我国腹泻患者粪中非羧勒克氏菌的分离与鉴定

1987年从3例腹泻病人粪便中分离出3株产黄色素、发酵分解糖类、氧化酶阴性,具有周生鞭毛的革兰氏阴性杆菌。经系统生理生化特性鉴定、DNA的G+C mol％测定和DNA／DNA杂交,确认为非脱羧勒克氏菌(Leclercia adecarboxylate)。此外,还测定了该菌对抗菌素的敏感性,讨论了与临床感染症的关系。     

致脓癣的须癣毛癣菌鉴定及体外药敏试验

须癣毛癣菌是皮肤癣菌病中常见的致病真菌之一,其分型复杂,具有多个变种和有性型,引起脓癣的常为亲动物性分离菌。从形态学角度难以明确区分不同种型,需要从分子生物学角度加以鉴定。rDNA序列测定是目前最常用于真菌鉴定的一种方法。我们从一脓癣患儿头部分离出一株须癣毛癣菌,对其形态学、rDNA序列和体外对抗真菌药物的敏感性进行了研究。     

菌株CICC 6287发酵特性研究及其在辣椒发酵中的应用

旨在对从新疆乳制品中分离菌株CICC 6287的发酵特性进行研究,并通过辣椒发酵试验评价菌株CICC 6287作为发酵菌株的优势。采用多相分类技术确定该菌株的分类学地位,通过测定耐酸耐盐特性、产酸能力、降解亚硝酸盐能力、氨基酸脱羧酶活性和抑菌能力表征其发酵特性。在此基础上,将菌株CICC 6287应用于新疆特色辣椒发酵中,评价其在辣椒发酵过程中的作用。菌株CICC 6287鉴定为产马乳酒乳杆菌,能够降解亚硝酸盐,耐受8%Na Cl和p H3,抑制大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌和沙门氏菌,产生生物胺的四种氨基酸脱羧酶活性为阴性。接种菌株CICC 6287的发酵辣椒亚硝酸盐的含量1.06 mg/kg,生物胺的含量为5.62 mg/kg,总酸含量达到2.54%。研究结果表明,菌株CICC 6287具有良好的发酵特性,能够应用于辣椒发酵,提高发酵辣椒的安全性。     

牙鲆迟钝爱德华氏菌感染症及其病原的研究

对 7起牙鲆迟钝爱德华氏菌感染病例进行了发病情况、临床特征、病理变化等方面的检验 ,经对细菌的分离与鉴定表明所检病例均为迟钝爱德华氏菌的单独感染 ,系统归纳了该感染症的主要特点。同时 ,对所分离后做纯培养的 130株迟钝爱德华氏菌进行了主要生物学性状、血清型的测定 ,表明除在生化试验的吲哚项目中表明有株间差异 (阴性的 2 0株、阳性的 110株 )外 ,130株对其他所测内容的结果一致 ,130株均为同种血清型。从每起病例分离并鉴定的各 1个代表菌株做对健康牙鲆的人工感染试验 ,表明了相应的原发病原学意义及较强的致病作用。药敏试验结果表明 ,对供试 37种抗菌药物中的头孢唑啉等 19种药物敏感、对青霉素G等 5种药物耐药、对氨苄青霉素等 13种药物表现了株间差异。经以荧光抗体技术对纯培养物、人工感染病死鱼肝脏中细菌的检验 ,初步表明了荧光抗体技术在对迟钝爱德华氏菌检验中作为辅助检验手段的可行性。     

肺结核合并非发酵菌下呼吸道感染的临床特征及耐药性分析

目的了解肺结核患者合并非发酵菌下呼吸道感染的临床特征及耐药性,为临床合理使用抗菌药物提供依据。方法采用ATB全自动细菌鉴定仪,对临床分离菌株进行菌种鉴定,用K．B法对非发酵菌做药物敏感试验。结果从肺结核患者下呼吸道标本中共分离非发酵菌156株,其中铜绿假单胞菌最多,占46．5％,其次为鲍曼不动杆菌和嗜麦芽寡养单胞菌,分别占37．8％和9．6％。药敏试验显示5种非发酵菌对多种抗生素均表现为高度耐药或多重耐药,高于相关研究,差异有统计学意义（P≤0．05）。结论肺结核患者肺部感染非发酵菌的分离率较高,多重耐药现象严重,临床应重视非发酵菌感染和耐药性监测。     

