蔗糖液在生物制片中的应用

从事生物学研究和教学工作,形态观察是十分重要的.就目前来说,微生物的形态观察主要以涂片镜检法较为快速简捷.无疑,一种好的微生物涂片方法,对于微生物的研究及微生物学的教学工作都是十分必要的.因此,做好微生物涂片这一基本工作,探讨微生物涂片的方法,是一项很重要的工作.我们在从事细菌细胞融合和教学工作中,对微生物涂片的方法进行了探索,发现在微生物涂片中,应用蔗糖液,效果很好.现介绍如下: (一)蔗糖液在一般微生物涂片中的应用 1.方法基本上与常规的微生物涂片方法相同,但不同的是在涂片前应先在清洁的载玻片上滴少许蔗糖液进行擦试;而后由原来加一滴无菌水改为滴加一滴蔗糖液(0.4M—0.6M);再涂菌. 2.优点经我们在不同菌种(细菌、放线菌、酵母菌等)上进行多次实验,发现这种方法具有(1)使载玻片清洁,在一定程度上减少一些印痕;(2)可增加透明度和清晰度,便于进行观察和显微摄影;(3)易使所涂样品分散开来,提高涂片的效果;(4)对革兰氏染色等     

于铬化及碳蜡包埋后染神经终足及线粒体

(一)固定:猫、兔以加有20—40毫克亚硝酸钠(Sod nitrite)的0.9%氯化钠液50—100毫升灌注(亚硝酸钠作为血管扩张剂):继以含10%蚁醛之0.9%氯化钠液300—500毫升灌注;取其脊髓,继续以上述10%蚁醛液固定,最少两天;置5—10毫米长的脊髓在室温下入下液浸5天。配法:重铬酸钾5克;氟化铬(chromiumfluaride)2克;蒸馏水100毫升,再入5%重铬酸钾于38—40℃下浸2—4星期,此液应换数次。     

一种无血清冻存液在猪胎儿成纤维细胞上的应用研究

在猪胎儿成纤维细胞(porcine fetal fibroblasts, PFF)冻存过程中,血清品质常常制约着细胞的冻存效果。为了解决这个问题,本研究旨在开发一种无血清冻存液应用于猪胎儿成纤维细胞冻存。用3种不同冻存液冻存猪胎儿成纤维细胞,每种冻存10管。冻存30 d后复苏细胞,测定冻存细胞存活率,细胞增殖活力以及电转后细胞活性。结果显示:自制无血清细胞冻存液,冻存猪胎儿成纤维细胞后存活率达95.33%;细胞增殖活力以及电转后细胞活性均显著高于标准胎牛血清冻存液(p<0.05),与特级胎牛血清冻存液效果相当(p>0.05)。因此,自制冻存液冻存猪胎儿成纤维细胞效果稳定,能够替代含血清冻存液,有良好的推广应用前景。     

纤支镜检查对菌阴性肺结核的诊断价值

目的探讨纤支镜检查技术对菌阴性肺结核的诊断价值。方法通过回顾性分析153例痰涂片、痰培养和PCR分析均为结核杆菌阴性疑诊为肺结核最终确诊为肺结核的患者病例资料。观察肺结核病灶在纤支镜下的表现,并于镜下行组织活检、刷检、组织盲检,支气管肺泡灌洗液涂片及PCR检查和痰结核分枝杆菌涂片检查。结果回顾性分析发现肺结核纤支镜下改变主要为粘膜充血肿胀(23.5%)、粘膜溃疡糜烂(19.6%)、粘膜表面灰白色苔状物或豆腐渣样物质覆盖(15.7%)和支气管瘢痕或狭窄(13.1%)。纤支镜下组织活检、刷检、组织盲检,支气管肺泡灌洗液涂片及PCR检查和痰结核分枝杆菌涂片检查,诊断为肺结核的患者占最终明确诊断为肺结核的百分比分别为41.2%(63/153),47.1%(72/153),11.1%(17/153),56.9%(87/153),55.6%(85/153)和32.0%(49/153)。结论菌阴性肺结核镜下改变多样无特征性,纤支镜检查技术对菌阴性肺结核的明确诊断具有重要价值,多种纤支镜技术联合能够明显提高菌阴性肺结核的诊断率。     

