PDIA1 和EF1D 在左侧和右侧结肠癌差异表达的实验研究

目的:初步确定蛋白质二硫化异构酶A1和延伸因子1-delta为左侧和右侧结肠癌中差异表达蛋白,为左侧和右侧结肠癌在肿瘤生物学方面的差异提供分子遗传学依据。方法:收集人左侧结肠癌(LSCC)和右侧结肠癌(RSCC)组织标本,进行二维凝胶电泳、质谱分析和生物信息学分离和鉴定左右侧结肠癌中差异表达蛋白质,进一步应用RT-PCR、Western Blot和免疫组织化学技术检测蛋白质二硫化异构酶A1和延伸因子1-delta在左侧和右侧结肠癌中的表达状态。结果:筛选并成功鉴定出左侧和右侧结肠癌中16种差异表达蛋白质,与右侧结肠癌比较,10种蛋白在左侧结肠癌表达上调,6种蛋白在左侧结肠癌表达下调,其中蛋白质二硫化异构酶A1在左侧结肠癌中表达上调,延伸因子1-delta在左侧结肠癌中表达下调,并通过RT-PCR、Western Blot和免疫组化方法证实了在左侧和右侧结肠癌中该两种蛋白表达的差异,与蛋白质组学结果一致。结论:左侧结肠癌和右侧结肠癌的蛋白质组存在差异,其中蛋白质二硫化异构酶A1和延伸因子1-delta在mRNA和蛋白水平均存在差异,这些可能是左侧和右侧结肠癌生物学行为差异的原因。     

左侧大肠癌和右侧大肠癌蛋白质差异表达谱的建立及质谱分析

目的:初步探索左侧大肠癌和右侧大肠癌中蛋白质表达的差异,为左右侧大肠癌生物学特性上的差别提供功能基因组学上的依据。方法:以左右侧大肠癌组织为研究对象,提取组织总蛋白,依次进行二维凝胶电泳,凝胶图象分析,质谱及生物信息学分析。结果:成功建立了左侧大肠癌和右侧大肠癌的二维电泳图谱,进行质谱和生物信息学分析比较得到左侧大肠癌与右侧大肠癌的差异表达蛋白共有16个,其中左侧大肠癌中表达增加的蛋白有10个包括蛋白质二硫化异构酶A1,78 kDa葡萄糖调节蛋白,抑制素,热休克蛋白60,含硫氧还蛋白域的蛋白5,T-复合蛋白1ε亚单位,应急蛋白70,异柠檬酸脱氢酶,蛋白质二硫化异构酶A3,巨噬细胞加帽蛋白;左侧大肠癌表达降低的蛋白6个包括ATP合成酶β亚单位,延伸因子1-delta,热休克蛋白β1,载脂蛋白A-Ⅰ,转甲状腺素蛋白,热休克蛋白β6。结论:左侧大肠癌和右侧大肠癌中存在差异表达蛋白,这些差异表达蛋白可能是左右侧大肠癌生物学性质差异的分子遗传学基础。     

