水稻120KDa光敏色素的提纯

采用改进的 Grimm 等方法,从晚粳“农垦58”水稻(Oryza sativa L.subsp.japonica,var.nongken 58)6天龄黄化苗中提取光敏色素。经液氮深冻的胚芽鞘在含有乙二醇和苯甲基磺酰氟化物等、pH 为8.45的 Tris 缓冲液中匀浆。对聚乙烯亚胺沉淀后的提取液照射红光,经硫酸铵盐析后、通过羟基磷灰石柱层析梯度洗脱。合并的含有光敏色素的洗脱液再经硫酸铵盐析和三次不同体积、不同浓度的磷酸缓冲液洗涤。最后溶于 HEPES 缓冲液的天然光敏色素(120kDa)经 SDS-PAG 电泳检测为一条带,并具有经典的纯净光敏色素的吸收光谱,产率达12%。     

叶绿体色素提取方法的改进

用乙醇提取叶绿体色素,通常采用的方法是：取新叶１０ｇ,放入研钵中,加９５％乙醇２０ｍｌ,研磨至匀浆,经过滤后制取叶绿体色素提取液。在一般情况下,用以上方法不能充分地将色素提取,往往液体中含杂质多（即使用水清洗的叶片也如此）,溶液浑浊,绿色不浓,很难得到理想的叶绿体色素提取液,影响了实验效果。我们经过反复实验,将以上方法进行了一些改进,色素的提取效果很好,现简要介绍一下：首先取新鲜叶片１０ｇ,放入研钵中,加入９５％乙醇１５ｍｌ,研碎后将钵中液体倒掉,保留碎叶（此过程可破坏叶片表面角质层,促进色素外…     

日本血吸虫琥珀酸氧化酶的研究

应用測压法和分光光度法証明了日本血吸虫含有琥珀酸氧化酶,琥珀酸脫氫酶,琥珀酸-細胞色素c还原酶和細胞色素氧化酶等完整系統。血吸虫的琥珀酸氧化酶活力与細胞色素c浓度有关,浓度增加,酶活力上升,在0.4×10~(-5)—2×10~(-5)M之間与酶活力成直綫关系。酶活力与磷酸盐浓度亦有一定关系,浓度愈低,酶活力愈強。在酶作用的最适条件下(琥珀酸鈉,0.02M;細胞色素c,2×10~(-5)M;磷酸盐緩冲液,0.01M,pH7.4)測定合抱成虫匀浆的酶活力,結果为:氧耗量Qo_2=30.3微升/小时/毫克氮量;琥珀酸耗量Q_S=322微克/小时/毫克氮量;延胡索酸产生量Q_F=157微克/小时/毫克氮量。当雌雄虫分別測定时,在等氮量基础上,雌虫酶活力比雄虫高。丙二酸鈉,二乙基二硫代氨基甲酸鈉(銅試剂)和氰化物都能強烈地抑制琥珀酸氧化酶活力。治疗血吸虫病常用的几种銻剂在2×10~(-3)M时,体外試驗,对此酶活力无明显的抑制作用。此外,氰化物除抑制細胞色素氧化酶外,还能抑制琥珀酸脫氫酶(用甲烯蓝方法測定)。与細胞色素c相似,維生素K_3亦能刺激匀浆的呼吸。此外,我們发現了日本血吸虫匀浆經过加热处理后,可以分离出一种耐热的“还原物貭”,对細胞色素c有化学的还原作用。本文还討論了血吸虫琥珀酸的代謝途径和細胞色素系統在呼吸鏈中可能占有重要地位。     

"叶绿素的提取和分离"实验的一种方法

我们以灯芯柱纸层析法为基础,进行该实验,取得了较好的效果,现介绍如下。　　具体的方法是：①取洗净、揩干的天竺葵叶片５ｇ剪碎,加８５％丙酮５ｍｌ研成匀浆;②取滤纸一张剪成２．５ｃｍ×５．５ｃｍ的长方形,从一端开始卷起,卷成柱状,卷时将两边对齐,捻紧备用;③将纸芯插入滤纸中央并立放于培养皿上,培养皿内装有四氯化碳（不用汽油）,纸芯下端浸入四氯化碳中;④用尖镊夹取研好的色素匀浆均匀堆于纸芯周围,盖上皿盖,静置观察。１５ｍｉｎ左右色素可充分扩展,分离结束。此实验方法具有以下特点：①克服了提取液中色素量少…     

