RNA病毒的反向遗传学

反向遗传操作作为一种新兴技术在RNA病毒的研究中发挥着重要作用。本文介绍了RNA病毒反向遗传学的研究方法以及RNA病毒反向遗传技术的最新研究进展。     

冠状病毒反向遗传技术的研究进展和应用

冠状病毒（Coronavirus,CoV）在分类上属于尼多病毒目、冠状病毒科、冠状病毒属,其基因组长度约为25 000 nt～30 000 nt。反向遗传技术可以针对RNA病毒的基因组进行突变,是研究病毒蛋白功能的有力工具,也是对毒力基因进行突变,构建减毒疫苗株的新型方法。冠状病毒反向遗传技术的建立和应用,推动了基因功能的研究和重组病毒疫苗的研发。本综述将介绍三种常见的冠状病毒反向遗传克隆技术,分别是基于痘病毒载体、基于细菌人工染色体（Bacterial artificial chromosome,BAC）载体和基于体外连接的反向遗传技术。传染性支气管炎病毒（Infectious bronchitis virus,IBV）是成功建立反向遗传系统的冠状病毒之一,本文对反向遗传技术在IBV中的研究和应用进行了介绍和讨论。     

弹状病毒反向遗传操作系统研究进展

弹状病毒是一类重要的共患病病原,可引起人、动物、植物等多种生物的严重疫病。该病毒属不分节段的负链RNA病毒,其基因组相对简单。近年来,随着基因操作技术的发展,弹状病毒反向遗传操作系统技术研究取得显著成果。本综述从弹状病毒概论、弹状病毒反向遗传操作系统的建立及其疫苗研究中的应用等方面概述其反向遗传操作的研究进展,以期为弹状病毒防控相关研究提供参考。     

合成病毒:对流感病毒研究的贡献

流感病毒是一种单股负链分节段RNA病毒。完全以质粒为基础的反向遗传学技术的建立和发展解决了利用cDNA克隆人工合成流感病毒的难题和技术障碍,并逐渐成为研究流感病毒及生产流感疫苗的重要基础和手段。重点综述了流感病毒反向遗传技术20多年来的发展过程,以及以质粒为基础的反向遗传操作系统在对流感病毒的生命周期、致病性的研究和生产疫苗等方面的巨大贡献。     

TILLING技术及其应用

定向诱导基因组局部突变(targetinginducedlocallesionsingenomes,TILLING)可快速、有效地鉴定和定向筛选突变,是一种全新的反向遗传学技术。现对TILLING的技术流程、核心与特点,及其在突变研究、反向遗传学及功能基因组学、SNP检测、资源创新与分析以及作物遗传改良等方面的应用进行了综述。     

A型流感病毒的反向遗传技术研究进展

A 型流感病毒基因组为单股负义RNA,分为8 个片段。反向遗传技术即从克隆的cDNA 产 生病毒的过程,是研究RNA 病毒、也是研究A 型流感病毒基因结构与功能的新技术。介绍了A 型流感病毒反向遗传技术的发展,完全以质粒为基础的新操作系统及其在研究病毒的生命周期、 致病性、产生基因修饰的疫苗候选株等方面的应用。     

狂犬病病毒EveIyn-Rokitnicki-Abelseth疫苗株反向遗传系统的建立

[目的]建立狂犬病毒的反向遗传系统,为研制不含狂犬病病毒致病性的新型安全高效的狂犬疫苗提供技术依据.[方法]本研究采用反向遗传学方法和分子克隆技术,建立了狂犬病病毒Evelyn-R0kitnieki-Abelseth(ERA)疫苗株的cMV/T7、T7启动子病毒拯救系统,构建了表达N、P、L蛋白的辅助质粒.[结果]成功拯救出野生型病毒rERA-VC,在Vero细胞上的生长动力学特性与父母本ERA相同,第三代可在Vero细胞上可获得很高的生长滴度.[结论]建立了狂犬病病毒的反向遗传系统,拯救出的野生型病毒生物学特性与父母本相同.     

狂犬病病毒Evelyn- Rokitnicki-Abelseth疫苗株反向遗传系统的建立

摘要：【目的】建立狂犬病毒的反向遗传系统,为研制不含狂犬病病毒致病性的新型安全高效的狂犬疫苗提供技术依据。【方法】本研究采用反向遗传学方法和分子克隆技术,建立了狂犬病病毒Evelyn- Rokitnicki-Abelseth (ERA)疫苗株的CMV/ T7、T7启动子病毒拯救系统,构建了表达N、P、L蛋白的辅助质粒。【结果】成功拯救出野生型病毒rERA-VC,在Vero细胞上的生长动力学特性与父母本ERA 相同,第三代可在Vero细胞上可获得很高的生长滴度。【结论】建立了狂犬病病毒的反向遗传系统,拯救出的野生型病毒生物学特性与父母本相同。     

反向遗传学技术在疫苗研究的进展

本文通过反向遗传学技术的基本原理,发展历史和反向遗传学技术在疫苗研究方面的进展与应用,重点介绍了反向遗传学技术在流感病毒疫苗方面的应用。     

反向遗传学在现代生物学领域中的应用

反向遗传学是一种新兴的分子生物学技术.主要从反向遗传学的含义、研究方法及应用等角度进行综述,并介绍有关反向遗传学研究的最新进展.     

