铜绿假单胞菌耐消毒剂-磺胺基因及β-内酰胺类抗生素耐药相关基因研究

目的了解临床分离的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,Pa)耐消毒剂-磺胺基因(qacE△1-sulⅠ)及β-内酰胺类抗生素耐药相关基因存在状况。方法自临床分离40株Pa,采用聚合酶链反应(PCR)检测qacE△1-sulⅠ基因及12种β-内酰胺类抗生素耐药相关基因(TEM、SHV、OXA-10群、CTX-M-1群、PER、VEB、GES、CARB、IMP、VIM、DHA和oprD2)。结果40株中qacE△1-sulⅠ基因阳性19株(47.5%),CARB基因阳性18株(45.0%),oprD2基因缺失35株(87.5%),其余基因均阴性。结论临床分离的铜绿假单胞菌多重耐药严重,qacE△1-sulⅠ基因及CARB基因携带率高,oprD2基因缺失严重。     

对一株铜绿假单胞菌22种耐药基因的研究

目的研究铜绿假单胞菌多重耐药情况和相关机制。方法采用聚合酶链反应（PCR）法对一株多重耐药铜绿假单胞菌进行β-内酰胺酶基因、氨基糖苷类修饰酶（AMEs）基因、喹诺酮类耐药基因、耐消毒剂基因（qacE△1-sul1）和整合酶基因检测,并对VIM基因进行了测序。结果PCR扩增结果显示该菌株aac（6′）-Ⅰb、blaCARB、gyrA、oprD2、ant（2″）-Ⅰ、qacE△1-sul1、blaIMP-I、blaTEM、blaVEB、aac（3）-Ⅱ、ant（3″）-Ⅰ、intⅠ1、blaVIM基因均为阳性,而aac（3）-Ⅰ、aac（6′）-Ⅱ、blaGES、blaGIM、blaOXA-10群、blaPER、blaSPM、blaSHV、blaDHA基因均为阴性,VIM基因扩增产物测序后经BLAST同源性分析表明为VIM-2型。结论铜绿假单胞菌存在多重耐药基因。管壁涂有季胺类、双胍类消毒剂和磺胺的II代导管的抑菌效果需重新评价。     

鲍曼不动杆菌老年人分离株耐药性与qacE△1-sul1基因检测

目的了解鲍曼不动杆菌老年人分离株耐药性与qacE△1-sul1基因存在情况,并讨论其临床意义。方法自老年人分离的20抹鲍曼不动杆菌按CLSI做药敏试验,采用聚合酶链反应法检测qacE△1-sul1基因。结果鲍曼不动杆菌qacE△1-sul1基因阳性15株,阳性率为75％。结论鲍曼不动杆菌老年人分离株qacE△1-sul1基因携带率较高,现行的消毒剂或消毒方法的有效性,应引起我国医院消毒界的广泛重视。     

鲍曼不动杆菌耐消毒剂基因检测

目的 了解深圳市人医院鲍曼不动杆菌抗季铵盐类消毒剂基因的检出率及基因型特点.方法 收集深圳市人民医院临床标本中分离鲍曼不动杆菌67株,PCR检测分离株的qacA/B、qacE△1、qacC、qacG和qacJ 5种抗季铵盐类消毒剂基因.结果 67株鲍曼不动杆菌中qacE△l基因阳性42株(62.6％),qacA/B与qacG基因各有一菌株阳性,未检测出qacC或qacJ基因阳性菌株.结论 深圳市人医院鲍曼不动杆菌中抗季铵盐类消毒剂基因检出率较高,主要为qacE△1型.     

