吡格列酮对大鼠缺血/再灌注心肌转化生长因子β1表达的影响

目的:观察吡格列酮对大鼠缺血/再灌注损伤心肌转化生长因子β1(TGFβ1)表达的影响。方法:30只SD大鼠随机分为5组(n=6):缺血/再灌注组、吡格列酮5 mg/(kg.d)组、吡格列酮10 mg/(kg.d)组、吡格列酮20 mg/(kg.d)组、吡格列酮20 mg/(kg.d)+过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)特异性阻断剂GW9662组,利用在体结扎左前降支的方法建立缺血/再灌注损伤模型,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL法)检测心肌细胞凋亡,RT-PCR方法检测心肌组织TGFβ1 mRNA的变化,Western blot方法检测心肌组织TGFβ1蛋白的变化。结果:TUNEL法显示吡格列酮抑制缺血/再灌注心肌细胞凋亡,吡格列酮上调TGFβ1表达,GW9662逆转吡格列酮对凋亡细胞的抑制作用,抑制吡格列酮促进TGFβ1表达上调的作用。结论:吡格列酮可抑制缺血/再灌注损伤诱导的心肌细胞凋亡,吡格列酮可促进TGFβ1上调,这两种作用是由PPARγ介导的。     

吡格列酮诱导心肌细胞凋亡和抑制心肌细胞肥大的作用及其机制研究

摘要 目的：探讨吡格列酮诱导心肌细胞凋亡和抑制心肌细胞肥大的作用及其机制研究。方法：选取1-3日龄的健康新生SD大鼠,采用酶学分离心肌细胞并培养。将心肌细胞分为4组：对照组、吡格列酮10 μM组、吡格列酮20 μM组、阿帕替尼2 μM组。采用自动细胞计数器（BioRad）计数吡格列酮和阿帕替尼对心肌细胞增殖的影响,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率,[3H]-亮氨酸掺入法评估心肌细胞的肥厚,用相差显微镜检测心肌细胞直径。蛋白免疫印迹试验检测VEGFR-2,磷酸化VEGFR-2,蛋白激酶B （Akt）,磷酸化人体抑癌基因（P53）,兔抗人单克隆抗体（Bax）,B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）,哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）表达水平。免疫组织化学检测心肌细胞VEGFR-2、Bcl-2及Bax阳性指数。结果：吡格列酮和阿帕替尼均能抑制心肌细胞活力,其中吡格列酮以剂量依赖的方式抑制心肌细胞活力,即吡格列酮剂量越大,其抑制心肌细胞活力越强。吡格列酮或阿帕替尼治疗后,心肌细胞凋亡率显著增加,表明两者均诱导心肌细胞凋亡。吡格列酮或阿帕替尼治疗后,血管紧张素II（Ang II）诱导的[3H]-亮氨酸掺入量显著减少,心肌细胞直径减小,表明两者均抑制心肌细胞肥大。吡格列酮显著提高了新生大鼠心肌细胞中Bax和磷酸化-P53的蛋白表达,降低了mTOR、Akt、VEGFR-2、Bcl-2和磷酸化-VEGFR-2蛋白表达。与对照组比较,吡格列酮和阿帕替尼治疗后,VEGFR-2阳性指数和Bcl-2阳性指数显著降低,Bax阳性指数显著升高（P＜0.05）。结论：吡格列酮通过调节VEGFR-2信号通路诱导心肌细胞凋亡,抑制心肌细胞肥大。     

吡格列酮抑制大鼠心肌肥厚的实验研究

目的: 以体外实验和体内实验探讨噻唑烷二酮(Thiazolidinedione,TZD)类药物吡格列酮对大鼠心肌肥厚的影响.方法: 体外原代培养新生大鼠的心肌细胞,以血管紧张素Ⅱ刺激建立心肌肥大模型,分别给予不同浓度的吡格列酮处理.采用RT-PCR法检测心肌肥大特征性基因心钠素(ANP)和脑钠素(BNP)mRNA的表达,并以3H-亮氨酸掺入测定心肌细胞蛋白合成速率.体内实验中通过不完全结扎大鼠腹主动脉引起压力负荷增加,导致左心室肥厚.从术前1周起用灌胃器经口给予吡格列酮(20 mg*kg-1*day-1)直至术后4周.处死动物,计算心脏重/体重比值,测量左心室壁厚度和心肌细胞的平均直径,RT-PCR法测定心肌细胞中BNP及炎性细胞因子的mRNA表达.结果: 心肌细胞肥大模型出现后,心肌细胞的ANP和BNP mRNA的表达以及蛋白合成速率增加.经不同浓度的吡格列酮处理后,这些变化得以减轻,并呈一定的剂量依赖性.吡格列酮抑制左心室心肌白细胞介素-1β,心调理素-1的mRNA表达,同时减轻压力负荷升高引起的大鼠心脏重/体重比值、左心室壁厚度和心肌细胞平均直径的增加.结论: 吡格列酮在体外和体内实验研究中显示对大鼠心肌肥厚有保护作用,可能对防治以心肌肥厚为特征的心血管疾病有一定的应用前景.     

