鸡AchRγ亚基基因远上游增强子样作用依赖生肌因子

先前曾报告鸡ＡＣｈＲγ亚基基因５连接区－５３８／－２８８片段（含一对Ｅ盒子）与生肌调节因子（ｍｙｏｇｅｎｉｎ）的相互作用,为进一步观察ＤＮＡ－ｍｙｏｇｅｎｉｎ相互作用对γ基因转录激活功能的影响,利用瞬时表达体系研究了鸡ｎＡＣｈＲγ亚基基因５端－５３８／－２８８片段调控机能,ＣＡＴ分析表明：γ基因－５３８／－２８８片段可显著激活ｔｋ启动子在分化的Ｃ２Ｃ１２肌细胞中的转录活性,但不能激活在未分化Ｃ２Ｃ     

鸡AChRγ亚基基因远上游增强子样作用依赖生肌因子

先前曾报告鸡ＡＣｈＲγ亚基基因５＇连接区－５３８／－２８８片段（含一对Ｅ盒子）与生肌调节因子（ｍｙｏｇｅｎｉｎ）的相互作用,为进一步观察ＤＮＡ－ｍｙｏｇｅｎｉｎ相互作用对γ基因转录激活功能的影响,利用瞬时表达体系研究了鸡ｎＡＣｈＲγ亚基基因５＇端－５３８／－２８８片段调控机能。ＣＡＴ分析表明：γ基因－５３８／－２８８片段可显著激活ｔｋ启动子在分化的Ｃ２Ｃ１２肌细胞中的转录活性,但不能激活在未分化Ｃ２Ｃ１２肌细胞中的转录活性。这种组织特异性转录激活作用与距离无关,因而是一个典型的增强子;－５３８／－２８８片段的增强子样作用既依赖于两毗邻Ｅ盒子的完整性,又依赖于ｍｙｏｇｅｎｉｎ等生肌调节因子的存在。强化表达ｍｙｏｇｅｎｉｎ可激活ｐＢＬＣＡＴ２－γ（－５３８／－４３３）和ｐＢＬＣＡＴ２－γ（－４３２／－２８８）（各含一个Ｅ盒子）在分化肌细胞中的表达,究竟是克隆片段中的独立Ｅ盒子对这种表达起贡献还是出现在克隆位点附近的反向Ｅ盒子（ＧＴＣＧＡＣ）或ｔｋ启动子中的另一个Ｅ盆子起作用？尚不十分清楚。     

生肌蛋白的功能与调节

生肌蛋白（ｍｙｏｇｅｎｉｎ）是ＭｙｏＤ家族的成员之一。胚胎发育过程中生肌蛋白在肌肉形成区持续表达,决定骨骼肌的特异表型,在骨骼肌分化过程担当着独一无二的角色,是其它Ｍ蛋白不能替代的。同时,生肌蛋白还是控制烟碱样乙酰胆碱受体（ｎＡＣｈＲ）基因表达必不可少的转录调节因子。生肌蛋白的上述调节功能受蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）催化的磷酸化反应调节,参与质膜－ＰＫＣ－受体基因级联反应。     

M－CAT盒在鸡AchR γ－亚基基因转录激活中的作用

原代培养鸡胚肌细胞瞬时转染结合氯霉素乙酰基转移酶水平测试表明：鸡ＡＣｈＲγ－亚基基因缺失近起始点一对Ｅ盒（ＣＡＮＮＴＧ）的－２０４／－５０片段与含Ｅ盒的－２０４／＋３６片段一样,均可独立激活ｔｋ启动子的转录活性,证明了该片段的增强子样作用,利用鸡胚肌肉核抽提物与－２０４／－５０片段进行胶阻滞分析,检出了明显的迁移位移条带的发生;迁移条带不仅可被未标记的－２０４／－５０片段消除,而且还可被含Ｍ－ＣＡＴ盒（ＣＡＴＴＣＣＴ）的２３ｂｐ寡核苷酸竞争阻断,说明胶阻滞分析中出现的迁移条带系由核内因子特异结合－２０４／－５０片段中的Ｍ－ＣＡＴ序列所致,上述结果证明,Ｍ－ＣＡＴ盒对鸡ＡＣｈＲγ－亚基基因－２０４／－５０片段的转录激活功能起作用。     

