庐山石韦抗I型单纯疱疹病毒的实验研究

我们使用原代人胚肌皮单层细胞培养技术对庐山石韦抗Ⅰ型单纯疱疹病毒进行了实验研究。由结果知,同时给药途径与治疗给药途径的最低有效剂量均为250ug/ml(抑制病毒对数分别为2.55±O.21和2.5d±0.19),预防给药途径为500ug/ml(抑制病毒对数为2.00±0.15),管外给药途径无效。     

樟芝提取物体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型的初步研究

樟芝是台湾特有的珍稀药用真菌,具有抗癌、抗炎、抗病毒等多种功效。为了考察液体发酵樟芝菌丝体水提取物和乙醇提取物对单纯性疱疹病毒II型的抑制作用,本文采用MTT法测定樟芝提取物对细胞的毒性和对病毒的抑制作用。试验结果表明樟芝水提取物和乙醇提取物对Vero细胞有微弱毒性,但是1.5mg/mL的乙醇提取物和2.5mg/mL的水提取物对细胞基本无毒性,二者对单纯疱疹病毒Ⅱ型均有抑制作用,其半数抑制浓度(IC50)分别为0.30mg/mL和1.32mg/mL。樟芝水提取物和乙醇提取物在体外对单纯疱疹病毒均有显著的抑制作用。     

中药矮地茶不同洗脱部位抗病毒活性研究

采用细胞体外抗病毒实验CPE法结合CCK-8试剂盒,以TI值(治疗指数)为研究指标,研究矮地茶及其不同洗脱部位对呼吸道合胞病毒(RSV)、单纯疱疹病毒(HSV-1)、柯萨奇病毒(COX-B5)和手足口病毒(EV71)的抑制作用。结果表明矮地茶对RSV、HSV-1、COX-B5有显著杀灭作用。70%乙醇部位对COX-B5直接杀灭效果较好,TI值为16.709,较阳性对照药利巴韦林(TI值为17.482)作用效果相差不大。说明矮地茶提取物具有抗RSV、HSV-1、COX-B5的活性。     

复方羚羊角注射液的抗病毒活性研究

我们用细胞培养法对大青叶、板兰根、羚羊角及复方羚羊角等注射液进行了抗病毒活性的实验研究。结果复方制剂优于单方,预防用药方式的效果最好,抑制病毒对数为3.25±0.45,属中等有效;治疗用药方式居中,抑药毒对数为2.38±0.96;同时用药方式接近无效,抑病毒对数为1.50±0.82。     

栀子提取物对单纯疱疹病毒1型感染小鼠VP16mRNA和IFN-γmRNA的影响

采用RT-PCR技术,分别在单纯疱疹病毒1型感染BALB/C小鼠4、7、10、14、21天时,检测小鼠脑内VP16 mRNA和IFN-γ表达的变化,考察栀子提取物T9对病毒复制和宿主免疫的影响。结果显示,栀子提取物T9各给药组VP16 mRNA相对表达量在同一时间内均低于病毒对照组,其中T9低剂量组VP16 mRNA相对表达量在感染后第21天明显下降,T9高剂量组VP16 mRNA相对表达量随时间变化呈现持续降低状态;栀子提取物T9各给药组在除第4天外的其他时间点IFN-γmRNA相对表达量均高于病毒对照组,其中T9低剂量组IFN-γ mRNA相对表达量在感染后第4天至第14天随时间变化而明显增高,之后表达量略有下降,T9高剂量组IFN-γ mRNA相对表达量随时间变化呈现持续升高状态。结果提示,栀子提取物T9可能通过上调单纯疱疹病毒感染小鼠脑内IFN-γ mRNA相对表达量,来抑制单纯疱疹病毒在小鼠脑内的复制。     

黄酮类化合物对禽流感病毒的抑制作用

采用鸡胚培养法探讨黄酮类化合物对禽流感H5N1亚型病毒的抑制作用。实验分三种给药方式:即直接作用、先感染病毒后用药和先加药后感染。第一种给药方式说明黄酮类化合物可以直接灭活H5N1病毒;第二种给药方式说明黄酮类化合物可通过抑制流感病毒唾液酶的活性,从而抑制病毒粒子的复制;第三种给药方式反映一定浓度的药物可以阻断病毒对细胞的吸附作用。结果表明,黄酮类化合物对禽流感病毒的预防及治疗均有显著效果。     

