有机溶剂微扰葡萄糖淀粉酶时的紫外、荧光和红外光谱

本文结果表明:(1)酶体系中随有机溶剂含量增加,紫外吸收亦随之增加,表明芳香氨基酸更充分地暴露,分子更趋于伸展;(2)酶的荧光发射随有机溶剂量增加而稍有变化,但当溶剂量达到一定值时[对乙二醇为35％(V/V)],荧光发射强度显著增加,表明酶分子构象受溶剂影响有一个极限值;(3)酶的傅立叶红外光谱表明,有机溶剂侧链的疏水性愈强,微扰后C=O,C—N,O—H等共价键的吸收峰变得愈宽,愈强,肽链愈伸展。     

阳离子交换树脂对甜菜碱的吸附特性研究

目的：阐明阳离子交换树脂吸附甜菜碱的机理和特性,获得从甜菜废糖蜜中提取分离甜菜碱的工艺路线。方法：采用雷氏盐比色法测定甜菜碱含量,根据吸附等温线的图形拟合方程。结果：阳离子交换树脂吸附甜菜碱是指数型的吸附等温线类型,并且可以与Freundlich方程很好地拟合。采用阳离子交换树脂从废糖蜜中分离甜菜碱,树脂动态吸附量最大为40mg/ml,吸附流速为40ml/min,盐酸洗脱浓度为1.5mol/L,洗脱速度为30ml/min进行解吸时,解吸率为33%,甜菜碱提取率为58%。结论：阳离子交换树脂吸附甜菜碱的特性为从废糖蜜中提取分离甜菜碱提供了理论依据,使工艺操作简单、易行。     

基于拉曼光谱的鼻咽癌细胞株总蛋白放射敏感性研究

本文以鼻咽癌细胞株CNE2为放射敏感性的研究对象,经不同剂量X射线照射及不同时间培养后分别提取总蛋白,用共聚焦显微拉曼光谱仪检测其拉曼光谱。统计分析表明:被测样品的拉曼光谱中观察到一些可以归属于蛋白质物质的较为明显的基团频率振动峰;不同剂量的X射线照射后,总蛋白质的平均拉曼光谱与对照组谱形基本一致,但与对照组间的光谱存在着对应峰信号强度的不同。实验提示:照射后谱峰强度的增大或减小,提示着相关物质含量有所改变。分析照射后癌细胞总蛋白拉曼光谱的变化情况,结合数学统计方法,以探寻放射敏感性的特征拉曼标志,可以作为研究肿瘤放射敏感性的手段之一。     

眼镜蛇毒细胞毒素-4N的分离纯化及其对HSC-T6细胞的作用

为了得到高纯度眼镜蛇毒细胞毒素-4N,探索眼镜蛇毒中细胞毒素-4N(cytototxin-4N,CTX-4N)对大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC-T6)的增殖抑制作用。本研究采用DEAE-Sepharose CL-6B阴离子交换柱、Spehadex G-50凝胶层析柱、Macro-prep High S阳离子交换柱结合的方法对眼镜蛇毒蛋白进行分离纯化。在每一步分离纯化过程中,采用CCK-8法检测各蛋白峰组分对HSC-T6细胞的增殖抑制作用活性,收集增殖抑制作用最强的CTX-4N峰。经SDS-PAGE电泳鉴定蛋白纯度,Nano-LC-ESI-MS/MS质谱方法鉴定其组分,Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂检测CTX-4N对肝星状细胞(HSC-T6)的增殖抑制作用,从而确定其药理作用。经DEAE-Sepharose CL-6B阴离子交换柱、Spehadex G-50凝胶层析柱、Macro-prep High S阳离子交换柱分离纯化后得到一个电泳纯度的蛋白,蛋白质谱鉴定为CTX-4N,分子量约为9.605 k D。不同浓度的CTX-4N作用HSC-T6细胞24 h后,随着其浓度的增大对HSC-T6细胞增殖抑制作用越强,呈剂量-效应关系,IC_(50)为(12.836±0.045)μg/m L。因此,本研究建立一种眼镜蛇毒细胞毒素-4N的分离纯化方法,并确定了其对HSC-T6细胞的增殖抑制的药理作用随浓度的增加而增强,为进一步研究其药理作用提供一定的理论依据。     

