环孢菌素A对脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤的保护作用

目的：探讨线粒体渗透性转换孔道抑制剂环孢菌素A（CsA）对脂多糖（LPS）诱导的小鼠急性肺损伤可能的保护作用。方法：LPS 4 mg/kg气管内滴入复制小鼠急性肺损伤模型,实验随机分为5组（n=24）：分别为正常对照组、LPS组、地塞米松组、CsA组和CsA＋苍术苷组。6 h后小鼠处死,测定各组支气管肺泡灌洗液乳酸脱氢酶（LDH）的含量,酶联免疫吸附法测定肺组织匀浆液TNF-α浓度,测定肺组织湿/干重比和肺毛细血管通透性指数。结果：气管内滴入LPS 6 h后,CsA组与LPS组相比,肺泡灌洗液中LDH活性降低,肺组织匀浆液TNF-α浓度下降,肺组织湿/干重比、肺毛细血管通透性指数均明显下降,但CsA＋Atr组与LPS组相比无明显区别。结论：环孢菌素A对脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤有保护作用,其机制可能与其抑制线粒体渗透性转换孔道的开放有关。     

脂多糖对新生小鼠肺血管内皮细胞的影响及机制探讨

该文旨在探讨脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)对新生小鼠肺血管内皮细胞的影响及机制。将分离培养的肺血管内皮细胞随机分为空白对照组和LPS组;用10μg/mL的LPS处理细胞后分别于0 h、6 h、12 h、24 h、48 h时间点收集细胞标本进行检测;采用划痕实验观察LPS对肺血管内皮细胞迁移的影响;用荧光定量PCR(Real-time PCR, RT-PCR)检测白介素-1β(IL-1β)、巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α) mRNA水平变化; Western blot检测血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)及核因子κB(nuclear factor kappa-B, NF-κB)相关蛋白P65水平的变化。结果显示,体外分离培养的肺血管内皮细胞成鹅卵石样排列, VIII因子相关抗原和CD31表面抗原荧光染色阳性。划痕实验中, LPS组细胞在12 h的迁移高于对照组(P0.001);荧光定量PCR检测到LPS组分泌的炎症因子IL-1β、TNF-α和趋化因子MIP-1α、MCP-1的mRNA表达明显高于对照组(P0.001); Western blot显示, LPS组与对照组相比, VEGF蛋白表达在24 h、48 h处降低(P0.05), VEGFR2蛋白表达在各时间段都明显降低(P0.001),同时, NF-κB相关蛋白P65活性显著升高(P0.05)。研究表明,脂多糖诱发的炎症反应影响肺血管内皮细胞的发育,其机制可能与NF-κB通路激活,诱导炎症因子、趋化因子表达升高和VEGF/VEGFR2表达下降有关。     

脂多糖诱导大鼠急性肺损伤的机制研究

目的:观察NF-κB及CyPA在内毒素诱导急性肺损伤大鼠肺组织的活性变化,探索NF-κB及CyPA在内毒素诱导急性肺损伤的发病机理中的作用.方法:36只雄性SD大鼠随机分为2组:A组:正常对照组(n=18)尾静脉注射等量生理盐水;B组:内毒素组(LPS)(n_18):经尾静脉注射LPS 5 mg/kg;分别于造模后6、24、72小时,处死动物收取标本,每个时间点6只(LPS的24小时组因1只死亡固只处死5只).分别测定肺湿重/干重、肺组织TNF-α、IL-1β、NF-κB及CyPA.结果:湿重/干重:B组各个时间点均明显高于A组(P＜0.05);同一时间点的比较:B组较A组显著性升高,P＜0.05;NF-κB的核内表达量及肺组织CyPA的表达各个时间点之间B组均显著高于A组,P＜0.001;结论:NF-κB及CyPA在内毒素诱导大鼠急性肺损伤的发病机理中起了重要的作用.     