青霉PT95菌株菌核内产生类胡萝卜素的研究

从土壤中分离到一株经鉴定属于Penicilliumthomiiseries的菌株PT95,该菌株在6种固体培养基上都能形成大量的橙红色菌核,其中在察氏培养基上形成的菌核量最大,而在马铃薯葡萄糖琼脂培养基上形成的菌核的类胡萝卜素含量最高。培养基初始pH对菌核形成和色素含量无明显影响,但对菌落生长速度有显著影响。光照培养对菌核形成和色素含量无明显影响。薄层色谱分析表明,PT95菌株菌核内产生的类胡萝卜素由两种色素成分组成,其中β-胡萝卜素占总色素量的64．3％。     

亚硫酸氢钠测序法检测水稻FIE基因CpG岛甲基化状态

建立了适用于水稻基因组特定基因甲基化检测的亚硫酸氢钠测序法,并利用此方法对FIE2A基因CpG岛部分片段的甲基化差异进行了研究。采用CTAB法提取水稻叶片和胚乳细胞的基因组DNA,经亚硫酸氢钠化学修饰后,针对已修饰的FIE基因序列设计特异引物并结合巢式PCR扩增,TA载体克隆、测序,最后对测序结果进行分析。结果表明巢式PCR能够增加特异性产物的产生,FIE基因CpG岛在对称的CG和CNG位点甲基化水平较高,而在非对称CNN位点甲基化水平最低,此外在叶片中的平均甲基化水平较高。由此表明本研究建立的亚硫酸氢钠测序法适用于水稻基因组特定基因甲基化状态的检测。     

基于重组大肠杆菌无细胞体系生产吡咯喹啉醌

采用无细胞体系生产吡咯喹啉醌(pyrroloquinoline quinone,PQQ)。首先将肺炎克雷伯氏菌PQQ基因簇pqqABCDEF置于半乳糖苷酶启动子之下,构建表达载体,经转化筛选获得重组大肠杆菌。制备重组菌的细胞匀浆,体外反应后测定PQQ产量。结果显示,与活体重组菌相比,无细胞体系的PQQ产量提高约30%,表明胞内存在PQQ合成的限速反应,而无细胞体系可解除此限速反应。     

"叶绿体色素提取与分离实验"的好材料——胡萝卜叶、法国梧桐叶

本人采用胡萝卜叶、法国梧桐叶、胡萝卜肉质根与菠菜叶等材料进行了“叶绿体色素提取与分离实验”的对比实验 ,结果表明胡萝卜叶、法国梧桐叶的实验效果很好 ,能清楚地观察到 4种色素的分层、颜色及位置 ,现介绍如下。1　色素的提取方法　　分别称取洗净、擦干的上述新鲜植物材料各 2 g,剪碎后放入不同研钵中 ,然后各加入少许碳酸钙、石英砂、3 ml丙酮和 3 ml石油醚 ,研磨成匀浆 ,再用双层纱布过滤得到滤液。静止片刻 ,滤液分为两层 ,上层液色深即为石油醚色素提取液。2　层析方法及装置用 50 0 ml、高 1 1 .5cm的烧杯作为层析容器。取长1 2…     

几种诱变因子对龟裂链霉菌原生质体的影响

作者应用通电、ＵＶ、ＮＴＧ和亚硫酸氢钠等诱变因子对土霉素产生菌——龟裂链霉菌１３８—ｌ原生质体进行处理。结果表明,各种诱变因子在对原生质体致死率５０％左右时具有较好的诱变效应。经亚硫酸氢钠＋ＬｉＣｌ处理获得的Ｃｌ１８菌株通过１６５００１发酵罐试验,最高发酵水平达３３３３０ｕ／ｍｌ,平均发酵水平为３０５４２．５ｕ／ｍｌ,比出发菌株１３８—１提高２０．６％。     

鼻饲极低蛋白匀浆联合α酮酸疗法对老年慢性肾功能不全患者营养状况的影响

目的：评估鼻饲极低蛋白匀浆饮食联合α酮酸疗法是否延缓慢性肾功能衰竭（CRF）老年患者病情发展,改善患者营养状况。方法：将我院收治的无法耐受常规低蛋白饮食治疗的肾功能衰竭的老年患者,共24例,随机分为两组,每组12例,一组病人给予极低蛋白匀浆饮食联合α酮酸治疗,为α酮酸组;一组病人给予单纯低蛋白匀浆饮食,为低蛋白组,均进行了6个月的治疗,然后调查患者营养状况。结果：治疗后两组患者的血清总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、前白蛋白（PA）水平较治疗前上升,无明显营养不良,但α酮酸组上升幅度更大（P〈0.05）。与治疗前相比,α酮酸组患者经治疗后,血胆固醇（CH）、三酰甘油（TG）、磷（P）水平均下降,血钙（Ca）水平上升（P〈0.05）,上述指标在低蛋白组无显著性改变。两组患者治疗后血肌酐（Cr）和尿素氮（BUN）在治疗期间均保持稳定。结论：①极低蛋白匀浆饮食联合α酮酸疗法和单纯低蛋白匀浆饮食治疗在短期内均可延缓慢性肾功能不全进展并改善营养状况,而且前者效果更优;②联合α酮酸治疗对改善血脂和钙磷代谢紊乱具有明显作用,单纯低蛋白肠内营养治疗无显著作用。     