M—CAT盒在鸡AChRγ—亚基基因转录激活中的作用

原代培养鸡胚肌细胞瞬时转染结合氯霉素乙酰基转移酶水平测试表明,鸡ＡＣｈＲγ－亚基基因缺的近起始点一对Ｅ盒（ＣＡＮＮＴＧ）的－２０４／－５０片段与含Ｅ盒的－２０４／＋３６片段一样,均可独立激活ｔｋ启动子转录活性,证明了该片段的增强子样作用,利用鸡胚肌肉核抽提物与－２０４／－５０片段进行了胶阻滞分析,检出了明显的迁移位移条带的发生,迁移条带不仅可被未标记的－２０４／－５０片段消除,而且还可被含Ｍ－ＣＡ     

鸡骨骼肌发育过程生肌素的表达

ＭｙｏＤ家族生肌因子ＭｙｏＤ,生肌素（ｍｙｏｇｅｎｉｎ）ｍｙｆ－５和ｍｙｆ－６／ｈｅｒｃｕｌｉｎ对脊椎动物肌细胞分化和骨骼肌系统的发育成熟具有重要意义,其中生肌素的作用尤为突出,是肌细胞终末分化的关键因素,采用Ｎｏｒｈｔｅｒｎ和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹技术检测鸡胚骨骼肌发育过程中生肌素在转录水平的表达动力学,发现在胚胎发育第９ｄ已有鸡肢体骨骼肌生肌素ｍＲＮＡ表达,第１３ｄ达到高峰,第１５ｄ开始下降,第１     

哺乳动物性别分化的调控

哺乳动物性别分化调控的分子机制的研究特别是性别分化的层次调控、剂量补偿和性染色体进化这三个领域,已取得快速进展。已经发现Ｙ染色体性别决定区基因（ＳＲＹ）、Ｘ染色体ＤＳＳ－ＡＨＣ决定区基因１（ＤＡＸ－１）、甾类生成因子１基因（ＳＦ１）和Ｗｉｌｍｓ瘤抑制基因（ＷＴ－１）等与哺乳动物性别决定有关。ＳＲＹ启动睾丸分化,但胚胎发育成雄性的其余步骤由睾丸分泌的激素控制。ＤＡＸ－１编码一种女性特异功能的蛋白质,     

成肌细胞增殖/分化的信号转导研究

间充质干细胞可分化为成肌细胞[1] ,成肌细胞在ＭｙｏＤ、Ｍｙｆ5等基因调控下分化为肌细胞。参与骨骼肌损伤修复的卫星细胞即是成肌细胞 ,成肌细胞增殖 /分化的正确调控对创伤修复有重要意义 ,多种信号转导通路在此过程中发挥作用 ,不同的生长因子通过不同的信号转导通路抑制或诱导成肌细胞的定向分化。1 .Ｃａ2 +通道成肌细胞分化为功能性纤维是被分散的、不连续的胞内信号转导途径诱导调节。Ｃａ2 +是细胞信号的第二信使 ,其内流是成肌细胞胞膜融合后分化为肌细胞的前提 ,Ｓｈｉｎ等[2 ] 发现Ｋ+(Ｃａ2 +)通道在成肌细胞中对Ｃａ2 +的敏…     

鸡AChRγ亚基基因远端E盒子与myogenin的相互作用

业已证明,鸡ｎＡｃｈＲγ亚基基因５连接区,－５０９／－３０２,－３２４／＋３６片段可独立激活异源启动子ＳＶ４０的转录活性,γ基因近端两个Ｅ盒子（ＣＡＮＮＴＧ）与生肌调节因子（ｍｙｏｇｅｎｉｎ）的相互作用及转录激活分析表明,近端两个Ｅ盒子是γ启动子活性必不可少的,但却是不充分的,利用胶阻滞和ＤＮａｓｅＩ足级试验观察了鸡ｎＡｃｈＲγ基因远端Ｅ盒子与ＧＳＴ－ｍｙｏｇｅｎｉｎ融合蛋白的相互作用,胶阻滞试验     