一种新型PPARγ激动剂对人肾癌细胞增殖抑制的实验研究

目的:探讨新型过氧化物酶体增殖激活物受体(PPARγ)激动剂DH9对人肾癌细胞OS-RC-2的增殖抑制作用。方法:予以不同浓度的DH9及罗格列酮作用OS-RC-2细胞12 h、24 h和48 h,荧光素酶活性检测比较两种药物的PPARγ激动效应;MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞术观察细胞周期;Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞术测定细胞凋亡率;Western blot检测细胞内Bax及Bcl-2等蛋白的变化。结果:不同浓度的DH9与罗格列酮相比,对PPARγ的激动效应DH9明显低于罗格列酮,增殖抑制作用优于罗格列酮(P0.05),并呈现明显的浓度、时间依赖性;加入PPARγ抑制剂GW9662前后DH9的增殖抑制作用差异无统计学意义(P0.05);DH9作用细胞48小时后,G0/G1期细胞比例明显增加(P0.05),S期细胞明显减少(P0.05)。DH9可诱导细胞凋亡,伴随Bcl-2表达的减少以及Bax表达的增加。结论:OS-RC-2细胞中,DH9的增殖作用明显优于罗格列酮,且是通过PPARγ非依赖途径实现;DH9能将OS-RC-2细胞阻滞在G0/G1期,并通过影响Bcl-2和Bax蛋白表达促进细胞凋亡。     

过氧化体增殖物激活型受体激活物对HepG-2细胞PAI-1表达的影响

目的：观察不同的过氧化体增殖物激活型受体(peroxisome proliferator—activated receptors,PPARs)激活物对HepG-2细胞纤溶酶原激活物抑制剂—1(plasrninogen activator inhibitor-1,PAI-1)mRNA表达及其活性的影响,探讨过氧化体增殖物激活型受体在PAI-1基因调控中的作用。方法：分别利用硬脂酸、油酸、亚油酸、非诺贝特、吡格列酮作为诱导因素刺激HepG-2细胞,采用半定量RT—PCR法检测PAI-1 mRNA及PPARs mRNA的转录水平,比色法检测PAI-1活性变化,Western blot法检测PPARs蛋白表达情况。结果：与对照组比较,油酸、亚油酸组HepG-2细胞PAI-1 mRNA表达及蛋白活性显著增加;非诺贝特组HepG-2细胞PAI-1 mRNA表达及活性显著降低;硬脂酸、吡格列酮组HepG-2细胞PAI-1 mRNA表达及蛋白活性均无显著变化;各组PPARs在mRNA及蛋白水平均无明显差异。结论：PPARs激活物对HepG-2细胞PAI-1 mRNA表达及其活性具有调节作用,PPARa可能是实现该调节作用的重要途径之一,同时不排除其他调控因素介入该调节过程。     

血管紧张素-(1-7)对大鼠血管平滑肌细胞PKC和ERK1/2的抑制作用

采用Westernblot、氚 胸腺嘧啶 ( 3H TdR)和氚 亮氨酸 ( 3H Leu )掺入等技术和方法 ,用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ )和血管紧张素 ( 1 7) [Ang ( 1 7) ]刺激大鼠血管平滑肌细胞 (VSMCs) ,观察和分析Ang ( 1 7)对VSMCs增殖及蛋白激酶C (PKC)和胞外调节蛋白激酶 (ERK)表达的影响。Ang ( 1 7)能明显抑制基础和AngⅡ刺激下的VSMCsPKC ζ和ERK1/ 2蛋白表达 (P <0 0 1或P <0 0 5 ) ,减少3H TdR和3H Leu掺入量 (P <0 0 1或P <0 0 5 )。结果提示 ,Ang ( 1 7)对VSMCs增殖有抑制作用 ,这可能与影响PKC ζ和ERK1/ 2蛋白表达有关。     