不同生长阶段青枯菌的高效离子交换色谱表征

采用高效离子交换色谱和激光光散射仪对不同生长阶段的青枯菌进行色谱表征。青枯菌经过色谱分离得到3个特征峰。通过对延滞期、对数生长期和稳定期青枯菌细胞浓度、发酵液pH值、细胞表面黏附的胞外酸性多糖(EPSⅠ)含量与青枯菌色谱行为的关系研究,发现在8h时,青枯菌运动能力强,细胞表面EPSⅠ少,吸附力弱,绝大多数菌体直接随流动相流出形成峰1;随着培养时间延长,细胞表面黏附的EPSⅠ量增多,与树脂吸附力增强,保留时间延长。因此分析3个色谱峰的形成与青枯菌的运动性、以及细胞表面EPSⅠ与阴离子交换树脂的吸附作用有关。并通过比较3个色谱峰青枯菌细胞表面EPSⅠ含量的差异和观察青枯菌经过4%甲醛固定处理后色谱行为的变化加以进一步验证。高效离子交换色谱为细菌完整细胞的研究提供了一种新的分析方法。     

三七中三七素的分离纯化与结构分析

以三七(Panaxnotoginseng)为材料,经醇提、水提,得到三七素粗提物,用乙醇沉淀、正丁醇萃取去除皂苷类成分,经阳离子交换树脂柱层析,得到三七素.三七素经初步纯化含量从4.43%提高到13.98%.经过离子交换树脂柱分离后含量提高到96.46%.通过重结晶得到的无色板状晶体三七素的结构经过红外光谱,核磁共振光谱及质谱加以鉴定。     

脲对果菠萝蛋白酶活力与构象的影响

本文用荧光光谱,紫外差示光谱和CD谱研究果菠萝蛋白酶在不同浓度的脲溶液中的构象及酶活力的变化情况。酶的荧光强度随脲浓度增大而明显增加,8mol/L脲使荧光强度增强65％,发射峰出现红移。差示谱表明在232nm和288nm出现二个正峰,它们均随脲浓度增大而加剧,前者与主链构象变化有关,而后者与生色基团(Trp、Tyr)的微环境变化相关。CD谱表明:天然酶在208nm和225nm处有二个负峰,脲变性后,225nm的负峰基本上不随脲浓度增大而变化,但208nm峰则明显发生变化并逐渐出现红移,6mol/L以上此峰则完全消失。     

基于氢氘交换核磁共振技术研究蛋白质与阳离子交换介质的相互作用

原位实时捕捉多孔介质内的蛋白结构变化信息是蛋白质层析失活机理研究中的难点。为此,本文发展了蛋白质氢氘交换与核磁共振(Nuclear magnetic resonance,NMR)相结合的新型蛋白质液固界面表征路线。研究了溶菌酶在溶液态以及在阳离子交换介质内部吸附态时的去折叠行为,并揭示了蛋白与阳离子交换介质(SP Sepharose FF)相互作用机理。溶液态溶菌酶的一维核磁共振氢谱动力学显示蛋白质去折叠可导致残基暴露进而加快氢氘交换速率。吸附态溶菌酶的二维氢-氢全相关谱图(Total correlation spectroscopy,TOCSY)以及残基峰强度显示,溶菌酶在吸附态时的去折叠呈区域性,无规则卷曲(Coil,bend,and turn)片段的酰胺氢信号更容易失去,而二级结构域(α-helix,β-sheet)对酰胺氢信号保护更好。最终,利用蛋白表面静电势模拟计算结合氢氘标记的蛋白核核磁数据可确定出溶菌酶与阳离子交换介质的作用位点。这对于深刻理解层析过程中蛋白与层析介质微观作用机理以及层析过程中吸附剂的选择、设计具有重要意义,也为获取蛋白质与生物材料之间相互作用研究提供新的有效工具。     

