Caspase-3在肝癌组织中的表达及其与HBV感染的关系

目的探讨天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3（Cysteinyl aspartate-specific proteinase-3,Caspase-3）和生存素（survivin）在原发性肝细胞肝癌（HCC）组织中的表达及其与乙肝病毒（HBV）感染的关系。方法用免疫组化SP法检测21例肝癌组织和10例癌旁组织Caspase-3和survivin的表达．并分析两者表达与HBV感染的关系。结果在肝癌和癌旁组织Caspase-3表达的阳性率分别为33．33％和66．67％（P〈0．05）．survivin在肝癌和癌旁组织表达的阳性率分别为85．71％和0（P〈0．01）。Caspase-3在HBsAg阳性和阴性组表达的阳性率分别为27．78％和66．67％（P〈0．05）;survivin在HBsAg阳性和阴性表达的阳性率分别为88．89％和100％（P〉0．05）。Caspase-3在高、中、低分化组表达的阳性率分别为66．67％、31．25％、33．33％．高分化组与中、低分化组比较差异有显著性（P〈O．05）;survivin在高、中、低分化组表达的阳性率分别为50％、87．5％、100％,高分化组与中、低分化组比较差异有显著性（P〈0．05）。Caspase-3和survivin在HCC的表达呈显著负相关。结论HBV感染能使肝癌组织Caspase-3的表达降低,与survivin共同抑制肝细胞的凋亡,三者在HCC的发生及发展过程中起一定作用。     

Caspase-12抑制剂对百草枯中毒大鼠肝损伤的保护作用

目的:观察caspase-12抑制剂Z-ATAD-FMK对百草枯染毒大鼠肝脏caspase-12蛋白表达和肝细胞凋亡的影响,以及通过血清SOD和MDA的检测,探讨其对百草枯中毒大鼠肝脏保护作用和对机体氧化应激反应的作用。方法:50只健康Wistar大鼠随机分三组:A组为正常对照组;B组为模型组(PQ染毒);C组抑制剂组(PQ/Z-ATAD-FMK),于3d、7d处死B组和C组各10只大鼠。取血检测ALT、TBIL、SOD和MDA;HE染色观察肝组织病理学变化;免疫组化法检测caspase-12蛋白;二苯胺法检测细胞凋亡率。SPSS18.0统计分析。结果:Z-ATAD-FMK抑制剂组ALT、TBIL、MDA值低于模型组(P0.05),SOD高于模型组(P0.05);caspase-12蛋白表达和细胞凋亡率亦低于模型组(P0.05);HE染色显示凋亡和坏死程度也较模型组轻。结论:Caspase-12抑制剂Z-ATAD-FMK能减少百草枯中毒大鼠肝脏caspase-12蛋白表达和肝细胞凋亡率,减轻肝细胞坏死,对肝脏具有保护作用,同时可以抑制百草枯中毒大鼠的氧化应激反应。     

藏红花对肝纤维化大鼠肝脏组织中Caspase-3，Bcl-2 表达的影响

目的:研究藏红花(Saffron)对肝纤维化大鼠肝组织中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)表达的影响。方法:45只雄性SD大鼠随机均分为3组:正常组、模型组、藏红花组,除正常组外,另外两组给予40%四氯化碳橄榄油溶液腹腔注射制备肝纤维化大鼠模型,在造模的同时,藏红花组给予藏红花溶液5 m L·kg~(-1)·d~(-1)灌胃。8周后处死大鼠,留取肝脏组织,通过Masson染色观察大鼠肝纤维化的形成,免疫组化方法检测肝组织中Caspase-3及Bcl-2蛋白表达。结果:模型组大鼠肝纤维化程度最重,藏红花组较模型组纤维化程度轻,正常组大鼠肝脏无纤维化。与模型组比,藏红花组Caspase-3在肝实质内呈弱阳性表达,而纤维间隔内表达增加;Bcl-2的表达明显减少(P0.05),正常组Caspase-3及Bcl-2几乎无表达。结论:藏红花具有抗肝纤维化作用,其机制可能与调节Caspase-3,Bcl-2的表达有关。     

