细胞外基质和细胞粘附分子表达与细支气管肺泡癌淋巴结转移的关系

用免疫组化方法检测50例细支气管肺泡癌（BAC）（其中18例伴有淋巴结转移）及其三个亚型粘液型、非粘液型、硬化型中基底膜细胞外基质（ECM）层粘连蛋白（LN）、Ⅳ型胶原（CollⅣ）、纤粘连蛋白（FN）分布和细胞粘附分子A－CAM（又称N－钙粘素）表达情况。结果发现粘液型、非粘液型、硬化型BAC的淋巴结转移率分别为57％（8／14）、32％（7／22）和21％（3／14）。在BAC及BAC各亚型中,三种ECM在基底膜水平的分布状态与淋巴结转移无关（P均＞0.05）、A－CAM在伴或不伴淋巴结转移的BAC原发瘤中的表达率分别为56％（10／18）和53％（17／32）（P＞0.05）。提示BAC三个亚型中粘液型淋巴结转移率有高于其它两亚型的倾向。基底膜ECM（LN、CollⅣ、FN）分布完整与否及细胞粘附分子A－CAM表达高低与BAC淋巴结转移无关。     

肿瘤转移的新miRNA故事

肿瘤转移是恶性肿瘤发展的晚期事件。癌细胞从原发瘤处侵袭基底膜、穿越细胞外基质、内渗入血管或者淋巴管、与宿主细胞相互作用、黏附于基底膜外渗进入远端组织,在与原发瘤不同的解剖学部位形成微转移灶,并最终适应陌生的1     

基底膜和肿瘤转移

基底膜是一种特化的细胞外基质,是肿瘤转移过程中必须穿越的物理屏障。基底膜的组成成分通过和细胞表面受体整合素相互作用,在调节肿瘤转移的过程中发挥了重要作用。另一方面,肿瘤细胞通过分泌基质降解酶类破坏基底膜的组织结构,同时调节细胞外基质受体整合素的表达,为穿过：基底膜和在靶器官粘附、增殖创造有利条件。了解细胞和基底膜的相互作用可以为抗转移药物的研发提供新的策略。     

层粘连蛋白及基质金属蛋白酶-2在人脑胶质瘤侵袭过程中的相关研究

目的研究层粘连蛋白(Laminin, LN)及基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinases-2,MMP-2)在人脑胶质瘤侵袭中的相互关系,探索人脑胶质瘤侵袭转移的机制.方法用免疫组织化学SP法检测LN和MMP-2在27例人脑胶质瘤、6例颅内转移瘤及5例正常脑组织的表达情况.结果 1)LN在高度恶性的胶质瘤中的表达显著高于颅内转移瘤及其它各组(9.584±6.448,P<0.05), MMP-2的表达随着胶质瘤恶性程度的增高而增加(P<0.05),其在颅内转移瘤中的表达与高度恶性组无显著差异性(P>0.05);2)MMP-2/LN比值在颅内转移瘤中显著高于其它各组(0.120±0.069, P<0.05),其它各组间无统计学差异,该值相对恒定;3)LN与MMP-2在上述组织中的表达呈正相关( r＝0.605,P=0.0002<0.01).结论在人脑胶质瘤中,MMP-2表达增加使得胶质瘤细胞呈现颅内浸润,而LN的表达随MMP-2表达的增加而增加却阻遏了胶质瘤细胞向颅外转移,两者的相互作用使得胶质瘤既表现出颅内广泛的侵袭性,又不转移到颅外.     

硫酸乙酰肝素、肝素酶及其与肿瘤转移的关系

细胞外基质和基底膜的降解是癌细胞穿透组织屏障发生转移的重要步骤。硫酸乙酰肝素蛋白聚糖是细胞外基质和基底膜的组成成分,其多糖侧链可以被葡萄糖苷内切酶--肝素酶,特异性识别并切割,以破坏细胞外基质和基底膜的完整性,促进肿瘤转移。临床上肿瘤患者肝素酶高表达与肿瘤恶性程度和转移发生密切相关。深入了解硫酸乙酰肝素、肝素酶及它们与肿瘤转移相关的作用机制有助于我们寻找肿瘤治疗的新思路。本文将从硫酸乙酰肝素的合成调控、功能、肝素酶的转录和活性调节、肝素酶表达与肿瘤患者的临床特征,以及硫酸乙酰肝素、肝素酶与肿瘤转移的关系进行综述。     

