新鲜烟叶中12种多酚类化合物的UPLC-MS-MS分析

多酚类物质含量高低是衡量烟叶质量的重要指标,快速准确测定其含量可为烟叶质量评价和多酚代谢研究提供技术支持.本研究将25 mg新鲜烟叶冻干粉末样品经5 mL 50％甲醇超声20 min提取后离心,上清液经0.22 μm滤膜过滤后用超高效液相色谱-串联质谱仪(UPLC-MS-MS)在多反应监测(MRM)模式下分析.研究发现,咖啡酸、阿魏酸、莨菪亭和香豆素等4种低含量多酚化合物在0.05～5.00 μg/mL范围内线性良好;新绿原酸、莨菪苷、山奈酚、山奈酚苷和山奈酚-3-O-芸香糖苷等5种中等含量多酚化合物在0.2～40.0 μg/mL范围内线性良好;绿原酸、隐绿原酸和芸香苷等3种高含量多酚化合物在5～200 μg/mL范围内线性良好.12种多酚的回收率在84.7％～102％,相对标准偏差(n=6)在1.9％～5.7％,定量限在0.5～8.0μg/g.研究结果表明,本方法具有灵敏度高、专一性好和结果准确等特点,适用于新鲜烟叶中12种多酚含量的高通量分析,可为新鲜烟叶代谢过程中多酚含量的变化研究提供有效分析手段.     

烟曲霉GZWMJZ-152茶粕发酵代谢产物

在茶粕培养基摇床培养条件下,烟曲霉GZWMJZ-152将茶粕中的山茶苷A (1)和山茶苷B (2)代谢为山奈酚-3-O-芸香糖苷(3);在茶粕培养基静置发酵条件下,从发酵提取物中分离得到5个化合物,分别为山奈酚(4)、(-)Chaetominine (5)、trypacidin (6)、1,2-seco-trypacidin (7)、(-)-丁香脂素(8)。测试了8个化合物的α-葡萄糖苷酶抑制活性和DPPH自由基清除活性,其中化合物1-3,5-8具有较好的α-葡萄糖苷酶抑制活性,IC₅₀值在133.9-308.6μg/mL;化合物1,4,8具有较好的自由基清除活性,IC₅₀值在0.43-5.06μg/mL。     

UPLC-MS/MS法同时测定毕氏海蓬子中13个功能成分

利用超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）法同时测定毕氏海蓬子（Salicornia bigelovii,SB）中没食子儿茶素、表没食子儿茶素、隐绿原酸、绿原酸、新绿原酸、儿茶素、表儿茶素、异绿原酸-B、芦丁、异槲皮苷、褪黑素、山柰酚-3-O-芸香糖苷、槲皮苷13个功能成分的含量。样品利用甲醇提取,过0.22 μm滤膜后上机检测。采用C18 色谱柱 （100 mm × 2.1 mm,1.7 μm）进行分离,以0.1%甲酸水溶液-甲醇为流动相,流速0.3 mL/min,柱温（35±5）℃,采用电喷雾离子源（ESI）、多反应监测（MRM）进行检测。结果表明：13个功能成分在各自的线性范围内线性关系良好,相关系数R2均大于0.99,该方法的检测限（LOD）和定量限（LOQ）分别为1.0~20.0 μg/kg、2.0~50.0 μg/kg,平均加标回收率在89.10%~109.51%范围内。LC-MS/MS法测定毕氏海蓬子功能成分快速灵敏,准确可靠,可用于毕氏海蓬子中功能成分的检测。     

高效液相色谱法同时测定青钱柳中9种指标成分的含量

建立高效液相色谱法同时测定青钱柳中绿原酸、香草酸、逆没食子酸、异槲皮苷、阿福豆苷、槲皮苷、山奈酚、山奈素和乌苏酸含量的方法。采用Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,3.5μm);流动相为0.2%磷酸乙腈-0.2%磷酸水,梯度洗脱;流速为0.7 m L/min,柱温35℃;检测波长:香草酸、逆没食子酸和乌苏酸为210 nm;绿原酸、异槲皮苷、阿福豆苷、槲皮素、山奈酚和山奈素为360 nm。青钱柳在该色谱条件下9种成分分离较好,平均加样回收率为95.86%~103.30%,RSD2.5%。该方法简便、准确、重复性好,适用于青钱柳中绿原酸、香草酸、逆没食子酸、异槲皮苷、阿福豆苷、槲皮苷、山奈酚、山奈素和乌苏酸含量的同时测定。     

反相高效液相色谱法同时测定车前子中的毛蕊花苷和异毛蕊花苷

采用反相高效液相色谱法在Waters Symmitry C18(5 μm,250 mmm×4.6 mm)色谱柱上以甲醇:体积分数0.1%甲酸溶液(40:60,v:v)为流动相同时测定车前子中毛蕊花苷和异毛蕊花苷的含量,流动相流速为0.6 mL/min,检测波长为330 nm.毛蕊花苷线性范围为0.2～2.0 μ,r=0.9982.异毛蕊花苷线性范围为0.2～2.0 μ,r=0.9957.样品的平均回收率分别为99.70%,101.18%.测得大粒车前子中毛蕊花苷含量为8.65 mg/g,异毛蕊花苷含量为1.36 mg/g.此方法准确、快速,适用于车前子中毛蕊花苷和异毛蕊花苷的定量分析.     