多重耐药伤寒沙门菌耐药基因的研究

目的 检测多重耐药伤寒沙门菌对抗菌药物的敏感性及其耐药基因定位。方法 随机选取实验室保存的5株耐药菌和1株敏感菌,用纸片扩散法检测对12种抗菌药物的敏感性。用利舍平抑制试验检测菌株是否存在药物外排系统。PCR法检测TEM型β-内酰胺酶基因、aac(6′)-Ⅰb和aac3-Ⅱ型氨基糖苷类修饰酶基因、qacEΔ1-sul1耐消毒剂和磺胺基因、catA和catB氯霉素乙酰基转移酶基因以及cmlA氯霉素外排泵蛋白基因等7种耐药基因。结果 5株多重耐药菌对氨苄西林、哌拉西林、头孢呋辛、头孢西丁、卡那霉素、庆大霉素、复方磺胺甲噁唑及氯霉素等8种抗菌药物全部耐药,对美罗培南、头孢哌酮、头孢吡肟全部敏感;对头孢噻吩中度敏感。1株无质粒pRST98的菌株对上述药物全部敏感。利舍平抑制试验均为阴性。4株耐药菌TEM型β-内酰胺酶基因检测为阳性。全部耐药菌株aac3-Ⅱ、qacEΔ1-sul1、catA基因均为阳性,而aac(6′)-Ⅰb、catB和cmlA基因均为阴性。 结论 多重耐药伤寒沙门菌质粒pRST98上同时存在多种耐药基因, 是导致菌株同时对多种结构各异的抗生素耐药的原因。     

医院感染多重耐药革兰阴性杆菌耐消毒剂基因的检测分析

目的研究医院感染多重耐药革兰阴性杆菌耐消毒剂基因qac E△1-sul1存在情况。方法采用聚合酶链反应(PCR)技术检测qac E△1-sul1基因。结果 201株多重耐药革兰阴性杆菌对阿莫西林和头孢类等抗菌药物多数耐药率均达到50%以上,但对碳青霉烯类仍高度敏感。qac E△1-sul1基因的总检出率为40.80%,其中产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌、产ESBLs肺炎克雷伯菌、多重耐药鲍曼不动杆菌、多重耐药的铜绿假单胞菌qac E△1-sul1检出率分别为34.78%、44.23%、58.91%和31.25%。结论医院感染患者临床分离多重耐药革兰阴性杆菌耐消毒剂基因qac E△1-sul1携带率较高,加强多重耐药革兰阴性杆菌对消毒剂耐药性的监测,对临床合理使用消毒剂具有重要意义。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐消毒剂基因与消毒剂抗性的研究

摘要：目的 了解临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）耐消毒剂基因携带状况及其对消毒剂抗性水平。方法 采用聚合酶链反应（PCR）法和体外抗菌试验方法进行实验室检测。结果 10株临床分离的MRSA中,检出4株携带qacA/B基因,检出率为40.0%。含氯消毒剂对4株qacA/B基因阳性MRSA的MIC值均高于标准菌株。戊二醛消毒剂对2株MRSA基因阳性MRSA的MIC值和1株MRSA基因阳性MRSA的MBC值高于标准菌株,其他均与标准株相同。结论 临床分离的MRSA qacA/B基因阳性率较高,携带qacA/B基因阳性的MRSA对含氯消毒剂有产生抗性的趋势。     

铜绿假单胞菌外膜蛋白缺失合并qacE△12sul1与耐药性的研究

目的 对临床分离的54株铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PAE)进行耐药基因检测,分析的PAE耐药性,为临床合理用药提供依据.方法 应用MIC法和K-B法检测PAE对22种药物的耐药性,采用PCR法检测PAE的消毒剂磺胺类qacE△12sul1基因和外膜蛋白oprD2基因,并对阳性菌株进行序列分析.结果 54株PAE中oprD2膜缺失、qacE△12sul1、多重耐药铜绿假单胞菌(Multi-drug Resistant of Pseudomonas aeruginosa,MRPA)菌株的检出率分别为77.8％、14.8％、37.0％;20株MRPA菌株中,qacE△12sul1、oprD2膜缺失阳性率分别为40.0％、50.0％;54株PAE对氨苄西林和头孢唑啉完全耐药,对头孢呋辛钠、头孢呋辛酯、复方新诺明的耐药率均为98.1％、对多粘菌素B敏感率为100％;MRPA与非MRPA对qacE△12sul1基因阳性菌株的检出率差异有统计学意义;oprD2阴性和阳性菌株对亚胺培南和美洛培南的耐药率差异有统计学意义.结论 临床分离的铜绿假单胞菌耐药严重,oprD2基因的缺失可能是亚胺培南和美洛培南耐药的主要原因.     