绿僵菌破坏素合成缺失株中分离鉴定pseurotin A

真菌次级代谢产物是医药活性成分的重要来源之一。就真菌基因组编码的次级代谢基因簇数量而言,由于普遍存在的基因沉默现象,常规培养中能够分离鉴定的化合物种类一般很有限。广谱杀虫的罗伯茨绿僵菌在液体培养基中的主要代谢产物为非核糖体环肽类的破坏素,本研究在对破坏素合成缺失突变株ΔdtxS1进行液体培养时获得了新的产物峰,对其中一个产物峰进行分离、纯化及结构鉴定,确定该化合物为螺环类的pseurotin A。结合在烟曲霉菌中解析的pseurotin A合成途径,推测获得了罗伯茨绿僵菌中的潜在合成基因簇,并推测了pseurotin A在绿僵菌中的合成途径。本研究首次在绿僵菌中鉴定获得pseurotin A,并揭示了在真菌中通过对主要次级代谢产物缺失的方法可以鉴定获得新型的化合物。     

鳜源致病性荧光假单菌的分离与鉴定

为确定导致鳜（Siniperca chuatsi）细菌性感染死亡的病原,从患病濒死的鳜肝中分离出一株优势菌B01,经人工回感实验确定其分离菌的致病性,并利用VITEK-2全自动微生物鉴定仪及16S rRNA序列分析对纯培养细菌进行鉴定。此外,对分离的菌株进行药敏实验。研究结果表明,菌株B01对鳜鱼具有致病性。经VITEK-2全自动微生物鉴定仪鉴定菌株B01为荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens）（表1）,并在紫外灯可以产生荧光（图1）。进一步的16S rRNA基因序列和系统发育树分析表明,该菌与荧光假单胞菌同源性达到了97%以上,并和（图2）。药物敏感性实验结果显示,该分离株对恩诺沙星、诺氟沙星、链霉素和四环素药物等6种药物高度敏感（表2）。     

中国部分昆虫上的镰刀菌

镰刀菌与昆虫具有密切的关系,许多种是昆虫致病菌,在农林业虫害的生物防治上有其应用价值。作者在研究中国镰刀菌属(Fusarium Link:Fr.)分类的过程中,在全国范围内采集了大量昆虫标本,用表面消毒法从中分离镰刀菌,累计得到了180多株,鉴定出16种和变种,其中1种和1变种是中国新记录,它们是:     

三种红树林植物健康与非健康叶片中真菌的比较

红树林叶片感染真菌后可能会向非健康状态变化,为了比较三种红树林植物海漆、秋茄和桐花树健康与非健康叶片真菌类群,明确其中真菌类群的差异,该研究从广西茅尾海红树林自然保护区采集海漆、秋茄和桐花树健康与非健康叶片,对叶片中真菌分离纯化并进行形态学鉴定,提取真菌的DNA,采用RAPD多样性、ITS序列对真菌进行分子鉴定。经过初步分析,从海漆、秋茄和桐花树中共分离到157株真菌,经过形态学和RAPD分析,可能为19种不同的真菌。采用真菌ITS序列对19种真菌代表性菌株进行分析,结果表明:19种真菌都属于子囊菌门,有15株与已有的真菌ITS序列相似性在97%以上;有4株相似性低于95%,可能为新种。海漆健康和非健康叶片分别分离到真菌7种和5种,健康叶片含了非健康叶片中所有真菌;秋茄健康和非健康叶片分离到真菌1种和9种,且健康叶片中分离到的内生真菌Dothiorella aegiceri也包含于非健康叶片分离的真菌中;桐花树健康和非健康叶片分离到真菌1种和3种,且桐花树分离的内生真菌也是Dothiorella aegiceri,其包含于非健康叶片中分离到的真菌。该研究证明,海漆内生真菌同时也可能是植物病原菌,内生真菌与植物病原菌没有明显界限;另一方面,该研究发现秋茄和桐花树叶片的病变是由外部的病原真菌感染引起,感染的原因可能是昆虫叮咬红树林植物后留下了创口,这些创口有利于真菌的感染。     

宿主菌富集空肠弯曲菌噬菌体培养条件的优化

【背景】开发噬菌体产品是一种防控空肠弯曲菌有潜力的策略,但是面临噬菌体分离的挑战。【目的】运用响应面法对宿主菌富集空肠弯曲菌噬菌体的培养条件进行优化。【方法】通过单因素试验分析培养基、培养温度、培养转速、离子添加剂对噬菌体富集效果的影响,以噬菌体回收率为评价指标,采用响应面法优化了空肠弯曲菌噬菌体的富集培养条件。【结果】在37℃条件下进行静置培养时,噬菌体富集培养效果最佳,回收率为354.12%。分离噬菌体的过程包括采样并制备滤液、宿主菌与样品滤液共培养及噬菌体分离与鉴定等环节。应用此方法从鸡粪便中分离空肠弯曲菌噬菌体,与传统的单斑法相比,噬菌体分离率提高了269.23%。【结论】研究优化的宿主菌富集噬菌体培养方法可提高空肠弯曲菌噬菌体的分离效率,为噬菌体的研究提供思路。     