猪囊虫囊液氨基酸分析的研究

本研究应用氨基酸自动分析仪(日立835-50型)对猪囊虫(cysticercus cellulosae)的囊液作氨基酸组成与含量测定,旨在了解囊虫营养代谢与宿主机体相互关系,以及探讨药物对囊虫的作用机理,为防治人畜共患的猪囊虫病提供基础资料。实验材料系以猪皮下肌肉与脑内的囊虫。从14只猪的皮下肌肉和10只猪的脑     

猪红细胞与人淋巴细胞形成玫瑰花环的影响因素

Lay等人曾发现人T淋巴细胞与猪红细胞形成花环,证实在人T淋巴细胞表面存在猪红细胞受体。为探讨该种受体的特性,我们观察了若干因素对人T淋巴细胞与猪红细胞花环形成的影响,现报告如下: 材料与方法猪红细胞悬液制备取抗凝猪血,用Hanks液洗涤3次,并以Hanks液配成0.5％猪红细胞悬液(约为8×10~7个细胞/毫     

毁损大鼠中缝背核内触液神经元对吗啡依赖和戒断的影响

目的:探索脑内远位触液神经元在吗啡依赖和戒断形成过程中的作用。方法:化学性神经元毁损、侧脑室引入霍乱毒素亚单位B与辣根过氧化物酶复合物(CB-HRP)神经示踪、TMB-ST呈色反应,Western blot、nNOS免疫组织化学。结果:毁损大鼠中缝背核内远位触液神经元后,纳洛酮催促的戒断症状明显减弱,戒断症状评分较戒断未毁损组降低约38%(P<0.05);给予溶媒和毁损触液神经元旁侧的大鼠戒断症状与戒断组比较未见明显变化(P>0.05)。毁损组脑片触液神经元密集区局部细胞损坏明显,仅在其毁损区边缘观测到少量CB-HRP阳性细胞。未毁损组CB-HRP标记细胞位置及数量恒定,形态清晰。毁损触液神经元后,脊髓背角nNOS阳性神经元计数及nNOS蛋白表达较戒断未毁损组减少明显(P<0.05),而较正常组和依赖组增加仍显著(P<0.01)。结论:毁损大鼠中缝背核内部分远位触液神经元可减弱吗啡戒断症状和脊髓背角神经元型一氧化氮合酶的表达,提示中缝背核内部分远位触液神经元可能参与了吗啡依赖和戒断的形成,NO介导脑内触液神经元与脊髓水平对吗啡依赖和戒断的调节。     

肠道内神经丛富含神经介素-U

神经介素-U(neuromedin-U,NMU)是近年由日本学者在猪脊髓发现的一个新肽,有NMU-8和NMU-25两种形式,后者的C端8个氨基酸与NMU-8完全相同。大鼠NMU为23肽,C端7个氨基酸组成与猪NMU一致,二者具有完全的免疫交叉反应。NMU存在于神经系统的神经元和神经纤维中,具     

猪β-干扰素的原核表达及其对猪流行性腹泻病毒的抑制作用研究

本研究通过PCR技术克隆了猪β干扰素全基因,设计引物亚克隆猪β干扰素成熟蛋白编码基因并对,5’端1个稀有密码子进行了大肠杆菌偏嗜性改造。构建了猪IFN-β原核单纯表达载体pRLC-poIFNβ,实现了poIFN-β在大肠杆菌中的表达,表达产物约占菌体总蛋白的17.3%。表达产物以包涵体形式存在,用含6mol/L盐酸胍的变性液溶解及含GSH-GSSG复性液复性处理,复性后的表达产物经凝胶层析纯化后,MDBK细胞-VSV病变抑制法测定结果表明,重组猪β干扰素具有良好的抗病毒活性,约为5.6x105U/mg。用重组猪β干扰素处理猪肾传代细胞PK-15后,细胞病变抑制法(CPE50)测定结果表明:重组猪β干扰素可显著抑制猪流行性腹泻病毒(PEDV)的感染。     