三叶青对呼吸道合胞病毒作用实验研究

为探讨三叶青在抗病毒中的作用,本文选取三叶青乙醇提取物正丁醇萃取部分和乙酸乙酯萃取部分,采用细胞病变抑制实验,以治疗指数(TI)为研究指标,研究各溶剂萃取部位、柱分离部分在MA104细胞中对呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)的抑制作用,从而筛选出三叶青抗RSV有效部位,分离活性成分。三叶青乙醇提取物正丁醇萃取部分和乙酸乙酯萃取部分的TI值分别为128和64,相对于阳性对照药利巴韦林(TI值为6.25)。说明三叶青乙醇提取物正丁醇萃取部分和乙酸乙酯萃取部分具有抗RSV的活性且明显优于利巴韦林。     

“调免抗毒”中药提取液体外抗病毒的实验研究

为了寻找天然的预防和治疗病毒性心肌炎及常见病毒感染的有效药物。采用组织细胞培养法,固定病毒,稀释药物,体外进行了药物抑制病毒的中和试验。结果从400多种中药材中,筛选出能抑制100TCID50病毒保护细胞不发生病变的抑毒作用较强的药物13种,其中具有广谱抗病毒作用11种;这些药物组合后抗病毒作用增强,增加只有免疫调节作用而无抗病毒作用的药物提取液后,抗病毒作用略减弱;所筛药物抗毒作用均较阳性对照药物为强,且无抑制细胞分裂的毒副作用;药筛应在各类中药和多种细胞系中进行,才能提高药筛的阳性率,组织细胞培养法,不失为药筛的一种经济简便的良好手段。天然有效的抗病毒药物存在于各类中草药中。     

重组人干扰素α2a滴鼻剂抗病毒药效学研究

为了检测干扰素滴鼻剂抗病毒药效作用,采用组织细胞培养法及建立流行性感冒动物模型,对不同浓度的干扰素滴鼻剂进行了体内外抗病毒药效学研究。结果显示:在体外有抑制流感病毒、呼吸道合胞病毒、副流感病毒、麻疹病毒、腺病毒、柯萨奇B3病毒的作用,对单纯疱疹病毒有部分抑制作用。在体内可有效抑制流感病毒所致的病毒性肺炎。可见,重组人干扰素α2a滴鼻剂在体内外均有较明显的抗呼吸道病毒的作用。     

紫球藻胞外多糖抗柯萨奇B3病毒活性研究Ⅰ

采用MTT法研究了紫球藻胞外磺酸化多糖(ESPS)的细胞毒性,在高浓度(250μg/mL)下尚未发现对HEp-2细胞有明显毒性.CPE抑制法发现ESPS能明显抑制细胞的CPE,在综合、预防、治疗和直接作用四种给药方式下都具有抑制CVB3的作用.直接作用法的活性最高,TI值高达1920.6,是阳性对照药病毒唑的31倍.ESPS组分中分子量越大,抗病毒活性越高,其中分子量大于300 k的组分,IC50可低至0.754μg/mL,TI值高达331.6,是病毒唑的5倍多.结果表明ESPS有强烈的抗CVB3病毒活性,作用机制可能是干扰病毒在细胞表面的吸附及侵染过程.     

紫球藻胞外多糖抗柯萨奇B3病毒活性研究I

采用MTT法研究了紫球藻胞外磺酸化多糖(ESPS)的细胞毒性,在高浓度(250μg/ml)下尚未发现对HEp-2细胞有明显毒性。CPE抑制法发现ESPS能明显抑制细胞的CPE,在综合、预防、治疗和直接作用四种给药方式下都具有抑制CVB3的作用。直接作用法的活性最高,TI值高达1920．6,是阳性对照药病毒唑的31倍。ES-PS组分中分子量越大,抗病毒活性越高,其中分子量大于300k的组分,IC50可低至0．754μg／ml,TI值高达331．6,是病毒唑的5倍多。结果表明ESPS有强烈的抗CVEb病毒活性,作用机制可能是干扰病毒在细胞表面的吸附及侵染过程。     

从中药筛选金黄色葡萄球菌耐抗菌素抑制剂

用耐甲氧西林的金葡菌（MRSA）及金葡菌标准株为试验菌,测定了14种中药的乙醇提取物与4种抗菌药物的联合抗菌作用。狭叶十大功劳、马齿苋、厚朴、桔梗、益母草、夏枯草与4种抗菌药物对两株金葡菌存在联合作用;泽漆、马鞭草、乌头、车前草、白曼陀罗、杜仲与4种抗菌药物无联合作用;芍药与青霉素、头孢曲松产生很好的联合效应;鸡骨常山能提高环丙沙星的抗菌作用。筛选与抗菌素有联合作用的中草药对抑制金黄色葡萄球菌是可行的。     

