半夏凝集素的糖结合活性研究

半夏凝集素(PTL)可与甘露聚糖结合。本文以PTL与~(125)I标记的甘露聚糖的结合活性为指标,观察了一些金属离子对PTL的糖结合活性的影响,井对PTL的糖结合专一性作了较系统的研究。结果表明常见的金属离子或EDTA对其糖结合活性无显著影响,但K~+可明显增加PTL的糖结合活性。大多数单糖,二糖不抑制PTL与甘露聚糖的结合,但一些疏水配基形成的糖苷可产生显著的抑制效应。PTL专一与高甘露糖型糖链结合。     

半夏凝集素的分离纯化和在植物中的分布

从半夏块根中,经９５％硫酸铵沉淀和固定化猪甲状腺球蛋白柱亲和层板分离得到一种凝集素,称为半夏凝集素。凝胶过滤,ＳＤＳＰＡＧＥ和免疫双扩散鉴定ＰＴＬ是均一的样品,分子量约４４ｋＤ,由四个约１２ｋＤ的亚基组成。ＰＴＬ主要存在于半夏的块茎中,茎中也有少量存在。     

三种菜豆凝集素的分离纯化及其与黑皮扁豆凝集素抗血清的免疫交叉反应

利用Tris-HCl缓冲液浸提、硫酸铵分级沉淀、离子交换和分子筛层析,分别从白花菜豆(Phaseolus albiflora L.var)、紫花菜豆(Phaseolus purpurea L.var)、红花菜豆(Phaseolus coccineus L.var)种子中纯化得到3种菜豆凝集素(PAL,白花菜豆凝集素;PPL,紫花菜豆凝集素;PCL,红花菜豆凝集素).纯化的3种菜豆凝集素经SDS-PAGE电泳检测都只有一个分子量约为32 kD的亚基,它们都能与黑皮扁豆凝集素抗血清发生免疫交叉反应.     

三叶半夏和掌叶半夏凝集素原核表达及特性研究

通过原核表达获得大量具有生物活性的三叶半夏和掌叶半夏凝集素,比较分析两种半夏凝集素的异同,并深入探讨半夏凝集素和亚基之间凝集活性的差异。结果表明,掌叶半夏凝集素的凝集活力为三叶半夏凝集素的4倍,凝集素第三个活性位点两个氨基酸的差异可能是引起三叶半夏和掌叶半夏凝集素凝集活性不同甚至药理作用不同的主要原因。原核表达系统获得的凝集素亚基不能凝集兔血红细胞。该研究为深入探讨两种半夏凝集素的区别,及半夏凝集素和亚基之间凝集活性的差异打下了基础,也为解决半夏资源紧缺提供了一个可能的方法。     

半夏凝集素在脂双层形成的阳离子通道

半夏凝集素是从多年生植物三叶半夏的块茎鲜汁中分离纯化的糖结合蛋白,具凝集素活性,与甘露聚糖有专一结合。本工作利用双室系统观察了它对人工脂双层的作用。 人工脂双层由卵磷脂和胆固醇(重量比为4:1)的正癸烷溶液形成。电阻≥10GΩ。在电压箝位下将半夏凝集素(1—4μg/ml)加至系统的一小室,几分钟后即观察到通道样活动噪音,脂双层电阻下降。甘露聚糖对这种变化有明显的对抗作用,加入40μg/ml的甘露聚糖可使脂双层的膜电阻立即从2GΩ恢复到对照水平(≥10GΩ)。在低浓度半夏凝集素和低维持电压下可获得单位电导涨落记录。在100mmol/L对称KCl溶液中记录的半夏凝集素单通道电流的优势电导为35pS。通过测定在非对称盐溶液中的平衡电位,根据Goldman—Hodgkin—Katz电位方程可推算出通道的离子选择性。结果表明,半夏凝集素形成的通道为阳离子通道。     

孔石莼凝集素蛋白基因的克隆与表达

根据孔石莼(Ulva pertusa)凝集素(Lectin)蛋白cDNA全长序列(GenBank登录号:AY433960)设计引物,以其总DNA为模板,采用PCR技术扩增蛋白DNA序列,经克隆、测序获得基因序列。结果表明,孔石莼凝集素蛋白(UPL)基因序列长约为670 bp,含有一个大小为56 bp的内含子。此外,设计带酶切位点的引物,以UPL-cDNA为模板,扩增其开放阅读框,并与表达载体pGEX-2T连接,构建原核表达载体pG2T-UPL,并在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达大小约为47 kD的目的蛋白。     