环境高温促进猪睾丸Apaf-1和Caspase-9的表达

高温热应激条件下,凋亡蛋白表达量升高,生殖细胞凋亡增加。凋亡蛋白酶活化因子1（apoptosis protease activating factor 1,Apaf-1）和凋亡蛋白酶活化起始者含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9,(cysteine aspartic acid specific protease 9, Caspase-9）是细胞凋亡内源途径中的重要调节蛋白,热应激条件下猪睾丸Apaf-1和Caspase 9的表达未见报道。本研究发现,夏季畜舍高温使Apaf-1和Caspase-9表达量升高。qRT-PCR和Western印迹结果显示,与对照组（正常舍温20℃）相比,短时热应激组（40～42℃,1 h/d, 7 d）和长时热应激组（40～42℃,1 h/d, 42 d）,Apaf-1和Caspase-9 mRNA和蛋白的相对表达量均显著升高。免疫组织化学研究发现,Apaf-1在猪睾丸组织中免疫反应阳性物定位于间质细胞、支持细胞和各个发育阶段生精细胞。热应激处理导致精母细胞和精子细胞Apaf-1表达量升高。在各实验猪睾丸组织中,Caspase-9定位于间质细胞、支持细胞和各个发育阶段生精细胞的胞质中。与对照组相比,热应激处理导致减数分裂以后的生精细胞和支持细胞Caspase-9表达量升高。上述结果表明,高温热应激促进Apaf-1和Caspase-9的表达,提示Apaf-1和Caspase-9表达的变化可能与猪舍高温导致的猪精液品质下降存在关联。     

退变腰椎间盘组织细胞凋亡相关蛋白酶Caspase-10 的表达研究

目的:探讨凋亡相关蛋白酶Caspase-10在腰椎间盘退变中的表达。方法:45例腰椎间盘突出症病人按年龄分为青年、中年和老年患者组,5例青少年型特发性脊柱侧弯病人作为对照组。患者组标本均为术中所取出L4/5新鲜椎间盘髓核组织,对照组标本均为术中所取出L2/3新鲜椎间盘髓核组织。采用TUNEL法和免疫组织化学S-P法,分别检测腰椎间盘髓核中的凋亡阳性细胞率及Caspase-10的表达情况。结果:对照组髓核内TUNEL阳性细胞率为(17.80±0.62)%。青年、中年、老年患者组髓核内TUNEL阳性细胞率分别为(45.71±2.05)%、(53.65±2.93)%和(68.39±4.33)%。四个组两两之间差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组髓核内Caspase-10染色阳性细胞率为(32.60士1.64)%。青年、中年、老年患者组髓核内Caspase-10染色阳性细胞率分别为(50.67士2.89)%、(63.12士4.61)%和(75.28士4.26)%。四个组两两之间差异均有统计学意义(P<0.05)。髓核内Caspase-10染色阳性细胞率与TUNEL阳性细胞率和年龄之间均呈正相关(P<0.01)。结论:退行性变腰椎间盘组织中凋亡细胞率以及Caspase-10的表达均高于正常椎间盘组织,年龄是细胞凋亡的重要影响因素,细胞凋亡以及Caspase-10的表达上调可能在腰椎间盘退行性变的发生和发展中发挥重要作用。     

Caspase-3：治疗神经退行性疾病的新靶点

Caspase-3是caspases家族（一类天冬氨酸特异性酶切半胱氨酸蛋白酶）中的成员,是哺乳动物细胞凋亡的关键蛋白酶.随着研究的深入,发现caspase-3在神经退行性疾病的病理过程中起着很重要的角色.Caspase-3在这些疾病的病理过程中,不仅仅是起着凋亡的效应器作用,还能直接与老年性痴呆症、帕金森氏症、亨廷顿舞蹈病、脊椎小脑失调等疾病的致病蛋白质分子相互作用,参与致病机制.因此,caspase-3是治疗神经退行性疾病的新靶点,寻找caspase-3高效高选择性的抑制剂将为治疗神经退行性疾病提供新的途径.     

