TLR4在四氯化碳诱导的肝硬化大鼠骨髓血窦内皮细胞的表达

目的：检测Toll样受体4（TLR4）在四氯化碳诱导的肝硬化大鼠骨髓血窦内皮细胞的表达,为进一步研究肝硬化时骨髓损伤的发生机制提供实验依据。方法：选择Wistar大鼠给予腹腔注射CCl4,一周两次,建立肝硬化大鼠模型。分别于建模8周和12周检测大鼠血浆内毒素的水平,免疫组化检测大鼠骨髓血窦内皮细胞上TLR4的表达情况,RT-PCR测定骨髓组织中TLR4mRNA的表达,分析TLR4的表达与内毒素血症间的关系。结果：给予CCl4 8周和12周时,对照组大鼠血浆内毒素水平分别为（0．216±0．024）Eu／ml和（0．133±0．022）Eu／ml,模型组大鼠血浆内毒素水平分别为（0．626±0．021）Eu／ml和（0．725±0．031）Eu／ml,分别较对照组显著升高,差异均有统计学意义（P〈0．001）;骨髓血窦内皮细胞TLR4蛋白表达及骨髓组织中TLR4mRNA的表达均显著高于对照组,差异均有统计学意义（P〈0．05）。大鼠骨髓TLR4蛋白和mRNA表达与血浆内毒素水平均呈显著正相关（r=0．841,0．803,P均〈0．001）。结论：CCl4诱导的肝硬化大鼠骨髓血窦内皮细胞TLR4表达升高,并伴随大鼠内毒素血症的发生,提示肝硬化时肠源性内毒素血症可能参与了骨髓的造血功能的损害和病变。     

核因子-κB在脂多糖诱导大鼠心肌血红素加氧酶-1基因表达中的作用

目的：观察核因子-κB（NF-κB）在脂多糖（LPS）诱导大鼠心肌血红素加氧酶-1（HO-1）表达中的作用,探讨其对内毒素休克（ES）的影响。方法：用生理多导仪监测大鼠静脉注射LPS（8mg／Kg）后12h平均动脉压（MAP）变化：用免疫组化方法检测心肌组织NF-κBp65和HO-1蛋白表达的变化;用逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）检测心肌组织HO-1基因表达的变化。结果：①LPS组MAP较对照组快速持续降低（P〈0．01）：②LPS可诱导大鼠心肌间质血管内皮细胞和心肌细胞NF-κB阳性表达增强,1／2h和2h表达明显升高,6h和12h逐渐降低;③LPS可诱导大鼠心肌HO-1基因表达上调,2h开始增加,6h达到高峰,12h表达下调;LPS组大鼠心肌间质血管内皮细胞和心肌细胞HO-1蛋白表达在6h明显增强,12h表达减弱。④应用PDTC可明显减轻ES大鼠心肌损伤,并抑制心肌HO-1蛋白和基因表达。结论：LPS活化的心肌NF-κB参与LPS诱导心肌HO-1蛋白和基因高表达的信号转导,可能是导致ES顽固性低血压的机制之一。     

急性肺损伤大鼠肺组织TOLL样受体4及CD14mRNA的表达

目的 探讨内毒素致急性肺损伤大鼠肺组织TOLL样受体4及CD14 mRNA表达的变化.方法 24只雄性Wistar大鼠随机分为2组:对照组、LPS模型组,每组再分为4 h和8 h两个亚组.尾静脉注射脂多糖(LPS)(10 mg/kg)建立大鼠急性肺损伤模型.检测大鼠动脉血气、肺体指数,实时荧光定量PCR测定肺组织TOLL样受体4及CD14 mRNA的表达,并观察肺组织病理变化.结果 与对照组相比,模型组4 h和8 h时大鼠肺组织中的TLR4及CD14 mRNA表达均显著增高(P＜0.05或P＜0.01).病理学观察显示,模型组大鼠肺组织出现出血及坏死.结论 内毒素致急性肺损伤的发病机制可能与TLR4及CD14 mRNA的表达升高有关.     

