欧石楠体细胞胚发生和植株再生

以欧石楠茎段为外植体,研究其体细胞胚胎发生和植株再生。对影响茎段不定芽分化及胚性愈伤组织诱导的主导因子进行比较分析,并研究其体胚萌发、生根及移栽;同时,采用树脂切片法对茎段脱分化产生胚性愈伤组织及体胚发育过程进行组织细胞学观察。结果表明,接种在1／2WPM基本培养基上的茎段,胚性愈伤组织诱导率为88．7％,显著高于其他处理,不定芽诱导率可达90．6％,平均分化倍数为3．6个,平均分化苗高3．82cm;体细胞经过成熟培养后。在添加1．0mg·L-1 ZT和0．3mg·L-1 IBA的1／2WPM培养基上萌发,萌发的体胚在I／2WPM附加0．2mg·L-1 NAA和0．3mg·L-1 IBA的培养基上形成完整的体胚苗植株,体胚苗生根率达到87．4％,经炼苗后移栽到蛭石：珍珠岩=3：1（V／V）的栽培基质中,成活率可达63．7％。在显微镜下可观察到球形胚、心形胚、鱼雷形胚和子叶形胚;体细胞胚以间接方式发生,表现为愈伤组织外层细胞直接发生和愈伤组织组织内部细胞发生。     

碳氮源对花榈木胚性愈伤组织诱导、发育及有机物积累的影响

为探讨花榈木体胚发生过程中不同碳氮源处理对胚性愈伤组织诱导、发育和有机物积累的影响,并筛选出有利于花榈木体胚发生的碳氮源,优化体胚发生体系,该研究以成熟胚为外植体,通过单因素试验分析3种碳源、4种蔗糖浓度和6种氮源处理下胚性愈伤组织诱导、发育和有机物积累的差异。结果表明:(1)蔗糖中胚性愈伤组织诱导率显著高于葡萄糖和麦芽糖,但其体胚诱导率、体胚分化率、胚性愈伤组织可溶性糖、淀粉和可溶性蛋白含量差异不显著。(2)随着蔗糖浓度的升高,胚性愈伤组织、体细胞胚(体胚)诱导率、体胚分化率、胚性愈伤组织重量和可溶性蛋白含量呈先升高后降低的趋势,均以添加30 g·L^-1蔗糖最高,而胚性愈伤组织可溶性糖和淀粉含量呈增加的趋势。(3)在6种氮源处理中,胚性愈伤组织诱导率以添加500 mg·L^-1谷氨酰胺的处理最高,体胚诱导率则以添加谷氨酰胺和水解酪蛋白的处理较高,但不同氮源处理间体胚分化率无差异; 添加有机氮源的处理其胚性愈伤组织可溶性蛋白含量显著高于无氮源处理。总之,不同的碳氮源通过影响花榈木胚性愈伤组织的诱导、发育和有机物的积累,从而影响其体胚诱导率,但对体胚分化率影响不显著。初步认为30 g·L^-1蔗糖和500 mg·L^-1谷氨酰胺作为碳氮源可促进花榈木体胚发生诱导。     

小麦幼穗胚性愈伤组织诱导及分化过程中内源激素的作用

2,4-D的浓度及诱导时间的长短影响出愈率和早期体胚的形成,6－BA0．25mg／L或KT0．5mg/L抑制胚性愈伤组织的诱导及分化。胚性能力较强外植体的内源激素含量较高,同时分化过程中胚性愈伤组织的ABA、IAA含量高于非胚性意伤组织,而GA3含量则低于非胚性愈伤组织。     

农杆菌介导的单子叶植物早熟禾的转化

利用种子和胚分别在两种培养基K3和K5诱导产生了早熟禾(Poa pratensis L.)一个品种Mado的胚性愈伤组织.K3培养基含有10.0μmol/L的二氯苯氧乙酸(2,4-D)、0.5μmol/L的苄氨基嘌呤(BAP).K5培养基是K3另加0.5μmol/L的硫酸铜.光照条件为20～30 μmol.m-2.s、16 h光照、8 h黑暗.温度保持在24℃.用携有bar基因和gus基因的pDM805质粒转化的农杆菌AGL1对胚性愈伤组织进行转化.共得到4个转基因株系.影响转基因效率的主要因素有愈伤组织的胚性、光照条件、共转化时间、抗生素浓度、选择压力.本研究建立了单子叶早熟禾农杆菌介导的转基因方案.     