海藻色素糖蛋白对肝癌细胞Caspase-3 和Bax 蛋白表达的影响

目的:研究麒麟菜海藻色素糖蛋白(SPG)对肝癌细胞Caspase-3和Bax蛋白表达的影响。方法:将50只皮下接种H22肝癌细胞株的小鼠随机分为5组,每组10只。高、中、低剂量组分别每天经口灌胃给予100、50、10mg/kg的SPG,肿瘤对照组灌胃生理盐水,连续10d。环磷酰胺组隔天腹腔注射环磷酰胺20mg/kg.bw。取肝癌组织用MTT法测定各组肝癌细胞增殖活性,免疫组化法检测各组肝癌组织Caspase-3和Bax蛋白表达水平。结果:高剂量组Caspase-3和Bax蛋白表达率分别为40.20%和38.10%,而肿瘤对照组分别为5.00%和4.68%,差异均有显著性(P<0.05)。高剂量SPG组和肿瘤对照组的肝癌细胞增殖活性分别为0.711±0.028和1.135±0.032,差别有显著性(P<0.05)。结论:SPG可促进肝癌细胞Caspase-3和Bax蛋白表达,诱发肝癌细胞凋亡。     

姜黄素预处理对沙漠干热环境中暑大鼠心肌细胞凋亡和Caspase-3活性的影响

目的:研究姜黄素预处理对沙漠干热环境不同阶段中暑大鼠心肌损伤、细胞凋亡及半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性的影响。方法:选择雄性健康SD大鼠80只,将其随机分为2组(n=40):盐水对照组以及姜黄素预处理组。每组再分为4个亚组(n=10):干热0 min组(即常温组),干热50 min组(轻度中暑组),干热100 min组(中度中暑组),干热150 min组(重度中暑组)。盐水组大鼠给予0.9%生理盐水灌胃,姜黄素组大鼠给予剂量为100 mg/kg姜黄素灌胃,各组大鼠均连续灌胃7天。0 min组置于常温环境中,其余组放置在西北特殊环境人工实验舱内,设置干热环境:温度(41±0.5)℃,湿度(10±1)%,并在相应时间点麻醉大鼠,取血液以及心脏组织。检测血液心肌酶谱磷酸肌酸激酶(CK)、磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB)及乳酸脱氢酶(LDH)水平,用TUNEL法检测心肌细胞凋亡率,Caspase-3比色试剂盒检测Caspase-3活性。结果:随着干热环境时间的延长,大鼠血清CK、CK-MB、LDH水平、心肌细胞凋亡率及心肌组织Caspase-3活性均逐渐升高,而姜黄素预处理组在干热环境放置50 min、100 min和150 min时的血清CK、CK-MB、LDH水平、心肌细胞凋亡率及心肌组织Caspase-3活性均明显低于对照组(P0.01)。结论:姜黄素预处理可通过减少心肌细胞凋亡、增加Caspase-3活性,保护沙漠干热环境中暑大鼠心肌损伤。     

高浓度藏红花溶液导致大鼠肝损伤中caspase-3、bcl-2、NF-kB表达及意义

目的:通过研究高浓度藏红花溶液引起肝损伤大鼠肝功能、肝组织病理及肝组织中半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3),bcl-2,NF-kB表达,探讨半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3),bcl-2,NF-kB在高浓度藏红花溶液导致的肝损伤中的作用及机制。方法:清洁级雄性大鼠45只,随机分为3组,每组15只,分别标记为A组(藏红花组);B组(酒精组,阳性对照);C组(生理盐水组,阴性对照)。分别给予藏红花高浓度水煎浓缩溶液、60%酒精、生理盐水灌胃共6周。第6周末,心腔取血测定ALT、AST。肝组织HE染色,免疫组化方法检测细胞凋亡相关蛋白Caspase-3及调控基因Bcl-2、NF-kB的表达。结果:藏红花组大鼠肝功能ALT、AST升高,肝组织正常结构消失,肝细胞肿胀坏死,部分碎裂,凋亡蛋白caspase-3,bcl-2,NF-kB表达增加(69.6%±16.7%vs 5.3%±1.6%;55.4%±14.5%vs4.5%±2.8%;44.1%±12.6%vs2.5%±1.9%;P0.05)。结论:高浓度藏红花溶液可以引起大鼠肝损伤,肝组织caspase-3,bcl-2,NF-kB表达增加,细胞凋亡机制参与了藏红花肝损伤过程。     