TLR4 在四氯化碳诱导的肝硬化大鼠骨髓血窦内皮细胞的表达

目的：检测Toll样受体4(TLR4)在四氯化碳诱导的肝硬化大鼠骨髓血窦内皮细胞的表达,为进一步研究肝硬化时骨髓损伤 的发生机制提供实验依据。方法：选择Wistar大鼠给予腹腔注射CCl4,一周两次,建立肝硬化大鼠模型。分别于建模8 周和12 周 检测大鼠血浆内毒素的水平,免疫组化检测大鼠骨髓血窦内皮细胞上TLR4 的表达情况,RT-PCR 测定骨髓组织中TLR4 mRNA 的表达,分析TLR4 的表达与内毒素血症间的关系。结果：给予CCl4 8 周和12 周时,对照组大鼠血浆内毒素水平分别为(0.216± 0.024) Eu/ml 和(0.133± 0.022) Eu/ml,模型组大鼠血浆内毒素水平分别为(0.626± 0.021) Eu/ml 和(0.725± 0.031) Eu/ml,分别较对 照组显著升高,差异均有统计学意义(P<0.001);骨髓血窦内皮细胞TLR4蛋白表达及骨髓组织中TLR4 mRNA的表达均显著高于 对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。大鼠骨髓TLR4 蛋白和mRNA表达与血浆内毒素水平均呈显著正相关（r=0.841,0.803,P 均<0.001）。结论：CCl4 诱导的肝硬化大鼠骨髓血窦内皮细胞TLR4 表达升高,并伴随大鼠内毒素血症的发生,提示肝硬化时肠源 性内毒素血症可能参与了骨髓的造血功能的损害和病变。     

Toll样受体2及Toll样受体4在大鼠实验性变应性鼻炎中的表达

目的研究Toll样受体2（Toll-like receptor2,TLR2）及Toll样受体4（TLR4）在实验性变应性鼻炎大鼠鼻黏膜中的表达及脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）对其表达的影响。方法SD大鼠48只随机分为正常对照组（A组）;变应性鼻炎组（B组）：经腹腔注射及鼻腔滴入卵清白蛋白（Ovalbumin,OVA）建立变应性鼻炎（Allergic rhinitis,AR）模型;变应性鼻炎＋LPS刺激组（C组）：大鼠激发成变应性鼻炎模型后再以LPS滴鼻。用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测鼻黏膜中TLR2 mRNA、TLR4 mRNA的表达。结果B、C组大鼠均成功激发为AR动物模型;各组鼻黏膜中均有TLR2 mRNA、TLR4 mRNA表达;各组间TLR2 mRNA的表达差异无统计学意义（P〉0．05）。B、C组TLR4 mRNA的表达较A组高（P〈0．01）;C组TLR4 mRNA表达较B组增高（P〈0．01）。结论AR大鼠有TLLR4的表达增高;LPS刺激后TLR4表达进一步增高,说明TLR4可能参与AR的发病。TLR2在AR大鼠中的表达未见增高;LPS刺激后。TLR2表达未见进一步增高,TLR2与变应性鼻炎的关系有待进一步研究。     

急性出血坏死性胰腺炎肝损伤中TLR2, 4mRNA和蛋白的表达

目的:观察急性出血坏死性胰腺炎肝损伤中TLR-2、TLR4的表达水平,分析TLR2和TLR4在AHNP肝损伤中的表达意义。方法:48只成年Wistar大鼠作为实验动物,随机分为对照组和造模组各24只,造模组利用牛磺胆酸钠建立AHNP模型,在造模后3 h、12 h以及24 h时,每组分别各取8只大鼠,应用RT-PCR法检测TLR2、TLR4mRNA表达水平,应用Western blot检测肝脏组织中TLR2、TLR4蛋白表达水平。结果:造模后,造模组TLR2mRNA、TLR4mRNA、TLR2蛋白、TLR4蛋白显著升高,且在造模后12 h出现峰值,与同时段对照组相比差异显著(P0.01)。结论:急性出血坏死性胰腺炎肝损伤组织中TLR2、TLR4mRNA和蛋白表达水平异常升高,TLR2、TLR4可能参与了急性出血坏死性胰腺炎肝损伤发生发展过程。     

缺血后处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤时TLR4信号通路表达的影响

目的：观察缺血后处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后TLR4通路表达的影响。方法：成年健康雄性SD大鼠110只,随机分为假手术组（sham组）（n=10）、缺血再灌注组（I／R组）和后处理组（IP组）,后两组又依据缺血再灌注6h、12h、24h、48h、72h不同的时间点再分五个亚组。对各组行神经行为学评分,脑组织梗死体积测量,TUNEL技术检测神经细胞凋亡的情况,免疫组织化学技术观察各组大鼠脑组织TLR4、NF—KB和TNF—a蛋白的表达,原位杂交方法检测各组大鼠脑组织TLR4mRNA、NF-KBmRNA的表达。结果：缺血后处理可下调TLR4、NF-KB、TNF-a细胞炎性因子的表达,抑制细胞凋亡、减少脑梗死体积,改善神经行为。结论：后处理可通过抑制TLR4信号通路表达,减少脑梗死体积,改善神经功能。     