大豆异黄酮激活PPARγ抑制人乳腺癌MCF-7 细胞增殖

目的:探讨两种大豆异黄酮主要成分染料木黄酮(genistein,GEN)和大豆苷元(daidzein,DAI)抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖的作用与过氧化物酶体增殖激活物受体γ(peroxisome proliferators-activated receptorγ,PPARγ)信号途径的关系。方法:采用免疫细胞化学染色方法观察MCF-7细胞的PPARγ表达情况,PPARγ介导的荧光素酶报告基因检测大豆异黄酮和PPARγ配体罗格列酮(rosiglitazone,ROS)对MCF-7细胞PPARγ的激活作用,MCF-7细胞分别经8×10-5mol/L GEN、DAI和1×10-5mol/L的ROS单独或联合1×10-5mol/L的PPARγ特异性抑制剂GW9662联合处理24、48和72 h后,用CCK-8法检测细胞增殖。结果:MCF-7细胞存在有PPARγ表达,GEN、DAI呈剂量依赖性增强报告基因荧光素酶活性,且这种作用可被GW9662明显阻断;GEN、DAI和ROS呈时间依赖性明显抑制MCF-7细胞增殖(P<0.05),而GW9662可以显著削弱GEN、DAI和ROS对MCF-7细胞的增殖抑制作用(P<0.05)。结论:大豆异黄酮可通过激活乳腺癌MCF-7细胞的PPARγ信号途径抑制其增殖。     

大豆异黄酮激活PPARγ抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖

目的：探讨两种大豆异黄酮主要成分染料木黄酮（genistein,GEN）和大豆苷元（daidzein,DAI）抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖的作用与过氧化物酶体增殖激活物受体γ（peroxisome proliferators-activated receptorγ,PPARγ）信号途径的关系。方法：采用免疫细胞化学染色方法观察MCF-7细胞的PPARγ表达情况,PPARγ介导的荧光素酶报告基因检测大豆异黄酮和PPARγ配体罗格列酮（rosiglitazone,ROS）对MCF-7细胞PPARγ的激活作用,MCF-7细胞分别经8×10-5mol/L GEN、DAI和1×10-5mol/L的ROS单独或联合1×10-5mol/L的PPARγ特异性抑制剂GW9662联合处理24、48和72 h后,用CCK-8法检测细胞增殖。结果：MCF-7细胞存在有PPARγ表达,GEN、DAI呈剂量依赖性增强报告基因荧光素酶活性,且这种作用可被GW9662明显阻断;GEN、DAI和ROS呈时间依赖性明显抑制MCF-7细胞增殖（P〈0.05）,而GW9662可以显著削弱GEN、DAI和ROS对MCF-7细胞的增殖抑制作用（P〈0.05）。结论：大豆异黄酮可通过激活乳腺癌MCF-7细胞的PPARγ信号途径抑制其增殖。     

妊娠糖尿病对仔鼠肺成熟的影响及吡格列酮的干预作用

摘要 目的：探究妊娠糖尿病（GDM）对仔鼠肺成熟的影响及吡格列酮对肺发育的干预作用。方法：将30只SD孕鼠分为对照组、GDM组和GDM+吡格列酮组（GDM+P组）,每组10只。GDM组和GDM+P组孕鼠通过腹腔注射链脲霉素（STZ,45 mg/kg）和高脂饮食饲养构建GDM孕鼠模型,GDM+P组大鼠建模后灌胃10 mg/kg的吡格列酮,对照组和GDM组孕鼠每天灌胃等体积生理盐水。分娩后,检测各组仔鼠的血糖和血浆胰岛素水平以及胎肺组织中的总磷脂量。通过苏木精伊红（HE）染色、油红O染色和透射电镜观察胎肺组织结构和形态变化。通过RT-PCR和Western blot检测胎肺组织中SP-A、SP-B、SIRT1和PPARγ的表达。结果：GDM组仔鼠的血糖水平与对照组无显著差异（P>0.05）,胰岛素水平明显高于对照组（P<0.05）。与对照组相比,GDM组仔鼠胎肺组织中的总磷脂含量降低（P<0.05）;胎肺组织中肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)数量和脂滴明显减少。与对照组相比,GDM组仔鼠胎肺组织中的SP-A、SP-B、SIRT1和PPARγ的mRNA和蛋白相对表达水平均降低（P<0.05）。吡格列酮干预显著逆转了GDM对仔鼠胰岛素、胎肺组织结构和形态变化的影响;GDM+P组仔鼠胎肺组织中的SP-A、SP-B、SIRT1和PPARγ的mRNA和蛋白相对表达水平相较GDM组均升高（P<0.05）。结论：GDM母鼠所生仔鼠存在肺发育延迟,吡格列酮干预可有效促进仔鼠的肺成熟。     