若干外源凝集素对胰岛素与其受体相互作用的影响

本文研究了若干外源凝集素对胰岛素与其脂肪细胞胰岛素受体相互作用的影响。结果表明与D-甘露糖和D-葡萄糖专一结合的外源凝集素,如ConA(伴刀豆球蛋白A)、豌豆及蚕豆凝集素可抑制~(125)Ⅰ-胰岛素与其受体的结合。与D-半乳糖专一结合的外源凝集素,如蓖麻凝集素Ⅰ和天花粉凝集素基本上不抑制~(125)Ⅰ-胰岛素与其受体的结合,在低浓度时有一定程度的促进胰岛素与受体结合的能力。另外两个和低聚糖专一结合的半夏凝集素和PHA(菜豆凝集素)的效应和蓖麻凝集素Ⅰ等类似。这些结果说明在胰岛素受体分子表面可能存在着与ConA等专一结合的糖,而且它们在胰岛素受体与胰岛素结合部位的附近。而和其他几个外源凝集素专一结合的糖或低聚糖链则和胰岛素受体与胰岛素结合的部位相距较远,并就这些凝集素对胰岛素与受体结合的促进作用进行了讨论。     

若干外源凝集素对胰岛素与其受体相互作用的影响

本文研究了若干外源凝集素对胰岛素与其脂肪细胞胰岛素受体相互作用的影响。结果表明与D-甘露糖和D-葡萄糖专一结合的外源凝集素,如ConA (伴刀豆球蛋白A)、豌豆及蚕豆凝集素可抑制~(125)I-胰岛素与其受体的结合。与D-半乳糖专一结合的外源凝集素,如蓖麻凝集素I 和天花粉凝集素基本上不抑制~(125)I-胰岛素与其受体的结合,在低浓度时有一定程度的促进胰岛素与受体结合的能力。另外两个和低聚糖专一结合的半夏凝集素和PHA (菜豆凝集素)的效应和蓖麻凝集素I 等类似。这些结果说明在胰岛素受体分子表面可能存在着与ConA等专一结合的糖,而且它们在胰岛素受体与胰岛素结合部位的附近。而和其他几个外源凝集素专一结合的糖或低聚糖链则和胰岛素受体与胰岛素结合的部位相距较远,并就这些凝集素对胰岛素与受体结合的促进作用进行了讨论。     

一株产凝集素的三叶半夏内生真菌的研究

研究三叶半夏内生真菌及其凝集素,旨在为半夏内生真菌及其凝集素的开发利用提供依据。对三叶半夏块茎内生真菌分离、纯化,液体发酵培养代谢产物,无水乙醇提取总蛋白,兔血红细胞检测其凝集活性,筛选出菌株gs1,其总蛋白对兔血红细胞凝集活性显著。使用甘露聚糖-Sepharose 4B亲和层析柱纯化菌株gs1总蛋白,得到凝集素。Brandford法定量检测分析表明,1000 ml gs1发酵培养液中含有9.58 mg 凝集素。SDS-PAGE 电泳分析显示该凝集素为单一条带,分子量约为12 kDa。凝集活性实验表明,该凝集素对兔、大鼠和小鼠的血红细胞具有凝集作用,对兔血红细胞效果最显著;而对人（A＼B＼O＼AB型）和鸡的血红细胞无凝集作用。糖结合活性实验表明,甘露糖对该凝集素的凝集活性具有抑制作用。通过初步分类鉴定,菌株gs1为半知菌亚门,丝孢纲,丛梗孢目,丛梗孢科,曲霉属。     

三种鲟科鱼类和两种鲑科鱼类卵黄免疫球蛋白性质的比较

从施氏鲟(Acipenser schrencki)、小体鲟(Acipenser ruthenus)、西伯利亚鲟(Acipenser baeri)、哲罗鲑(Hucho taimen)和金鳟(Oncorhynchus mykiss)五种鱼类卵黄中分离、纯化Ig,并对其分子结构进行了初步研究。结果表明:五种鱼类卵中Ig的分子量分别为施氏鲟524kD、小体鲟468kD、西伯利亚鲟475kD、哲罗鲑为490kD,金鳟498kD,其Ig重链的相对分子量相同,约为97kD。轻链的相对分子量各不相同,施氏鲟为27kD,小体鲟28.5kD,西伯利亚鲟30kD,哲罗鲑28.5kD和金鳟16kD。其中西伯利亚鲟、施氏鲟和小体鲟Ig等电点约为5.85,哲罗鲑和金鳟的Ig等电点约为6.55,其蛋白质结构上具有一定的相似性,且均为糖蛋白     

不同光照强度下半夏化学成分含量的比较研究

利用遮荫网对卵叶型半夏（Pinellia ternata（Thunb.）Breit.）进行遮荫,秋季倒苗后,测定其化学成分含量,以研究光强对半夏化学成分含量的影响。结果显示：全光照下半夏的生物碱、鸟苷和蛋白质含量较高,55%遮荫处理半夏的块茎增重幅度较大,80%遮荫处理的还原糖和可溶性糖含量较高。不同光照强度下,半夏化学成分含量有显著的差异,全光照处理有利于半夏生物碱、鸟苷和蛋白质的积累,80%遮荫处理有利于其还原糖和可溶性糖的积累,55%遮荫处理有利于半夏的生长,但其化学成分含量低于全光照处理。     

Determination of the site of origin of Pinellia ternata roots based on RAPD analysis and PCR-RFLP

Analyses of randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) and PCR-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) were performed in an effort to distinguish between two different origins of Pinellia ternata. To determine whether the origin of Pinellia ternata is in China or Korea. RAPD analysis was carried out using ten 20-mer random primers. Although the coefficients of similarity between the DNA of Chinese and Korean accessions of Pinellia ternata were high, distinguishable band patterns were observed in the reaction performed using primer numbers 3, 6 and 10. Primer 3 produced one (410 bp) and primer 6 produced four (410 bp, 350 bp, 300 bp, 250 bp) Chinese Pinellia-specific fragments. Primer 10 produced one (900 bp) Korean Pinellia rhizome-specific fragment. In addition, using PCR-RFLP analysis, different fingerprints were obtained from Korean and Chinese Pinellia ternata respectively. These results suggest that the analyses with RAPD and PCR-RFLP can be used to authenticate the relevant Chinese and Korean herbal medicines.     