脊髓全横断损伤后差异表达蛋白的蛋白质组学分析

 对脊髓全横断损伤前后的大鼠脊髓全蛋白质进行双向凝胶电泳,借助PDQuest软件从中找出差异表达蛋白质点.应用基质辅助激光解吸电离串联质谱,对差异表达的蛋白质点进行鉴定,成功鉴定出18种蛋白质.脊髓损伤3 d后表达上调的蛋白质有巨噬细胞游走抑制因子、S期激酶相关蛋白 1、热休克蛋白 27、多配体蛋白聚糖 3、T细胞受体β链可变区、膜联蛋白Ⅲ、腺苷酸激酶 1、半乳凝素 3、丙酮酸脱氢酶、磷脂酶 B、嗜铬粒蛋白 A、热休克蛋白70凝结蛋白 1;同时表达下调的蛋白质有磷酸丙糖异构酶、神经鞘氨醇磷酸化受体、热休克蛋白10、肽酰 脯氨酰 顺反式异构酶 A多数差异蛋白质涉及到神经细胞的增殖、凋亡、应激反应等过程,为进一步阐明中枢神经系统的损伤和修复机制提供了理论依据.摘要 对脊髓全横断损伤前后的大鼠脊髓全蛋白质进行双向凝胶电泳,借助PDQuest软件从中找出差异表达蛋白质点.应用基质辅助激光解吸电离串联质谱,对差异表达的蛋白质点进行鉴定,成功鉴定出18种蛋白质.脊髓损伤3 d后表达上调的蛋白质有巨噬细胞游走抑制因子、S期激酶相关蛋白 1、热休克蛋白 27、多配体蛋白聚糖 3、T细胞受体β链可变区、膜联蛋白Ⅲ、腺苷酸激酶 1、半乳凝素 3、丙酮酸脱氢酶、磷脂酶 B、嗜铬粒蛋白 A、热休克蛋白70凝结蛋白 1;同时表达下调的蛋白质有磷酸丙糖异构酶、神经鞘氨醇磷酸化受体、热休克蛋白10、肽酰 脯氨酰 顺反式异构酶 A多数差异蛋白质涉及到神经细胞的增殖、凋亡、应激反应等过程,为进一步阐明中枢神经系统的损伤和修复机制提供了理论依据.     

应用蛋白质组学技术筛选胃癌SGC-7901细胞中的let-7a功能相关蛋白

为探讨let-7a表达下调在胃癌发病中的机制,高通量地检测了与let-7a功能相关的蛋白质.首先采用基因克隆技术稳定过表达SGC-7901细胞系的let-7a基因,然后用蛋白质组学技术研究稳定过表达该基因对SGC-7901细胞蛋白质表达谱的影响.通过对SGC-7901/let-7a细胞的蛋白质表达谱改变的研究,并用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析鉴定了10个差异表达蛋白质.这些差异表达蛋白质可能是let-7a功能相关蛋白质,其中抗氧化蛋白2、胰岛素样生长因子结合蛋白2、二硫化蛋白异构酶A2、四氢叶酸合成酶、细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白1、Rho-GTPsae激活蛋白4表达上调,Skp2蛋白、血小板黏附蛋白CD41、纤维连接蛋白、Cks1蛋白表达下调.部分差异表达蛋白质如细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白1、Skp2蛋白和纤维连接蛋白经蛋白质印迹分析进行了验证.在SGC-7901/let-7a中鉴定的10个差异表达蛋白质涉及到细胞周期的调控、分子基因表达调控、细胞黏附、细胞代谢等众多事件,它们可能作为let-7a功能相关蛋白质,为阐明let-7a表达下调在胃癌发病中的机制提供了重要线索.     

抑癌候选基因NDRG2对结肠癌细胞SW620的迁移和侵袭力的影响

目的：观察NDRG2对结肠癌SW620细胞侵袭、转移等生物学行为的影响,探讨其可能的调节机制。方法：用阳离子脂质体转染方法分别转染pcDNA3.1-Ndrg2和SiRNA-Ndrg2于SW620细胞内48h,上调/下调NDRG2的表达;检测NDRG2基因mRNA及蛋白表达水平的变化;通过划痕试验及transwell细胞侵袭试验进一步对上调/下调NDRG2表达水平后的结肠癌细胞迁移和侵袭能力进行分析。结果：pcDNA3.1-Ndrg2转染SW620后,NDRG2的mRNA和蛋白表达水平明显升高,细胞的迁移和侵袭能力下降;SiRNA-Ndrg2转染SW620后,NDRG2的mRNA和蛋白表达水平明显降低,细胞的迁移和侵袭能力上升,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论：NDRG2作为抑癌候选基因能够降低结肠癌细胞转移和侵袭能力。     