分心木乙醇提取物对人结肠癌HCT116细胞增殖、凋亡和迁移的影响

为研究分心木对人结肠癌细胞HCT116增殖、凋亡和迁移的影响,该研究以75%乙醇作为溶剂提取分心木中的活性成分,利用MTT法检测分心木乙醇提取物对HCT116细胞增殖的影响;流式细胞术、AO/EB双染、TUNEL法和Western blot检测细胞凋亡;划痕愈合实验检测细胞迁移;体外建立肿瘤3D细胞模型(3D培养)检测分心木乙醇提取物对HCT116 3D肿瘤细胞球增殖的影响。结果显示,分心木乙醇提取物以剂量依赖的方式抑制HCT116细胞活性,促进细胞凋亡,同时促进凋亡因子Bax的表达,降低抗凋亡因子Bcl2的表达,并促进凋亡的关键执行蛋白PARP的裂解;划痕愈合实验和3D肿瘤细胞培养表明,分心木乙醇提取物抑制细胞迁移和3D肿瘤细胞的增殖。该研究表明,分心木乙醇提取物抑制肿瘤细胞的增殖和迁移,并通过促进cleaved PARP、Bax蛋白表达和抑制Bcl2蛋白的表达诱导肿瘤细胞凋亡。此外,分心木乙醇提取物抑制肿瘤3D细胞球的增殖,这提示结肠癌对分心木乙醇提取物的药物敏感性在体内体外没有显著差异。     

甘草甜素抗单纯疱疹病毒I的实验研究

目的旨在观察甘草甜素对HSV-1的抑制作用,为临床更为有效的治疗单纯疱疹病毒性脑炎探索新的药物。方法分体外及体内实验两个部分。体外培养Vero细胞,在病毒吸附Vero细胞后加入甘草甜素,观察空斑形成单位来评价甘草甜素对HSV-1的抑制作用;建立单纯疱疹病毒性脑炎小鼠模型,于小鼠腹腔内给药。通过观察实验组和对照组的小鼠死亡率来评价甘草甜素在体内对HSV-1的抑制作用。结果甘草甜素能明显抑制病毒所致的空斑形成,IC50为0．56mM;实验组小鼠的死亡率明显低于对照组。结论甘草甜素能明显的抑制单纯疱疹病毒I型的复制,能明显降低单纯疱疹病毒性脑炎小鼠的死亡率。     

甘草甜素抗单纯疱疹病毒Ⅰ的实验研究

目的 旨在观察甘草甜素对HSV-1的抑制作用,为临床更为有效的治疗单纯疱疹病毒性脑炎探索新的药物.方法 分体外及体内实验两个部分.体外培养Vero细胞,在病毒吸附Vero细胞后加入甘草甜素,观察空斑形成单位来评价甘草甜素对HSV-1的抑制作用;建立单纯疱疹病毒性脑炎小鼠模型,于小鼠腹腔内给药.通过观察实验组和对照组的小鼠死亡率来评价甘草甜素在体内对HSV-1的抑制作用.结果 甘草甜素能明显抑制病毒所致的空斑形成,IC50为0.56 mM;实验组小鼠的死亡率明显低于对照组.结论 甘草甜素能明显的抑制单纯疱疹病毒Ⅰ型的复制,能明显降低单纯疱疹病毒性脑炎小鼠的死亡率.     

特异性干扰ICP27基因的siRNA对HSV-1病毒复制的影响

针对单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus 1,HSV-1)的ICP27基因和其他疱疹病毒相关基因的高度保守区设计小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),研究其抑制病毒复制的效果。首先构建相应的小发夹RNA(small hairpin RNA,shRNA),然后通过病毒滴度测定、real-time PCR和细胞致病变效应(cytopathic effect,CPE)检测所设计的siRNA抑制病毒复制的能力。结果显示,所设计的shRNA-2(靶序列起始位置815)和shRNA-3(靶序列起始位置1 367)具有明显地抑制病毒复制的效果。尤其是shRNA-3,抑制病毒复制的效果更明显,在病毒滴度实验中,与阴性对照相比,其抑制倍数为81,同时可以下调ICP27基因的mR NA表达水平。实验结果表明shRNA-3能够显著抑制HSV-1病毒复制的能力,可以作为HSV-1感染性疾病的补充治疗手段,其对应的靶序列可以作为抗HSV-1新的靶标。     