肌源性调节蛋白MyoDl和肌球蛋白myosin在横纹肌肉瘤中的表达:免疫组织化学研究

应用免疫组织化学ＳＰ方法,检测了肌源性调节蛋白ＭｙｏＤｌ和肌球蛋白ｍ ｙｏｓｉｎ 在３８例横纹肌肉瘤（ＲＭＳ） 中的表达。结果显示ＭｙｏＤｌ阳性表达主要定位于ＲＭＳ瘤细胞的胞核中; ｍ ｙｏｓｉｎ 的阳性表达定位于ＲＭＳ瘤细胞的胞浆中, 二者的表达阳性率分别为６５．８％ 和５５．３％ 。在ＲＭＳ不同病理分型中ＭｙｏＤｌ和ｍ ｙｏｓｉｎ 的阳性表达均无显著性差异。但ＲＭＳ分化程度低,ＭｙｏＤｌ阳性表达增强,ｍ ｙｏｓｉｎ 阳性表达下降。Ｍｙｏ－Ｄｌ在Ⅲ级（低分化） 中的表达阳性率显著高于Ⅰ级（高分化）、Ⅱ级（中等分化） 中的表达阳性率（Ｐ＜ ０．０５,Ｐ＜ ０．０５）。ｍ ｙｏｓｉｎ 在Ⅰ级中的阳性率显著高Ⅲ级中的表达阳性率（Ｐ＜ ０．０５）。本文认为, ＭｙｏＤｌ表达增高、ｍ ｙｏｓｉｎ 表达下降,不仅是ＲＭＳ生物学行为的重要特征,也为改进低分化ＲＭＳ的病理诊断和ＲＭＳ早期诊断提供了有益的思路。     

鸡骨骼肌发育过程生肌素的表达

ＭｙｏＤ家族生肌因子ＭｙｏＤ、生肌素（ｍｙｏｇｅｎｉｎ）、ｍｙｆ－５和ｍｙｆ－６／ｈｅｒｃｕｌｉｎ对脊椎动物肌细胞分化和骨骼肌系统的发育成熟具有重要意义,其中生肌素的作用尤为突出,是肌细胞终末分化的关键因素。采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹技术检测鸡胚骨骼肌发育过程中生肌素在转录水平的表达动力学,发现在胚胎发育第９ｄ已有鸡肢体骨骼肌生肌素ｍＲＮＡ表达,第１３ｄ达到高峰,第１５ｄ开始下降,第１８ｄ至出生后两周几无可检测的ｍＲＮＡ;而生肌素蛋白则在胚胎发育第１３ｄ方可被检测到,第１５～１８ｄ达到高峰,至出生后两周仍维持在一定水平,表明生肌素的表达存在翻译和翻译后水平的调控。利用鸡生肌素基因上游－２２３／＋４０调控片段为探针对发育不同时期的鸡肌肉组织细胞核抽提物进行Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析。发现一种约３５ｋＤ的核内蛋白与探针有较强结合,结合活性第９ｄ时出现,至第１８ｄ达到峰值,出生后两周时降至难检测水平;另外有一种约１１ｋＤ的核内蛋白的ＤＮＡ结合活性恰好在转录活性下降的第１５～１８ｄ发生,按此情况两种核因子可能对生肌素的转录激活分别起正负调控作用。     