淫羊藿苷及宝藿苷Ⅰ对气管切开模型大鼠肺组织病理学及炎症因子的影响

目的探讨淫羊藿苷及其代谢产物宝藿苷I对气管切开模型大鼠肺组织病理及炎症的影响。方法将72只SPF级雄性SD大鼠随机分成四组,正常对照组(A)、模型非用药组(B)、模型+宝藿苷I组(C)、模型+淫羊藿苷组(D),每组18只。制备大鼠气管切开插管留置模型。模型成功6h后给予C组宝藿苷I,D组淫羊藿苷干预,A、B组给与等量0.9%生理盐水。分别在24、72、168h取肺组织及肺泡灌洗液。肺组织用苏木精-伊红染色(HE染色),光镜下观察分析肺组织的病理学改变;ELISA检测肺泡灌洗液白细胞介素6(IL-6),肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达。结果1)肺组织病理结果显示:气管切开后B组大鼠肺损伤程度随时间延长逐渐加重,明显高于A组(P<0.05)。C、D组肺损伤程度均明显轻于B组,且D组在24、168h均明显轻于C组(P<0.05)。D组在168h病理评分明显降低(与24h比较P<0.01)。(2)肺泡灌洗液IL-6、TNF-α含量:气管切开插管后大鼠肺泡灌洗液IL-6和TNF-α含量在三个时段均明显高于A组(P<0.05)。用宝藿苷I和淫羊藿苷干预后,C、D组IL-6、TNF-α含量在72、168h明显低于B组(P<0.05);且C、D组组内IL-6和TNF-α含量在72、168h明显低于24h(P<0.05);D组与C组相比,IL-6含量无明显统计学差异(P>0.05)。D组TNF-α在72h、168h均明显低于C(P<0.05)。结论宝藿苷I和淫羊藿苷对气管切开术后早期肺部炎症有一定疗效,其机制与抑制肺泡灌洗液炎症因子IL-6、TNF-α的表达,减轻肺组织损伤有关,且淫羊藿苷效果更佳。     

Apelin-13对LPS诱导人脐静脉内皮细胞屏障损伤的干预作用*

目的: 探讨Apelin-13对LPS诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)屏障损伤的影响。方法: 将体外培养的HUVECs分为4组:正常对照组、LPS组、Apelin-13+LPS组、Apelin-13组。用5 μg/ml LPS作用细胞24 h, 复制屏障功能受损模型。1 μmol/L Apelin-13提前30 min给予,再给予LPS作用24 h,确定Apelin-13的影响。通过CCK8法检测Apelin-13对细胞活力的影响;Western blot检测血管内皮细胞钙粘蛋白(VE-cadherin)、纤维状肌动蛋白(F-actin)表达变化;免疫荧光检测VE-cadherin、F-actin的表达变化及核转录因子Kappa B(NF-κB p65)入核情况。结果: 与正常对照组相比,单独给予Apelin-13对细胞活力无明显影响。与正常对照组相比,LPS组细胞活力明显下降(P＜0.01),VE-cadherin蛋白表达下降(P＜0.01)、F-actin蛋白表达升高(P＜0.05),NF-κB p65入核明显增加。与LPS组相比,Apelin-13明显增加细胞活力(P＜0.01),VE-cadherin蛋白表达增加(P＜0.05)、F-actin蛋白表达下降(P＜0.01),蛋白NF-κB p65入核下降明显。结论: Apelin-13可减轻LPS诱导的人脐静脉内皮细胞损伤及屏障受损,其机制可能与抑制炎症相关。     

