共查询到20条相似文献,搜索用时 15 毫秒
1.
用生物素标了己了花椰菜CaM。生物素标记的CaM具有与天然CaM相似的Ca2+依赖电泳特性,可激活CaM依赖性磷酸二酯酶,能够检测出50ng的磷酸二酯酶。利用它建立了检测植物CaM结合蛋白的生物素-覆盖法(Biotin-overlay)并证实酶标亲和素可与胡萝卜愈伤组织内64kD蛋白质非特异结合,因此将此法运用于植物材料时必需设置酶标亲和素处理的对照。用生物素-覆盖法检测胡萝卜愈伤组织形成过程中的CaM结合蛋白时可检出2,4-D诱导的CaM结合蛋白。 相似文献
2.
白芷培养细胞外钙调素结合蛋白的胶体金电镜定位研究 总被引:5,自引:1,他引:4
利用胶体金标主民技术制备了具有生物活性的植物Cam-BAS-gold探针,并用此探针建立了白芷愈伤组织培养细胞下调素结合蛋白的透射电镜标 记方法。标记结果显示,在1mmol/LCa^2+存在下,用EGTA洗涤过的白芷愈伤组织培养细胞壁表面有金颗粒分布,而分别在含有EGTA、TFP、过量未标记的CaM、CaM抗体存在的民政部下,用金示CaM探针进行标记,以及用的各对照组,细胞壁表面金颗粒则消失,说明 相似文献
3.
玉米精细胞及体细胞原生质体表膜蛋白的比较 总被引:1,自引:1,他引:0
以低渗冲击法(改良两步法)及Percoll密度梯度离心,成功分离纯化生活玉米(Zeam ays)精细胞;以混合酶解法制备玉米叶原生质体和愈伤组织原生质体;以NHS-生物素标记完整精细胞及原生质体表膜蛋白,进行SDS-PAGE和Western blot,并以辣根过氧化物酶标亲和素检测被标记的表膜蛋白。结果表明,在精细胞中标记蛋白有4 种,分子量分别为48、59、67、79 kD;叶片原生质体中有5 种,分子量分别为54、58、66、71、78 kD;愈伤组织原生质体中仅有2 种,分子量67 和80 kD。其中48 kD蛋白为精细胞所特有,54 kD 和71 kD蛋白为叶片细胞所特有 相似文献
4.
通过CaM-Sepharose4B亲和层析方法从云南松花粉中提取出10种CaM结合蛋白。它们均能抑制CaM对PDE的激活,但这种抑制可被随后加入的过量的CaM所消除。酶活测定表明CaM结合蛋白中有Ca2+-依赖的ATPase活力,但无植酸酶、过氧化物酶、酸性磷酸酶和磷脂酶D活性。 相似文献
5.
从每公斤萌发24h的玉米胚丙酮粉中可提纯得63mg的钙调素(CaM),这是目前从每公斤植物材料中所提纯得CaM的最高记录。对其理化性质的研究表明,玉米胚CaM 有较高的生物学活性,能较好地激活磷酸二酯酶,其紫色吸收光谱,SDS-PAGE电泳行为及氨基酸组成与其它的植物CaM相似。上述结果表明玉米胚是1个提取植物CaM相似。上述结果表明玉米胚是1个提取植物CaM的适宜材料。 相似文献
6.
将抗癌胚抗原单链抗体基因与核心链霉亲和素基因融合插入昆虫杆状病毒供体质粒pFastBacHTa中,在粉纹夜蛾Tn-5B1-4细胞中进行表达。SDS-PAGE分析结果表明,表达产物分子量为41kD左右,Western印迹分析结果表明,以HRP标记的生物素进行蛋白质印迹在41kD处可见表达条带,表明融合蛋白能特异性的与生物素结合,放射免疫分析表明重组杆状病毒表达产生的ScFv-CS蛋白能特异性结合癌胚 相似文献
7.