热CO2气腹处理后结肠癌细胞株COLO 205的蛋白组学变化

目的：研究热CO2气腹处理后结肠癌细胞株COLO205的蛋白组学变化,为阐明热CO2气腹对结肠癌细胞的杀伤作用机制提供依据。方法：用热CO2气腹处理结肠癌细胞株COL0205,按有无处理分为处理组与对照组。分别抽提两组细胞的总蛋白质,采用同位素标记的相对和绝对定量（isobaric tags for relative absolute quantitation, iTRAQ）技术标记,液相色谱（LC）分离蛋白质,质谱仪（MS）进行蛋白质鉴定及Western blot检测。结果：共筛选得到18个差异表达的蛋白,其中8个蛋白表达上调,10个蛋白表达下调。Western blot显示热休克蛋白HSP70在细胞表达明显高于对照组（P〈0．01）;蛋白Myosin-9的表达量在处理后显著下降。结论：热CO2气腹处理后结肠癌细胞株COL0205的蛋白组学发生差异性变化。     

左半结肠癌和右半结肠癌基因差异表达谱的建立

目的:初步探索左半结肠癌和右半结肠癌中基因表达的差异,为左右半结肠癌生物学特性上的差别提供分子遗传学依据。方法:以左右半结肠癌组织为研究对象,提取组织总RNA,依次进行样品RNA进行荧光标记,杂交和清洗,芯片扫描和芯片图像的采集和数据分析。结果:成功建立了左半结肠癌,左半结肠癌旁,右半结肠癌,右半结肠癌旁的基因表达谱,应用SAM软件分析比较得到左半结肠癌与右半结肠癌的差异基因共有11个,包括乳酸脱氢酶B链,泛素D,磷脂酰-4-3磷酸激酶C2-α,FAT,双特异性蛋白磷酸酶2,细胞周期蛋白依赖性激酶4抑制剂D,酪蛋白激酶-1结合蛋白,突触结合蛋白-13,锌指蛋白560,公认未定性蛋白,IgGFc结合蛋白。左半结肠癌旁与右半结肠癌旁的差异基因共有4个,包括金属蛋白酶7,早期生长反应蛋白1,左半结肠癌旁组织中下调的基因包括突触孔蛋白,膜相关磷脂酶A2基因。结论:左半结肠癌和右半结肠癌以及相应癌旁组织中存在差异表达基因,这些基因表达的差异可能是左右半结肠癌生物学性质差异的分子遗传学基础。     

LncRNA RP1调控周期蛋白质促进结肠癌细胞增殖

长链非编码RNAs（long non-coding RNAs, lncRNAs）是一类无蛋白质编码功能,长度大于 200 nt的RNAs。qRT-PCR实验证实,lncRNA RP1-506.5（命名为RP1）在人结肠癌细胞株中的表达量明显高于人正常结肠上皮细胞（P<0.01）。RP1在结肠癌组织中的表达量为癌旁组织中表达量的8.5倍。在HCT116中,上调RP1的表达,同时在HCT8中沉默RP1的表达,探讨RP1对结肠癌细胞生物学特性的影响。MTS实验、活细胞工作站增殖实验,结合平板克隆实验发现,过表达RP1能明显促进结肠癌细胞HCT116的增殖能力。而在HCT8细胞中沉默RP1表达后,该细胞的增殖能力明显减弱。流式细胞周期实验结果表明,RP1能促进细胞周期快速通过G1/S检测点,并能加速S期进程。荧光定量PCR、Western印迹实验发现,在HCT116中细胞中,上调RP1的表达后,P21的表达水平下调,细胞周期蛋白D1（cyclinD1）、依赖细胞周期蛋白激酶6(CDK6)表达水平上调;当沉默LncRNA RP1的表达后,能上调P21的表达水平,下调cyclinD1、CDK6的表达水平。这些结果表明,LncRNA RP1可通过调控周期相关蛋白质的表达促进结肠癌细胞增殖。     

