with organophosphorus anticholinesterase compounds. In the present studies, an effort was made to obtain additional information on the effects of 2-PAM Cl on AChE activity of the cerebral cortex and respiration in cats intoxicated intravenously with either 1.8 × LD50 (27 μg/kg) or 3 × LD50 (45 μg/kg) of isopropyl methylphosphonofluoridate (Sarin). Following poisoning by 1.8 × LD50 of Sarin, injection of 15 mg/kg of 2-PAM Cl into the common carotid artery in a volume of 5 ml/kg of saline, pH 7.3, affected AChE activity in the cerebral cortex. The enzymatic levels in the poisoned, oxime-treated cats were significantly higher than those of the poisoned, untreated animals. In other experiments, the time for recovery of respiration from the effects of 3 × LD50 of Sarin was reduced from an average of 147 min in untreated animals to within 2 min after oxime administration. Under the conditions of these experiments, 2-PAM Cl rapidly restored respiration and reactivated some AChE in the cerebral cortex of cats intoxicated with Sarin.