HPLC同时测定大叶冬青叶中10种多酚成分的含量及抗氧化活性研究

建立HPLC同时测定大叶冬青叶中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、对羟基肉桂酸、芦丁、异槲皮苷、异绿原酸B、异绿原酸A和异绿原酸C 10种多酚类化合物的定量分析方法,研究不同产地及不同采收时期大叶冬青叶中10种多酚类化合物的含量差异及其抗氧化活性。采用HPLC测定大叶冬青叶50%甲醇提取液中10种多酚类成分的含量,并选用DPPH法对其抗氧化活性进行初步探索。结果表明,10种多酚类化合物分离效果较好,标准曲线在检测范围内具有良好的线性(r>0.999 5),平均加样回收率在96.58%～112.03%,RSD<4%(n=6)。大叶冬青叶50%甲醇提取液抗氧活性良好。本实验建立的方法快速、准确、重复性好,可用于同时测定大叶冬青叶中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、对羟基肉桂酸、芦丁、异槲皮苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C 10种成分的含量;不同产地、不同采收时期大叶冬青叶中10种多酚类化合物含量存在一定差异;不同来源大叶冬青叶50%甲醇提取液抗氧化能力具有明显差异。     

Folin-Ciocalteu分光光度法测定夏枯草总酚含量的研究(英文)

通过采用Folin-Ciocalteu试剂,以没食子酸为对照品,用紫外可见分光光度法,研究测定夏枯草中总酚含量。结果表明,在装有样品的10 mL容量瓶中依次加入Folin-Ciocalteu试剂0.5 mL,20%Na2CO31.7 mL,室温放置60 min后,在波长660 nm或760 nm测定吸光度。多酚质量浓度在0～10.3μg/mL范围内与吸光度有良好的线性关系,回归方程在660 nm为Y=94.542X-0.0067,R2=0.9999,加样回收率为101.7～105.0%;760 nm为Y=101.13X-0.0191,R2=0.9990,加样回收率为105.1～107.6%。本研究在稳定性、准确性和重复性方面都具有较好的实验结果,可为夏枯草多酚的定量分析提供方法参考。     

不同施氮水平对烟草叶片黄酮类化合物含量及其代谢途径的调控

本研究以生长在3个不同施氮水平(60 kg/hm~2,90 kg/hm~2和120 kg/hm~2)下的"云烟87"为材料,运用超高效液相色谱法、分光光度法和荧光定量PCR法,分别研究了不同施氮水平对烟叶生长发育过程中黄酮类化合物芸香苷、山奈酚-3-O-芸香苷和总黄酮含量、代谢相关酶活性及相关基因表达的影响。结果表明:随着生长发育的进行,黄酮类化合物代谢相关基因PAL、C4H、4CL、CHS、CHI、F3H、F3'H、FLS、A3RT的基因表达总体上呈逐渐降低的趋势,从而调控了山奈酚-3-O-芸香苷和总黄酮含量呈逐渐降低的趋势,芸香苷含量呈先略有升高后降低的趋势。不同施氮水平下比较,处理前期(50 d和83 d),较低施氮水平(60 kg/hm~2)上调了烟草叶片黄酮类化合物代谢相关基因PAL、C4H、4CL、CHS、CHI、F3H、F3'H、FLS、A3RT和ANS的基因表达,提高了黄酮类化合物代谢关键酶PAL、CHI的活性,促进了黄酮类化合物芸香苷、山奈酚-3-O-芸香苷和总黄酮含量的积累(p0.05);处理后期(106 d),较高施氮水平(120 kg/hm~2)上调了烟草叶片黄酮类化合物代谢相关基因PAL、C4H、4CL、CHS、CHI、F3H、F3'H、A3RT和ANS基因的表达,提高了黄酮类化合物代谢关键酶PAL、CHI的活性,促进了黄酮类化合物芸香苷、山奈酚-3-O-芸香苷和总黄酮含量的积累(p0.05)。     

Folin-Ciocalteu比色法测定花椒中多酚含量的研究

研究了以没食子酸为标准品,采用Folin-Ciocalteu比色法,测定花椒多酚含量的适宜条件。结果表明:当Folin-Ciocalteu试剂与10%Na2CO3溶液之比为1∶2(V∶V),Folin-Ciocalteu试剂体积为4 mL,反应温度为25℃,反应时间为120 min时,多酚含量在1~6μg/mL范围内与吸光值呈良好的线性关系。测定了4种花椒中的多酚含量,四川青花椒多酚含量最高。     

经典名方温胆汤物质基准总黄酮、柚皮苷和新橙皮苷含量测定

目的：研究并建立紫外分光光度法（UV）和高效液相色谱法（HPLC）分别测定温胆汤物质基准中总黄酮、柚皮苷和新橙皮苷含量。方法：以柚皮苷为对照品，采用紫外-可见分光光度法测定总黄酮的含量并采用HPLC法测定柚皮苷和新橙皮苷的含量。结果：采用直接测定法测定总黄酮类成分在284 nm处有较强吸收，柚皮苷在20.22～80.88μg/mL范围内与吸光度呈良好的线性关系，平均加样回收率为98.33%。柚皮苷和新橙皮苷分别在0.01～0.51 mg/mL和0.01～0.50 mg/mL范围内有良好的线性关系，精密度、稳定性、重复性的RSD均小于5.0%，加样回收率分别为97.11%和102.72%；温胆汤物质基准中总黄酮的平均含量为15.03%，柚皮苷、新橙皮苷的平均含量分别为22.78 mg/g和9.75 mg/g。结论：建立的温胆汤物质基准总黄酮、柚皮苷和新橙皮苷含量测定方法简单、稳定、重复性好，为温胆汤及其相关制剂进一步研究和开发提供实验基础。