雌核发育银鲫和两性融合发育鱼（红鲫和彩鲫）卵壳结构及其组成的比较研究

作者以两性融合发育鱼（红鲫、彩鲫）为对照,对雌核发育银鲫卵壳的表面结构及其可溶性蛋白的组成进行了研究：（１）雌核发育银鲫卵壳表面比较平滑,没有明显的嵴和沟;（２）雌核发育银鲫卵壳可溶性蛋白的含量略高于两性融合发育鱼（红鲫、彩鲫）,并且在ＩＩ区段存在一条分子量为１０万Ｄａｌｔｏｎ的特异蛋白区带。并对银鲫卵壳结构及组成的特殊性与银鲫卵初级控制作用间的关系进行了初步探讨。     

雌核发育银鲫和两性融合发育鱼（红鲫和彩鲫）卵壳结构及其组成的比…

作者以两性融合发育鱼为对照,对雌核发育银鲫卵壳的表面结构及其可溶性蛋白的组成进行了研究：（１）雌核发育银鲫卵壳表面比较平滑,没有明显的嵴和沟;（２）雌核发育银鲫卵壳可溶性蛋白的含量略高于两性融合发育鱼,并且在Ⅱ区段存在一条分子量为１０Ｄａｌｔｏｎ的特异蛋白区带。并对银鲫卵壳结构及组成的特殊性和银鲫卵初级控制作用间的关系进行了初步探讨。     

可诱导结瘤基因nodA的体外转录

报道结瘤基因nodA的体外诱导转录 :当转录体系中有一定量的调控蛋白NodD和植物诱导分子柚皮素 (naringenin )存在时 ,在体外转录的产物中始终存在着与体内转录相一致的特异产物。体外诱导转录表明 ,可诱导结瘤基因nodA在体内转录时 ,可能同样存在NodD蛋白、柚皮素诱导剂分子和nodA启动子的某种方式的直接相互作用     

大阪鲫鱼（Carassius Auratus cuvieri Temminck et．Schlegel）雌性特异血清蛋白生化特性及免疫细胞化学定位的研究

雌性特异血清蛋白存在于成熟雌性大阪鲫鱼血清中,雄鱼则无。注射雌二醇可诱导雄鱼及成熟雌鱼合成这种蛋白质并引起鱼肝细胞粗面内质网增加,糖元颗粒减少。从诱导的大阪鲫鱼血清中分离出电泳纯的雌性特异血清蛋白的分子量为４６６０００±４０００（ｎ＝１０）,电泳谱带有３条,用纯的雌性特异血海蛋白制备的兔抗鱼抗血清不与雄鱼血清发生免疫反应,而与正常成熟雌鱼及诱导鱼的血清形成１条免疫沉淀线。免疫细胞化学定位诱导及成熟雌鱼的肝细胞核外细胞质有阳性颗粒,在卵母细胞外围有成团的阳性颗粒分布。     

银鲫HIRA多克隆抗体的制备及组织特异性表达分析

Hir/Hira基因家族的成员广泛存在于多种生物体中,但有关其在生物体发育过程中的具体功能还不甚清楚.对果蝇的研究表明,dHira基因产物可能在受精时精核的解凝过程和雄性原核的正常形成过程中起重要作用.本研究组前期已经分别克隆出雌核发育银鲫和两性生殖彩鲫的Hira基因(cagHira 和caHira),本实验在银鲫cagHira基因的特异区域,设计一对引物,以银鲫成熟卵母细胞总RNA逆转录出的cDNA为模板,扩增出cagHira的特异片段.再将该片段克隆到原核表达载体pET-32a上,转化BL21(DE3)菌株,经诱导后表达出融合蛋白.分析表明,该融合蛋白主要以包涵体形式表达.以纯化的融合蛋白作为抗原去免疫小鼠,制备多克隆抗血清,经蛋白质印迹分析检测,该抗血清(稀释到1:2000)与包涵体蛋白识别反应良好,确定获得了具有高效价的特异性银鲫CAGHIRA多克隆抗体,为进一步研究HIRA在鱼类发育和雌核生殖过程中的作用奠定了基础.对银鲫HIRA蛋白的组织特异性表达分析发现,该蛋白仅在成熟卵巢组织中特异表达,故表明HIRA可能对鱼类卵子发生和/或早期胚胎发育具有重要作用.     

雌核发育银鲫和两性融合彩鲫卵母细胞体外诱导成熟过程中周期蛋白 …

采用体外诱导卵母细胞成熟技术,比较研究了雌核发育银鲫和两性融合发育彩鲫卵母细胞成熟过程中周期蛋白合成和ＭＰＦ活性变化情况。结果表明：１７α,２０β－二氢孕酮（简称ＤＰ）浓度为０．５μｇ／ｍｌ,温度为２４℃,光照时间２０小时为最适诱导条件。在相同条件下,两性生殖彩鲫卵母细胞体外诱导成熟速度明显快于银鲫。相应的细胞学研究表明,在体外诱导时,银鲫和彩鲫卵母细胞的发育成熟是正常的。银鲫卵母细胞生发泡破裂（     