猪β-干扰素的原核表达及其对猪流行性腹泻病毒的抑制作用研究

本研究通过PCR技术克隆了猪β干扰素全基因,设计引物亚克隆猪β干扰素成熟蛋白编码基因并对,5'端1个稀有密码子进行了大肠杆菌偏嗜性改造.构建了猪IFN-β原核单纯表达载体pRLC-poIFNβ,实现了poIFN-β在大肠杆菌中的表达,表达产物约占菌体总蛋白的17.3%.表达产物以包涵体形式存在,用含6mol/L盐酸胍的变性液溶解及含GSH-GSSG复性液复性处理,复性后的表达产物经凝胶层析纯化后,MDBK细胞-VSV病变抑制法测定结果表明,重组猪β干扰素具有良好的抗病毒活性,约为5.6x105U/mg.用重组猪β干扰素处理猪肾传代细胞PK-15后,细胞病变抑制法(CPE50)测定结果表明重组猪β干扰素可显著抑制猪流行性腹泻病毒(PEDV)的感染.     

聚乙烯醇和卵泡液添加方式对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎发育的影响

本试验研究目的在于探讨在猪卵母细胞体外成熟(IVM)过程中,聚乙烯醇(polyvinyl alcohol,PVA)和猪卵泡液(porcine follicular fluid,PFF)添加方式对猪卵母细胞体外成熟及孤雌激活早期胚胎发育的影响。卵母细胞、卵丘细胞复合体(COCs)在含有HCG和PMSG的改良TCM-199+10%FBS+10%猪卵泡液(PMH-PFF)或改良TCM-199+10%FBS+0.1%PVA(PMH-PVA)成熟液中培养22~23 h;再移至无HCG和PMSG的PM-PFF或PM-PVA的成熟液中成熟培养至44 h。试验:(1)处理组1:使用PMH-PFF培养22~23 h后,更换PM-PFF继续培养至44 h;(2)处理组2:使用PMH-PFF培养22~23 h后,更换PM-PVA继续培养至44 h;(3)处理组3:使用PMH-PVA培养22~23 h后,更换PM-PVA继续培养至44 h;(4)处理组4:使用PMH-PVA培养22~23 h后,更换PM-PFF继续培养至44 h。将在不同成熟体系中IVM 44 h后的卵母细胞进行固定染色,鉴定卵母细胞核和细胞质成熟情况;对在不同处理组的成熟液中成熟培养44 h的卵母细胞进行孤雌激活后放入PZM-3中培养,分别于第2天、第7天统计分裂率和囊胚发育率。结果表明:经44 h成熟培养后,处理组1卵母细胞核成熟率(42.00%)显著低于处理组2(64.67%)、处理组3(69.00%)、处理组4(64.33%)核成熟率(p0.05)。处理1、处理2、处理4的卵母细胞皮质颗粒分布类型Ⅲ比例(62.00%/54.67%/46.67%)均高于处理组3(28.67%),且处理组1、处理组2卵母细胞皮质颗粒分布类型Ⅲ比例显著高于处理组3卵母细胞皮质颗粒分布类型Ⅲ比例(p0.05)。处理组1、处理组2、处理组4孤雌分裂率(81.92%/76.00%/73.33%)均高于处理组3(69.00%)。处理组3孤雌激活囊胚率(9.67%)显著低于处理组1(23.33%)、处理组2(25.00%)、处理组4(23.00%)(p0.05)。结果表明,在本研究条件下,处理组2的各项指标均优于其它组,IVM液中添加猪卵泡液培养22~23 h后更换添加有PVA的IVM液继续培养至44 h,更有利于促进IVM猪卵母细胞核成熟、胞质成熟以及早期孤雌胚胎发育。     

用蔗糖溶液进行微生物制片

从事微生物学研究和教学工作,其形态观察是十分重要的。最近我们发现应用蔗糖溶液进行微生物制片效果很好。现报道如下: (一)在一般微生物菌体制片中的应用 1.方法基本与常规的微生物制片方法相似,但不同的是: (1)在涂片前应先在清洁的载玻片上滴加少许蔗糖液(0.5M)进行擦拭。     