铜绿假单胞菌耐消毒剂基因检测

目的了解深圳市人民医院临床分离的铜绿假单胞菌耐季胺盐类消毒剂基因(qac)的检出率及基因型。方法收集深圳市人民医院近几年铜绿假单胞菌临床分离菌株63株,应用PCR法检测菌株的qacA/B、qacC、qacG、qacJ和qacE△1基因。结果63株铜绿假单胞菌中,qacE△1基因阳性51株(80.9%),qacA/B基因阳性5株(7.9%),其余的基因型未检出。结论我院临床分离的铜绿假单胞菌中耐季铵盐类消毒剂基因检出率较高,主要为qacE△1型。     

呼吸科住院患者耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌抗菌药物敏感性及其分子特征

目的调查深圳市人民医院呼吸科住院患者耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌（CRAB）的抗菌药物敏感性和耐药分子机制,以及克隆流行情况。方法收集2010年深圳市人民医院呼吸科住院患者临床分离CRAB29株,琼脂稀释法测定亚胺培南等15种抗菌药对CRAB的最低抑菌浓度（MIC）,PCR和DNA测序分析CRAB碳青霉烯酶基因型,脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析菌株同源性。结果多粘菌素B对29株CRAB抗菌活性最强,敏感性100％,MIC50／MIC90为1／1μg/mL,其次米诺环素,敏感性96．6％,MIC50／MIC90为4／4μg/mL,替加环素中介率高达96．6％,MIC50／MIC90为4／4μg/mL。96．6％（28／29）CRAB携带ISAba1—blaOXA-23-like,对亚胺培南和美罗培南高度耐药,亚胺培南和美罗培南的MIC集中分布在32—64μg／mL;1株携带ISAba1—blaOXA-51-like CRAB,对亚胺培南和美罗培南中度耐药,亚胺培南和美罗培南的MIC分别为4μg/mL和8μg/mL。29株CRAB未发现blaOXA-24-like、blaOXA-143-like、金属酶基因及KPC酶基因。29株CRAB经PFGE分型共分2型,以A型28株（96．6％）为主要流行克隆,均携带ISAba1-blaOXA-23-like。结论2010年我院呼吸科临床分离CRAB主要携带ISAba1—blaOXA-23-like基因,并以克隆播散流行。     

危重病房耐碳青霉烯酶鲍曼不动杆菌同源性研究

目的探讨杭州市第一医院危重病房耐碳青霉烯酶鲍曼不动杆菌之间的同源性,进行分子流行病学调查,旨在为制定预防和控制其院内感染的措施提供依据。方法收集该院危重病房2005年1月至12月分离到的34株亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌。采用全自动微生物分析系统VITEK-AMS60对34株耐碳青霉烯酶鲍曼不动杆菌进行鉴定及药敏;用琼脂稀释法和E-test法测定14种抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC),脉冲场凝胶电泳(PF-GE)分析其耐药株的同源性,对碳青霉烯类基因OXA-23型、OXA-24型、IMP型、VIM型基因进行PCR扩增及序列分析。结果PFGE发现34株鲍曼不动杆菌菌株为同一耐药克隆株,在危重病房呈爆发流行。所有对亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌明确产OXA-23型碳青霉烯酶,未检出OXA-24、IMP、VIM基因型。34株菌株质粒提取未成功。结论该院同一个耐药克隆株在危重病房不同患者身上流行,可能与行气管插管、呼吸机、氧气湿化瓶、护士手操作有关。     

单味中药对多重耐药鲍曼不动杆菌 体外抑菌作用的研究

目的研究鱼腥草等10种广谱抗菌中药对多重耐药鲍曼不动杆菌的抑菌作用,为临床治疗多重耐药鲍曼不动杆菌的感染提供新的治疗思路和途径。方法采用药敏纸片琼脂扩散法和微量肉汤稀释法测定板蓝根、鱼腥草、黄芩、黄连、五倍子、金银花、苦参、连翘、乌梅和穿心莲等10种单味中药的抑菌效果和最低抑菌浓度(MIC)。结果五倍子对多重耐药鲍曼不动杆菌抑菌作用最强,抑菌圈直径为17~30mm,MIC值为0.975mg/mL;黄芩也有较好的抑菌效果,MIC值为15.63mg/mL;乌梅抑菌作用相对较弱;而黄连、鱼腥草、连翘、板蓝根、苦参、金银花和穿心莲的抑菌活性很弱甚至无抑菌效果。结论 10种单味中药中五倍子对多重耐药鲍曼不动杆菌的抑菌效果最强,为临床用药提供有效指导。     

