不同微生物的α-乙酰乳酸脱羧酶的生理生化特性的研究*

分析测定了不同微生物的α－乙酰乳酸脱羧酶（ＡＬＤＣ）酶活力，结果表明不同来源的ＡＬＤＣ酶活力有较大差异，酶反应速度曲线存在明显差异；酶反应体系的ｐＨ对ＡＬＤＣ酶活力有明显的影响，如乳酸乳球菌的ＡＬＤＣ酶反应最适ｐＨ为６．６，而产气气杆菌的ＡＬＤＣ酶反应的最适ｐＨ为５．８；酶反应体系中加入不同浓度的亮氨酸、缬氨酸和异亮氨酸对不同来源的ＡＬＤＣ酶活性有较明显的影响。     

α-乙酰乳酸脱羧酶在大肠杆菌中的克隆表达

根据已知的α-乙酰乳酸脱羧酶（ALDC）的基因序列,通过PCR获得了枯草芽孢杆菌168的ALDC基因,将该基因克隆到克隆载体pUC18和表达载体pQE60中,构建了pUC18-ALDC和pQE60-ALDC,经DNA测序证明序列正确。重组大肠杆菌DH5a／pQE60-ALDC经IPTG诱导能够高表达ALDC。对该酶进行了活力测定,结果显示工程菌产酶活力为0．11U／mL。     

α-乙酸乳酸脱羧酶高产菌株的优化培养条件的研究

α-乙酸乳酸脱羧酶（α－acetolactatedecarboxylase,简称ALDC,EC,4．1．1．5）用于啤酒生产中,可将啤酒酵母在主发酵期间形成的α-乙酰乳酸直接转化为3-羟基丁醇,由此可大大缩短啤酒熟化期,从而提高设备利用率,增加产值．我们通过反复诱变已筛选到一株ALDC高产菌株（编号为ZIT-6-1－2）。为了进一步提高酶产量,对该菌株进行了发酵条件的优化组合研究．通过对发酵培养基组分、碳氮比、培养基起始pH值、通气量、培养温度、培养时间和微量元素等进行了一系列研究．结果表明上述诸因素对该ALDC高产菌株的酶产量均有不同程度的…     

嗜碱性短小芽孢杆菌碱性蛋白酶的研究III．酶的性质及应用

本文对嗜碱性短小芽孢杆菌(Alkaliphilic Bacillus pumilus)B45菌株产生的碱性蛋白酶性质进行了研究。该酶对酪蛋白水解的最适pH为10．0—10．5,在PH7-l0之间稳定,最适反应温度为45℃,稳定性较好。最适底物浓度为1％。四硬酸钠、氯化钙对酶有激活作用,三聚磷酸钠及碳酸钠在常温下对酶话力无影响,而在40℃时对活力略有抑制,加入0．2g／LCaCl2可以保护酶的活性。B 45蛋白酶对血、奶污布的去污效果明显,其去污力比一般洗衣粉高10-13倍。     

产胞外木聚糖酶放线菌的分离与筛选

报道了产胞外木聚糖酶放线菌的筛选方法。实验表明,PH6.0±0．5可用作一般放线菌木聚糖酶活力测定的酸碱度。分离并筛选了一株产胞外木聚糖酶活力高的链霉菌（Streptomycessp．Strz－6）,酶活力达9．77IU／ml,酶最适作用温度和酸碱度分别为55℃和pH6．5;Na 、K 、Ca2 等离子对木聚糖酶有激活作用,而Fe3 、Zn2 、Cu2 等离子明显抑制酶的活性。     

固定化酶及双酶共反应

 <正> 葡萄糖异构酶(GI)将糖化酶(GA)的水解淀粉产物葡萄糖转化为果糖。这二种酶是生产高果糖浆(HFCS)不可缺少的酶。我们根据离子型载体可以改变固定化酶最适PH的道理,将GA固定在磺酸型聚苯乙烯载体上,其最适pH由4.6移到了6.8。将GI固定在季胺多羟基聚苯乙烯载体上,其PH-活力曲线变宽,在pH7.0的活力由48％提高到66％。本文首次创建了使两种酶的最适PH相向移动的双酶共反应体系。其意义在于更加广泛地利用固定化多酶体系的动力学优势。     

固定化β淀粉酶的制备及其性质

对β-硫酸酯乙飘基苯胺(SESA)与环氧氯丙烷交联琼脂糖反应,制得对氨基苯砜乙基(ABSE)交联琼脂糖,经重氯化后与β-淀粉酶偶联制成固定化酶。研究了载体的苯胺基含量、PH)、巯基乙醇等因素对酶偶联反应的影响。尤其是巯基乙醇的存在,可使固定化酶活力明显提高。固定化酶活力可达120u／ml,活力回收为38％,相对活力为45％。固定化β-淀粉酶的最适pH和最遗温度与自然酶相似,以可溶性淀粉为底物时,固定化酶的米氏常数是自然酶(Km=0．0057(％))的8倍。将固定化酶装柱,连续水解可溶性淀粉,在45℃下连续操作;50天后,酶活力未见下降,在50℃下28天后,还保留活力50%左右。     

弗氏柠檬酸细菌完整细胞TNT降解酶的性质

弗氏柠檬酸细菌(Cizrobacter freundii)在好氧和兼性好氧条件下具有很强的降解2,4,6-三硝基甲苯(a-TNT)的能力。该菌在牛肉汁培养基中30℃摇床培养10小时,其完整细胞TNT降解酶活力最高。酶反应最适pH为7．2,最适温度为30℃,酶的pH和温度稳定性较佳,在PH 6.0--8.0时,30℃保温12小时,保留活力90％以上,30小时仍有76％剩余活力。作用于a—TNT的米氏常数(Kin)为5印^f,最大反应速度(Vmax)为0．22／zM／mg蛋白／,J、时。金属离子“g’、Hg冲和。U蚌对酶活力有强烈抑制作用,EDTA无明显抑制。底物类似物间一二硝基苯、2,4-二硝基苯酚和对硝基酚(0.3mM)对酶活力也有一定程度的抑制作用。     

Rhizopus sp.PW358菌脂肪酶固态发酵生产

研究了Rhizopus sp.PW358菌的固态生长和产脂肪酶条件。结果表明：黄豆饼粉为培养基的基本成分,用来生产脂肪酶。培养基中可加入淀粉和蛋白胨作为碳源和源,有利于脂肪酶的合成,培养基的含水量以及金属离子Ca^2 ,Mg^2 的浓度也影响Rhizopus sp.PW358菌和脂肪酶 产生。在优化条件下,12g豆粉中含1.0g淀粉及0.5g蛋白胨、15ml营养盐中Ca^2 ,Mg^2 离子浓度分别为8．0和4．0g/L,培养基含水量为55．6％,在接种后培养48h,酶活力可达最大值320IU／g干培养基。脂肪酶的基本性质研究表明,酶的最适反应温度和PH分别为35℃和7．0,酶的半失活温度为53．5℃,不同的PH环境中,30℃保温1h后酶在PH6．5－8．5范围内较为稳定。     

木霉菌株T6木聚糖酶固态发酵条件和酶学性质研究

研究了碳源和氮源、起始pH、接种量及温度等条件对一野生型木霉Trichodermasp.T6菌株固态发酵产木聚糖酶的影响。在28℃培养4d后,酶活力可达1918IU／g干培养物。酶的最适反应温度为50℃,最适反应pH4．5。不同温度保温1h后,测定酶的半失活温度为47．7℃,酶的pH稳定性也进行了研究。