高效絮凝菌A9在不同碳源培养条件下差异表达蛋白鉴定及分析

研究了高效絮凝菌A9在普通培养基、葡萄糖培养基和甘露糖培养基的培养条件下蛋白质组表达的差异。从这3种不同培养基培养的菌体中提取蛋白,进行蛋白质双向电泳,胶图分析后选取差异蛋白进行质谱鉴定。胶图分析结果表明:絮凝菌A9在不同碳源培养条件下蛋白质表达有较大差异。通过质谱分析,共有54个蛋白得到成功鉴定,包括二氢硫辛酸脱氢酶、磷酸丙糖异构酶、果糖-1,6-二磷酸酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、磷酸甘油酸激酶、顺乌头酸酶、磷酸酰基转移酶、肽基脯氨酸顺反异构酶、延伸因子G等。这些差异蛋白的功能主要与能量代谢、糖类合成和代谢、脂类运输和代谢、蛋白翻译后修饰以及核糖体结构和生成有关。本文从蛋白水平阐明了絮凝菌A9在不同碳源培养条件下部分蛋白表达差异,为优化菌株絮凝剂培养条件提供了依据。     

抑癌候选基因NDRG2 对结肠癌细胞SW620 的迁移和侵袭力的影响

目的:观察NDRG2对结肠癌SW620细胞侵袭、转移等生物学行为的影响,探讨其可能的调节机制。方法:用阳离子脂质体转染方法分别转染pcDNA3.1-Ndrg2和SiRNA-Ndrg2于SW620细胞内48h,上调/下调NDRG2的表达;检测NDRG2基因mRNA及蛋白表达水平的变化;通过划痕试验及transwell细胞侵袭试验进一步对上调/下调NDRG2表达水平后的结肠癌细胞迁移和侵袭能力进行分析。结果:pcDNA3.1-Ndrg2转染SW620后,NDRG2的mRNA和蛋白表达水平明显升高,细胞的迁移和侵袭能力下降;SiRNA-Ndrg2转染SW620后,NDRG2的mRNA和蛋白表达水平明显降低,细胞的迁移和侵袭能力上升,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:NDRG2作为抑癌候选基因能够降低结肠癌细胞转移和侵袭能力。     

MACC1在结肠癌中表达及其临床病理意义

目的：观察MAccl（metastasis．associatedincoloncancer-1）在结肠癌中的表达并分析其与大肠癌临床病理特征的关系。方法：选择我院2001年1月～2011年12月收治的317例接受结肠癌根治术治疗的结肠癌患者为研究对象,通过免疫组织化学技术检测MACCl在结肠癌及癌旁正常结肠组织中的表达,并分析MACCl的表达与结肠癌患者临床病理指标和生存期的相关性。结果：MACCl在结肠癌中的阳性表达率选择高于癌旁正常结肠组织（P〈0．05）。MACCl的表达与肿瘤的大小、临床分期、淋巴结转移、远处转移均显著相关（P〈0．05）,MACCl阳性表达病例的肿瘤体积较MACCl阴性表达病例大,临床分期较MACCl阴性表达病例晚,淋巴结转移和远处转移的发生率较MACCl阴性表达者高,均有统计学意义（P〈0．05）。MACCl阳性表达病例的生存率和生存期均较MACCl阴性表达病例显著降低和缩短（P=0．01）。结论：MACCl的表达上调与结肠癌的发生发展密切相关,可能作为评估结肠癌患者预后的参考指标。     

结肠炎相关结肠癌分泌蛋白质体外富集方法的建立

目的:建立小鼠结肠炎相关结肠癌分泌蛋白质体外富集的方法;方法:利用结肠炎相关结肠癌小鼠模型,取不同阶段实验小鼠的结肠体外培养48h,收集分泌蛋白质。使用SDS-PAGE分离分析分泌蛋白质,并通过Western blot检测分泌蛋白质是否存在胞浆蛋白或者核蛋白的污染。结果:在实验条件下收集得到的分泌蛋白重现性好,分泌蛋白中核蛋白和胞浆蛋白的污染较少,且能够明显分辨与病程相关差异表达蛋白质条带。结论:成功建立了结肠炎相关结肠癌分泌蛋白质的体外富集方法。     

