基于26S rDNAD1/D2区序列分析的15株白地霉分子分类学研究

采用26S rRNA基因D1/D2区系统发育分析的方法对CICC(中国工业微生物菌种保藏管理中心)保藏的15株白地霉(Geotrichum candidum)菌种进行复核鉴定。系统发育分析结果表明15株白地霉属于地霉属的成员,且形成两个系统发育分支,系统发育上最接近Galactomyces geotrichum NRRLY-17569T,与其同源性为96.3%～98.3%。15株白地霉26S rRNA基因D1/D2区序列显著不同于地霉属的模式种及其它种,可能代表地霉属的两个新种,但这一结论尚需进一步的实验去证实。     

中间型高温放线菌特异PCR快速鉴别方法的应用

根据中间型高温放线菌的gyrB基因设计了中间型高温放线菌的特异性引物,建立了快速筛选中间型高温放线菌菌种的特异PCR方法,并将其应用于芝麻香型白酒高温大曲中的中间型高温放线菌筛选。结果表明,所设计的特异性引物对中间型高温放线菌具有较高的特异性,可以快速鉴别中间型高温放线菌菌种,并成功从芝麻香型白酒高温大曲中快速筛选获得中间型高温放线菌,与传统的菌种鉴定方法相比,具有高效、灵敏、便捷及成本低廉等显著优点。     

基于UPLC-MS/MS定量检测法优化灵芝三萜热回流提取工艺的研究

基于超高效液相-三重四级杆质谱联用（UPLC-MS/MS）定量检测法优化出一种灵芝三萜热回流提取的工艺。通过本实验建立的灵芝三萜UPLC-MS/MS精确方法检测不同来源的7个栽培品种灵芝子实体中19个三萜化合物的含量,筛选出三萜含量较高的sd-2灵芝子实体作为提取原料,以三萜含量和提取物得率为指标,通过单因素和响应面实验对灵芝三萜的热回流工艺进行优化,获得的最佳条件为：乙醇浓度75%、提取时间2.5h、液料比14:1、提取次数2次。对获得的最佳提取工艺进行中试实验,灵芝子实体乙醇提取物的得率为6.10%,三萜含量为11.8591mg/g。研究结果可为灵芝三萜的工业大规模提取提供理论依据,为灵芝高附加值产品的开发利用提供技术支撑。     

一株芝麻香型白酒高温大曲的施莱格尔氏菌的分离与鉴定

从芝麻香型白酒高温大曲中分离到一株革兰氏阴性高温细菌Zm91,并对其进行形态学、生理生化代谢特征以及细胞代谢酶活性和药物敏感性分析,结合16S rRNA基因序列分析结果,Zm91鉴定为水生施莱格尔氏菌(Schlegelella aquatica).该菌株是首次从我国芝麻香型白酒高温大曲中分离得到的施莱格尔氏菌,其G+C mol％含量为67.5％,具有碱性磷酸盐酶、酯酶(C4)、脂酯酶(C8)、白氨酸芳胺酶、颉氨酸芳胺酶、胰凝乳蛋白酶、萘酚-AS-BI-磷酸水解酶及α葡萄糖苷酶活性,对青霉素、氨苄西林、链霉素、利福平敏感.     

生物转化法制备L-天冬酰胺

探索生物转化法制备L-天冬酰胺的技术与工艺。通过分子生物学方法,克隆来源于大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)JM109的天冬酰胺合成酶A基因asn A,并于E.coli BL21(DE3)中表达,利用构建的E.coli基因工程菌E.coli BL21(DE3)/p ET28a(+)-asn A全细胞高密度催化L-天冬氨酸生产L-天冬酰胺,以PITC柱前衍生-高效液相检测底物和产物。表达的蛋白质分子质量约为37k Da,与预期大小相符,比酶活力为1786.6U/g。L-天冬氨酸转化率为95.8%,L-天冬酰胺产量可达126.5g/L,生产速率为15.81g/(L·h)。结果表明,已成功构建高效表达天冬酰胺合成酶A基因工程菌株,并用于催化L-天冬氨酸转化生产L-天冬酰胺,解决了L-天冬酰胺生物转化生产工艺中ATP成本过高的难题,为L-天冬酰胺制备提供新的绿色途径。     