亚硫酸氢钠对鱼腥藻生长的影响

在不同条件下研究了光呼吸抑制剂——亚硫酸氢钠对鱼腥藻(Anabaena)生长的影响。结果表明亚硫酸氢钠的浓度在1—10μg/ml时都提高了鱼腥藻的生物量,浓度在2.5和5.0μg/ml的效果优于其他浓度。亚硫酸氢钠提高了鱼腥藻叶绿素a的含量,但是,对蛋白质的含量没有的影响。亚硫酸氢钠用于增加鱼腥藻生物产量是有意义的。     

萝卜色素的分离、纯化及其性质研究

“心里美”萝卜酒精提取物,经薄层层析、高压液相层析纯化后可得到天然色素为粉红色针状结晶。该色素性质稳定、耐温、耐光,颜色随pH值的不同而变化。经红外光谱分析和质谱鉴定,初步推导其结构可能为报春花色素。     

琥珀酸脱氢酶的研究——琥珀酸脱氢酶还原细胞色素c的性质

新鲜制备之水溶性琥珀酸脱氢酶能还原细胞色素c,此还原细胞色素c 之能力与其重组琥珀酸氧化酶系的能力呈平行关系,二者均很快减弱,数小时之内即全部丧失。还原细胞色素c 之能力受金属螯合剂如邻二氮菲,硫茂甲酰基三氟丙酮及组氨酸等试剂的抑制,抗霉素A 对它则无影响。除了能还原细胞色素c 之外,其他如氮蓝四唑、2,6-二氯酚靛酚均可作为受体,并且亦很快失活。泛醌-5不能被还原,以其他受体测活力时,泛醌-5亦无激活作用。经分析,其异咯嗪、非血红素铁以及不稳定硫之比为1∶(8～10)∶10。     

琥珀酸脱氢酶的研究——琥珀酸脱氢酶还原细胞色素c的性质

新鲜制备之水溶性琥珀酸脱氢酶能还原细胞色素c,此还原细胞色素c之能力与其重组琥珀酸氧化酶系的能力呈平行关系,二者均很快减弱,数小时之内即全部丧失。还原细胞色素c之能力受金属螯合剂如邻二氮菲,硫茂甲酰基三氟丙酮及组氨酸等试剂的抑制,抗霉素A对它则无影响。除了能还原细胞色素c之外,其他如氮蓝四唑、2,6-二氯酚靛酚均可作为受体,并且亦很快失活。泛醌-5不能被还原,以其他受体测活力时,泛醌-5亦无激活作用。经分析,其异咯嗪、非血红素铁以及不稳定硫之比为1:(8～10):10。     

鼻饲极低蛋白匀浆联合α 酮酸疗法对老年慢性肾功能不全患者 营养状况的影响

目的:评估鼻饲极低蛋白匀浆饮食联合α酮酸疗法是否延缓慢性肾功能衰竭(CRF)老年患者病情发展,改善患者营养状况.方法:将我院收治的无法耐受常规低蛋白饮食治疗的肾功能衰竭的老年患者,共24例,随机分为两组,每组12例,一组病人给予极低蛋白匀浆饮食联合α酮酸治疗,为α酮酸组;一组病人给予单纯低蛋白匀浆饮食,为低蛋白组,均进行了6个月的治疗,然后调查患者营养状况.结果:治疗后两组患者的血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、前白蛋白(PA)水平较治疗前上升,无明显营养不良,但α酮酸组上升幅度更大(P＜0.05).与治疗前相比,d酮酸组患者经治疗后,血胆固醇(CH)、三酰甘油(TG)、磷(P)水平均下降,血钙(Ca)水平上升(P＜0.05),上述指标在低蛋白组无显著性改变.两组患者治疗后血肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)在治疗期间均保持稳定.结论:①极低蛋白匀浆饮食联合α酮酸疗法和单纯低蛋白匀浆饮食治疗在短期内均可延缓慢性肾功能不全进展并改善营养状况,而且前者效果更优;②联合α酮酸治疗对改善血脂和钙磷代谢紊乱具有明显作用,单纯低蛋白肠内营养治疗无显著作用.     