硒与红细胞血影收缩蛋白(Spectrin)作用导致构象变化

从人红细胞膜提取血影收缩蛋白(Spectrin),研究不同浓度Na_2SeO_3与其作用后的构象变化.用N—[3—芘]—马来酰胺(N-[3-P]M)作荧光探针标记Spectrin,经SDS处理后,其荧光强度随硒的浓度增加而逐步降低.但未经SDS处理的样品,加入0.2—1.0ppm的Na_2SeO_3后反而使荧光强度有所增加.Spectrin经硒作用与未经作用相比较在色氨酸内源荧光、丹磺酰氯(DNS-Cl)标记后(DNS-Spectrin)的荧光光谱以及色氨酸残基与DNS基团间的能量转移实验结果均有明显的差别.这反映Spectrin的巯基经与硒作用后会导致构象的变化.     

SB202190 调节蚕豆保卫细胞中SA 诱导H2O2 产生

运用激光共聚焦扫描技术, 在p38 MAP激酶专一抑制剂SB202190处理下, 探索植物促分裂原活化蛋白激酶(mitogenactivated protein kinase, MAP激酶)介导蚕豆(Vicia faba)保卫细胞中H2O2为代表的活性氧(reactive oxygen species, ROS)信号机制, 发现: p38 MAP激酶专一抑制剂SB202190处理没有导致蚕豆保卫细胞中H2O2和Ca2+探针荧光强度增强, 与水杨酸 (salicylic acid, SA) 或脱落酸 (abscisic acid, ABA) 迅速加强2种探针荧光强度形成鲜明对比; 而该抑制剂分别与SA和ABA共同处理, 前者H2O2探针荧光强度没有增加, 而后者荧光强度仍然能够增加; 而进一步使用Ca2+螯合剂BAPTA和SB202190 ＋SA共同处理, H2O2探针荧光强度没有增加。这些结果初步表明: 无论胞质Ca2+浓度高低, SB202190调节蚕豆保卫细胞中SA诱导H2O2产生, 但是不调节植物逆境信使分子ABA 此类的反应。因此推测, 植物细胞中可能有类似动物和酵母细胞中的p38MAP激酶类, 并可能专一调节植物保卫细胞中H2O2信号通路。据我们所知, 这是首次报道SB202190和SA共同调节植物保卫细胞中ROS信号过程。     

NO可能作为H2O2的下游信号介导ABA诱导的蚕豆气孔关闭

ABA、H2O2和硝普钠(SNP)均能诱导蚕豆气孔关闭.NO的清除剂c-PTIO可以减轻由ABA或H2O2所诱导的蚕豆气孔关闭的程度,而过氧化氢酶(CAT)则不能减轻NO诱导的气孔关闭程度.激光共聚焦显微检测结果显示,10μmo1/L的ABA处理后,胞内H2O2的产生速率明显高于NO的产生速率;CAT几乎可完全抑制ABA所诱导的DAF的荧光增加;外源H2O2能显著诱导胞内DAF的荧光增加;c-PTIO对ABA诱导的DCF荧光略有促进作用,但外源SNP不能诱导胞内DCF荧光增加.这些结果表明,在ABA诱导气孔关闭过程中,H2O2可能在NO的上游起作用并受NO的负反馈调节.     

离子交换吸附L-瓜氨酸的热力学和动力学

研究不同树脂对L-瓜氨酸的吸附能力,发现D001树脂对L-瓜氨酸的吸附效果最好。采用静态吸附法研究L-瓜氨酸在D001型阳离子交换树脂上的热力学和动力学特性,考察不同温度、pH和溶液初始浓度对离子交换过程的影响。结果表明:L-瓜氨酸在D001型阳离子交换树脂上的吸附等温线符合Freundlich和Langmuir等温吸附方程,其中,Langmuir吸附方程能更好地描述该过程。吸附过程焓变ΔH=-45.01 k J/mol(0),说明该吸附过程放热。树脂对L-瓜氨酸的吸附过程速度控制步骤为颗粒扩散。随着温度升高,树脂的最大平衡吸附量减小;当pH=6时,树脂达到最大吸附量135.5 mg/g;L-瓜氨酸溶液初始质量浓度为8 g/L时,扩散系数达到最大,为8.53×10-3,吸附速率最快。     