EGb761对LPS诱导THP-1细胞释放HMGB1蛋白表达的调节

目的:探讨EGb761对LPS诱导THP-1细胞释放HMGB1蛋白表达的调节,为EGb761的临床运用提供可行的依据。方法:LPS(1μg/m L)诱导不同时间后,western blotting检测THP-1细胞上清液中HMGB1蛋白含量变化及不同浓度EGb761对LPS诱导THP-1细胞释放HMGB1蛋白的表达和NF-κB的活性;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量。共聚焦显微镜观察EGb761对LPS诱导THP-1细胞释放HMGB1蛋白核转位变化。结果:(1)LPS组IL-1β、IL-6、TNF-α的含量在刺激6-12 h后明显高于空白对照组,而EGb761+LPS组IL-1β、IL-6、TNF-α的含量均显著低于LPS组(P0.05)。(2)EGb761处理LPS诱导THP-1细胞6 h后细胞上清液NF-κB活性表达量较空白对照组低,随着处理时间延长至12 h,NF-κB的活性表达量呈明显下降趋势(P0.05)。(3)LPS诱导THP-1细胞18 h后,细胞上清液中HMGB1蛋白含量呈明显升高趋势(P0.05)。(4)不同浓度EGb761对LPS诱导THP-1细胞18 h后,HMGB1蛋白含量较空白对照组有下降趋势,HMGB1蛋白含量随着EGB761浓度增加至100μg/m L呈下降趋势并呈浓度依赖效应(P0.05)。(5)LPS诱导THP-1细胞后,在共聚焦显微镜下可见胞浆中大量HMGB1蛋白标记分布,而EGb761+LPS共同诱导THP-1细胞后胞浆中可见少量HMGB1蛋白分布。结论:LPS可诱导THP-1细胞IL-1β、IL-6、TNF-α表达增多及NF-κB活化,导致HMGB1蛋白表达增多及核转位,而EGB761能抑制THP-1细胞IL-1β、IL-6、TNF-α表达及NF-κB活化,调节HMGB1蛋白的表达及核转位。     

硫酸镁对脑源性肺损伤综合征的影响

目的探讨不同剂量的硫酸镁(MgSO4)对大鼠脑源性肺损伤后神经源性肺水肿、血浆炎性因子TNF-α及肺组织病理形态学变化的影响。方法将30只SD雄性大鼠按随机数字法分为假手术组(A组)、模型组(B组)及硫酸镁50mg/kg干预组(C组)、硫酸镁100mg/kg干预组(D组)、硫酸镁200mg/kg干预组(E组),每组6只。建立大鼠颅脑损伤模型后,硫酸镁干预组即刻按50mg/kg 25%MgSO4腹腔注射,C组注射1次、D组注射2次、E组注射4次,每8h注射1次。A组及B组的大鼠注射相同剂量生理盐水作对照,C组大鼠注射1次及D组大鼠注射2次MgSO4后给予注射相同剂量的生理盐水作对照,注射方法及间隔时间同E组。伤后48h测定大鼠肺组织含水量、血浆TNF-α浓度,肺组织常规HE染色,光镜观察肺组织病理形态学变化。结果大鼠颅脑创伤后肺组织含水量均高于假手术组,以C组最明显(P0.05),差异有统计学意义。B、C、D、E组大鼠之间肺组织含水量比较差异无统计学意义。B、C、D、E组大鼠TNF-α浓度均明显高于假手术组(P0.05),D组血浆TNF-α浓度明显低于B组(P0.05),E组血浆TNF-α浓度明显低于B组(P0.01),其他各组间差异无统计学意义。假手术组肺组织形态正常,肺血管无扩张,无炎症细胞浸润;B、C、D、E组与假手术组比较均可见终末支气管腔内充满炎症细胞,周围肺组织的肺泡腔内可见炎细胞浸润,肺血管扩张、充血。B、C、D、E组在炎症细胞浸润及肺毛细血管扩张方面无明显差异。结论脑外伤可导致脑源性肺损伤综合征,可导致神经源性肺水肿;硫酸镁可降低大鼠脑损伤后血浆TNF-α浓度,对肺水肿无明显影响。     

