2011-2017年大连市输入性卵形疟原虫感染病例的实验室诊断

目的分析大连市2011-2017年7例输入性卵形疟原虫感染病例的病原、抗原及核酸检测结果,以提高卵形疟原虫诊断的准确率和效率。方法收集7例疑似疟疾患者的血样,对血样进行血涂片镜检、快速疟疾诊断试纸条检测(RDT)及荧光定量PCR检测。结果血涂片镜检结果显示7例患者均感染卵形疟原虫。RDT检测结果显示2例阴性,另外5例为泛疟原虫抗原阳性。荧光定量PCR结果显示7例患者均检出疟原虫属和卵形疟原虫核酸。结论综合镜检、RDT及荧光定量PCR检测结果确定该7例患者均为卵形疟原虫感染。     

2011年至2014年大连市疟疾流行形势及分析

摘要：目的 对大连市自2011年至2014年上报的50例疟疾进行检测分析,了解疟疾流行现状及趋势,并进行流行病学分析,为大连市疟疾消除防治策略与监测手段提供参考依据。方法 采用镜检法、快速检测法（RDT）和巢式PCR三种方法,对上报50例疟疾感染病例进行实验室检测,并以巢式PCR进行虫种鉴定。同时,对上述50例进行流行病学分析。结果 2011年至2014年上报的50例全部为输入性病例,每年病例数分别为12例、16例、10例和12例。其中恶性疟占82.0%、间日疟占6%、卵形疟占6%、三日疟占2%和未分型占4%。境外感染49例,主要来自非洲。感染者以建筑工人最多,占40%,其次是捕鱼工,占34%。结论 大连地区存在着疟疾感染和流行有良好的自然环境条件,加强本土或外来疟疾疫情的监控,积极严查防控传染源,防止疟疾传播和流行具有重要的意义。     

种猪弓形虫病的诊断与治疗分析

目的:分析种猪弓形虫病的诊断中使用PCR方法的意义以及各类可用于治疗的药物。方法:对3例疑似患有弓形虫病的种猪进行PCR诊断,将其编号为1、2、3号,涂片后观察镜检情况,并讨论目前可用于治疗的各类药物。结果:镜检中1号种猪可观察到弓形虫滋养体,但数量有限,2、3号种猪均未观察到弓形虫滋养体;PCR诊断1、2、3号均可观察到弓形虫条带。结论:猪弓形虫病的诊断中使用PCR方法可得到准确的结果,且检测操作快捷、方便,是主要的确诊方法;临床所选用的主要治疗药物为磺胺类以及乙胺嘧啶,收效良好,不过伴有严重的不良反应及副作用。     

2009年大连市疟疾监测点监测报告

目的报告2009年大连市大连湾镇疟疾监测点监测结果,为今后疟疾防治工作提供理论依据和建议。方法监测人群疟原虫抗体（IFA）,对监测点发热患者进行病原学监测,采用通宵室外人饵诱捕法监测按蚊密度。结果3名学生间接荧光抗体（IFA）阳性,阳性率为0．97％,血涂片镜检阴性;病原学监测均为阴性;共捕到按蚊4只,占捕蚊总数的1．08％。结论大连市外来人口流动频繁,来自疟区的人员较多,结合疟疾传播媒介的分布及水平,今后存在发生本地病例的隐患,出现暴发疫情的可能性很小,但疟疾防治工作力度仍需加强。     

三株抗恶性疟单克隆抗体(M26-32，F5-3F9，F5-4E9)的鉴定

用约氏疟原虫和恶性疟原虫免疫BALB／c小鼠,取其脾细胞与sP2／o细胞融合,获得11株抗恶性疟原虫红内期的单克隆抗体(McAb)。以多种疟原虫(恶性疟,间日疟,卵圆疟,诺氏疟、食蟹猴疟和约氏疟)的感染血片为抗原,进行间接免疫荧光测定(IFA),发现有3株McAb(M26—32,F5—3F9,F5—4E9)与所试6种疟原虫均发生阳性荧光反应。其中M26—32除能与中国海南岛的2个恶性疟分离株结合外,与东南亚、非洲、拉丁美洲的6个恶性疟分离株及卢旺达临床病人周围血中的环状体亦呈阳性反应。在与我国不同地区的间日疟反应时,几株McAb的IFA结果不同,提示不同间日疟原虫株的抗原成分有所差异。这些McAb与马媾疫锥虫和弓浆虫均无交叉免疫荧光反应。因此可能用于检测病人血中的微量疟原虫抗原,为早期诊断疟疾提供有力的工具,并可能用于鉴定不同地区的间日疟原虫。恶性疟原虫体外生长抑制试验结果表明,McAb M26—32能部分抑制疟原虫对。H－亮氨酸的掺入,并能延缓原虫血症的上升,在疟疾保护性免疫中可能起一定作用。     