类产碱假单胞菌杀虫物质的分离纯化和鉴定

类产碱假单胞菌是一株昆虫病原菌,该菌对草地蝗虫、竹蝗等具有良好的致死作用,经鉴定,该菌对蝗虫具有毒杀作用的物质为其代谢分泌到胞外的一种蛋白质。类产碱假单胞菌培养物经硫酸按沉淀,SephadexG-100凝胶过滤及DEAE-SephadexA-50阴离子交换柱层析,纯化获得的杀虫蛋白只含一种亚基,分子量25100,等电点5．16,含17种氨基酸,其中谷氨酸含量最高,胱氨酸含量最低,最大吸收峰为278．3nm。     

植物乳杆菌胞外多糖包覆的高稳定性硒纳米颗粒的制备及其抗氧化活性的研究*

目的:以植物乳杆菌胞外多糖(EPS)作为稳定剂和包覆剂,安全、简便地制备高稳定性胞外多糖-纳米硒复合物(E-SeNPs),并研究其稳定性和抗氧化活性。方法:将植物乳杆菌胞外多糖引入亚硒酸钠与抗坏血酸的反应体系中,室温合成E-SeNPs。采用透射电子显微镜(TEM)、动态光散射(DLS)、紫外可见光谱(UV-vis)和傅里叶变换红外光谱(FT-IR)等技术对E-SeNPs的尺寸、形貌、结构及稳定性进行研究。此外,通过检测E-SeNPs的还原能力、ABTS⁺的清除率评估其体外抗氧化活性。结果:制备了具有良好分散性、稳定性的E-SeNPs,其平均粒径为(45.17±11.9)nm,带负电荷(-31.3mV)。同时,由于包覆作用,该E-SeNPs在水溶液中可稳定存在20天。最后,相同浓度下,E-SeNPs的还原力、ABTS⁺清除率都明显高于EPS和硒纳米颗粒(SeNPs),表现出了良好的抗氧化活性。结论:获得了一种新型的SeNPs稳定剂和包覆剂,简便、安全地制备了高稳定性、水分散性良好且具有良好抗氧化活性的SeNPs。     

植物乳杆菌胞外多糖包覆的高稳定性硒纳米颗粒的制备及其抗氧化活性的研究*

目的:以植物乳杆菌胞外多糖(EPS)作为稳定剂和包覆剂,安全、简便地制备高稳定性胞外多糖-纳米硒复合物(E-SeNPs),并研究其稳定性和抗氧化活性。方法:将植物乳杆菌胞外多糖引入亚硒酸钠与抗坏血酸的反应体系中,室温合成E-SeNPs。采用透射电子显微镜(TEM)、动态光散射(DLS)、紫外可见光谱(UV-vis)和傅里叶变换红外光谱(FT-IR)等技术对E-SeNPs的尺寸、形貌、结构及稳定性进行研究。此外,通过检测E-SeNPs的还原能力、ABTS⁺的清除率评估其体外抗氧化活性。结果:制备了具有良好分散性、稳定性的E-SeNPs,其平均粒径为(45.17±11.9)nm,带负电荷(-31.3mV)。同时,由于包覆作用,该E-SeNPs在水溶液中可稳定存在20天。最后,相同浓度下,E-SeNPs的还原力、ABTS⁺清除率都明显高于EPS和硒纳米颗粒(SeNPs),表现出了良好的抗氧化活性。结论:获得了一种新型的SeNPs稳定剂和包覆剂,简便、安全地制备了高稳定性、水分散性良好且具有良好抗氧化活性的SeNPs。     