硫化氢对大鼠内毒素性急性肺损伤肺泡表面活性物质的影响

目的：观察脂多糖（LPS）所致内毒素性急性肺损伤（ALI）大鼠肺泡表面活性物质（PS）的变化及硫化氢（H2S）对PS的影响,探讨H2S对肺脏的作用机制。方法：雄性SD大鼠共48只,随机分为6组（n=8）：空白对照组、LPS组、LPS＋NaHS低、中、高剂量组、LPS＋PPG组。空白对照组给予生理盐水,LPS组给予LPS,LPS＋NaHS低、中、高剂量组和LPS＋PPG组分别在给予LPS3h时腹腔注射低、中、高剂量氢硫化钠（NariS）或炔丙基甘氨酸（PPG）。各组均于给予生理盐水或LPS6h时电镜下观察肺泡Ⅱ型上皮细胞（AEC-Ⅱ）的形态改变,检测血浆中H2S含量、肺组织中胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）活性、肺泡灌洗液（BALF）中总蛋白（1P）和总磷脂（TPL）含量、及肺组织中肺泡表面活性蛋白A、B、C（SP-A、B、C）mRNA表达的变化。结果：①与空白对照组比较,LPS组AEC-Ⅱ超微结构明显受损,血浆中H2S含量、肺组织中CSE活性、BALF中TPL的含量、及肺组织中SP-A、B、CmRNA表达均明显降低（P〈0．05,P〈0．01）,BALF中TP的含量明显增加（P〈0．01）;②与LPS组比较,LPS＋NaHS低、中、高剂量组,AEC-Ⅱ超微结构均有所恢复,血浆中H2S含量、肺组织中CSE海性、SP-AmRNA表达均明显升高（P〈0．05,P〈0．01）;LPS＋NaHS中、高剂量组BALF中吼含量明显增高,SP-BmRNA表达升高（P〈0．05）;LPS＋NaHS高剂量组BALF中,IP含量明显降低（P〈0．05）;LPS＋NaHS各剂量组SP-CznRNA表达无明显变化;③与LPS组比较,LPS＋PPG组AEC-Ⅱ超微结构仍损伤严重,血浆中H2S含量、肺组织中CSE活性、BALF中TPL的含量、及肺组织中SP-A、B、CmRNA表达均明显降低（P〈0．05）,BALF中TP的含量明显升高（P〈0．05）。结论：PS降低是内毒素性ALI的重要病理生理过程,H2S对LPS诱导的ALI有保护性作用,其机制可能与H2S对PS的调节有关。     

银杏叶提取物对内毒素诱导巨噬细胞核因子-κB活化及炎性细胞因子表达的调节

探讨银杏叶提取物（EGb761）对内毒素（LPS）诱导RAW264．7细胞核因子-κB（NF-κB）活化及炎性细胞因子基因表达的调节,为银杏叶提取物的临床运用提供理论依据．分别用LPS或EGb761＋LPS处理体外培养的小鼠巨噬细胞系RAW264．7细胞,采用蛋白质印迹分析检测细胞中NF-κB活性,用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA和蛋白的表达．研究结果表明LPS组NF-κB活性和TNF-α、IL-1β、IL-6含量在刺激后2～12h明显高于正常对照组,而EGb761＋LPS组NF-κB活性和TNF-α、IL-1β、IL-6含量均显著低于LPS组．结果提示LPS可诱导RAW264．7细胞NF-κB活化,导致TNF-α、IL-1β、IL-6基因表达增强,而EGb761能抑制NF-κB活化而调节TNF-α、IL-1β、IL-6基因的表达．     

百草枯中毒大鼠TNF-α、IL-10 的表达及大黄保护作用的研究

目的:观察大黄对急性百草枯中毒大鼠TNF-α、IL-10的干预作用,探讨其可能的作用机制。方法:90只SD大鼠随机分为生理盐水对照组(A组)、PQ(60 mg/kg)灌胃染毒组(B组)、生大黄(300mg/kg.d)干预组(C组),每组30只。中毒后6h、24h、72h分批处死存活的大鼠,并且检测大鼠血浆TNF-α、IL-10水平。结果:B组、C组TNF-α、IL-10水平在染毒后6h开始升高,72h达到高峰,与A组相比,差异有统计学意义(P<0.05、P<0.01),在相同时间点C组TNF-α和IL-10的表达低于B组,差异均有统计学意义(P<0.01)。B组、C组血浆TNF-α、IL-10水平与中毒时间呈显著正性相关关系(r=0.849,P<0.01;r=0.790,P<0.01;r=0.0.943,P<0.01;r=0.892,P<0.01)。结论:大黄能够通过降低百草枯中毒大鼠体内的TNF-α、IL-10水平,减轻百草枯对大鼠的损伤作用。     