DMSO对人胃腺癌MGC80—3细胞的诱导分化作用

用光镜、电镜和生化分析方法研究ＤＭＳＯ在体外对ＭＧＣ８０－３细胞的作用,不同浓度ＤＭＳＯ对ＭＧＣ８０－３细胞有不同的生长抑制作用。１．５％ＤＭＳＯ是本研究较适合的浓度。１．５％ＤＭＳＯ处理７天后细胞生长率、分裂指数、克隆形成率和Ｃｏｎ－Ａ凝集率分别下降３５．１５％、１８％、９０％和５５．８％。处理后,癌细胞膜的碱性磷酸酶（不存在于正常人胃粘膜）比活性下降了９０％,接种裸鼠致瘤率亦下降７５％。处理后     

二甲亚砜与维甲酸对人卵巢癌细胞COC1的生长抑制及转化生长因子β_1表达的影响

本实验以人卵巢癌细胞株（ＣＯＣ１）为模型,观察诱导分化剂二甲亚砜（ＤＭＳＯ）与维甲酸（ＲＡ）对该细胞生长增殖、ＤＮＡ合成和转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）在细胞内表达的影响。结果显示：ＤＭＳＯ与ＲＡ对人卵巢细胞ＣＯＣ１生长有明显的抑制作用,生长曲线表明作用５天后其生长抑制率分别为６２．７％和４２．１％;３Ｈ－胸腺嘧啶核苷（３Ｈ－ＴｄＲ）掺入实验说明ＤＭＳＯ组与ＲＡ组的单位时间计数率（ＣＰＭ）明显低于对照组（Ｐ＜０．０１）。用药３天后百分掺入抑制率分别为６０．４％与３７．９％,表明ＤＭＳＯ与ＲＡ抑制ＣＯＣ１细胞的ＤＮＡ合成;免疫细胞化学反应表明,ＤＭＳＯ或ＲＡ处理５天后,对照组细胞ＴＧＦβ１表达为阳性,定位于胞浆,而处理组细胞ＴＧＦβ１呈阴性或弱阳性反应。以上结果提示ＤＭＳＯ和ＲＡ对人卵巢癌细胞有一定的诱导分化作用。     

泰山赤鳞鱼同工酶的研究

采用琼脂糖凝胶电泳或聚丙烯酰胺垂直板凝胶电泳（ＰＡＧＥ）技术研究了泰山赤鳞鱼早期发育阶段（受精后０—１２０ｈ）及成体眼、脑、心、肾、肝、肌６种组织中的ＬＤＨ同工酶分化表达谱式。结果表明：（１）赤鳞鱼在胚胎发育过程中Ｌｄｈ－Ａ基因和－Ｂ基因同时表达,形成５种不同形式的四聚体（Ｂ４、ＡＢ３、Ａ２Ｂ２、Ａ３Ｂ、Ａ４）。与大多数硬骨鱼相比,赤鳞鱼ＬＤＨ同工酶具有独特的早期个体发育谱式：在整个胚胎发育时期,Ａ亚基与Ｂ亚基的活性几乎相等。（２）赤鳞鱼的ＬＤＨ同工酶谱具有明显的组织特异性。Ｌｄｈ－Ｃ基因仅在肝脏组织表达,以向阴极迁移的分子形式（ＬＤＨ－Ｃ４）特异地表达。     

野生型及启动子区突变的HPFHAγ基因在MEL细胞中的表达

研究了野生型Ａγ珠蛋白基因、中国型胎儿血红蛋白持续存在综合症（ＨＰＦＨ）Ａγ基因（启动子区－１９６Ｃ－Ｔ突变）及希腊型ＨＰＦＨＡγ基因（－１１７Ｇ－Ａ突变）在鼠红白血病（ＭＥＬ）ＧＭ９７９细胞中的表达,比较每个整合的Ａγ基因明显增加的表达水平,而－１１７Ｇ－Ａ１９６Ｃ－Ｔ突变Ａγ基因未显示比野生型Ａγ基因明显增加的表达水平,而－１１７Ｇ－Ａ空变Ａγ基因在未分化的及ＨＭＢＡ或丁酸钠诱导分化的ＭＥＬＧ     