桃儿七成熟胚的离体培养研究

以MS为基本培养基,通过添加不同激素和附加物等措施对桃儿七种子成熟胚进行了无菌苗和愈伤组织诱导初步研究。研究结果表明：0．5mg／L IAA＋0．2mg／L KT＋0．3mg／L GA3处理可获得生长良好的无菌苗,诱导率达41．67％。1．0mg／L 2,4-D＋0．4mg／L KT＋0．3mg／L GA3处理愈伤组织诱导率可达36．67％,添加500mg／L水解酪蛋白（CH）或10mg／L D-生物素有益于愈伤组织的诱导。光照和变温培养有利于提高无菌苗和愈伤组织的诱导率,有效降低褐化率。     

AgNO3对橡胶树花药愈伤组织形态及体胚发生的影响

橡胶树的花药愈伤组织在长期继代过程中,胚性易下降甚至丧失;而AgNO3作为乙烯活性抑制剂,被广泛应用于植物组织培养中.该研究以继代培养4 a以上的热研7-33-97花药愈伤组织为材料,在继代培养基中添加2.5 mg·L-1 AgNO3预培养35 d后,观察预培养前后愈伤组织表形及其细胞形态的变化,并设计不同浓度AgNO3及不同处理时间对其进行体胚诱导,90 d后分别统计胚状体总数和正常胚数.结果表明:浅黄色质地柔软的愈伤组织在含AgNO3的培养基上预培养后能转变成鲜黄色易碎愈伤组织,在倒置显微镜下前者大多表现为不规则多边形,细胞内含物较稀薄;而后者则呈圆形或椭圆形,细胞内含物丰富,属于典型的胚性细胞.在体胚诱导的第1个月添加5 mg·L-1 AgNO3能显著促进体胚的发生,AgNO3浓度升至10 mg·L-1时体胚发生受到抑制,且畸形胚的形成率显著增加;在含5 mg·L-1 AgNO3的培养基中培养2个月以上,体胚发育明显受阻,大部分形成畸形胚.该研究结果在一定程度上恢复了橡胶树长期继代花药愈伤组织的胚性能力,并提高了其体胚发生频率,为橡胶树花药胚性愈伤组织长期继代培养过程中胚性的保持提供了参考.     

尾巨桉胚状体诱导及愈伤组织差异研究

以尾巨桉优良无性系无菌苗茎段为外植体,通过对多种不同浓度生长调节剂组合的优化,进行胚状体诱导研究;并对胚性与非胚性愈伤组织进行形态解剖学观察、相关生理指标检测以及相关基因荧光定量PCR分析,以揭示尾巨桉胚性愈伤组织非胚性化发生的机理,为建立尾巨桉体细胞胚胎再生体系提供参考。结果表明:(1)胚性愈伤组织在MS+0.1mg/L NAA+0.01mg/L TDZ培养基中诱导得到胚状体,外植体经过0.5mol/L蔗糖处理12h有助于胚性愈伤组织产生胚状体,胚状体最高发生率为16.7%。(2)尾巨桉胚性与非胚性愈伤组织石蜡切片观察发现,两者的细胞形态特征存在明显的差异,胚性愈伤组织细胞体积小,排列紧密,表现出典型的胚性细胞特征,而非胚性细胞比较大,排列疏松,细胞呈不规则形状。(3)生理生化指标检测结果表明,非胚性愈伤组织中蛋白质含量、SOD、PPO及CAT活性均显著低于胚性愈伤组织,非胚性愈伤组织中木质素、可溶性糖含量以及PAL和POD活性要高于胚性愈伤组织,二者的反肉桂酸4-单加氧酶基因、淀粉磷酸化酶基因、谷胱甘肽硫转移酶基因、葡萄糖-1-磷酸腺苷酸转移酶基因、葡萄糖六磷酸异构酶基因、分支酸合酶基因以及苯丙氨酸解氨酶基因表达差异也达到显著水平。     