猪瘟病毒E2蛋白A3BCD主要抗原结构域的原核表达

目的：对猪瘟病毒E2蛋白A3BCD进行原核表达,以期获得具有抗原活性的表达产物。方法：利用反转录PCR（RT-PCR）和套式PCR（nPCR）技术从河南省近期流行猪瘟病毒野毒株中扩增得到E2基因,并将其克隆至pUCm-T载体,构建克隆载体pUCm-TE2;利用PCR方法扩增E2基因的主要抗原域A3BCD,克隆至pET-32a（＋）载体,构建表达载体pET-32aE2-2,转化到大肠杆菌Rosetta（DE3）中,用IPTG进行诱导表达,对诱导产物进行SDS-PAGE和Western-blotting分析。结果：SDS-PAGE结果显示在相对分子质量约35000处出现预期条带,表达产物主要以包涵体形式存在;Western-blotting检测表明,表达产物能与猪瘟病毒阳性血清发生特异性反应,出现单一反应带;用8mol／L尿素（pH8.0）溶解包涵体,经Ni-NTA亲和层析法纯化,获得纯度较高的目的蛋白,ELISA检测表明能与猪瘟抗体阳性血清发生特异性反应。结论：重组质粒pET-32aE2-2转化大肠杆菌Rosetta（DE3）,解除了由于稀有密码子造成的表达限制,表达量得到提高;表达产物为硫氧还蛋白和E2-2的融合蛋白,易于纯化,且具有活性,为研制猪瘟抗体ELISA检测试剂盒奠定了基础。     

雌核发育银鲫和两性融合彩鲫卵母细胞体外诱导成熟过程中周期蛋白合成和MPF活性变化的比较研究

采用体外诱导卵母细胞成熟技术 ,比较研究了雌核发育银鲫和两性融合发育彩鲫卵母细胞成熟过程中周期蛋白合成和MPF活性变化情况。结果表明 :1 7α ,2 0 β 二氢孕酮(简称DP)浓度为 0 5μg/ml,温度为 2 4℃ ,光照时间 2 0小时为最适诱导条件。在相同条件下 ,两性生殖彩鲫卵母细胞体外诱导成熟速度明显快于银鲫。相应的细胞学研究表明 ,在体外诱导时 ,银鲫和彩鲫卵母细胞的发育成熟是正常的。银鲫卵母细胞生发泡破裂 (GVBD)时已有周期蛋白的合成 ,但生发泡破裂开始后则呈现合成速度下降直至没有合成的现象。尽管如此 ,卵母细胞中MPF活性却仍保持继续增强之势 ,至GVBD达1 0 0 %时 ,活性最强。而在两性融合发育彩鲫卵母细胞成熟过程中 ,周期蛋白的合成呈现出由较多到无 ,再逐渐到多的变化。GVBD开始时 ,周期蛋白合成较多 ,此后则急剧下降至几无周期蛋白的合成 ,以后随着成熟诱导的进行 ,周期蛋白的合成速度又缓慢回升至GVBD开始时的状态。与此相对应 ,MPF活性也出现从较强变无 ,再逐渐增至最强的变迁。这些结果初步揭示 ,鱼类卵母细胞中周期蛋白的合成和MPF活性的出现与卵母细胞的成熟分裂密切相关 ,雌核发育银鲫卵母细胞生发泡破裂开始以后 ,周期蛋白合成的消失可能与其特殊的三极纺锤体形成及其后的动力     

鱼类雌性特异蛋白的分离与生化检验及其促进鱼类繁殖能力的研究

Aida(1973)首先报道了雌性香鱼的血清中含有雌性特异蛋白。Nath等(1981)也报道了雌性鲇鱼的雌性特异蛋白的分离和鉴定。Wallace(1974)论述了卵黄蛋白原(即雌性特异蛋白)在肝脏合成及在激素的作用下通过血流进入性腺的过程。作者自1980年以来先后报道过10种海水及淡水雌性鱼类血清中含有雌性特异蛋白,对雌性特异蛋白各种氨基酸的含量和组成以及物理化学的特性也进行了分析测定,并开展了应用雌性特异蛋白的科学实验。       

双酚A诱导雄性中国林蛙肝细胞雌激素受体表达和卵黄蛋白原合成

为探讨双酚A(bisphenol A,BPA)对雄性两栖动物肝细胞中雌激素受体(estrogenreceptor,ER)表达和卵黄蛋白原(vitellogenin,VTG)合成的影响,将中国林蛙(Ranachensinensis)雄性成体分别持续暴露于10-7、10-6、10-5mol/LBPA水体中10、20、30d,设10-9、10-8mol/L雌二醇(E2)为阳性对照。用原位杂交技术检测ERmRNA在肝细胞中的表达定位,用免疫组织化学技术检测肝细胞中ER和VTG蛋白的表达。结果显示,各BPA和E2处理组肝细胞中均有ERmRNA阳性反应,ER和VTG蛋白的表达相对值均显著高于空白对照组。在同一暴露时间,ER和VTG表达值是随着BPA浓度的增加呈增高趋势。在同一BPA浓度,VTG表达值是随暴露时间的延长呈增高趋势,而ER表达值则无显著性变化。这些表明BPA可以通过诱导雄性中国林蛙肝细胞的ER高调导致VTG合成,但其效应远低于E2。