利用小RNA深度测序技术鉴定半夏病毒病病原

RNA沉默是真核生物体内由病毒来源的干扰小RNA（virus derived small interfering RNA, vsiRNA）沉默复合物介导目标RNA特异降解的一种保守机制,通过对vsiRNA分析可进行植物病毒病原鉴定。本文利用小RNA深度测序技术对感病半夏叶片进行鉴定,结果发现,表现典型花叶症状的半夏叶片受到大豆花叶病毒（Soybean mosaic virus, SMV）、黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus, CMV）、芋花叶病毒（Dasheen mosaic virus, DsMV）、魔芋花叶病毒（Konjac mosaic virus, KoMV）、烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus, TMV）等多种病毒的复合侵染。为明确SMV山西半夏分离物（SMV-SXBX）的进化关系,进行SMV-SXBX全基因组克隆与分析,获得SMV-SXBX全长为9 735 nt,编码一个由3 105个氨基酸组成的多聚蛋白质。通过核苷酸与氨基酸序列比对发现,SMV-SXBX与半夏分离物P同源性最高,分别为91.1%和94.1%,且系统发育分析表明,SMV-SXBX与半夏SMV分离物P聚为一簇。同时,也对vsiRNA进行了系统分析,研究结果有望为半夏SMV的有效防治提供一定科学依据。     

中国半夏属植物亲缘关系的SRAP分析

利用序列相关扩增多态性(SRAP)标记对中国半夏属植物5个种的亲缘关系进行了研究.38个引物组合在半夏属植物的5个种中共扩增出752条清晰的谱带,其中628条谱带具有多态性,多态性比率为83.51％,显示出较高的多态性比率;各物种间的遗传相似系数在0.6513～0.7312之间,聚类分析和主坐标分析结果表明,5种半夏属植物被聚为两大类:掌叶半夏单独聚为一类(Ⅱ),而其它4个种聚为一类(Ⅰ).第Ⅰ类可再分为A和B两个亚类:A亚类包括半夏和石蜘蛛;B亚类包括盾叶半夏和滴水珠.滴水珠和盾叶半夏的亲缘关系最近,其次是半夏和石蜘蛛,而掌叶半夏和其它4个种的亲缘关系都较远,这说明掌叶半夏与半夏属其它种呈姐妹群关系.本研究结果对我国半夏属植物资源的开发利用与保护具有重要意义.     

Principal Component Analysis to Assess the Changes of Yield and Quality of Two Pinellia ternata Cultivars After Brassinolide Treatments

Journal of Plant Growth Regulation - Brassinolide (BR) plays an important role in physiological and biochemical processes of plants. The natural resources of Pinellia ternata (P. ternata) were...     

半夏倒苗前后的细胞组织结构

探讨高温胁迫下半夏倒苗前后的组织学结构的变化,为揭示半夏倒苗的生物学机理提供参考依据。在半夏植株高15cm左右时,给予(32±1)℃的高温胁迫,于不同胁迫天数取半夏叶柄,经爱氏苏木精染液染色,用石蜡切片法制片,在显微镜下观察并照相。结果表明,随着高温胁迫时间的延长,半夏叶柄的维管组织结构被破坏越来越严重,细胞壁、细胞膜破裂,原生质外渗,核膜破裂,核仁溢出,有的细胞内核仁消失。     

Immunolocalization of extensin and potato tuber lectin in carrot, tomato and potato

Tissue-specific expression of two members of the cell wall hydroxyproline-rich glycoprotein (HRGP) family, extensin and potato tuber lectin, was examined by immunolocalization at the light microscope level in various organs (leaves, stems, roots, fruit, tuber) of carrot ( Daucus carota cv. Thumbelina), tomato ( Lycopersicon esclentum cv. Pixie Hybrid II), and potato ( Solanum tuberosum cv. Kennebec). Extensin was prominently expressed in vascular tissue, particularly xylem and also phloem, although virtually all cells displayed some degree of staining which varied as a function of the tissue, organ, and plant under study. Antibodies against potato tuber lectin (PTL) displayed a localization pattern similar to that observed for extensin; notably PTL did not stain cambium but did stain epithelial cells lining secretory cavities. These distribution patterns are consistent with a role for extensin, and possibly PTL, in providing mechanical support in tissues subjected to compression or torsional stress imparted by vascular growth, or by similar stress brought about by transport of vascular fluids.