香山黄栌枯萎病叶片真菌的分离与鉴定

利用微生物培养方法及多相分类鉴定技术,对分离自香山黄栌枯萎病叶片样品的真菌菌株进行分离与鉴定,共分离到丝状真菌22株,分属细极链格孢(Alternaria tenuissima)、草酸青霉(Penicillium oxalicum)、腊梅拟茎点霉(Phomopsis chimonanthi)和葡萄茎枯病菌(Phoma glomerata)4个菌种,并保藏于中国工业微生物菌种保藏管理中心(CICC)。其中细极链格孢(11株)和腊梅拟茎点霉(7株)为优势菌种。细极链格孢、腊梅拟茎点霉、葡萄茎枯病菌均为已报道的植物病原菌,可能为香山黄栌枯萎病潜在病原菌。     

一株芝麻香型白酒高温大曲嗜热放线菌的分离与鉴定

自芝麻香型白酒高温大曲中分离到一株嗜热放线菌Zm60,对其进行形态学、生理生化代谢特征鉴定、化学成分分析以及细胞代谢酶活性测定,并结合16S rRNA基因序列分子生物学鉴定及系统发育学分析,结果表明,该菌株归属于高温放线菌属(Thermoactinomyces sp.),并且可鉴定为普通高温放线菌(Thermoactinomyces vulgaris).其最适生长温度为55℃,细胞壁肽聚糖及氨基酸分别为meso-DAP及Ala、Glu,醌为MK-7,主要脂肪酸组成分别为iso-C15∶0(44.01％)、anteiso-C15∶0(22.23％)、iso-C17∶0(14.16％)、anteiso-C17∶0(7.56％)和iso-C16∶0(6.18％),具有碱性磷酸盐酶、酯酶、类脂酯酶及萘酚-AS-BI-磷酸水解酶的活性.该菌株是首次从我国芝麻香型白酒高温大曲中分离并鉴定得到的高温放线菌.     

PCR-SSCP技术在假丝酵母属菌种鉴别中的应用

选取中国工业微生物菌种保藏管理中心(CICC)保藏的假丝酵母属的7个种30株菌, 对其rDNA的ITS1区及ITS2区进行了PCR-SSCP指纹图谱分析, 结果表明在假丝酵母属种水平的区分鉴定中, ITS1区与ITS2区的PCR-SSCP图谱均能对本研究所选7个种的菌株进行显著区分, 比较两个区段的PCR-SSCP图谱及鉴别效果, 发现ITS2区的应用效果要优于ITS1区。     

标准菌株CMCC(F)98003的多相复核鉴定

采用形态学观察、Biolog全自动微生物鉴定系统、ITSrDNA序列分析、ITS区特殊位点碱基分析、β-微管蛋白基因序列分析方法,对《中国药典》(CHP)中指定使用的培养基质控参考菌株CMCC(F)98003进行了多相复核鉴定。结果表明:CMCC(F)98003为黑曲霉,与CHP收载的科学名称是一致的。鉴于黑曲霉与巴西曲霉虽然较为接近,但已成为两个不同的种,其形态学、系统发育学和代谢产物等特性均存在一定差异,《中国药典》是否需要更换新的丝状真菌代表菌株,以保持与国际上其他药典的一致性值得研究。     

CLSI M38-A2肉汤稀释法对蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyces hepiali)的药敏检测

[目的]对保健食品生产菌株蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyces hepiali)进行6种常见抗真菌药物:伊曲康唑、酮康唑、伏立康唑、环吡酮胺、5-氟胞嘧啶、氟康唑的药敏检测.[方法]参考美国国家临床实验室标准化委员会CLSI M38-A2《肉汤稀释法抗真菌药敏试验参考方案》.[结果]质控菌株MIC值均在参考范围之内,蝙蝠蛾拟青霉(P.hepiali)对以上6种药物的MIC值分别为1 mg/L、0.5 mg/L、0.25 mg/L、≥128 mg/L、64 mg/L、2 mg/L.[结论]M38-A2方案适合用来测定蝙蝠蛾拟青霉(P.hepiali)对抗真菌药物的敏感性,但获得菌株耐药敏感性的判别标准,仍需进一步的试验数据.