苦参碱对大鼠宫颈癌组织中Survivin、Caspase-3和Caspase-7表达的影响

目的:探讨苦参碱对宫颈癌模型大鼠组织中Survivin、Caspase-3和Caspase-7的表达影响。方法:选取Wistar雌性大鼠34只,宫颈癌造模成功的19只分成阴性对照组(A组)和苦参碱组(B组);未造模的10只大鼠作为正常对照组(C组)。采用免疫印迹法检测三组大鼠宫颈癌组织中Survivin、Caspase-3和Caspase-7表达水平。结果:1A组大鼠组织中Survivin表达明显高于B、C组大鼠组织中Survivin水平,差异有统计学意义(P0.05);2A组大鼠组织中Caspase-3和Caspase-7的表达明显低于B、C组,差异有统计学意义(P0.05);3B组大鼠组织中Survivin、Caspase-3和Caspase-7的表达水平与C组比较存在差异,差异有统计学意义(P0.05)。结论:苦参碱能够明显下调宫颈癌大鼠凋亡抑制因子Survivin水平,改善凋亡因子Caspase-3和Caspase-7的表达。     

腺性膀胱炎及膀胱癌中livin 和caspase-9 的表达

目的:研究在腺行膀胱炎(cystitis glandularis,CG)以及膀胱癌(bladder carcinoma,BC)中livin和caspase-9的表达,探讨腺性膀胱炎与膀胱癌可能存在的关系。方法:收集哈尔滨医科大学附属第三医院2014年1月~2014年10月住院患者60例组织石蜡标本,应用SP(streptavidin-perosidase)法检测livin和caspase-9在腺性膀胱炎组织(30例)、膀胱癌组织(30例)和正常组织(30例)中的表达。结果:正常膀胱、CG和BC组织中livin阳性表达率分别为0/30,9/30(30%)和14/30(46.67%),差异有统计学意义(P0.05);caspase-9在正常膀胱、CG和BC组织中的阳性表达率分别20/30(66.67%),15/30(50%),3/30(10%),差异有统计学意义(P0.05)。结论:腺性膀胱炎可能是正常膀胱组织向膀胱腺癌发展的一个中间阶段,在CG向BC发展过程中livin和caspase-9的异常表达具有普遍性,临床上应积极治疗并密切随访,并可将livin和caspase-9作为诊断早期膀胱癌的检测指标。     

RNA干扰肝细胞肝癌中PECAM-1的表达对肿瘤细胞侵袭及增殖的影响

目的:探讨PECAM-1在肝细胞肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达及意义。方法:选择2013年5月-2015年6月在我院接受治疗的HCC患者100例,收集肝癌患者HCC组织及癌旁组织,另选取100例正常肝脏组织作为对照组。应用免疫组织化学法检测PECAM-1在肝癌组织、癌旁组织以及正常肝脏组织中的阳性表达。利用小分子干扰RNA技术(si RNA)构建低表达的PECAM-1,并转染至肝癌细胞中抑制PECAM-1的表达。应用Transwell小室法检测肝癌细胞的侵袭能力,CCK-8法检测肝癌细胞的增殖能力。结果:PECAM-1在肝癌组织、癌旁组织及正常肝脏组织中呈不同程度阳性表达(P0.05);PECAM-1在肝癌组织及癌旁组织中的表达显著高于正常肝脏组织,差异具有统计学意义(P0.05);PECAM-1在肝癌组织中的表达显著高于癌旁组织,差异具有统计学意义(P0.05);转染si RNA PECAM-1后,肝癌细胞中PECAM-1 m RNA的表达水平明显下降,PECAM-1蛋白表达也明显降低,差异具有统计学意义(P0.05);转染si RNA PECAM-1后,肝癌细胞侵袭及增殖能力明显降低,差异具有统计学意义(P0.001)。结论:PECAM-1在肝癌患者血清中高表达,PECAM-1 si RNA能够抑制肝癌细胞的侵袭及增殖能力,提示PECAM-1可作为预测肝癌发生及发展的临床指标。     