胰岛素样生长因子1（IGF-I）通过PI-3K/Akt途径对结肠癌细胞凋亡的影响

目的：探讨胰岛素样生长因子-1（IGF-I）通过磷酯酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI-3K/Akt）信号通路对结肠癌细胞株SW480凋亡率的影响及其凋亡抑制蛋白survivin表达水平的变化。方法：培养结肠癌SW480细胞株,实验分成三组：未加IGF-I空白组、IGF-I刺激组、IGF-I＋LY294002阻断组,检测阻断剂LY294002是否阻断PI-3K/Akt通路（Western Blot检测三组P-Akt表达情况）;Western Blot及免疫荧光观察三组survivin蛋白表达变化;MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果：Western blot结果显示LY294002可抑制IGF-I诱导的p-Akt的表达（P〈0.05）;阻断IGF-I诱导的PI-3K/Akt通路后MTT显示结肠癌细胞SW480增殖抑制率升高（P〈0.05）,流式细胞术分析显示凋亡率明显上升（P〈0.05）;Western blot及免疫荧光结果显示LY294002可抑制IGF-I诱导的survivin的表达（P〈0.05）。结论：IGF-I可通过PI-3K/Akt通路诱导survivin表达,从而抑制结肠癌细胞SW480的凋亡。     

朊蛋白在结肠癌及结肠炎组织中的表达及其临床意义

目的：观察朊蛋白（PrPc）在正常结肠粘膜、结肠炎及结肠癌组织中的表达,并探讨其临床意义。方法：采用免疫组织化学法分别检测PrPc在正常结肠组织、结肠炎及结肠癌组织（各40例）中的表达,并分析其在结肠癌及结肠炎组织中的表达与患者性别、分化程度、TNM分期、淋巴结转移及炎症程度等临床特征间的关系。结果：PrPc在正常结肠及结肠癌组织中均有表达,在结肠炎中表达较低,在结肠癌组织中阳性表达率为60％（24／40）,明显高于正常结肠组织的35％（14／40）及结肠炎组织的30％（12／40）（P〈0．05）。轻度结肠炎中PrPc的阳性表达率明显高于重度结肠炎,结肠癌中PrPc的表达与患者的肿瘤分级、分期显著相关（P〈0．05）。结论：PrPc在结肠癌中的表达增高,在结肠炎中表达较低,可作为临床判断结肠癌恶性程度及结肠炎炎症程度的重要参考指标。     

S100A11在结肠癌的表达及其与临床特征的关系

目的：探讨S100A11在结肠癌和正常肠粘膜组织中的表达及其与患者临床特征的的关系。方法：采用RT-PCR、WesternBlotting技术,检测S100A11在24例结肠癌及正常肠粘膜中的表达,并分析S100A11与患者年龄,性别,临床病理分型之间的关系。结果：S100A11mRNA在结肠癌组织的表达量（0.944＋0.032）高于正常肠粘膜组织中的表达量（0.828＋0.079）,两组比较差异有统计学意义（p〈0.05）。S100A11蛋白在结肠癌组织中的表达量（0.951＋0.02）高于在正常肠粘膜组织中的表达量（0.860＋0.05）,两组比较差异有统计学意义（p〈0.05）。但与患者临床特征之间比较差异无统计学意义（p〉0.05）。结论：S100A11在结肠癌组织中表达量高于正常肠粘膜组织,提示其与结肠癌的发生和发展有关.是判断结肠癌生物学行为的有价值的参考指标。     

ERCC1蛋白表达与结肠癌FOLFOX方案化疗疗效及预后相关性分析

目的：探讨晚期结肠癌癌组织中核苷酸切除修复交叉互补基因1（excisionrepaircross—complementinggenel,ERCCl）~O表达状况及其与患者临床病理特征、奥沙利铂方案化疗疗效及预后之间的关系。方法：采用免疫组化方法检测晚期结肠癌癌组织中ERCCl蛋白表达状况。结果：晚期结肠癌癌组织中ERCCl表达阳性表达率为45．1％。ERCCl蛋白的表达状况与患者的性别、年龄、肿瘤部位、分化程度及病理类型均无关（P〉0．05）。ERCCl蛋白表达阴性患者奥沙利铂方案化疗有效率为56．O％高于表达阳性患者的34．1％（P。0．037）,并且接受化疗后表达阴性患者中位生存期为19个月高于表达阳性患者的14个月（P=0．016）。结论：ERCCl蛋白表达阴性的晚期结肠癌患者接受奥沙利铂方案化疗有效率较阴性患者高并有生存受益,ERCCl的表达状态可作为晚期结肠癌化疗方案的选择及预后判断的指标。     