白芷细胞外21kD钙调素结合蛋白的生理功能初探 总被引:5,自引:0,他引:5
利用Sephadex G-100及CM-Sepharose层析法,从白芷悬浮培养细胞的胞外盐提液中纯化了21kD钙调素结合蛋白(21kD CaMBP),测其等电点的pH为8.9,紫外薄层扫描显示其纯度达94%以上,以此蛋白为抗原,用免疫小鼠得水法制备了特异性抗体。由纯化的21kD CaMBP及其特异性抗体研究其对白芷悬浮培养细胞增殖的影响,结果表明:加入外源纯化的21kD CaMBP抑制细胞增殖, 相似文献
8.
NAD激酶在光合作用等植物生理过程中起重要作用。NAD激酶的激活依赖于钙离子和钙调素(CalmOdulin,CaM).从植物中分离得到的一种新的CaM结合蛋白CaMBP-10(BP-10)明显抑制NAD激酶的激活活性,抑制作用可被CaM所克服.动力学研究表明,抑制效应是BP-10与CaM之间特异性相互作用的结果。实验证实BP-10对NAD激酶活性起着重要调节作用. 相似文献
9.
CaM BP—10对NAD激酶的抑制效应 总被引:2,自引:0,他引:2
NAD激酶在光合作用等植物生理过程中起重要作用。NAD激酶的激活依赖于钙离子和钙调素(CaM)。从植物中分离得到的一种新的CaM结合蛋白CaM BP-10(BP-10)明显抑制NAD激酶的激活活性。抑制作用可被CaM所克服。动力学研究表明,抑制效应是BP-10与CaM之间特异性相互作用的结果。实验证实BP-10对NAD激酶活性起着重要调节作用。 相似文献
10.
轻稀土离子对钙调蛋白激活的磷酸二酯酶活力作用的影响 总被引:5,自引:2,他引:3
研究了轻稀土离子(Ln3+)对钙调蛋白(CaM)调控的磷酸二酯酶(PDE)活力的影响。结果表明,在无Ca2+的CaM(Apo—CaM)体系中,由CaM调节的PDE的活力随Ln3+浓度的变化曲线是双相效应,即在高浓度时,Ln3+具有抑制CaM调节PDE活力的能力;低浓度的Ln3+可以提高CaM调节PDE活力的能力。在Ca2+4-CaM-PDE体系中,高浓度的Ln3+的加入能抑制ChM调节PDE活力的能力,其抑制程度因其离子不同而异。CaM的两类拮抗剂JuA(非竞争性抑制剂)和TFP(竞争性抑制剂)都能抑制CaM-Ln3+-PDE系统的活性。最后对Ln3+和CaM相互作用的分子机制进行了初步的讨论。 相似文献
11.
利用Sephadex G100 及CMSepharose层析法,从白芷悬浮培养细胞的胞外盐提液中纯化了21 kD 钙调素结合蛋白(21 kDCaMBP) ,测其等电点的pH 为8 .9 ,紫外薄层扫描显示其纯度达94 % 以上。以此蛋白为抗原,用免疫小鼠腹水法制备了特异性抗体。由纯化的21 kDCaMBP及其特异性抗体研究其对白芷悬浮培养细胞增殖的影响,结果表明:加入外源纯化的21 kDCaMBP 抑制细胞增殖,半抑制浓度约8 μg/ml;而加入21 kDCaMBP特异性抗体却促进细胞增殖效应。推测胞外内源存在的21 kDCaMBP在生理条件下可能具有参与调节胞外活化CaM 信号分子的浓度,从而调节胞外CaM 的生物学功能。 相似文献
12.
13.
钙调素对细胞周期的调节 总被引:6,自引:0,他引:6
RC3细胞是一种用真核表达载体P^cam转染NIH3T3细胞建成的可调钙调素(Calmodulin,CaM)高表达细胞模型。通过分子杂交及蛋白免疫印迹方法证实在地塞米松(Dexamethasome,DXM)作用下,RC3细胞可高表达CaM.CaM拮抗剂三氟拉嗪(trifluoprazine,TFP)则使G1期细胞增加,S期细胞减少。高表达CaM使细胞分裂指数提高,G2期细胞减少,有丝分裂前期细胞 相似文献
14.
15.
