线形质粒

质粒是染色体外的遗传因子,是一种双链环状的DNA分子,质粒本身含有复制的遗传结构,能在细胞质中独立自主地进行自我复制。它是一个复制子。一些质粒也能整合到细菌染色体中随染色体的复制而复制。质粒一般都带有某些抗性基因。     

质粒RP4的一株杀宿主温度敏感突变体的研究

质粒是细菌染色体外的遗传因子。一般来说质粒的存在与否并不影响宿主细胞的正常生长。但是当宿主细胞存在某些缺陷时,质粒所带的某些基因可以代替宿主缺陷基因的功能,这一点很早就为F′的遗传学分析所说明。与此相反,已有一些报道表明,某些基因发生了突变的质粒,或者通过重组DNA技术所形成的某些杂种质粒(例如带生长激素释放抑制因子基因的杂种质粒PSOM 11-3),可以严重影响宿主细胞的生长,甚至杀死宿主细胞。因此质粒基因与宿主基因的相互关系的研究,不仅有助于进一步弄清原核生物基因的调控机制,也可以借此深入了解某些突变质粒或杂种质粒对宿主产生有害影响的原因。这在遗传工程上也是有一定价值的。     

叶绿体遗传工程

叶绿体遗传工程,是利用DNA重组技术将 叶绿体DNA片段同载体质粒DNA体外连接, 再将重组质粒引人到受体细胞中,借以研究叶 绿体DNA的基因组成及其功能表达的重要手 段。叶绿体遗传体系,是构成植物细胞中三个 遗传体系之一。叶绿体DNA编码一系列重要 性状,例如,在光合作用中固定Co,的RuBPC 酶的大亚基,并且与某些高等植物的花粉育性 有关,是染色体外遗传研究的主要对象。尤其 值得注意的是,叶绿体DNA在一系列特性方 面均与原核生物相近似,通过叶绿体遗传工程, 实现真核与原核生物之间的遗传重组,目前虽 仍处于试验阶段,但它可能引起的后果,则是人 们难以预料的。此外,叶绿体DNA经过改造使 之带有适当的标记性状之后,也是一个良好的 载体。由于以上原因,叶绿体遗传工程研究日 益受到重视。本文将综述这方面研究进展,供 参考。     

用Ti质粒体外转化植物原生质体

进行遗传工程研究需要有一种方法把DNA引入宿主细胞,继而让其整合进宿主基因组并表达其基因功能。虽然,在哺乳动物、酵母和细菌中已有若干媒介DNA转移基因的方法。不过,还没有这样的方法可用于植物细胞。植物细胞吸收DNA的主要障碍是细胞壁,但用植物原生质体时,这一障碍是可所克服的。     

痢疾杆菌大质粒的快速分离与检测

质粒是细菌染色体外小的共价闭环DNA(cccDNA)。质粒的分离与检测是微生物遗传学、基因工程等研究中的基本手段之一。Kopecko叙述了痢疾杆菌大质粒的分离方法,但过程较繁。国内分离痢疾杆菌大质粒并检测其分子量的工作尚未见报道。     

令人瞩目的细菌和植物的相互作用

<正> 目前,有关细菌-植物相互作用的分子生物学的大多数研究可分为两方面。1984年6月4～8日在美国康奈尔大学举行的细菌-植物相互作用的第二次学术讨论会上,这两方面都受到极大注意。会上提出的大部分论文都涉及到豆科作物(如大豆或三叶草)根系中固氮根瘤细菌功能的研究。在数量上接近第二位的是有关Ti细菌质粒的论文,该质粒在植物上引起冠瘿肿瘤,已成为重要的遗传工程工具。这些学术论文中,德国的两篇论文有些不同寻常。拜鲁兹大学的研究人员Mahavir Siagh和Walter Klingmüller研究了土壤中与小麦根系有密切关系的一种固氮微生物Enterbacter agglomerans,他们发现这种菌带有质粒,而固     

痢疾杆菌大质粒的快速分离与检测

质粒是细菌染色体外小的共价闭环DNA (cccDNA)。质粒的分离与检测是微生物遗传 学、基因工程等研究中的基本手段之一。Kopeckots, 叙述了痢疾杆菌大质粒的分离方法,但过 程较繁。国内分离痢疾杆菌大质粒并检测其分 子量的工作尚未见报道。     