农杆菌介导的单子叶植物早熟禾的转化

利用种子和胚分别在两种培养基K3和K5诱导产生了早熟禾(Poa pratensis L.)一个品种Mado的胚性愈伤组织。K3培养基含有10.0μmol/L的二氯苯氧乙酸(2,4-D)、0.5μmol/L的苄氨基嘌呤(BAP)。K5培养基是K3另加0.5μmol/L的硫酸铜。光照条件为20～30μmol·m~(-2)·s~(-1)、16h光照、8h黑暗。温度保持在24℃。用携有bar基因和gus基因的pDM805质粒转化的农杆菌AGL1对胚性愈伤组织进行转化。共得到4个转基因株系。影响转基因效率的主要因素有愈伤组织的胚性、光照条件、共转化时间、抗生素浓度、选择压力。本研究建立了单子叶早熟禾农杆菌介导的转基因方案。     

黄山栾树体细胞胚的发生和组织学观察

黄山栾树无菌苗的节间和叶柄离体培养后,其体细胞胚发生的结果表明：节间愈伤组织可诱导产生体细胞胚,而叶柄愈伤组织则生根：节间愈伤组织诱导培养基为MS＋3．0mg．L～2,4．D＋0．5～3．0mg．L-1NAA;节间胚性愈伤组织诱导培养基为MS＋2．0nag．L-2,4-D;胚性愈伤组织转移到无植物生长调节剂的MS培养基上可发育成正常植株。组织学观察表明,体细胞胚在胚性愈伤组织中有的发生于愈伤组织表层细胞,有的发生在愈伤组织内部。黄山栾树体细胞胚的形成经历球形胚、心形胚、鱼雷胚和子叶胚几个阶段,这与合子胚的发育途径相似。     

枸杞抗羟脯氨酸细胞变异系筛选及其耐盐特性的研究

试验以枸杞(Lycium barbarum L.)成熟胚诱导的胚性愈伤组织为材料研究了：(1)^60Co—γ射线诱变处理对愈伤组织的影响;(2)耐羟脯氨酸(HYP)愈伤组织变异系的筛选;(3)耐HYP愈伤组织变异系的耐盐性及稳定性分析;(4)耐HYP愈伤组织变异系生理生化特性;(5)变异系的分化和再生苗的生理生化特性。初究结果表明：由胚性愈伤组织经30Gy的^60Co—γ辐射处理,在含16mmol／L HYP选择培养基和无HYP培养基上交替培养4代,分离出耐HYP的愈伤组织变异体;该变异体游离脯氨酸含量比对照高3．3倍,其再生植株叶片游离脯氨酸比对照高13．5倍。     

枸杞原生质体培养及高效成株体系的建立

由枸杞髓部组织诱导出胚性愈伤组织,并由此愈伤组织建立起稳定的细胞悬浮系,从悬浮细胞游离的原生质体在改良KM培养基（1．5mg/L 6-BA,0.5mg/L NAA和0．5mg/L2,4-D)中进行液体浅层培养,3－4d后出现第一次分裂,第7d统计分裂频率为50．3％,15d左右可形成细胞团,3－4周后形成肉眼可见的愈伤组织,愈伤组织植板率为1．25％,将细胞团转移到液体分化培养基（MS＋6－BA 1．5mg/L 2,4-D 0.2mg/L)8-10d可形成大量胚状体,及时将胚性愈伤组织块转移到固体分化培养基上（MS 6-BA 0.2mg/L)可形成大量绿芽,分化率54．17％。绿芽在生根培养基（MS＋NAA 0．2mg/L)可形成完整植株,移栽后成活良好。     

MGBG对苜蓿愈作组织生长,体细胞胚胎诱导及其乙烯生物合成的影响

在苜蓿（ＭｅｄｉｃａｇｏｓａｔｉｖａＬ．）愈伤组织继代之初加入不同浓度的甲基乙二醛－双（脒腙）（ＭＧＢＧ）（０．５,１,２ｍｍｏｌ／Ｌ）可不同程度地抑制愈伤组织及其后体胚胎诱导悬浮培养物的生长和体胚形成,若在体胚诱导阶段加入,同上述的抑制作用更为强烈,ＭＧＢＧ不但促进愈伤组织乙烯释放量,内源ＡＣＣ（１－氨基环丙烷－１羧酸）水平和ＡＣＣ合成酶活性,也促进体胚诱导悬浮培养物的ＡＣＣ水平及ＡＣＣ合成酶的     