一种简单实用的猪颗粒冻精制作技术

本实验以年龄在2.5岁左右的长白种公猪的精液为材料,在比较了常用的Ⅰ号、Ⅱ号、Ⅲ号猪精液冷冻稀释液和Ⅰ号、Ⅱ号解冻液及冷冻———解冻程序对猪精液的冷冻效果后,依据解冻后精子的活力、质膜完整性等指标,发现:1、Ⅱ号冷冻稀释液的稀释效果(精子活力42.5±5.2精子弯尾率44.7±3.5)和Ⅱ号解冻液的解冻效果(精子活力43.8±2.6精子弯尾率36.2±4.3)明显较好;2、根据制作经验总结,发现了一种与以往资料上介绍的完全不同的猪精液冷冻颗粒制作方法,从而筛选出了一种简单实用的猪颗粒冻精制作技术。     

成都市动物园野生动物寄生虫调查报告

为了弄清成都市动物园野生动物感染寄生虫情况,以便今后制订合理的防治措施,我们于1982年2月至5月对成都市动物园内的72种265只野生动物(其中包括肉食类14种28只;灵长类11种79只;杂食类13种42只;草食类28种101只和禽类6种15只)进行了寄生虫调查,现将调查方法和结果报告于后。调查方法一、用沉淀法、漂浮法和部分采用贝尔曼法或法依德法检查各种动物粪便内蠕虫的虫卵和幼虫,原虫的卵囊或包囊。规定沉淀法每份标本检查三张沉淀宽涂片;漂浮法每份标本检查全部沾取液膜的盖玻片(或用铜丝圈沾取两滴液膜的涂片);贝尔曼法和法依德法则检查全部去掉…     

脊髓场电位起源的研究

节段性脊髓场电位的慢电活动(N、P波)分别与A_(α,β,δ)和C类纤维活动有关,与脊髓后角中间神经元和PAD亦有关。脊髓神经元回路较节段性脊髓场电位复杂,涉及的脊髓起源成份也多。     

薄层细胞涂片新方法在宫颈细胞学检查中应用的研究

目的：研究一种新的宫颈细胞薄层涂片方法,以提高传统手工涂片方法的制片质量。方法：随机选择的妇科门诊病人100例,随机分成2组,薄层细胞涂片组和手工涂片组,其中薄层细胞涂片组的刮片标本经过我们设计的双层滤网的过滤和分离液离心的步骤去除标本中的黏液、炎细胞和血细胞。这两组得到的涂片根据其细胞分布的均匀度及细胞重叠的多少,把涂片的结果分为满意、基本满意和不满意。结果：薄层细胞涂片组的涂片质量满意率（98％）高于手工涂片组的涂片质量满意程度（32％．P〈0．01）。讨论：薄层细胞涂片法在宫颈细胞学检查中的满意程度明显好于传统手工涂片（P〈0．01）,有统计学意义。效果稳定,适合在大范围内推广。薄层细胞涂片法相对于传统手工涂片有5大优点,大大提高了宫颈细胞学诊断的准确性。     

老年大鼠脊髓小胶质细胞分选新方法及功能特征观察*

目的: 建立分离纯化老年大鼠小胶质细胞的改良方法,并初步观察老年大鼠脊髓小胶质细胞的生物学特性。方法: 以年轻SD大鼠(2月龄)为对照组,采用胰酶、胰酶替代物和机械网搓法等不同的制备方法,制备大鼠小胶质细胞的单细胞悬液,通过检测细胞纯度、存活率,观察细胞形态特征,分析细胞的炎性功能特征等,确定老年大鼠(20月龄)小胶质细胞的分离纯化方法,观察老年大鼠脊髓小胶质细胞功能特征。结果: 胰酶消化所得细胞的存活率低(年轻大鼠83%,老年大鼠60%);机械网搓法虽得到的存活率较高(95%),但是细胞获取率最低(年轻大鼠((0.207±0.020)×10⁶,老年大鼠(0.243±0.023)×10⁶);采用胰酶替代物解离、密度梯度离心方法分选出的老年大鼠脊髓小胶质细胞数量多、活性好、存活率高,细胞纯度可达85%以上,我们采用此方法分选纯化不同年龄大鼠脊髓小胶质细胞,与年轻大鼠相比,老年鼠脊髓组织量大,所需消化液多,但消化时间缩短;与年轻大鼠小胶质细胞相比,老年大鼠脊髓小胶质细胞其胞体较大较圆,突起少且粗短,形态上偏向于激活状态,老年大鼠小胶质细胞促炎因子IL-1β表达降低(P＜0.05),而抗炎因子IL-10(P＜0.01)表达升高。结论: 成功建立胰酶替代物解离结合密度梯度离心法从大鼠脊髓组织中分离纯化小胶质细胞,老年大鼠脊髓内小胶质细胞整体表现出抗炎表型。     