双峰驼睾丸和隐睾细胞外基质相关蛋白的组织化学特征及超微结构比较

为探索细胞外基质相关蛋白在隐睾双峰驼的分布情况及其组织化学特征,应用电镜技术和多种组织化学方法比较了隐睾和正常睾丸的超微结构,组织化学特点及层粘连蛋白（LN）、Ⅳ型胶原（Col Ⅳ）和硫酸乙酰肝素糖蛋白（HSPG）的分布特征。结果显示：(1)与正常睾丸间质结构相比,光镜下隐睾生精小管发育不全,间质内胶原纤维稀疏,网状纤维分布明显,间质血管及生精小管固有膜PAS及AB-PAS阳性反应较弱。电镜下,隐睾生精上皮基膜明显增生,外围I型胶原纤维较少,管周肌样细胞不典型;间质毛细血管及Leydig细胞周围纤维细胞多见,而正常睾丸在间质毛细血管及Leydig细胞周围多分布有成纤维细胞。(2) 免疫组织化学染色显示,正常睾丸组织的Col Ⅳ、LN及HSPG在Leydig细胞内均为强阳性表达,Col Ⅳ和LN在毛细血管内皮细胞强阳性表达,后者在Sertoli细胞的表达尤为明显,HSPG在精原细胞无表达;隐睾时Col Ⅳ、LN及HSPG在Leydig细胞内阳性表达均明显减弱,Col Ⅳ、LN在管周肌样细胞及毛细血管内皮细胞阳性表达也减弱明显,HSPG在精原细胞较强阳性表达,且在精子细胞呈强阳性表达。免疫组织化学图像分析结果显示,双峰驼正常睾丸组织中Col Ⅳ和LN的分布显著高于隐睾组织（P<0.05）,HSPG检测结果在正常睾丸与隐睾之间无统计学差异（P>0.01）。该研究表明,双峰驼隐睾生精小管发育异常,间质组织中合成胶原纤维的能力下降,睾丸细胞外基质的重要成分Col Ⅳ,LN与正常组差异显著与生精小管及Leydig细胞异常发育有关,而HSPG在隐睾生精上皮的强阳性表达与精原细胞发育不成熟密切相关。     

骨桥蛋白RNA干扰对人U251胶质瘤细胞在裸鼠体内生长的影响

研究下调骨桥蛋白(osteopontin,OPN)对人U251胶质瘤细胞在裸鼠体内生长的影响并探讨其对胶质瘤生长、侵袭的可能机制.应用RNA干扰技术,将OPN基因的慢病毒干扰载体LV-OPNshRNA感染U251细胞.将对照和试验组U251细胞分别接种裸鼠,建立裸鼠荷瘤模型.3周后测量肿瘤的体积、瘤重并做肿瘤组织病理切片分析;利用RT-PCR和免疫印迹法检测OPN、尿激酶型纤维蛋白酶原激活物(uPA)、基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)的mRNA和蛋白表达;免疫组化法检测肿瘤组织微血管密度和血管内皮生长因子（VEGF）表达情况. 经OPN的RNA干扰后,能显著降低肿瘤组织OPN mRNA水平及蛋白表达,有效抑制肿瘤细胞生长及侵袭能力, 肿瘤体积及重量的减小有统计学意义(P<0.05).感染组uPA、MMP-2和MMP-9的mRNA和蛋白表达明显减少, 肿瘤组织的MVD值和VEGF的表达均显著降低.上述结果表明,抑制OPN的表达能明显抑制人U251胶质瘤细胞在裸鼠体内的生长和侵袭,OPN可能通过激活uPA、MMP-2和MMP-9等蛋白酶降解细胞外基质和促进肿瘤血管生成,参与胶质瘤的生长.     

整合素α6亚单位和肿瘤的发生、发展与转移

整合素为跨膜糖蛋白,属于细胞表面的粘附分子。胞外域介导细胞与细胞及细胞与细胞外基质间的识别与结合,胞质域与细胞骨架和信号转导系统相连。α6亚单位与β1或β4亚单位非共价结合形成异二聚体,是细胞外基质蛋白质——层粘连蛋白的单特异性受体,与肿瘤的发生、发展和转移有着非常密切的关系。多种肿瘤的发生伴有整合素α6表达水平的变化,包括表达水平的升高、降低或极性分布的变化。表现为一些不表达α6β1的细胞,如肝细胞癌变后通过新合成的α6β1介导了肿瘤细胞与基底膜间相互作用而促进了肿瘤细胞的转移;表达α6β1的细胞α6β1失去沿基底膜的极性分布,导致细胞与基底膜的结合减弱,癌细胞易于脱落而发生转移;还可以通过促进细胞基质金属蛋白酶的分泌而促进肿瘤的转移,并导致肿瘤细胞的低分化表型。整合素α6可以促进肿瘤新生脉管的生成,一方面增加瘤组织的血供和营养,促进肿瘤的生长;另一方面促进脱落的肿瘤细胞进入血循环发生转移。     