多重荧光定量PCR技术快速诊断21三体及18三体方法的建立及临床应用

利用收集的20例21三体、3例18三体DNA样本及40例正常人DNA样本,选择多对21、18号染色体短串联重复序列分子标记,建立多重荧光定量PCR检测技术用于21三体、18三体的快速产前诊断;利用建立的方法对165例产前诊断病例及4例消化道畸形新生儿进行检测,并与核型分析结果相比较。169例病例中共诊断21三体4例,18三体1例,所有病例均在1～3d得到结果,无漏诊和误诊,并利用建立的多重荧光定量PCR技术为5例核型分析失败的病例提供了明确的产前诊断。对于同期B超检查胎儿结构异常的22例胎儿,则采用传统的核型分析,检出1例(45,X),1例(47,XXY)。结果表明建立的多重荧光定量PCR技术可快速、准确地诊断21三体和18三体,减轻核型分析需时过长给孕妇带来的焦虑,可用于血清学筛查21三体、18三体高风险者及高龄孕妇,也适用于对其他遗传性疾病如遗传性耳聋进行产前诊断时并行检测以排除21三体和18三体。多重荧光定量PCR技术结合传统核型分析可更好的满足产前诊断的临床需求。     

BV三联法在细菌性阴道病诊断中的应用与评价

目的探讨BV三联法在诊断细菌性阴道病中的临床价值方法用BV三联法（检测患者阴道分泌物中的过氧化氢浓度、唾液酸苷酶、白细胞脂酶）和Amsel法（检测阴道分泌物并对阴道分泌物进行涂片革兰染色镜检）。结果BV三联法与Amsel法结合涂片革兰染色结果差异无显著性（P〈0．05）。结论BV三联法是一种新型、简便、快速的方法,可用于临床辅助诊断细菌性阴道病。     

子宫颈感染孢子丝菌1例

目的探讨双相真菌申克孢子丝菌(复合体)子宫颈感染的临床特点,为进一步提高实验室及临床诊断水平提供资料。方法分析1例申克孢子丝菌(复合体)子宫颈感染临床表现与实验室诊断过程,检索近年来国内外主要文献进行复习。结果患者阴道分泌物镜检见成团的革兰染色阳性、圆形、卵圆形孢子,较球菌大,较酵母样真菌孢子小。37℃血平皿培养,形成边缘不齐、表面有褶皱、干燥、有韧性不易挑取的白色菌落;革兰氏染色镜下见染色阳性酵母样芽生孢子。25℃SDA培养,形成中心有白色褶皱,周围绒毛样的丝状真菌菌落形态,直接涂片镜检见大量有隔菌丝、孢子。上述特征符合申克孢子丝菌。国内外文献检索,申克孢子丝菌感染多为皮肤局限性、肺炎、骨关节等病例,偶有累及局部淋巴结的病例,仅少数艾滋病等免疫力极度低下患者为全身播散性感染。结论申克孢子丝菌所致子宫颈感染罕见,掌握其在人体内与不同条件下培养菌落的特征有助于及时诊断。     

采用分子生物学技术诊断隐球菌脑膜脑炎的研究

目的采用分子检测技术对疑似隐球菌感染的脑膜炎病例进行诊断。方法收集患者的脑脊液样本,提取DNA,设计引物进行PCR扩增,采用DNA芯片技术对扩增产物进行分子检测。结果显示样本新生隐球菌阳性。结论通过ITS保守序列设计引物进行PCR扩增和DNA芯片技术对常规真菌学检查不能确定的疑似隐球菌脑膜炎患者脑脊液样本进行非培养检测,具有实验室诊断参考价值。     