一种微生物检测的新方法——原位PCR应用

原位PCR(in sztu PCR,ISPCR)是近几年发展起来的新型PCR技术,它能在细胞悬液、细胞涂片和组织切片上对待检的低拷贝或单拷贝基因进行扩增,然后再对待检基因进行原位杂交检测,因而兼有PCR快速、灵敏、特异性强和原位杂交精确定位的特点,具有非常广阔的应用前景。     

一种快速观察四膜虫纤毛的方法

器材与药品离心机,三用水箱,天平,染色缸。席夫试剂(schiff reagent),漂白液,乙醇二甲苯,磷酸缓冲液(PH7.2)。亮绿(溶剂是95％的乙醇) 步骤 1.取四膜虫浮液3—5ml,离心5分钟(800—1000转/分),去上清液,留沉淀物0.3—0.5ml。 2.用PH7.2磷酸缓冲液洗涤,离心5分钟(800—1000转/分),去上清液,留沉淀物0.3—0.5ml。 3.涂片。用甲醇固定液固定。 4.水解处理。室温下先在1NHCl中处理1分钟,后移至1NHCl(60℃)中处理7—9分钟(水解     

大豆甙减轻内质网应激导致血脊髓屏障破坏有益于脊髓损伤恢复

脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)是一种严重的中枢神经系统创伤性疾病。SCI最初导致血脊髓屏障(blood spinal cord barrier,BSCB)破坏。修复损伤后的血脊髓屏障是避免二次损伤和恢复运动感觉功能的关键。大豆甙(daidzin,DDZ)具有抗氧化应激和抑制炎症的作用,但尚未将其应用在脊髓损伤治疗上。本研究探讨大豆甙是否具有抑制内质网应激水平而增加细胞连接蛋白质,保护血脊髓屏障而改善脊髓损伤后大鼠的运动感觉功能的能力。通过毒胡萝卜素(thapsigargin, TG)在体外作用于内皮细胞模拟脊髓损伤后内质网应激,通过RT-PCR、Western印迹、免疫荧光、运动功能评分等实验,探讨大豆甙修复血脊髓屏障和恢复运动功能的相关机制。结果发现,大豆甙可以显著提高紧密连接蛋白(tight junction,TJ)和黏附连接蛋白(adherence junction,AJ)的表达,并呈剂量依赖性。不论是RNA水平还是蛋白质水平上,和单纯毒胡萝卜素组的连接蛋白质基因表达相比,大豆甙治疗后连接蛋白质的基因表达水平明显提高(P0.01或P0.05)。不仅如此,深入探究了大豆甙减少血脊髓屏障渗透性的机制发现,大豆甙下调内质网应激相关蛋白质水平,从而减轻炎症对血脊髓屏障的持续破坏。最后,建立了大鼠T9夹闭脊髓损伤模型,评价大豆甙在体内的效果。与对照组相比,腹腔注射大豆甙(10 mg/kg/d)治疗的大鼠,在损伤后28 d的BBB评分(9.8分)和斜板实验角度(45.3度)均显著提高。总而言之,脊髓损伤后大豆甙通过抑制内质网应激的过度激活,促进连接蛋白质的表达,减少血脊髓屏障的通透性,从而促进脊髓损伤后丧失的功能恢复。因此,大豆甙可能是治疗脊髓损伤的备选药物之一。