麦类赤霉病毒素的研究——Ⅰ.上海地区麦类赤霉病的病原菌

麦类赤霉病是我国长江流域的主要病害。带菌的麦种中含有影响人畜健康的毒素。1976—1978年我们在进行镰刀菌和其它霉菌分离鉴定时,对该类病麦进行了病原菌分离鉴定和致病性测定,为麦类赤霉病菌毒素的研究提供了依据。     

青藏高原黄绿蜜环菌纯培养菌种的分离培养及分子鉴定

首次从采自青藏高原、与高原牧草嵩草属Kobresia草本植物形成外生菌根的黄绿蜜环菌Armillarialuteo-virens子实体中分离获得一组织分离菌株,运用rDNA-ITS和rDNA-IGS-1测序技术对该组织分离菌株是否为黄绿蜜环菌的纯培养菌种进行分子鉴定,并基于黄绿蜜环菌的5.8S/ITS和IGS-1序列进行核酸序列数据库GenBank同源性检索比对、构建系统发育树。结果表明,本研究获得的黄绿蜜环菌子实体组织分离菌株即为其纯培养菌种。基于ITS的系统发育分析表明黄绿蜜环菌与口蘑科内其它属间物种的系统发育关系较远;基于IGS-1的系统发育分析表明黄绿蜜环菌与蜜环菌属内的其它种序列差异较大,系统发育关系较远,而与Lepiota属内的部分种具有较近的系统发育关系。本研究首次基于分子手段对我国青藏高原的黄绿蜜环菌种进行了分离培养、分子鉴定和系统发育分析,为黄绿蜜环菌的科学分类提供了分子依据。     

中国东部暖温带地区土壤中的蠕形菌

在调查研究中国东部暖温带地区土壤中暗色丝孢菌过程中,采用稀释平板法和土壤颗粒平板法分离获得100余株蠕形菌的分离物。经纯化培养后,依据形态特征鉴定为3属21种,其中虎尾草平脐蠕孢[Bipolaris chlorides (Alcon) Alcon]和小柄凸脐蠕孢[Exserohilum pedicellatum (Henry) Leonard & Suggs]为中国新记录种。文中列出了各蠕形菌的种名、采集地、土样号以及菌株号,对2个新记录种进行了详细描述。所有活菌株及干制培养物保存在山东农业大学植物病理系标本室(HSAUP)。     

冠突散囊菌的研究与应用进展

冠突散囊菌是茯砖茶发酵中的优势菌,其数量和质量直接关系到茯砖茶的品质,国内外学者对其进行了比较全面的研究。本文中,笔者综述了冠突散囊菌的分离鉴定、分子生物学、培养、发花过程、保健功能及其应用等几个方面,并对其研究与应用前景进行了展望。     

抗金葡菌深海真菌的分离鉴定及抑菌谱研究

[目的]从深海淤泥样品中分离筛选具有抗金葡菌特性的真菌菌株,对其进行鉴定,并研究其抑菌谱。[方法]采用稀释涂布平板法分离真菌菌株,对峙培养法初筛,琼脂扩散法复筛,将抑菌效果最好的菌株进行形态鉴定、镜检、26S r DNA鉴定,并研究其对产黄青霉、尖孢镰刀菌、黄瓜菌核、木霉、盘单毛孢、平头刺盘孢霉6种真菌和大肠埃希氏菌、单增李斯特菌、副溶血性弧菌、鼠伤寒沙门氏菌4种细菌的抑制作用。[结果]得到1株抑制金葡菌效果最佳的菌株,编号1B12,其抑菌圈直径为35.31 mm,鉴定结果为外瓶霉属(Exophiala),其对上述6种真菌和4种细菌都有一定的抑制作用。[结论]1B12是一株具有广谱抗菌性的海洋真菌。     

明永冰川垂直气候带中可培养低温细菌多样性分析

本研究对位于云南滇西北的明永冰川地区暖温带、中温带和寒温带三个不同垂直气候带中可培养低温细菌的多样性进行了研究。利用四种不同培养基对该地区可培养低温细菌进行了分离纯化,共得到细菌37 513株,根据菌落形态特征分为了391种,其中LB培养基分离到99种,Organic培养基分离到78种,PSG培养基分离到96种,PYGV培养基分离得到118种,可以看出寡营养培养基PYGV分离得到的细菌种类多于LB和Organnic等富营养培养基,表明PYGV针对冰川地区细菌的分离与鉴定更为合适;通过革兰氏染色和扫描电镜观察表明大部分菌株为革兰阴性杆菌;对已分离得到的优势菌进行了16S rRNA基因测序并构建系统发育树,分析得出:假单胞菌属(Pseudomonas)、耶尔森氏菌属(Yersinia)和黄杆菌属(Flavobacterium)在明永冰川不同垂直气候带上均有分布,其中假单胞菌属最多占据35%;而寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)是寒温带上特有的菌属。本研究证明明永冰川地区垂直气候带中可培养低温细菌多样性非常丰富,也为下一步了解这一特殊地理生态环境下微生物的群落演替规律、研究冰川环境中微生物群落如何响应气候变化提供了参考。     