培美曲塞联合罗格列酮抑制肺癌A549 细胞增殖研究

目的:研究培美曲塞联合过氧化物酶体增殖物激活受体γ(Peroxisome proliferators-activated receptorγ,PPARγ)激动剂罗格列酮(Rosiglitazone,RSG)对人肺癌A549细胞株增殖能力的影响。方法:蛋白质印迹法检测肺癌细胞系中PPARγ的表达水平,筛选高表达PPARγ的肺癌细胞株利用该细胞株并分别给予培美曲塞、培美曲塞联合罗格列酮、培美曲塞联合罗格列酮及PPARγ拮抗剂GW9662处理,之后检测细胞增殖能力及PPARγ、PTEN、pAKT表达水平的变化。结果:PPARγ在A549细胞系中显著高表达;培美曲塞组、培美曲塞联合罗格列酮组、培美曲塞联合罗格列酮及GW9662组,肺癌细胞增殖均受到抑制,吾美曲塞和罗格列酮联合应用对肺癌细胞的增殖抑制具有协同效应,与单用培美曲塞组相比有统计学差异,且该效应可被GW9662有效阻断;给予培美曲塞和罗格列酮联合应用,可明显上调PPARγ、PTEN表达,下调pAKT表达;给予PPARγ拮抗剂GW9662后,PPARγ、PTEN的表达显著下调,pAKT表达上调。结论:PPARγ激动剂RSG对培美曲塞抑制肺癌细胞的增殖具有协同效应且其分子机制可能是通过激活PPARγ/PTEN/pAKT信号通路从而抑制肺癌A549细胞增殖。     

Determination of stoichiometry of radioiodination of proteins

A sensitive method for the detection of small quantities of hydrophobic antioxidant free radical scavengers such as butylatedhydroxytoluene (BHT) and butylatedhydroxyanisole (BHA) in aqueous samples is described. The procedure involves extraction of the hydrophobic free radical scavenger into an organic solvent phase, followed by the subsequent reaction of an aliquot of this extract with the stable cation radical tris(p-bromophenyl)amminium hexachloroantimonate (TBACA). In experiments with BHT and BHA, the loss of TBACA absorbance at 730 nm was found to be linearly proportional to the amount of antioxidant added, with quantities of BHT as small as 200 pmol being easily detectable. In aqueous suspensions of dimyristoylphosphatidylcholine vesicles, assays of the aqueous BHT concentration showed that BHT partitioned strongly into the membrane phase, achieving very high BHT/phospholipid ratios. For a given concentration of BHT, partitioning into the membrane phase was greater in large, multilamellar liposomes than in either small, single-walled vesicles or in purified rat brain synaptic vesicle membranes. Direct assay of BHT and BHA in phospholipid membranes, however, was complicated by a nonspecific interaction between TBACA and the phospholipid.     

六种藓类植物茎的比较解剖学研究

通过对6种藓类植物,即褶叶青藓(Brachythecium salebrosum(Web.et Mohr.)B.S.G.)、湿地匐灯藓(Plagiomnium acutum(Lindb.)Kop.)、侧枝匐灯藓(Plagiomnium maximoviczii(Lindb.)Kop.)、大凤尾藓(Fissidensnobilis Griff.)、大羽藓(Thuidium cymbifolium(Doz.et Molk.)B.S.G.)和大灰藓(Hypnum plumaeforme Wils.)嫩茎和老茎的石蜡切片和显微观察发现,同一藓类植株的嫩茎和老茎,茎结构稳定,不同种藓类植物茎横切面具有不同特征.植物体茎横切面形状、表层细胞的层数、细胞大小和细胞壁厚薄、皮层细胞大小和形状、中轴的有无以及比例等特征可以作为藓类植物的分科分类依据之一.