前列腺癌DU145细胞相关蛋白在构建体内三维空间模型中的表达研究

目的探讨前列腺癌相关蛋白在胶原、琼脂糖、基质胶、海藻酸钠加明胶4种支架材料培养的前列腺癌DU145细胞中的表达水平。方法将前列腺癌DU145细胞按照一定比例接种至胶原、琼脂糖、基质胶、海藻酸钠加明胶4种支架材料中,分别分组进行移植瘤模型的三维培养,然后采用免疫组化方法检测MMP9、FN1、Laminin等3个前列腺癌相关蛋白在3种支架材料中培养的DU145细胞构建移植瘤模型后培养的组织中表达情况。结果 MMP9在有支架材料培养的前列腺癌DU145中蛋白表达高于无支架材料培养的组织;FN1在海藻酸钠加明胶组中蛋白表达阴性,在琼脂糖与胶原组中蛋白表达阳性且明显强于空白组;Lamininm在空白组与海藻酸钠加明胶组中均表达阳性,但明显低于胶原、琼脂糖、基质胶组的强阳性。结论采用支架材料的三维培养体系优于无支架材料的二维培养体系。胶原为体内前列腺癌DU145细胞三维培养的最优支架材料。     

纤粘连蛋白在实验性牙周炎鼠牙龈组织中的表达

目的:观察分析大鼠实验性牙周炎牙龈组织中纤粘连蛋白(fibronectin,FN)的表达及意义。方法:26只8周龄雄性Wistar大鼠,随机分为局部丝线结扎高糖软食4周和8周两组,每组实验动物10只,空白对照组3只。运用免疫组化方法,观察分析FN在健康牙龈组织中、牙周炎牙龈组织中的表达及意义。结果:健康牙龈组织中,FN相对均匀弥漫表达于整个牙龈结缔组织基质内;牙周炎牙龈组织中,FN表达具有部位特异性,即上皮下结缔组织最上部基质内FN表达明显下调;结合上皮根端基底细胞基底面下FN表达明显上调,表达强度和范围随结合上皮根向增生程度的增加而增强。结论:炎性刺激下调炎症中心区牙龈结缔组织基质内FN表达;炎症刺激上调结合上皮根端基底细胞基底面下FN表达,其表达强度和范围随结合上皮根向增生程度的增加而增强扩大,暗示FN参与牙龈结合上皮根向增生迁移活动。     

细胞外基质对毛细血管瘤内皮细胞增殖演变的影响

本文采用免疫组织化学方法,观察了纤维连接蛋白,层粘连蛋白及基底膜Ⅳ型胶原三种细胞外基质（ＥＣＭ）成分在颌面部不同分期毛细血管瘤组织中的表达变化。结果表明增殖期ＥＣＭ表达阳性率明显高于退化期及退化完成期,有非常显著的差异性（Ｐ＜００１）。由此认为ＥＣＭ成分的含量变化是影响毛细血管瘤增殖退化病理演变过程的重要因素     

层粘连蛋白促进实体型瘤细胞粘着、铺展及~3H-TdR参人

 恶性肿瘤细胞或粘着于基膜以及在一定的基质上增殖对于肿瘤的浸润转移至关重要。层粘连蛋白(1aminin,LN)是基膜所特有的非胶原糖蛋白。我们研究了LN在肿瘤细胞粘着、铺展及增殖中的作用。通过测定粘着细胞所释放的LDH活性定量分析细胞粘着率。LN可显著增加体外培养的小鼠S180-V肉瘤及B16-MBK黑色素瘤细胞在玻璃及Ⅳ型胶原基质上粘着及铺展。纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)亦有类似作用。而非糖蛋白(牛血清清蛋白)或其他糖蛋白(鸡卵清清蛋白或免疫球蛋白)均无类似作用。此外,LN或FN抗体可分别抑制细胞粘着于LN或FN。这些结果表明LN或FN促细胞粘着作用是专一性的。扫描电镜观察表明,粘着在LN敷盖的玻璃表面的瘤细胞呈多突扁平形、膜皱襞及微绒毛十分稀少,而粘着在裸露的玻璃表面者为球形,膜皱襞及微绒毛甚多。再者,~3H-TdR向粘着于LN基质上的瘤细胞群的参入量显著高于粘着在裸露玻璃面者。     