Instillation and Fixation Methods Useful in Mouse Lung Cancer Research

The ability to instill live agents, cells, or chemicals directly into the lung without injuring or killing the mice is an important tool in lung cancer research. Although there are a number of methods that have been published showing how to intubate mice for pulmonary function measurements, none are without potential problems for rapid tracheal instillation in large cohorts of mice. In the present paper, a simple and quick method is described that enables an investigator to carry out such instillations in an efficient manner. The method does not require any special tools or lighting and can be learned with very little practice. It involves anesthetizing a mouse, making a small incision in the neck to visualize the trachea, and then inserting an intravenous catheter directly. The small incision is quickly closed with tissue adhesive, and the mice are allowed to recover. A skilled student or technician can do instillations at an average rate of 2 min/mouse. Once the cancer is established, there is frequently a need for quantitative histologic analysis of the lungs. Traditionally pathologists usually do not bother to standardize lung inflation during fixation, and analyses are often based on a scoring system that can be quite subjective. While this may sometime be sufficiently adequate for gross estimates of the size of a lung tumor, any proper stereological quantification of lung structure or cells requires a reproducible fixation procedure and subsequent lung volume measurement. Here we describe simple reliable procedures for both fixing the lungs under pressure and then accurately measuring the fixed lung volume. The only requirement is a laboratory balance that is accurate over a range of 1 mg–300 g. The procedures presented here thus could greatly improve the ability to create, treat, and analyze lung cancers in mice.     

血栓调节蛋白在胚胎肺及肺癌中的表达

目的研究血栓调节蛋白(thrombomodulin,TM)在胚胎肺、正常肺组织及肺癌组织中的表达。方法以不同周龄的胚胎肺组织、正常成人肺组织、肺癌组织为研究对象,应用免疫组织化学SP法检测TM的存在。结果8、15、18、21、24、27、29周人胎肺组织中,TM在气管纤毛柱状上皮细胞、I型和Ⅱ型肺泡上皮细胞及软骨、结缔组织均呈阴性表达,围绕肺泡上皮细胞团周围的血管内皮细胞阳性表达。正常成人支气管纤毛柱状上皮细胞、肺泡上皮细胞不表达,但在血管内皮细胞呈阳性表达。TM在鳞状上皮不典型增生的细胞膜和细胞问桥表达,在肺鳞癌表达,阳性率为97．3％(34／35),在癌细胞膜和细胞问桥阳性表达,但腺癌、小细胞癌癌细胞不表达。结论TM在胚胎肺以及成人肺仅见于血管内皮细胞,在支气管上皮、肺泡上皮不表达。与其它的血管内皮细胞标记物不同,TM的表达在肺鳞癌与腺癌表扶明显不同．右助于鉴别肺鳞癌与肺腺癌．     

肠道、肺部菌群直接或通过肠—肺轴对 呼吸系统慢性疾病的影响

人体寄生的微生物与人体为共生关系,数量庞大,并形成不同的微生态系统,影响人体免疫、代谢、内分泌等生理过程。菌群失衡导致微生态紊乱,从而导致相关疾病的发生发展。呼吸系统慢性疾病患者常有肠道菌群和肺部菌群的改变,肠道菌群通过肠-肺轴影响呼吸系统免疫及呼吸系统慢性疾病,肺部菌群的改变导致肺部疾病的同时亦会通过血流引起肠道菌群的变化。近年来随着高通量测序及生物信息学技术的发展,相关研究也越发被重视,本文着重对肠道菌群、肺部菌群通过肠-肺轴或直接在肺部免疫及呼吸系统慢性疾病中所起的作用进行综述。     