糖、GA3及ABA对印度娃儿藤(Tylophora indica(Burm.f.)Merrill)体细胞胚发生的影响

从印度娃儿藤节间外植体获取愈伤组织,分析了糖、赤霉素(GA3)及脱落酸(ABA)对愈伤组织形成体细胞的影响。实验证明,含4μmol/L2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)的MS培养基是获得具有成胚功能的愈伤组织的最佳培养基。在含有6μmol/L激动素(Kn)的MS培养基上,高达69%的愈伤组织分化为体细胞胚,平均单位外植体(每克愈伤组织)产胚25个。在6μmol/LKn存在的条件下,分析了蔗糖、葡糖糖对胚产生的影响,不同的糖及不同糖浓度对体细胞胚的发生影响很大。6μmol/L Kn与200mmol/L蔗糖处理胚胎发生率最大(71%),单位外植体生成49个胚。然而葡萄糖与Kn、或者葡糖糖、蔗糖与Kn三者加在一起则降低成胚率及产胚数。一定浓度的GA3和ABA能促进体细胞胚的产生。在含200mmol/L蔗糖的培养基中加10μmol/LGA3胚的生成率为98%,单位外植体产胚51个。在含200mmol/L蔗糖的培养基中加2μmol/L ABA能显著增加体细胞胚的量,该培养基上每外植体平均生成44个胚,产率为95%。本研究显示,含200mmol/L蔗糖的培养基中分别加入6μmol/L Kn、10μmol/L GA3或者2μmol/L ABA能显著提高印度娃儿藤体细胞胚发生率,而单独的葡萄糖或葡糖糖和蔗糖则有抑制作用。得到的胚均能正常发育并分化为植株。     

利用广西杉木良种未成熟胚诱导胚性愈伤组织发生

以杉木不同基因型的未成熟胚为起始外植体,研究不同冷藏时间、不同接种方式、不同基因型和不同激素浓度组合对胚性愈伤组织诱导率的影响。结果表明,冷藏显著影响种子的质量,随着冷藏时间延长,坏死种子比例显著增加,冷藏20 d时坏死种子比例达54.5%;冷藏对胚性愈伤组织诱导率无显著影响。接种方式对胚性愈伤组织诱导具有显著影响,接种方式二(剥去种皮,切开小口)的诱导效果最好,方式一(种子切开小口)和方式三(剥出合子胚)不利于胚性愈伤组织诱导。不同基因型在同一激素组合条件下的胚性愈伤组织诱导率存在显著差异,同一基因型在不同激素组合下的胚性愈伤组织诱导率也存在显著差异。总体看来,6-BA对胚性愈伤组织诱导率的影响最大,其最优浓度为1.0 mg/L;其次为2,4-D和ABA,其较优浓度均为2.0 mg/L;KT较优浓度为1.0 mg/L。     

拟南芥胚愈伤组织诱导和植株再生

CullusInductionandPlantletRegenerationinEmbryoExplantsofAra－bidopsisthalianaLIXiU-Ru(BeijingAgriculturalCollege,Beijing102206)##D1植物名称拟南芥（Arabidopsisthaliana）。2材料类别胚。3培养条件（1）愈伤组织诱导培养基：B5或1／2MS＋2,4－D0．5mg·L－1（单位下同）＋BA0．05十2％蔗糖或葡萄糖;（2）诱导生芽培养基：B5、MS或1／2MS＋2,4-D0．05＋BA0．5＋3％蔗糖;（3）诱导生根培养基：1／2MS＋2,4-D1．0。将种子表面消毒后,接种在B5培养基上,1天后剥胚,将胚接种在培养基（1）上进行愈伤组织诱导。…     