鉴别无色素性恶性黑色素瘤方法的探讨

无色素及少色素性恶黑鉴别诊断时,（１）组织化学铁反应,褪色素和黑色素银染对证实瘤细胞中黑色素是有帮助的,但不能从无色素性恶黑中检出黑色素。因此对无黑色素恶黑的诊断和鉴别诊断帮助不大。网状纤维染色良性病均有增加,而恶黑几乎没有增加或仅极少增加。因此网状纤维染色有助于良恶性的鉴别。（２）免疫组化Ｓ－１００１８例恶黑及６例良性痣均显示阳性,这对无色素恶黑的诊断是有价值的,但对色素痣的恶变帮助不大。１６例恶黑中１４例色素性与１０例无色素性恶黑ＨＭＢ４５均显示阳性,证明两者有共同抗原,总阳性率８７．５％,６例良性痣均为阴性,证明无ＨＭＢ４５抗原。结果提示ＨＭＢ４５免疫组化检测不仅对无色素及少色素性恶黑的诊断与鉴别诊断实用性大,还可以用于对恶黑与良性痣、良性痣恶变的鉴别。（３）本组４例无色素性恶黑电镜下均找到前黑色素小体。因此在其他方法诊断困难时,应用电镜检查对确诊具有决定性作用。     

微粒体细胞色素P-450、NADPH-细胞色素P-450还原酶的纯化与重组活性

经苯巴比妥钠诱导的雄性大白鼠的肝微粒体纯化的细胞色素P-450同功酶组份,经SDS-PAGE鉴定呈电泳纯,分子量为55kD。部分纯化的NADPH-细胞色素P-450还原酶,含72和77kD两个蛋白质组分。上述细胞色素P-450和NADPH-细胞色素P-450还原酶与卵磷脂制备的脂质体重组后的活性试验表明,对艾氏剂有环氧化作用,对环已烷有羟化作用,对溴氰菊酯的羟化作用微弱。当重组系统中缺少细胞色素P-450组份时,对环已烷不再起作用。同时还研究了纯化的细胞色素P-450的光谱特性。     

一株黑果枸杞内生真菌RML6的黄色素稳定性研究

植物内生真菌具有产天然活性物质的潜能,亦是天然色素的来源之一,本研究从黑枸杞叶部分离筛选得到产黄色素的内生真菌RML6,经鉴定该菌为Coprinellus radians,该菌株所产黄色素在341 nm波长处有最大吸收峰。从温度、pH、光照、金属离子、氧化剂与还原剂等方面探究黑枸杞内生真菌RML6所产黄色素的稳定性。结果表明该色素在自然光下放置8 h黄色素光吸收值无显著变化,但对紫外较为敏感应尽量避光存放;在pH 6~10,20~100℃下不受太大影响;金属离子中,Na~+、K~+、Mg~(2+)、Cu~(2+)、Fe~(3+)对该色素有护色或增色作用,Zn~(2+)、Mn~(2+)、Ca~(2+)对色素有明显的影响;H_2O_2、NaHSO_3对该色素有较强的破坏力;常见几种添加剂对色素无太大影响,同时蔗糖对其还具有明显的增色效应。该色素可广泛用于多个用途。     

榕树叶红色素的提取及其稳定性研究

为生产各种食用品、化妆品、医药药品等色素新产品提供重要原料,研究榕树叶红色素的提取条件和稳定性。以水作提取剂,在室温下浸提24h,用紫外分析法研究色素的稳定性。色素在330am有最大吸收峰,该色素水溶性较好,pH值对色素的稳定性影响较大,但热稳定性良好。苯甲酸钠、柠檬酸、醋酸、蔗糖及葡萄糖等食品添加剂对色素无明显影响,淀粉对其影响较大,耐光性较差。氧化剂、还原剂中除抗坏血酸对色素的影响明显外,其他均无明显影响,金属离子对其影响较小。     

硬紫草悬浮细胞原生质体培养形成愈伤组织及其体细胞克隆变异

从硬紫草悬浮细胞系ＡＲ１２６分离原生质体,只有用葡萄糖作渗透剂经琼脂糖－液体双层培养才能获得可见的原生质体克隆,从中选择３４个克隆,用两阶段法生产紫草素及其衍生物,测量了它们在两阶段的细胞生长量及生产阶段的色素含量,并比较了其分布规律,其中最好的原生质体克隆色素生产量是起始悬浮系的２．５４倍,经培养４０ｄ达４４．０６ｍｇｇ－１ＦＷ,而且其生产量在所测的８０ｄ内无明显下降。