恶性肿瘤中MMP—3表达调控机制研究进展

MMP-9为基质金属蛋白酶家族中的一员,其作用底物为细胞外基质和基底膜中的Ⅳ型胶原。大量研究表明,MMP-9在多种恶性肿瘤中呈现过表达。并因此被认为在恶性肿瘤的浸润转移中扮演重要角色。MMP-9的结构已研究清楚。在其5′侧翼调控区鉴定出许多重要的顺式作用元件,提示其表达调控机制是十分复杂的,近年来针对恶性肿瘤中MMP-9表达调控机制特点开展了许多研究。并取得了一些重要进展。     

脑胶质瘤组织CMTM1、ME2表达与临床病理特征和复发的关系研究

摘要 目的：探讨脑胶质瘤组织含CKLF样MARVEL跨膜结构域的蛋白1（CMTM1）、苹果酸酶2（ME2）表达与临床病理特征和复发的关系。方法：选取2018年1月～2021年1月徐州医科大学附属医院接受切除手术的92例脑胶质瘤患者，根据术后是否复发分为复发组和未复发组。采用免疫组化法检测脑胶质瘤组织和瘤旁组织CMTM1、ME2表达，分析二者与临床病理特征的关系，采用多因素Logistic回归分析脑胶质瘤患者术后复发的影响因素。结果：与瘤旁组织比较，脑胶质瘤组织中CMTM1、ME2阳性表达率升高（P＜0.05）。不同分化程度、世界卫生组织（WHO）中枢神经系统肿瘤分类脑胶质瘤组织中CMTM1、ME2阳性表达率比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。随访2年，92例脑胶质瘤患者术后复发率为47.83%（44/92）。多因素Logistic回归分析显示，低分化、WHO中枢神经系统肿瘤分类Ⅲ～Ⅳ级、部分切除和CMTM1、ME2阳性表达为脑胶质瘤患者术后复发的独立危险因素（P＜0.05）。结论：脑胶质瘤组织中CMTM1、ME2阳性表达率升高，与分化程度、WHO中枢神经系统肿瘤分类等级和术后复发有关，可能成为脑胶质瘤患者术后复发的辅助评估指标。     

非小细胞肺癌患者胸膜转移瘤中NOK的表达及其与生存期的相关性

目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者胸膜转移瘤中NOK表达及其与患者生存期的相关性。方法:选取我科2014年至2015年收治的Ⅳ期NSCLC患者67例,用软式胸腔镜取胸膜转移瘤和瘤旁胸膜,采用免疫组化法测定NOK的表达情况,分析胸膜转移瘤和瘤旁胸膜中NOK的表达的无差异性;对患者进行随访,并分析胸膜转移瘤和瘤旁胸膜中NOK的表达与患者生存期的相关性。结果:1Ⅳ期NSCLC患者胸膜转移瘤中NOK的表达明显高于瘤旁胸膜,具有统计学差异(P0.05);2Ⅳ期NSCLC患者胸膜转移瘤中NOK的表达量与患者的生存期呈负相关,瘤旁胸膜中NOK的表达量与患者的生存期无显著相关性。结论:NSCLC患者胸膜转移瘤中NOK的表达异常上调,且与患者的生存期呈负相关,可做为判断Ⅳ期NSCLC患者生存期的参考指标。     

整合素相关激酶在糖尿病肾病的表达及其意义

目的探讨整合素相关激酶(Integrin-Linked Kinase,ILK)在糖尿病肾病患者肾组织中的表达及其意义.方法对3例正常肾组织,14例糖尿病肾病患者肾穿刺活检标本,应用免疫组织化学方法检测ILK和FN在肾组织的阳性表达强度,并作图像分析处理.结果在正常肾组织,ILK主要表达于肾小球脏层上皮细胞,系膜细胞和小管上皮细胞呈弱表达.在糖尿病肾病,ILK表达于肾小球脏层上皮细胞和系膜细胞,在萎缩变性的肾小管上皮细胞表达增强.在肾小球结节硬化时,ILK表达明显减少.此外,ILK和FN的表达量在糖尿病肾病早、中期成正相关(P<0.001),在糖尿病肾病晚期成负相关(P<0.05).结论 ILK在糖尿病肾病肾组织中表达量显著增加,并与FN的表达有一定的相关性,说明其可能通过促进细胞外基质FN等的积聚,在糖尿病肾小球硬化过程中发挥重要作用.     