运用重组细菌生产L-异亮氨酸

用遗传工程细菌进行好气发酵,生产出了L-异亮氨酸,比传统用的人工诱变法获得的突变株的产率高。本专利提供的方法,是把含有短杆菌(Breoibacterium)或棒状杆菌(Corynebacterium)L-异亮氨酸产生菌染色体DNA的重组质粒,插     

书刊介绍

本书是介绍重组DNA必需具备的方法技术、实验材材、操作过程等的实用参考书。对分子生物学、遗传工程的科研、技术人员是很实用的。内容先汇集主要名词解释,然后分四部分:一、基本技术,包括质粒DNA分离的快速方法用氯化铯-溴乙淀(CsCl—EtBr)超速离心或柱型色层分离法分离质粒DNA,从CsCl-EtBr溶液复原质粒DNA,从     

一种简便快速检测质粒DNA的方法

简便、快速检测质粒DNA的方法,无论是 在筛选、鉴定新质粒或重组质粒的研究中都具有重要的意义。我们在将质粒pBR 322 DNA与 A DNA进行体外重组、筛选和鉴定重组子过程 中,摸索了一种简便快速检测质粒及重组质粒 DNA的方法。此法对菌体和溶菌产物不需任 何处理,比较简便易行     

质粒在细菌致病性中的作用与新菌苗研制的展望

<正>一、质粒 1.基本性质:质粒是广泛存在于原核细胞中的一种复制子,是独立于染色体之外的双链超螺旋DNA,它的复制不受染色体的控制。它的存在与消失一般不影响细菌的存亡。只影响某些性状的有无。 细菌染色体的分子量约在10~9的数量级而质粒只有10~6左右,最大的也只有10~8数量级。根据质粒的大小,一般可分为     

质粒拯救法克隆细菌基因组大片段

[目的]细菌基因组大片段尤其是基因簇的克隆与操作,是细菌基因功能分析的一个难点.基因组测序工作的不断完成和序列信息的大量积累,为细菌基因组:DNA的操作提供了方便.本文报道了利用细菌的全基因组信息和质粒拯救法的原理建立的一种克隆细菌基因组大片段的方法.[方法]首先,根据基因组序列信息,在待克隆片段的一侧扩增一段DNA,并将其克隆到自杀载体上构建打靶质粒,然后,将打靶质粒整合到细菌的基因组中构建重组菌,提取重组菌的基因组DNA,酶切,自连,转化,将自杀质粒与待克隆的目的片段一起拯救出来.最后,根据需要将拯救的DNA片段亚克隆到新的载体中.[结果]我们利用该方法克隆了布鲁氏菌中长度为11kb的virB操纵子,并构建了互补质粒.将该质粒导入到virB的突变株中后使virB操纵子的转录活性得到了恢复,表明该策略切实可行.[结论]这种重组克隆策略给我们提供了一种新的对细菌基因组大片段进行操作的方法.     

Ti质粒及其在植物遗传操作中的应用

根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)感 染双子叶植物的受伤组织能引起冠瘦瘤(crown gall).这是一种严重危害植物生长的病害（癌 症）。已知有90多科600余种的双子叶植物能 感染这种疾病r0单子叶植物和裸子植物对此 病很不敏感,只少数感染的实例。根癌农杆菌 含有一类诱瘤质粒,即Ti质粒(Tumor inducing plasmid),Ti质粒上带有致瘤基因。在诱瘤期间, Ti质粒的一段DNA能整合到植物细胞核中, 而使植物细胞发生转化,成为肿瘤细胞。因此 冠廖瘤是一种天然的“遗传工程系统”,又是研 究原核细胞DNA在真核生物中表述的一个模 式系统,极受分子遗传学家的注意,成了植物遗 传操作中深人研究的重要对象。有关冠寥瘤发 生的分子生物学概况最近已有详细综述E2,3,410 人们期望MIV分子遗传学技术对Ti质粒加以 改造,去除对植物有害的致瘤基因,但仍保留转 化功能,使它成为遗传工程的载体,将外源基因 引人植物细胞,以达到改造植物并创造新植物 类型的目的。近几年来在这一方面取得了巨大 的进展。     