Toll样受体2和4在大鼠心肌缺血/再灌注损伤模型中的动态表达

目的:通过观察大鼠心肌组织缺血/再灌注(I/R)急性期Toll样受体2(TLR2)和4(TLR4)mRNA及蛋白质的表达,探讨TLR2和TLR4在心肌缺血/再灌注损伤中的作用。方法:雄性Wistar大鼠随机分为缺血/再灌注组(I/R组)和假手术组(sham组),建立大鼠心肌缺血/再灌注模型,按不同的再灌注时间(1、2、4、6、12、24 h和7 d)处死动物(n=42)。光镜下观察心肌组织形态改变。实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)定量心肌TLR2及TLR4mRNA水平。逆转录聚合酶链式反应(r-t PCR)测定心肌白介素-6(IL-6)和单核细胞趋化因子-1(MCP-1)的mRNA水平。结果:①随着再灌注时间的延长,心肌梗死面积逐渐增大,在再灌注4 h时达最大值,再灌注4 h、6 h、12 h、24 h,再灌注7 d已发生心室重塑。②在再灌注早期,sham组心肌组织形态未见明显改变,I/R组心肌结构有不同程度损伤,在复灌7 d时可见心室重塑,左室壁厚度明显变薄,大量成纤维细胞替代原有的心肌细胞。③sham组和I/R组TLR2、TLR4、MCP-1和IL-6mRNA水平均出现不同程度上调,其中TLR2和TLR4均在再灌注4 h时达高峰,随后逐渐下降,至再灌注7 d时TLR4水平再次升高。IL-6在6 h达到高峰后开始下降,到24 h时基本降至sham组水平,再灌注7 d时再次有升高趋势。MCP-1在缺血/再灌注后一直保持与sham组相当水平,在再灌注7 d时才有明显升高。结论:在心肌缺血/再灌注早期,心肌组织中TLR2和TLR4基因水平迅速上调,并促进下游炎症因子的产生造成心肌早期的损伤。在再灌注后期,TLR2和TLR4的再次升高使得炎症因子的表达再一次增加,从而影响心肌重塑,损伤心肌结构及功能。     

益生菌对急性肝内胆汁淤积大鼠肝组织NF-κB和MCP-1的影响

目的通过研究益生菌制剂对异硫氰酸萘酯（ANIT））所致的急性肝内胆汁淤积大鼠肝组织NF-κB和MCP-1表达的影响,进一步探讨益生菌防治急性肝内胆汁淤积肝损伤的作用机制。方法72只幼年雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠分为正常对照组（8只）、中毒组（32只）和干预组（32只）。中毒组及干预组幼鼠,按100mg／kg一次性灌服ANIT诱导急性肝内胆汁淤积病变,干预组于ANIT灌胃前3d开始灌服培菲康[4．2×10^8个活菌／（kg·d）]。观察各组在灌服ANIT后24h、48h、72h和96h血浆总胆红素（TB）、丙氨酸转氨酶（ALT）的浓度,同时用RT-PCR测定肝组织中MCP-1mRNA的表达,用免疫组化方法测定肝组织中NF-κB、MCP-1蛋白的表达,并在光学显微镜下观察肝脏的形态学改变。结果干预组大鼠血清ALT、TB在灌服ANIT后24h、48h、72h和96h各时间点升高的峰值较中毒组明显减低,且其肝组织MCP-1mRNA和蛋白表达水平以及NF-κB蛋白表达水平较中毒组低。结论益生菌能够改善急性肝内胆汁淤积肝脏功能,降低NF-κB、MCP-1的基因表达,对急性肝内胆汁淤积性肝损伤起到一定的防治作用。     

TLR4在急性肝衰竭模型大鼠中的动态变化及意义

目的 探讨TLR4在D-Gal/LPS诱导的大鼠急性肝衰竭中的表达变化及其作用。方法 65只SD雄性大鼠随机分为正常对照组（n=5）、D-Gal/LPS模型组（n=25）、PDTC干预组（n=25）,于不同时间点检测肝功能,免疫组化观察肝组织TLR4的表达,TUNEL法观察肝脏细胞凋亡。结果 模型组大鼠4h开始ALT、AST明显升高,8h达峰值,4-24h ALT、AST明显高于正常对照组（P〈0.05）。模型组各时间点TLR4表达明显高于正常对照组（P〈0.05）。模型组凋亡的肝脏细胞数随时间的延长逐渐增多,均高于正常对照组（P〈0.05）。PDTC干预后ALT、AST水平,TLR4的表达及凋亡的肝脏细胞数低于模型组（P〈0.05）。结论 急性肝衰竭模型鼠TLR4表达增强,PDTC干预可下调其表达,提示TLR4在急性肝衰竭的发生发展中可能具有一定作用。