在离体条件下拐芹(Angelica polymorpha)形成胚性愈伤组织和非… 总被引:3,自引:0,他引:3
以拐芹(Angelica ploymorpha)的叶柄为外植体,在附加2,4-D(1mg/L)+KT(0.5mg/L)MS培养基上诱导脱分化,40天内可形成愈伤组织。在相同的培养基上经过继代培养,可在20天内形成胚性愈伤组织(Embryogenic Callus,EC)和非胚性愈伤组织(Non-Embry-ogenic Callus,NEC)。将不同天数的培养物作为样品,提取其内源激素;气液相色谱 相似文献
16.
胸腺肽基因多元植物表达载体的构建 总被引:2,自引:0,他引:2
Gus基因是最为常用的报告基因之一,为了便于对胸腺肽目的基因进行检测,在该研究中,胸腺肽目的基因、PRIB分泌基因和GUS报告基因DNA片段用DNA纯化回收试剂盒回收,然后用T4 DNA连接酶连接,构建成几个基因相融合的多元植物表达载体,并通过酶切进行鉴定。用基因枪转化法对胡萝卜愈伤组织进行了遗传转化,转化的胡萝卜愈伤组织经Southern杂交检测和X-Gluc染色,结果表明,多元表达载体成功地被导入胡萝卜愈伤组织。 相似文献
17.
GM1激活环核苷酸磷酸二酯酶的作用 总被引:2,自引:0,他引:2
神经节苷脂GM1能激活CaM依赖性环核苷酸磷酸二酯酶,其AC为50为1.56μg/ml,这种作用并不一定依赖Ca^2+的存在,在有Ca^2+存在时,GM1对PDE的最大激活活性低于CaM,仅为CaM的80.4%;没有Ca^2+存在时,GM1与CaM对PDE有同样的最大激活活性。 相似文献
18.
光系统Ⅱ核心天线CP43的纯化及性质 总被引:7,自引:0,他引:7
菠菜放氧的PSII核心复合物经0.8mol/LTris-HCl(pH8.0)洗涤后,用温和的非离子去垢剂DM和高浓度的LiClO4增溶,再经DEAE-Toyopearl-650S离子交换柱层析分离,可得到PSII核心天线43kD叶绿素a结合蛋白(CP43)。SDS-PAGE显示一条43kD蛋白质带。根据Arnon法和Markewll法的结果表明,每个蛋白质分子结合20~21个分子的叶绿素a。室温条 相似文献
19.
为测定植物细胞质内[Ca^2+]i,对胡萝卜(Daucuscartavar.sativaDC.)原生质体制备介质做了改进,并在正常生理条件,用温和的、非损伤性的方法将Ca^2+荧光指示剂indo-1K^+和fura-2K^+地入该原生体,能很好地标记细胞质的游离Ca^2+。 相似文献
20.
目的:建立并优化基于Avi-tag标签技术的人胚肾细胞增强型绿色荧光蛋白(eGFP)的定点生物素化标记、纯化和检测方法。方法:分别构建具有Avi-tag标签的eGFP真核表达载体plenti-Avi-eGFP和BirA酶真核过表达载体pQCXIH-BirA,将plenti-Avi-eGFP和pQCXIH-BirA共转染人胚肾293T细胞,12 h后观察Avi-tag标签对eGFP蛋白在细胞内定位的影响;48 h后裂解细胞,用链霉亲和素珠子纯化生物素标记的eGFP,SDS-PAGE观察eGFP纯化和富集情况,并优化基于Western印迹的生物素化eGFP检测方法。结果:Avi-tag标签对eGFP在细胞内的定位无影响,同时BirA酶在293T细胞内可将带Avi-tag标签的eGFP标记上生物素;生物素化的eGFP可特异性地被链霉亲和素珠子纯化和富集,纯度可达95%;Western印迹检测生物素化蛋白的最终条件为5%的BSA作为封闭液和终浓度为100 ng/mL的链霉亲和素-HRP。结论:建立了基于Avi-tag技术的人胚肾细胞内增强型绿色荧光蛋白的生物素化标记、纯化与检测方法,为该方法的广泛应用奠定了前期技术基础。 相似文献