脱氧核糖核酸（DNA）的制备

在实验生物学的研究中,DNA的制备已 成为一种常用的方法。根据实验材料和研究目 的不同,所用的制备方法也不同。本文主要介 绍质粒DNA和其它（动物组织、细菌）DNA 常用的制备方法。     

遗传工程微生物细胞间发生的自然遗传转化

将两株具有不同遗传标记的枯草芽孢杆菌在基本培养基中分别培养至对数生长后期后进行短时间混合静置培养 ,经选择平板筛选、DNaseI敏感性试验、质粒检测和产蛋白酶活性检测 ,发现两菌株之间可通过自然遗传转化进行染色体DNA和质粒DNA的交换。研究结果表明 ,自然遗传转化可在细胞间进行 ,这对揭示微生物群居的自然环境中可能存在的细胞间的DNA转移 ,以及正确评估遗传工程微生物(GEMs)的安全使用具有重要意义。     

DNA只有一条链能被转录吗

1981年,Tomizawa(美)首先发现在细菌Escherichiacoli体内的有义DNA(即以前认为不具有转录能力的DNA链)可转录形成一种不翻译表达的反义RNA对质粒(细菌体内一种小的DNA双链环)的复制进行调控。因为质粒的复制需要以一种特殊的RNA作为引物(详细的机理可参阅《生物学通报》1990,4《关于DNA复制的引物和DNA聚合酶》一文)而根据碱基互补原则,对应的反应RNA显然可以与它互补结合,从而使它丧失作为引物的能力。这样,细菌就可以通过对反义RNA转录数量的控制,达到调控质粒复制的目的。在随后短短的几年中,研究人员不断在病毒和细菌     

猪瘟DNA疫苗在猪体及环境的生物安全性研究

DNA疫苗生物安全性是其走向临床所须解决的关键问题之一。以猪瘟DNA疫苗为研究对象 ,探讨了其两个方面的生物安全性问题。一方面 ,将两种不同的猪瘟DNA疫苗质粒免疫猪后 ,利用PCR技术分析了其与猪细胞基因组整合的可能性 ,结果在灵敏度为 30拷贝的检测条件下 ,未发现猪瘟DNA疫苗整合到细胞基因组 ;另一方面 ,以PCR技术检测了免疫现场环境样品 ,以分析猪瘟DNA疫苗上的E2基因、CMV启动子基因和抗性基因是否在环境细菌中发生转移和扩散。结果未发现DNA疫苗转化环境细菌的直接证据。因此认为DNA疫苗对猪体和环境是安全的。     

微环DNA研究进展

质粒载体在基因治疗中占据重要地位.传统质粒DNA在真核生物中可能会引起严重的炎症反应,未甲基化的CpG序列可能抑制基因的表达,最好的解决办法是在生产质粒载体过程中将细菌调控序列整体消除.微环DNA是一种新颖的小环超螺旋表达框,它是传统质粒在大肠杆菌体内通过位点特异性重组得到的.微环DNA缺乏抗性标记基因、复制原点等细菌...     

叶绿体DNA在大肠杆菌中的无性增殖——带有豌豆叶绿体DNAEcoRI片段的重组质粒的某些特性和带有rRNA基因DNA顺序的无性增殖

我们先前报道过用丝裂霉素C挑选大肠杆菌素缺陷型重组质粒的筛选方法。用该方法得到了许多带有豌豆叶绿体DNAEcoRI片段扦入顺序的CPS重组质粒细菌克隆。本篇报道在细菌细胞内复制的叶绿体DNAEcoRI片段某些特性的研究结果。证明,大肠杆菌细胞内无性增殖的豌豆叶绿体DNAEcoRI片段具有可变的核苷酸组成,共中有些片段内AT碱基对含量相当丰富。     

重组瘤胃细菌有利于饲料消化

美国国家农业研究中心科学家们研制了一种遗传工程细菌,旨在促进反刍动物中饲料的利用率。饲料费用可能占家畜生产价格的50％,所以,如果饲料的消化率能提高5％的话,则可大大降低其成本费用。因此,研究人员研制了一种天然瘤胃细菌,以促进动物消化饲料纤维中的木聚糖。从栖瘤胃拟杆菌分离出木聚糖酶的基因,然后借助于一质粒把这种基因插入人结肠细菌多形拟杆菌里。用燕麦外壳分离的木