暗纹东方同工酶生化表现型的研究

利用聚丙烯酚胺凝胶垂直平板电泳方法,对暗纹东方的心、肝、肾,肌、性腺５种不同组织的７种同工酶（ＥＳＴ、ＬＤＨ、ＰＯＤ、ＭＤＨ、ＳＯＤ、ＳＤＨ、α－ＡＭＹ）进行了研究,讨论了各同工酶的基因表达谱式,观察到ＥＳＴ同工酶存在着多态现象;ＬＤＨ同工酶有二个基因位点,但只表现３条带,Ａ与Ｂ亚基的结合受阻;ＭＤＨ同工酶存在性别差异,说明决定ＭＤＨ同工酶表达的因素在不同性别中存在差异;ＳＯＤ同工酶有３个基因位点。各同工酶酶谱稳定,有组织特异性,倡ＥＳＴ、ＭＤＨ、ＳＯＤ、ＰＯＤ同工酶在各组织器官中又表现出较大的一致性,有利于物种的鉴定。α－ＡＭＹ与ＳＤＨ只在个别组织中有活性,可能与特定组织与器官的形态发生与机能分化有关。     

多头绒泡菌肌球蛋白的纯化及性质的研究

从多头绒泡菌中纯化了肌球蛋白,并对其亚基组成及ＡＴＰ酶性质进行了研究。该肌球蛋白是由一种重链（２２５ｋＤ）和两种轻链（２０ｋＤ,１７．５ｋＤ）组成的大分子,其亚基之比为ＨＣ：ＬＣ１：ＬＣ２＝２：４：２。兔肌Ｆ－肌动蛋白能较大激活粘菌肌球蛋白ＡＴＰ酶活性,Ｃａ~（２＋）离子也能提高其活性,Ｍｇ~（２＋）离子无明显影响。钒酸盐,碘乙酸,对氯汞苯甲酸对其ＡＴＰ酶活性有显著抑制作用。     

植物培养细胞的形态分化与次生代谢产物的生产

植物培养细胞的形态分化与次生代谢产物的生产张泓（西北大学生物系西安７１００６９）ＭＯＲＰＨＯＬＯＧＩＣＡＬＤＩＦＦＥＲＥＮＴＩＡＴＩＯＮＯＦＣＵＬＴＵＲＥＤＰＬＡＮＴＣＥＬＬＳＡＮＤＴＨＥＰＲＯＤＵＣＴＩＯＮＯＦＳＥＣＯＮＤＡＲＹＭＥＴＡＢＯＬＩＴＥ...     

CaM BP－10对NAD激酶的抑制效应

ＮＡＤ激酶在光合作用等植物生理过程中起重要作用。ＮＡＤ激酶的激活依赖于钙离子和钙调素（ＣａｌｍＯｄｕｌｉｎ,ＣａＭ）．从植物中分离得到的一种新的ＣａＭ结合蛋白ＣａＭＢＰ－１０（ＢＰ－１０）明显抑制ＮＡＤ激酶的激活活性,抑制作用可被ＣａＭ所克服．动力学研究表明,抑制效应是ＢＰ－１０与ＣａＭ之间特异性相互作用的结果。实验证实ＢＰ－１０对ＮＡＤ激酶活性起着重要调节作用．     

多头绒泡菌肌球蛋白的纯化及性质的研究

从多头绒泡菌中纯化了肌球蛋白，并对其亚基组成及ＡＴＰ酶性质进行了研究。该肌球蛋白是由一种重链（２２５ｋＤ）和两种轻链（２０ｋＤ，１７．５ｋＤ）组成的大分子，其亚基之比为ＨＣ：ＬＣ１：ＬＣ２＝２：４：２。兔肌Ｆ－肌动蛋白能较大激活粘菌肌球蛋白ＡＴＰ酶活性，Ｃａ＾２＋离子也能提高其活性，Ｍｇ＾２＋离子无明显影响，钒酸盐，碘乙酸，对氯汞苯甲酸对其ＡＴＰ酶活性有显著抑制作用。