三种结核分枝杆菌检测方法的比较

目的:比较三种结核分枝杆菌检测方法的阳性检出率,并且评价其检测成本等因素,为基层医院快速、准确诊断结核病提供科学依据。方法:对学院附属医院2010---2012年确诊为肺结核病的98例患者标本用抗酸染色涂片法、血清学胶体金法以及聚合酶联链式反应(PCR)分别进行检测。结果:三种检测方法的阳性率分别为:17.3%,76.5%和79.5%。结论:综合三种方法的优缺点,建议基层医院联合使用抗酸涂片染色法和血清学胶体金法进行结核分枝杆菌的检测。     

云南松雌雄配子体的发育

云南松(Pinus yunnanensis Fr.)雄配子体于10月在小孢子叶腹面产生二个小孢子囊,内有许多进行分裂的造孢组织细胞。第二年一月下旬至二月初小孢子母细胞进行减数分裂。在分裂期间,细胞内所贮存的淀粉粒的分布发生变化。二月初四分体小孢子形成,绒毡层细胞解体。二日中旬单核花粉粒形成,外壁扩展形成二个异极对称的气囊。三月花粉在四细胞时期散发。 雌配子体于二月上旬在珠心皮下分化出孢原细胞。二月下旬大孢子母细胞进入减数分裂期。三月初直列四分体大孢子形成,珠孔端三个退化,合点端一个功能大孢子进入有丝分裂期,形成约32个游离核的配子体。次年三月初雌配子体形成,四月初中央细胞核分裂,四月底颈卵器成熟,卵核周围产生辐射状原生质纤丝。五月初受精开始。云南松雌雄配子体的发育与亚热带分布的P.roburghii相似。     

非侵袭性真菌性鼻窦炎的实验室诊断及致病菌分析

目的探讨非侵袭性真菌性鼻窦炎的实验室诊断方法,分析其致病菌,为鼻窦炎合并真菌感染的临床诊断、治疗提供依据。方法对我院临床及鼻内镜下所诊断的10例真菌性鼻窦炎患者,鼻内镜手术时直接吸取病变的鼻窦黏膜及窦腔内容物,通过直接镜检、真菌培养、传统鉴定及分子生物学鉴定和组织病理学检查对其进行检查。结果 10例病例中,直接镜检阳性者8例;病理学检查可见真菌菌丝或者孢子者8例;接种培养及基因鉴定阳性者5例(感染菌株包括2例烟曲霉复合体、1例杂色曲霉、1例枝孢样枝孢霉、1例帚霉)。不同方法检测出的阳性病例并非完全重叠。结论真菌镜检、真菌培养、真菌分子生物学鉴定、组织病理学检查在诊断真菌感染时可以互补,有助于明确诊断及发现新菌株。     

痰涂片标本用于结核分枝杆菌耐药性检测的研究

目的 研究抗酸染色结核分枝杆菌(简称结核杆菌)阳性痰涂片标本直接用于耐药性检测的方法。方法 对18株临床分离培养的结核杆菌用利福平进行药敏试验。分别提取菌株DNA和与之对应的痰涂片标本的菌体DNA,用聚合酶链反应(PcR)扩增ropB基因后进行固相杂交和核酸测序检测结核杆菌的耐药性。结果 18株结核杆菌中有12株对利福平耐药。经PCR扩增的ropB片段与探针杂交后,敏感菌株未发现rpoB基因的突变,自耐药菌株提取的DNA中rpoB突变体的检出率为100％(12／12),痰涂片提取DNA的检出率为91．7％(11／12)。所有耐药菌株DNA与痰涂片DNA核酸测序结果相吻合,都有rpoB基因核心区域碱基突变。结论 抗酸染色痰涂片阳性标本可直接用于检测结核杆菌利福平耐药基因rpoB突变体,是一种值得临床实验室推广使用的耐药菌诊断方法。     