Caspase-9 plays a marginal role in serum starvation-induced apoptosis

Serum withdrawal represents a potent trigger to induce caspase-dependent apoptosis in a series of cell culture models. In rat 423-cells, caspase-8 and caspase-3 were apparently sufficient to initiate and proceed apoptosis without involving the intrinsic amplification loop via caspase-9. To assess the reasons for this inactivity of an otherwise crucial initiator caspase, we examined the ability for apoptosome assembly in 423-cells. Caspase-9 and Apaf-1 were expressed and cytochrome c released from mitochondria upon serum withdrawal. Although functional apoptosomes were assembled successfully in vitro, caspase-9 processing was found essentially refrained during apoptosis in 423-cells. Cell fractionation experiments revealed that sequestration of caspase-9 to cytoskeletal structures in 423-cells contributed to the observed impairment of apoptosome formation. Altogether, these findings provide evidence that serum starvation-induced apoptosis may occur independently of the intrinsic pathway and that caspase-9 sequestration potentially represents a novel biological antiapoptotic strategy.     

Mechanism of Siglec-8-induced human eosinophil apoptosis: role of caspases and mitochondrial injury

Sialic acid binding immunoglobulin like lectin (Siglec)-8 crosslinking with specific antibodies causes human eosinophil apoptosis. Mechanisms by which Siglec-8 crosslinking induces apoptosis are not known. Peripheral blood eosinophils were examined for caspase, mitochondria and reactive oxygen species (ROS) involvement after incubating the cells with anti-Siglec-8 crosslinking Abs or control Abs, in the presence or absence of selective inhibitors. Siglec-8 crosslinking induced rapid cleavage of caspase-3, caspase-8, and caspase-9 in eosinophils. Selective caspase-8 and/or caspase-9 inhibitors inhibited this apoptosis. Siglec-8 crosslinking on eosinophils increased dissipation of mitochondrial membrane potential upstream of caspase activation. Rotenone and antimycin, inhibitors of mitochondrial respiratory chain components, completely inhibited apoptosis. Additional experiments with an inhibitor of ROS, diphenyleneiodonium, demonstrated that ROS was also essential for Siglec-8-mediated apoptosis and preceded Siglec-8-mediated mitochondrial dissipation. These experiments show that Siglec-8-induced apoptosis occurs through the sequential production of ROS, followed by induction of mitochondrial injury and caspase cleavage.     

CD90在肝细胞肝癌组织中的表达及其与肝癌临床病理特征的关系

目的:探讨CD90在肝细胞肝癌(HCC)患者肿瘤组织中的表达及其与临床病理参数的关系,为HCC的临床治疗提供参考。方法:选择2014年3月-2015年3月在我院接受治疗的HCC患者80例,收集患者肿瘤组织及癌旁组织,另选择同期就诊的80例正常肝脏组织作为对照组。观察并比较CD90在肝癌组织、癌旁组织及正常肝脏组织中的表达情况。结果:CD90在肝癌组织、癌旁组织及正常肝脏组织中呈不同程度阳性表达(P0.05)。CD90在肝癌组织和癌旁组织中的表达显著高于正常肝脏组织,差异具有统计学意义(P0.05)。CD90在肝癌组织中的表达显著高于癌旁组织,差异具有统计学意义(P0.05)。CD90在HCC组织中的表达与肿瘤大小、肝内转移、TMN分期和病理分级有关(P0.05)。结论:CD90在肝癌组织中呈高表达,其表达水平与肝癌临床病理参数有关,可以作为HCC诊断、治疗及预后评估的参考指标。     