立体定向建立大鼠C6脑胶质瘤模型

目的应用不同C6细胞数量接种大鼠脑内建立大鼠脑胶质瘤模型,观察其生长特性,比较各种接种量的优劣。方法分别取1·0×105个/10μl,1·0×106个/10μl,1·0×107个/10μl体外培养的大鼠C6胶质瘤细胞单细胞悬液,立体定向接种于Wistar大鼠脑右侧尾状核区,在整体、组织、细胞、蛋白4个水平对各种接种量进行比较。结果各种接种量的实验组成瘤率均为100%,未见颅外转移病灶,在组织病理学上接近人脑胶质瘤,瘤细胞病理性核分裂像多见,C-erbB1和S-100B等神经胶质瘤常见蛋白强阳性表达,瘤组织内有丰富的微血管以及出血和坏死。结论C6细胞接种Wistar大鼠建立脑胶质瘤动物模型,成瘤率高,颅内生长稳定,肿瘤组织病理学及形态学特性与人脑胶质瘤相似。可作为临床胶质瘤基础研究的理想模型。实验过程部分时段各种接种剂量肿瘤生长速度差异有显著性,可根据病因学、实验治疗或药效学等不同研究需要选择不同接种量。     

口服氯化汞对大鼠肾间质纤维化的作用

目的口服氯化汞(HgCl2)造成大鼠的肾间质纤维化模型并探讨相关机制。方法用不同剂量HgCl2[(A组为5mg/(kg·bw)、B组为10mg/(kg·bw)、C组为20mg/(kg·bw)]给大鼠灌胃1周,观察大鼠一般状况、肾功能和肾组织病理变化,免疫组化法观察肾组织纤维连接蛋白(FN)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达。结果模型大鼠体重下降,肾体比增加,肾功能损害和肾组织Hyp含量呈剂量依赖性升高,肾间质炎性细胞浸润,肾间质胶原沉积增加,肾间质FN和α-SMA表达增强,以C组病变最重。结论20mg/(kg·bw)剂量HgCl2灌胃1周可造成大鼠的肾间质纤维化病变,其部分机制在于HgCl2促使肾间质肌成纤维细胞活化和细胞外基质的生成沉积。     

VEGF在人胎卵巢发育过程中的表达研究

目的研究血管内皮生长因子（VEGF）在人胚胎卵巢组织发生过程中的表达特征,探讨其在卵巢发生中的作用。方法采用HE染色和SP免疫组织化法学法检测VEGF在不同胎龄卵巢组织中的表达变化。结果VEGF在胎儿卵巢初级卵母细胞、卵泡细胞、部分基质细胞呈阳性表达,在卵母细胞的染色程度均强于卵泡细胞和基质细胞,基质小血管内皮也有阳性表达。其在卵母细胞中以胎24w阳性细胞多且表达量强,此后呈逐渐下降趋势。结论胎儿卵巢存在局部调节因子,VEGF表达于人胎卵巢中,以自分泌或旁分泌方式参与卵母细胞生长,在卵巢发生、发育过程中起着一定的作用。     

感染HCMV的U251干细胞裸鼠大脑移植瘤模型的建立

研究人巨细胞病毒(HCMV)感染的U251干细胞(GSC_S)裸鼠颅内成瘤情况。用单克隆培养法从U251细胞系中分离出GSC_S,采用流式细胞仪检测分离出的GSC_S中CD133的表达,感染HCMV病毒,制备细胞密度为1×10~7个/mL的GSC_S悬液。取20只SPF级BALB/c裸鼠腹部麻醉,固定在立体定位仪上,在裸鼠颅脑钻一小孔,将3μL干细胞悬液缓慢接种于裸鼠颅内,随机分为HCMV感染组和未感染HCMV组。观察HCMV对肿瘤生长及裸鼠存活情况,处死濒死裸鼠取脑组织做免疫组化检测HCMV感染组胶质瘤内IE蛋白是否持续表达及HCMV感染对胶质瘤干细胞分化为血管的影响。结果显示,经单克隆法分选出的GSC_S在无血清培养基中成球生长;经流式细胞仪检测,分离出的GSC_S中CD133比例为98.00%;裸鼠脑内出现膨胀性生长的肿瘤;HCMV感染组肿瘤组织中检测到IE高表达,HCMV感染可促进CD133阳性胶质瘤干细胞分化为CD34阳性血管内皮细胞。以上结果表明,HCMV的IE蛋白能在通过此方法建立的HCMV阳性移植瘤中持续表达,且HCMV能促进GSC_S分化为血管内皮细胞。