从火棘果中提取精氨酸的研究

以天然野生植物火棘果为原料分离提取精氨酸,考察了树脂类型、吸附方式、温度、pH值、洗脱液、脱色及精制方法等因素对提取精氨酸的影响,并对产物进行了分析鉴定。结果表明,在20℃、pH值7-8的条件下,选用D001型大孔阳离子交换树脂静态吸附,40 min即达到饱和;以3 mol.L-1氨水为洗脱液,流速控制在40 mL.h-1,精氨酸的洗脱率达到90%以上;采用711型阴离子树脂进行脱色,D001型大孔阳离子交换树脂动态精制,精氨酸的提取率达到95.83%。     

乌骨鸡黑素的一些基本结构特征的初步研究

应用元素分析、电子能谱(XPS)和红外光谱(IR)分析技术对乌骨鸡体内黑素结构特征进行了研究。元素分析结果得到黑素分子中C、H、N、O克原子比率的均值为10:12:1:3.该比值与动物性吲哚黑素的相应元素比例接近。XPS波谱显示出黑素中含有两种价态的硫(S~Ⅵ、S~Ⅰ),其中以低价态占优势,S2p电子结合能比人发黑素要大些。氮原子只有一种价态。IR光谱中有五组明显吸收峰,其中以主要表征吲哚环的1619—1632CM~(-1)处的吸引峰最强。以上结果初步表明出乌骨鸡黑素是以吲哚环为主体的异聚物。     

铜离子对钝顶螺旋藻完整细胞中光系统Ⅱ活性和藻胆体能量传递的影响

Cu2 抑制钝顶螺旋藻 ( Spirulina platensis)完整细胞中电子传递活性 ( H2 O→ MV) ,并抑制 PS 的放氧活性。低浓度的 Cu2 处理 ,使钝顶螺旋藻细胞中藻蓝蛋白荧光发射峰位置蓝移、发射强度改变 ,表明藻胆体中能量传递发生了变化。Cu2 处理纯化的藻蓝蛋白 ,使其在长波区 ( 61 6— 62 0 nm)吸收减小、荧光发射峰蓝移 ( 64 7nm→ 64 3nm) ;而变藻蓝蛋白不受影响 ,说明 Cu2 选择性作用于藻蓝蛋白。     

竹叶马兜铃化学成分的研究(Ⅱ)

<正> 竹叶马兜铃Aristolochia bambusifolia的化学成分,我们在前文曾报导,从其块根分得结晶性单体,已鉴定为D—甘露醇、马兜铃酸,马兜铃酸C、朱砂莲内酰胺,β—谷甾醇外,现本文通过光谱方法,报导其另一个化合物晶V1的鉴定。 晶V1:浅黄色针状结晶,溶于氯仿时呈蓝色荧光,熔点207～208℃。其红外光谱有C=O及CH_3吸收峰1710,1225,1060cm~(-1),无NO_2吸收峰。质谱m/z:340(M~+),     

一种被毛孢(Hirsutella sp.)培养液中自由基清除剂的分析、分离和制备

[目的]在一次对虫生真菌代谢物进行大规模的清除自由基活性物质筛选中,发现一种被毛孢(Hirsutella sp.)菌株RCEF0881发酵液中存在有较强的清除自由基活性物质.本研究目的是初步搞清这些活性成分的具体组成,并制备出一定量的纯品用于进一步的结构鉴定.[方法]用有机溶剂法提取活性成分;用二苯基苦基苯肼自由基(DPPH)酶标仪法和薄层色谱法进行活性测定;用高分辨液质联用方法进行活性成分初步分析和鉴定;用反相制备色谱法制备活性组分.[结果]提取实验结果表明具清除自由基活性的物质能较好地被乙酸乙酯提取出来;液相色谱-质谱-活性测定分析表明提取物中活性组分的可能分子式分别为C7H6O4、C8H8O3和C12H14N2O.结合色谱特性、紫外光谱特征、质谱碎片和数据库查询可初步推断它们分别为二羟基苯甲酸、羟基甲基苯甲酸和生物碱类物质,但具体结构还有待于进一步确认.从高效液相色谱和质谱离子流的峰面积可知上述3种活性物质中C12H14N2O的含量最高.本研究成功地用反相制备色谱制备出该天然活性组分的纯品.该3种清除自由基活性物质都是首次发现存在于虫生真菌的代谢物中.