大熊猫鳞状上皮细胞中的病毒包涵体和合胞体

给疑患犬瘟热病的动物采用睑结膜采样涂片染色镜检病毒包涵体以诊断犬瘟热的方法在兽医临床上已有实施。用此睑结膜拭片法检测大熊猫疑患犬瘟热病时出现的多核巨细胞合胞体尚未见报导。1病例回顾1997年,某动物园的大熊猫相继患上疑为犬瘟热的疾病。检查了仍然活着的大熊猫睑结膜鳞状上皮细胞中的犬温热病毒诱导的合胞体。用灭菌脱脂棉签(棉拭)浸蘸生理盐水,在患病大熊猫的眼睑结合膜上稍用力擦拭。将此已取样的棉拭在清洁载玻片上轻轻涂抹一下。玻片自然干燥后,用瑞特氏法染色,在普通光学显微镜(油镜)下观察,发现了很多个清楚而典型的多核巨…     

PCR增强剂在核酸体外扩增检测技术的研究进展

在各种高致病性病原体、禽流感病毒、食源性微生物等引起的疾病随时大规模流行的背景下,利用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）技术对第一例或第一波病例的快速实验室诊断显得尤为重要,同时发展出多种以PCR技术为基础的检测技术以便更加快速、高通量、敏感地对疾病进行诊断、预防或预测。然而,在实际病原体检测中,常常出现灵敏度低、准确性差的结果。PCR增强剂是在PCR及PCR衍生技术中添加的一类物质,其可从产率、特异性、灵敏度等方面提高核酸扩增性能,从而优化核酸检测,解决病原体检测的应用瓶颈,为第一例病原体检出节约宝贵的时间。结合以PCR为基础的核酸体外扩增检测技术对PCR增强剂在其中的应用、优缺点、作用机理进行介绍,以期为病原体核酸检测的实际应用提供一些参考。     

自身免疫性大疱病合并侵袭性肺曲霉病:3例报告

目的通过典型病例回顾探讨自身免疫性大疱病糖皮质激素治疗过程中合并肺曲霉病的诊断和治疗情况。方法报告3例自身免疫性大疱病合并侵袭性肺曲霉病病例。3例病例均行痰镜检、培养、抗原检测、胸部CT或者坏死组织病理检查。分离病原菌经形态学和分子生物学鉴定为烟曲霉、黄曲霉和刺孢裸胞壳。结果 3例病例证实为侵袭性肺曲霉病。进行以伏立康唑为主的综合治疗后均治愈。结论自身免疫性大疱病糖皮质激素治疗过程中应警惕肺曲霉病的发生。多种实验室检查可以帮助早期诊断,提高疗效。     

B 超引导下甲状腺肿块细针穿刺细胞学诊断的临床病理分析

摘要目的：比较B 超引导下细针吸取穿刺和传统细针吸取穿刺在甲状腺肿块性质确定中意义。方法：使用B 超引导下细针吸取 穿刺（UG-FNAB）和传统细针吸取穿刺技术（c-FNAB）对225 例甲状腺肿块进行穿刺活检，然后进行涂片，染色，镜检，结合临床作 出细胞学诊断，并与组织切片诊断对照，比较两种方法的确诊率。结果：在UG-FNAB 检测病例中59.3%的结节位于甲状腺右叶， 40.7%肿块位于左叶和峡部。87%的患者甲状腺机能正常，结节最长径平均为2.8± 1.1 cm，部分病例符合甲状腺恶性肿瘤的超声 影像学改变。在本研究中诊断为甲状腺乳头状癌的病例细胞学和组织学特点均符合甲状腺癌形态学特点。在225 例研究病例中， 总确诊率为72.89%（164/225），其中UG-FNAB组确诊率为90.58%（77/85），C-FNAB 组确诊率为62.14%(87/140) ,两组确诊率比 较有显著性差异（P<0.05）。结论：本组研究数据显示比较C-FNAB，UG-FNAB在诊断甲状腺复杂性结节中具有更高的确诊率，特 别是在C-FNAB方法不能得出明确诊断时。     