Integrin beta1在结肠癌及其淋巴转移灶中的表达及临床意义

目的：检测integrin-beta1在结肠癌组织中的表达水平差异,研究其与结肠癌临床病理特征及其预后的关系。方法：采用免疫组化 SP法检测integrin 茁1在82例结肠癌原发灶及其淋巴结转移灶中的表达情况。结果：邻近正常结肠粘膜组织integrin beta1的阳性表 达率为93.33 %,原发灶癌细胞integrin beta1的表达率为73.17 %,两者之间integrin beta1的阳性表达率比较P<0.01;结肠癌转移性淋 巴结组织integrin beta1的阳性表达率为87.67 %,结肠癌非转移性淋巴结组织integrin beta1的阳性表达率为11.29 %,两者之间integrin 茁1的阳性表达率比较P<0.01。在所有与结肠癌相关的临床病理因素中,是否穿透浆膜层、有无淋巴结转移、分化程度不同、Dukes 分期不同,integrin beta1的阳性表达率比较P 值均小于0.05。结论：Integrin beta1与结肠癌分化程度、侵袭深度、淋巴结转移状况及 Dukes 分期等病理因素密切相关,其表达水平的检测对评估结肠癌淋巴结转移程度和分析结肠癌分期具有一定临床实用价值。     

Gli1与β-catenin相互作用促进二者在结肠癌细胞中的协同核输入

Wnt信号通路和Hedgehog（Hh）信号通路在胚胎和干细胞的发育中发挥重要作用.此外,这两条信号途径在结肠癌复发和浸润的过程也至关重要.然而,Wnt信号通路、Hedgehog信号通路二者之间具体的交互作用机制目前仍不清楚.本文发现,这两条途径的关键分子Gli1和β-联蛋白之间存在蛋白质相互作用.Gli1与β-联蛋白之间的分子相互作用有助于二者的核输入.同时发现,在肠癌细胞系中,Gli1与β-联蛋白协同上调表达. LiCl激活细胞Wnt信号通路使Gli1表达水平增加, RNA干扰抑制Wnt信号通路,Gli1的表达水平下降.同时,Gli1的过表达也提高了细胞内β-联蛋白的表达水平,并且用Hedgehog信号通路抑制剂GANT61处理细胞,降低Gli1的表达后细胞内β 联蛋白的表达相应下降.本研究揭示了Gli1 和 β-联蛋白的相互作用及二者协助核输入在Wnt、Hedgehog信号通路交互调节中发挥重要作用,Wnt、Hedgehog信号通路交互作用为大肠癌发生发展研究提供了细胞水平交互调控机制.     

TACC1及TFF3在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的：探讨转化酸性卷曲螺旋蛋白1（TACC1）和肠三叶因子（TFF3）在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法：采用免疫组化方法检测胃癌组织中TACC1及TFF3的表达情况。采用x2检验、乘积极限法及单因素、多因素生存分析等统计学方法,分析胃癌组织中TACC1及TFF3的表达与患者临床病理参数及预后的关系。结果：TACC1和TFF3在进展期胃癌、有淋巴结转移及复发的胃癌组织中的表达率较高。此外,TFF3在较大肿瘤（肿瘤大小〉4 cm）的胃癌组织中的表达较高。单因素生存分析显示年龄、淋巴结转移、TACC1和TFF3表达与低生存期显著相关（P〈0.05）。多因素分析结果表明,TACC1和TFF3的表达是独立的预后预测因子。结论：TACC1和TFF3的表达可以作为胃癌的独立不良预后因子,而且在胃癌组织中TACC1和TFF3共同表达的患者生存时间更短。