基因疗法中非整合型病毒载体的应用

在过去的十年间,基因疗法在肿瘤、遗传性疾病以及传染性疾病等多个领域的临床治疗中取得了突破性进展。在基因疗法中,广泛地应用了各种各样的病毒载体,按其生活史可分为整合型病毒载体(如γ-逆转录病毒、慢病毒)和非整合型病毒载体(如腺病毒、腺相关病毒、单纯疱疹病毒和痘病毒)。腺病毒、单纯疱疹病毒是溶瘤病毒中最常用的病毒载体,能优先感染肿瘤细胞,经复制后造成其裂解。这些病毒的特点是基因携带量大,但只能维持较短时间的外源性基因表达,加之免疫原性较强,因此需要采取肿瘤内注射的给药方式。腺相关病毒则由于其较低的免疫原性和持久的表达能力而被广泛使用于遗传缺陷性疾病的基因替代疗法中。现就用于直接在体细胞内进行稳定表达的非整合型病毒载体作一概述。     

紫球藻胞外多糖抗柯萨奇B_3病毒活性研究I

要 :采用MTT法研究了紫球藻胞外磺酸化多糖 (ESPS)的细胞毒性 ,在高浓度 (2 5 0 μg/mL)下尚未发现对HEp 2细胞有明显毒性。CPE抑制法发现ESPS能明显抑制细胞的CPE ,在综合、预防、治疗和直接作用四种给药方式下都具有抑制CVB3 的作用。直接作用法的活性最高 ,TI值高达 192 0 6 ,是阳性对照药病毒唑的 31倍。ES PS组分中分子量越大 ,抗病毒活性越高 ,其中分子量大于 30 0k的组分 ,IC50 可低至 0 .75 4 μg/mL ,TI值高达331. 6 ,是病毒唑的 5倍多。结果表明ESPS有强烈的抗CVB3 病毒活性 ,作用机制可能是干扰病毒在细胞表面的吸附及侵染过程。     

N-乙酰半胱氨酸体外对流感病毒H1N1的抑制作用

目的探讨N-乙酰半胱氨酸（N—acetylcysteine,NAC）在体外对流感病毒H1N1的抑制作用。方法采用MTT法、鸡胚接种法和免疫荧光法,观察NAC对流感病毒HlM的抑制作用。采用血球凝集试验、神经氨酸酶活性抑制试验和透射电镜负染技术,初步探讨NAC对流感病毒HlM的抑制机制。结果NAC在MDCK细胞上的最大无毒剂量是6．25mg／mL;流感病毒H1Nl在MDCK细胞上的半数致死感染浓度（TCID-50）为1012-2.25／100μ;在三种作用途径下（治疗性给药、预防性给药和直接灭活后给药）,NAC明显抑制了流感病毒HlNl对MDCK细胞的感染,细胞存活率分别为91．88％、93．21％、94．67％,在对照组,流感病毒H1N1感染后的细胞存活率为28．32％,两者相比差异有统计学意义（P〈0．05）;免疫荧光结果显示,与病毒对照组形成的强特异性荧光相比,三种作用途径感染MDCK细胞后的特异性荧光明显减弱;鸡胚培养法的结果显示,NAC明显抑制了流感病毒H1N1在鸡胚内的增殖,实验组血凝效价低于1：2,对照组血凝效价为1：1024;神经氨酸酶活性抑制试验和透射电镜的结果显示,NAC能够明显抑制流感病毒川N1的神经氨酸酶活性,对流感病毒H1N1的病毒体结构也有明显的破坏作用。结论NAC在体外对流感病毒川N1有明显的抑制作用,其抑制机制可能与NAC对流感病毒血凝素和神经氨酸酶活性抑制及病毒体的直接破坏有关。     

体外抑制EB病毒药物的应用研究

EB病毒容易感染人,与人类许多疾病高度相关,严重威胁人类健康。目前尚无有效的预防EB病毒感染的措施且针对EB病毒的药物比较局限,故而对EB病毒感染进行治疗显得十分重要。近年来研究发现,许多药物在体外可对EB病毒有很好的抑制效果。仅就体外抑制EB病毒的药物,如核苷类似药、硼替佐米、寡脱氧核苷酸、乳铁蛋白、砷剂、维生素甲类化合物、亚硒酸钠、某些中草药等的近期研究现状进行综述。