细菌性阴道病联合检测技术在阴道感染诊断中的应用

目的探讨细菌性阴道病(BV)联合检测技术在阴道感染诊断中的应用价值。方法取2009年9月至2010年2月至苏州市木渎人民医院妇科门诊就诊的6 500例育龄期妇女阴道分泌物,分别对霉菌、滴虫、清洁度进行生理盐水涂片的检测与过氧化氢、唾液酸苷酶和白细胞酯酶三项联合测定。结果应用湿片镜检发现霉菌性阴道炎1 274例,阳性率为19.6%,滴虫性阴道炎195例,阳性率为3.0%。应用BV三项联合技术测定6 500例患者的阴道分泌物,BV阳性1 612例,阳性率为24.8%,其中BV合并霉菌性阴道炎感染465例,占BV发病的28.9%,BV合并滴虫感染79例,占BV发病的4.9%。结论三项联合检测技术操作简单、快速、准确,从功能学分别反映阴道正常菌和致病菌的指标,可与白带常规镜检互补,建议作为阴道分泌物常规检查对阴道感染进行筛查。     

尖端赛多孢子菌引起的真菌性鼻窦炎1例并文献复习

目的 探讨尖端赛多孢子菌的实验室检测方法,了解其对5种常用抗真菌药物的体外敏感性.通过对相关文献的复习,熟悉真菌性鼻窦炎的临床表现和诊治方法.方法 将1例尖端赛多孢子菌引起的真菌性鼻窦炎患者经鼻内腔镜手术切除的团块用10％ KOH压片镜检、涂片革兰染色镜检、沙堡弱培养基培养、分子生物学方法鉴定到种.分离株应用E-test进行体外药敏试验.结果 鉴定为尖端赛多孢子菌.5种药物对其MIC范围分别为:伏立康唑0.064 μg/mL,卡泊芬净1.500 μg/mL,氟康唑16.000 μg/mL,两性霉素B＞32.000 μg/mL,5-氟胞嘧啶＞32.000 μg/mL.结论 尖端赛多孢子菌引起的真菌性鼻窦炎国内少见报道,易与肿瘤相混淆;实验室检测对正确诊断起决定性作用;行鼻内腔镜下手术治疗效果较好.了解该菌的耐药性对指导抗真菌治疗尤为关键.     

Xpert MTB/RIF在人类免疫缺陷病毒感染/艾滋病患者中诊断结核病的价值

为探讨利福平耐药结核分枝杆菌实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert Mycobacterium tuberculosis/rifampicin,Xpert MTB/RIF)在人类免疫缺陷病毒感染/艾滋病(human immunodeficiency virus infection/acquired immunodeficiency syndrome,HIV/AIDS)患者中诊断结核病的价值,本研究回顾性分析了2018年1月1日—2020年12月31日复旦大学附属公共卫生临床中心感染与免疫科收治的801例HIV/AIDS合并疑似结核病患者的临床资料。801例患者中,657例进行了Xpert MTB/RIF、外周血结核感染T细胞斑点试验(tuberculosis T cell spot test,T-SPOT.TB)、抗酸染色涂片镜检和BACTEC MGIT 960液体培养等检测。以液体培养及菌型鉴定结果作为结核病诊断的“金标准”,确诊结核病92例,Xpert MTB/RIF、T-SPOT.TB、抗酸染色涂片镜检在HIV/AIDS患者中诊断结核病(包括肺结核和肺外结核)的灵敏度分别为72.8%、55.4%和69.6%,特异度分别为96.8%、90.3%和84.4%,与“金标准”行一致性检验,Kappa值分别为0.719 (P<0.01)、0.430(P<0.01)和0.424(P<0.01)。Xpert MTB/RIF检测502份呼吸道样本,结果显示其诊断肺结核的灵敏度和特异度分别为66.7%和96.0%;在痰涂片阳性和阴性的患者中,Xpert MTB/RIF诊断肺结核的灵敏度分别为77.4%和35.2%,特异度分别为87.7%和 97.8%。采用Xpert MTB/RIF检测343份肺外标本,结果显示其诊断肺外结核的灵敏度和特异度分别为63.3%和95.2%。以上结果提示,Xpert MTB/RIF在HIV/AIDS患者中诊断结核病(包括肺结核和肺外结核)具有较高的灵敏度和特异度,诊断肺结核的灵敏度高于肺外结核,因此推荐将其作为HIV/AIDS患者疑似结核病的首选检测方法。