冷鲜牛肉中蜂房哈夫尼亚菌(Hafnia alvei)的分离与鉴定

在出口冷鲜牛肉的沙门氏菌检验过程中,从HE琼脂平板上分离到1株蜂房哈夫尼亚菌,该菌三糖铁斜面产碱,底层产酸,不产生H2S,不产气,革兰阴性。经BBL Crystal微生物半自动检测仪检测,同时结合伯杰细菌鉴定手册的生化试验结果鉴定为蜂房哈夫尼亚菌(Hafnia alvei)。     

呼吸道与非呼吸道标本主要非发酵菌分离株的耐药性比较

目的对2 229份住院患者标本进行分离培养,并对非发酵菌分离株进行药敏试验,了解呼吸道与非呼吸道主要分离株的耐药率差异,以便指导临床合理使用抗菌药物。方法收集2008年8月至2010年10月分离自患者呼吸道、非呼吸道标本的革兰阴性非发酵菌,采用VITEK-32全自动微生物鉴定药敏仪进行细菌鉴定,药敏测定采用K-B法,并比较呼吸道与非呼吸道标本所检出的主要革兰阴性非发酵菌对抗菌药物的耐药率差异。结果共检出非发酵菌556株,其中呼吸道标本366株,非呼吸道标本190株,前3位非发酵菌分离株分别为铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌和嗜麦芽窄食单胞菌。非发酵菌菌株ESBLs、AmpC、MBL、同产ESBLs+AmpC和同产ESBLs+MBL检出率分别为17.62%、13.67%、14.39、12.23%和6.12%,其中呼吸道标本分离株铜绿假单胞菌的ESBLs、AmpC检出率明显高于非呼吸道标本(均P<0.05),鲍曼不动杆菌的ESBLs、AmpC检出率明显低于非呼吸道标本(均P<0.05);呼吸道、非呼吸道标本的铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌和嗜麦芽窄食单胞菌分离株对多种抗生素的耐药率不同,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论呼吸道与非呼吸道标本分离的主要非发酵菌分离株对同一抗菌药物耐药率不同,治疗不同部位非发酵菌引起的感染,要考虑由于感染部位不同而产生的耐药性以及药物有效浓度的差异,根据药敏结果合理使用抗菌药物。     

基于16S rRNA和rpoB基因的分子系统发育分析在铜绿假单胞菌鉴定中的应用

为对比16S rRNA和rpo B基因分子系统发育分析与传统表型分类法对铜绿假单胞菌的鉴定,评估16S rRNA和rpo B基因序列分析在铜绿假单胞菌鉴定中的应用,用表型分类方法对临床自动微生物鉴定系统鉴定为铜绿假单胞菌的23株分离株进行再鉴定,PCR扩增23株分离株16S rRNA和rpo B基因片段,并测序进行系统发育分析。结果表明,表型再鉴定结果与自动微生物鉴定系统鉴定结果一致。基于两个基因的系统发育分析均显示分离株p22与不动杆菌属序列聚为一枝,其余22株分离株与铜绿假单胞菌序列聚为一枝。因此p22应鉴定为不动杆菌,16S rRNA和rpo B基因序列分析均能准确鉴定铜绿假单胞菌并能较好建立假单胞菌属内种间关系。     

东亚飞蝗虫病原褪色沙雷氏菌的鉴定与检验北大核心CSCD

病原褪色沙雷氏菌的有效分离与鉴定对控制由褪色沙雷氏菌引起的养殖东亚飞蝗感染病均具有一定的参考与应用价值,同时将为对蝗灾的生物防治研究提供借鉴。对从发病死亡的养殖东亚飞蝗中分离的10株细菌,进行了表观分类学指征、16S r RNA基因序列与系统发育、人工感染的致病作用等方面的检验与分析。结果表明为沙雷氏菌属的褪色沙雷氏菌,对供试养殖东亚飞蝗显示强致病性。褪色沙雷氏菌对东亚飞蝗有强致病性,是蝗虫养殖的重要致病菌。