RNA病毒“拯救”技术

介绍了RNA病毒拯救技术体系建立的简要过程、拯救成功与否的主要影响因素以及优化拯救体系的主要研究进展。着重介绍了该技术在分子病毒学研究和疾病防制中的重要应用及发展前景。     

狂犬病毒反向遗传学技术的研究及应用进展

反向遗传学技术是上世纪90年代在分子病毒学研究领域兴起的新技术,通常也被称为“病毒拯救”。综述了应用反向遗传学技术“拯救”狂犬病毒的主要技术体系以及反向遗传学技术在狂犬病毒致病机理、狂犬病毒疫苗及载体研究中的应用进展。     

纤溶活性蛋白检测方法研究进展

迄今为止,对纤溶活性蛋白(fibrinolytic protein)的检测主要有4种方法:纤维平板法(fibrin plate method)、显色底物法(colorimetric assay using chromogenic substrates)、反相纤维蛋白自显影法(reverse fibrin autography)和纤维蛋白酶谱法(fibrin zymography)。纤维平板法可以用来快速判断样品是否具有纤溶活性,同时,纤维平板法和显色底物法也可以用来对纤溶活性蛋白进行半定量分析。反相自显影法和纤维蛋白酶谱法则是两种较新的技术,主要用来对纤溶活性蛋白进行定性分析。详细阐述了这几种技术的发展过程、原理、优缺点和应用范围。     

15N自然丰度法在生态系统氮素循环研究中的应用

稳定性同位素技术是现代生态学研究中的一门新兴技术,在生态学研究的诸多领域都展示了广阔的应用前景,其中,稳定性同位素＾１５Ｎ自然丰度法近年来在生态系统氮素循环研究中发挥了正在发挥着极为重要的作用,首先简述了自然生态系统氮素循环诸过程中的＾１５Ｎ同位素分馏机制,然后,在此基础上,综述了＾１５Ｎ自然丰度法的基本原理与方法,列举了近年 来此法在生物固氮及氮素转化过程研究中的一些应用实例,并预测了该方法在国     

The genome revolution in vaccine research

The conventional approach to vaccine development is based on dissection of the pathogen using biochemical, immunological and microbiological methods. Although successful in several cases, this approach has failed to provide a solution to prevent several major bacterial infections. The availability of complete genome sequences in combination with novel advanced technologies, such as bioinformatics, microarrays and proteomics, have revolutionized the approach to vaccine development and provided a new impulse to microbial research. The genomic revolution allows the design of vaccines starting from the prediction of all antigens in silico, independently of their abundance and without the need to grow the pathogen in vitro. This new genome-based approach, which we have named "Reverse Vaccinology", has been successfully applied for Neisseria meningitidis serogroup B for which conventional strategies have failed to provide an efficacious vaccine. The concept of "Reverse Vaccinology" can be easily applied to all the pathogens for which vaccines are not yet available and can be extended to parasites and viruses.     

无核荔枝果实形成差异表达基因cDNA的克隆

采用抑制差减杂交技术(Suppression Subtractive Hybridization,SSH)分离与海南无核荔枝果实形成相关的差异表达基因的cDNA片段,为克隆相关基因提供研究基础。分别以无核荔枝的有核幼果为driver;无核幼果为tester,建立差减cDNA文库。经Reverse Northern Dot-Blot筛选该文库,共获得61个阳性克隆,随机选取17个克隆进行测序,共获得10条非重复序列,对其中较长的7个序列进行同源分析,结果表明:有6个序列在荔枝中为首次报道。     

一批逆转录酶活性检测假阳性的鉴别

目前逆转录病毒的检测方法被普遍应用的是逆转录酶活性检测,自从PCR方法被应用到逆转录酶活性检测中后,使检测的灵敏度及特异性得到极大地提高。同时,假阳性结果也带给各实验室很大困扰,包括试验过程中的实验用试剂及检测样品本身带来的假阳性。实验中观察了一批逆转录酶活性检测阳性样品和两个依赖DNA的DNA聚合酶的假阳性,通过对检测的严密监控以及改变反应体系pH值,抑制了由于细胞死亡后所释放的细胞内DNA聚合酶以及实验用DNA聚合酶的类逆转录酶样作用,从而达到鉴别结果的真实性的目的。