乳酸堆积和二氯乙酸钠对肝癌细胞凋亡及bax、bcl-2 表达 和caspase-3 活性的影响

目的：探讨乳酸堆积和二氯乙酸钠(DCA)对肝癌细胞(HepG2)凋亡和bax、bcl-2 表达及caspase-3 活性的影响。方法：通过体 外培养HepG2,建立稳定的体外培养模型,配制成终浓度分别为0 mmol/L、1.0 mmol/L、2.0 mmol/L、4.0 mmol/L、8.0 mmol/L的乳 酸培养液以及在不同浓度乳酸组中加入终浓度为10-3mmol/L DCA 培养液与HepG2共同培养,其中以0 mmol/L 乳酸组为对照 组。采用MTT法检测乳酸对HepG2 的抑制率,流式细胞仪检测乳酸和DCA 对HepG2的凋亡百分率,用Real-time PCR法测定 bax 及bcl-2 mRNA的表达,用免疫荧光法检测caspase-3 的活性。结果：乳酸对HepG2 的IC50值为13.6 mol/L,与对照组比较,随 着乳酸浓度的增加,HepG2 凋亡率增加,bax mRNA 表达升高,bcl-2 mRNA 的表达降低,caspase-3活性增加,其中1.0 mmol/L 乳 酸组与对照组比较(P>0.05),2.0 mmol/L,4.0 mmol/L 和8.0 mmol/L乳酸组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。加入DCA 后,HepG2 凋亡减少,2.0 mmol/L 乳酸+DCA 组、4.0 mmol/L乳酸+DCA 组、8.0 mmol/L乳酸+DCA 组与同浓度的乳酸组比较, bax mRNA 表达减少（P<0.05）,bcl-2 mRNA 表达增加（P<0.05）,caspase-3 活性减低（P<0.05）。结论：乳酸可诱导HepG2凋亡,且随 着乳酸浓度的增高,HepG2 的凋亡率增加,其机制可能是通过对bcl-2 及bax mRNA 表达的改变以及激活caspase-3 活性而实现, DCA可以降低HepG2 凋亡,对乳酸堆积造成的HepG2凋亡有抑制作用。     

Mutational analysis on the function of the SWAP-70 PH domain

Hepatocellular carcinoma (HCC), the major manifestation of primary liver cancer, is one of the most frequent and malignant cancers worldwide, especially in Taiwan. Estrogen receptors (ERs) have been reported to play either a proliferation- or apoptosis-enhancing role in the differentiation of cancers, including HCC. In a previous experiment, we showed that transient overexpressed estrogen receptor-α induced early stage HCC cell line Hep 3B cell apoptosis by increasing the hTNF-α gene expression in a ligand-independent manner. To further clarify if the apoptotic effect occurs in poorly differentiated HCC cell line, HA22T, and elucidate the roles of ERs and TNF-α, DNA fragmentation and caspase activity were measured in late stage HCC cell line, HA22T, by measuring the expression of hER-α and hER-β using a Tetracycline-induciable system (Tet-on). Increased DNA fragmentation and caspase-3 activity were found in hERβ-overexpressed HA22T cells treated with estrogen (10⁻⁸ M) but not in hERα-overexpressed HA22T cells. Using RT-PCR/PCR and western blotting in HA22T cells, overexpressed hER-β was also found to increase the expression of hTNF-α mRNA and induce hTNF-α-dependent luciferase activity in a ligand-dependent manner. Additionally, LPS treatment and hER-β overexpression both enhance caspase-8 activities, whereas neither hER-β nor E₂ treatment affected caspase-9 activities. In addition, the overexpressed hER-β plus E₂ enhanced DNA fragmentation and caspase-8 activities were only partially reduced by anti-hTNF-α (0.1ng/ml), which was possibly due to the involvement of P53 and TGF-β. Taken together, our data indicates that overexpressed hER-β but not hER-α may induce caspase-8-mediated apoptosis by increasing the hTNF-α gene expression in a ligand-dependent manner in poorly differentiated HA22T cells. (Mol Cell Biochem xxx: 1–9, 2005)Shares equally contribution Contract grant sponsor: National Science Council; Contract grant number: NSC 91-2314-B-075A-006, NSC 92-2314-B-075A-014.