苏云金杆菌内毒素蛋白基因转入葡萄胚性愈伤组织细胞及转基因植株再生的研究

以葡萄的胚性愈伤组织作为农杆菌介导,Ti质粒转化材料,利用共培养法将苏云金杆菌内毒素蛋白基因转入葡萄胚性愈伤组织细胞,通过胚状体发生途径再生转基因植株。实验发现:80μmol/L的乙酰丁香酮诱导处理农杆菌和葡萄愈伤组织后可将转化效率提高50倍。OD值为0.8的农杆菌菌液稀释8—10信后与在G培养基预培养10天的胚性愈伤组织共培养2—3夭,Ti质粒对葡萄愈伤组织细胞的转化效率可达50%左右。筛选得到的转基因植株在含Km 30 mg/L的选择培养基上继代存活6个月,生长正常;提取叶片染色体DNA做Southern blot,杂交结果为阳性。将转基因植株各部分切段置于含Km 50 mg/L的选择培养基上,能够脱分化产生抗性愈伤组织并能增殖。     

荔枝胚性愈伤组织诱导和离体保存条件的筛选

对影响荔枝(Litchi chinensis Sonn.)胚性愈伤组织诱导的因素(防褐化剂种类、花期、荔枝品种以及外植体取材部位)进行了比较研究,并对其离体保存条件进行了筛选.结果表明,在愈伤组织诱导培养基(含2.0 mg·L-12,4-D、0.5 mg-L-1NAA、30 g·L-1蔗糖和6 g·L-1琼脂的MS培养基,pH 5.8)中添加防褐化剂水解乳蛋白(0.4g·L-1),可使花药胚性愈伤组织的诱导率达到20.51%;以茎段、叶柄和幼叶为外植体,不能诱导出胚性愈伤组织,而采用花药和幼果培养,可诱导出胚性愈伤组织.其中,第1期雄花花药是最适宜的培养材料,胚性愈伤组织的诱导率可达20.11%;荔枝不同品种间幼果的胚性愈伤组织诱导率存在差异,品种‘及第'的诱导率最低.在15℃条件下,将荔枝胚性愈伤组织保存在添加20 g·L-1甘露醇的保存培养基(含1.0 mg·L-1 2,4-D、30 g·L-1蔗糖和6 g·L-1琼脂的MS培养基,pH 5.8)中,保存效果最佳,可将继代时间延至100 d.     

杂交狼尾草胚性愈伤组织的诱导与植株再生

以杂交狼尾草初级愈伤为材料,运用方差分析的方法研究不同因素对杂交狼尾草胚性愈伤诱导率与植株再生率的影响。结果发现,2,4-D和TDZ对杂交狼尾草胚性愈伤诱导影响显著,最佳的胚性愈伤诱导培养基为MS+3.0 mg·L-12,4-D+0.4 mg·L-16-BA+0.2 mg·L-1 TDZ,诱导率为54%;愈伤分化培养基以附加0.1 mg·L-1 TDZ+0.2 mg·L-16-BA+3.2 mg·L-1 CuSO4的 MS培养基为最佳,再生率为68.33%,褐化率为8.33%;分化培养基中添加0.8~3.2mg·L-1的CuSO4均能促进杂交狼尾草愈伤组织分化,而添加AgNO3对杂交狼尾草愈伤分化无显著影响。该技术为离体诱变获得杂交狼尾草低温种质材料奠定了基础。     

早籼稻培矮64S愈伤组织形态及植株再生

研究了早籼稻品种培矮64S种子胚愈伤组织诱导的再生的条件。调节培养基中的2,4－D,KT及NAA等激素浓度,胚性愈伤组织诱导频率可达到48．5％,愈伤组织学再生频率接近60％。结果表明,合适的激素浓度可显著提高籼稻组织培养的效率。     

云南松胚性愈伤组织诱导及增殖

以云南松成熟合子胚为外植体,在DCR培养基上诱导胚性愈伤组织,探索最佳消毒剂用量及激素浓度配比。用不同的培养方法增殖胚性愈伤组织,并对胚性愈伤组织形成过程中形态学与细胞学变化进行观察。其后提高培养基中肌醇浓度,增大渗透压,添加ABA,诱导早期原胚。结果表明,经5%次氯酸钠消毒20 min,使用添加8mg/L 2,4-D1、mg/L 6-BA、500 mg/L CH以及500 mg/L谷氨酰胺的DCR培养基接种,诱导率较高,可达70%以上;采用在愈伤组织周围添加少量培养过该愈伤组织的培养基的方式继代,愈伤组织增殖率可由20%显著提高至50%左右。在增殖培养基中添加4~6 mg/L ABA后,胚性细胞可逐渐发育形成胚性胚柄团。