黄酮化合物对耐药性鲍曼不动杆菌抑菌作用研究

为探索中药黄酮化合物对耐药性鲍曼不动杆菌的抑菌效果。研究通过微量肉汤稀释法,考察40种中药及天然来源的黄酮化合物对三株耐药性鲍曼不动杆菌菌株的体外抑菌作用,测试其最低抑菌浓度与最低杀菌浓度;采用结晶紫染色法进一步测定目标化合物对鲍曼不动杆菌生物被膜形成的能力;探索黄酮联合头孢哌酮/舒巴坦对鲍曼不动杆菌的抑菌效果。研究表明,黄酮单体对于鲍曼不动杆菌具有不同程度的体外抑菌作用。其中部分具有轻微作用,其最小抑菌浓度仅为0.5 mg/mL;黄芩素和汉黄芩苷具有显著的抑菌作用,其最小抑菌浓度分别为0.062 5和0.125 mg/mL;同时,黄芩素对鲍曼不动杆菌生物被膜形成具有明显的抑制作用。此外,黄芩素和头孢哌酮/舒巴坦联合作用于耐药鲍曼不动杆菌与单用黄芩素或头孢哌酮/舒巴坦比较,浓度有所降低。综上,黄芩素对耐药性鲍曼不动杆菌有较好的体外抑菌效果,这为治疗耐药性鲍曼不动杆菌引发的感染的治疗提供新思路和方向。     

主动外排机制在鲍曼不动杆菌耐药性中的作用

目的探讨细菌主动外排机制在临床分离的鲍曼不动杆菌耐药性中的作用。方法琼脂稀释法检测临床分离的鲍曼不动杆菌对常用抗生素的耐药性,测定经外排泵抑制剂碳酰氰基-对-氯苯腙（CCCP）处理前后鲍曼不动杆菌对抗生素最小抑菌浓度（MIC）的变化,以聚合酶链反应（PCR）、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测多重耐药主动外排基因以出及其表达水平。结果临床分离的鲍曼不动杆菌对常用抗生素耐药率高且具有多重耐药性,并存在药物的主动外排。所有临床分离的菌株均能检测到adeB基因,但多重耐药株表达水平明显高于敏感株（P〈0．01）。结论临床分离的鲍曼不动杆菌的耐药性尤其是多重耐药性与外排泵介导的耐药机制密切相关。     

Molecular characteristics and resistant mechanisms of imipenem-resistant <Emphasis Type="Italic">Acinetobacter baumannii</Emphasis> isolates in Shenyang,China

The investigation was carried out to elucidate the molecular characteristics and resistant mechanisms of imipenem-resistant Acinetobacter baumannii. Thirty-seven isolates were collected from January 2007 to December 2007. The homology of the isolates was analyzed by both pulsed field gel electrophoresis (PFGE) and multilocus sequence typing (MLST). The genes of β-lactamases, adeB, and class 1 integron were polymerase chain reaction amplified. Genotype analysis of the 37 A. baumannii isolates by PFGE revealed the circulation of four PFGE types (A-D); the A- and B-type accounted for 48.6% and 40.5%, respectively. MLST showed the existence of three allelic profiles. The agar dilution method was carried out to determine the MIC of imipenem, in the absence or presence of carbonyl cyanide m-chlorophenylhydrazone (CCCP, 10 μg/ml). The MICs of the strains to imipenem were between 16 μg/ml and 128 μg/ml. When CCCP was added, a MIC decrease of at least four-fold was observed in 20 isolates, which belonged to the A- or C-type. AdeB and bla _PER-1 genes were each detected in 35 isolates, bla _OXA-23 gene in 34 isolates and bla _OXA-58-like gene in 24 isolates. All isolates harbored bla _OXA-51-like genes. No isolates carried the bla _IMP-1 gene. Integron was detected in 25 isolates, which mediated the resistance to aminoglycosides and rifampin. The epidemiologic data suggested that the increasing infection of A. baumannii in our hospital was mainly caused by the inter-hospital spread of two epidemic clones. The AdeABC efflux system may be the important factor that leads to the high level of imipenem-resistance in PFGE A-type.     