肺部病灶18F-FDG PET-CT显像与CT引导下穿刺活检结果对比分析

目的:探讨不同大小病灶18F-FDG PET-CT的显像特点与同层面CT引导下穿刺活检结果的关系.方法:回顾性研究经过18F-FDG PET-CT及CT引导下穿刺活检两种检查的病例,通过统计病灶的大小、病理、穿刺取材部位的放射性浓聚程度、SUVmax 来分析不同大小病灶18F-FDG PET-CT的显像特点与同层面CT引导下穿刺活检结果的关系.结果:69例患者,共穿刺74个痛灶,71个病灶测得SUVmax,放射性浓聚程度不同的病灶其穿刺敏感性、病灶大小的分布情况有显著性差异(P＜0.05),≤ 3cm组病灶放射性均匀浓聚率高,≥5cm组放射性均匀浓聚率低(P＜0.05),≤ 3cm的均匀浓聚的恶性病灶其SUVmax低于＞3 cm组(P＜0.05),良恶性病灶SUVmax无显著性差异(P＞0.05).结论:不同大小的病灶在18F-FDG PET-CT上放射性浓聚程度不同,反映了病灶生物学特性的空间差异,进而影响穿刺活检的准确率.     

水飞蓟宾抑制人肺癌细胞浸润的作用机制研究

目的通过观察水飞蓟宾对有高转移能力的人肺癌细胞A549相关酶的作用来研究水飞蓟宾对浸润和运动性的影响。方法应用细胞活性测定、细胞浸润和运动性分析、细胞-基质黏附实验、逆转录聚合酶链反应等技术完成实验。结果A549细胞用高达100μM的不同浓度的水飞蓟宾处理一定时间后,行明胶酶谱、酪蛋白酶谱以及蛋白印迹分析来确定水飞蓟宾对金属蛋白酶-2（MMP-2）的影响。结论水飞蓟宾治疗可以浓度以及时间依存性方式减少MMP-2表达。半定量RT—PCR分析进一步表明,水飞蓟宾可在转录水平调节MMP-2表达。     

不同剂量右美托咪定对肺癌根治术后认知功能的影响

目的：探讨不同剂量右美托咪定麻醉对肺癌根治术患者术后认知功能的影响。方法：选取我院收治的肺癌根治术患者60 例,根据不同剂量的右美托咪定分为A 组（高剂量）、B组（低剂量组）及C 组（不加右美托咪定）,每组各20 例。比较三组患者治疗 前后超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）、苏醒时间、拔管时间以及认知功能。结果：三组患者的基线资料及术中情况比较 无差异,P＞0.05;术后SOD 水平呈先降低后升高的趋势,MDA呈先升高后降低的趋势。A组在第三天时SOD值较其他两组高, MDA在第1天与第3 天时较其他两组低,P＜0.05;术后1 天认知程度比较,A 组认知功能较其他两组高,P＜0.05;三组苏醒时间 和拔管时间相比较,A 组明显优于其他两组,P＜0.05。结论：右美托咪定麻醉能够降低氧化应激损伤,影响肺癌根治术患者术后认 知功能,缩短苏醒时间、拔管时间。     

Mouse Pneumonectomy Model of Compensatory Lung Growth

In humans, disrupted repair and remodeling of injured lung contributes to a host of acute and chronic lung disorders which may ultimately lead to disability or death. Injury-based animal models of lung repair and regeneration are limited by injury-specific responses making it difficult to differentiate changes related to the injury response and injury resolution from changes related to lung repair and lung regeneration. However, use of animal models to identify these repair and regeneration signaling pathways is critical to the development of new therapies aimed at improving pulmonary function following lung injury. The mouse pneumonectomy model utilizes compensatory lung growth to isolate those repair and regeneration signals in order to more clearly define mechanisms of alveolar re-septation. Here, we describe our technique for performing mouse pneumonectomy and sham pneumonectomy. This technique may be utilized in conjunction with lineage tracing or other transgenic mouse models to define molecular and cellular mechanism of lung repair and regeneration.