舒巴坦与亚胺培南对多重耐药鲍曼不动杆菌体外联合抗菌活性研究

目的评价舒巴坦与亚胺培南对临床分离的80株多重耐药鲍曼不动杆菌的体外联合抗菌活性,为临床治疗多重耐药鲍曼不动杆菌的感染提供实验依据。方法采用琼脂稀释、棋盘设计法测定舒巴坦与亚胺培南单用及联合应用对临床分离的80株多重耐药鲍曼不动杆菌的最小抑菌浓度（MIC）,并计算抑菌浓度指数（FIC）,判定联合效应：FIC≤0．5为协同作用,0．5〈FIC≤1．0为相加作用,1．0〈FIC≤2．0为无关作用,FIC〉2．0为拈抗作用。结果舒巴坦与亚胺培南联州后,两种药物对多重耐药鲍曼不动杆菌的MIC值均显著降低,FIC指数在0—0．5、0．5～1的百分率为12．5％、85．0％。结论舒巴坦与亚胺培南联用对多重耐药鲍曼不动杆菌的抗菌作用主要呈现协同和相加作用,并以相加作用为主。     

ICU耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌同源性研究

目的探讨重症监护病房（ICU）耐碳青霉烯酶鲍曼不动杆菌（CRAB）之间的同源性,并了解是否存在耐药菌株的克隆流行。方法收集宁波大学附属医院ICU 2010年2月至2011年5月分离到的CRAB 40株,常规药敏试验采用K-B法。用脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析其耐药株的同源性。结果阿米卡星的敏感率最高为100%,其次米诺环素敏感率为50%;PFGE结果显示,40株CRAB菌株分为A、B、C三型,A型22株,主要分离时段为2010年2月～3月（16株）和2011年1月-2011年2月（6株）;B型16株,主要分离时段为2010年5月-6月（16株）,C型为C1亚型和C2亚型各1株为散发型。结论调查期间CRAB主要的PFGE基因型为A型和B型菌株克隆流行,流行相关的克隆株可在病区长期生存,从而引起病区持续感染,需要积极采取感染控制措施;同时不同时段主要流行株由克隆株A变为克隆株B,推测同一个病区的流行基因型可能存在流行变迁。     

Resistance of Staphylococcus aureus strains to quaternary ammonium compounds and chlorhexidine

The level of susceptibility of 90 different Staphylococcus aureus strains to chosen quaternary ammonium compounds: cetyltrimethyl ammonium bromide, benzalkonium chloride and benzethonium chloride as well as to chlorhexidine digluconate were examined. The examined strains consist of three groups: hospital originated MRSA, hospital originated MSSA and non-hospital MSSA. The significant differences between these groups were observed in they susceptibility to the investigated disinfectants. The obtained MIC values showed that the most resistant were hospital MRSA strains, where 55% was estimated as resistant to cetyltrimethyl ammonium bromide, 72% were resistant to benzalkonium chloride and benzethonium chloride and 7% were resistant to chlorhexidine digluconate. Among hospital originated MSSA 3% of strains were resistant to cetyltrimethyl ammonium bromide and 6% were resistant to benzalkonium chloride and benzethonium chloride. 14% non-hospital S. aureus strains were resistant to benzalkonium chloride and benzethonium chloride. None were resistant to chlorhexidine digluconate or cetyltrimethyl ammonium bromide.     

鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素的耐药性分析

目的了解鲍曼不动杆菌的耐药情况,并检测耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的耐药基因,为指导临床合理用药、控制院内感染提供依据。方法利用K-B法检测45株鲍曼不动杆菌临床分离株的耐药情况,通过改良Hodge试验、Carba NP试验和EDTA协同试验对多重耐药鲍曼不动杆菌的碳青霉烯酶进行表型检测,并采用PCR技术检测鲍曼不动杆菌携带OXA-23和NDM-1型耐药基因的情况。结果 45株鲍曼不动杆菌临床分离株中共筛出42株多重耐药菌株;利用改良Hodge试验和Carba NP试验检出36株碳青霉烯酶阳性菌株;采用PCR扩增出OXA-23,未扩增出NDM-1。结论鲍曼不动杆菌耐药情况严重,且耐药基因OXA-23携带率高,治疗时应根据药敏试验结果合理用药。