蚕豆和玉米叶绿体atpE基因表达产物的生物活性差异 …

编码蚕豆和玉米叶绿体ＡＴＰ合酶ε亚基的ａｔｐＥ基因分别在大肠杆菌中获得了高效表达,两种表达的ε亚基蛋白在抑制ＣＦ１－ＡＴＰ酶水解ＡＴＰ、阻塞类囊体膜质子通道以及它促进光合磷酸化等方面均明显地强于蚕豆的ε亚基蛋白。该结果表明：（１）ε亚基对ＡＴＰ合酶活性的调节作用与基同ＡＴＰ合酶其他亚基间的亲和力大小密切相关;（２）ε亚基抑制ＣＦ１水解ＡＴＰ和阻塞质子通道两个功能是呈正相关的。圆二色性（ｃｉｒｃｕｌ     

颈髓损伤后线粒体系列酶活性变化与线粒体功能的关系

为了探讨颈髓损伤后颈髓线粒体系列酶活性变化与线粒体功能的关系,采用Ａｌｅｎ法造成猫颈髓损伤,观察颈髓损伤后线粒体Ｃａ２＋,Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶、Ｎａ＋,Ｋ＋－ＡＴＰ酶、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性及线粒体呼吸功能的变化。结果显示：颈髓损伤后２ｈ至７２ｈ,Ｃａ２＋,Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶、Ｎａ＋,Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性、ＳＯＤ活性明显降低,而线粒体呼吸控制率（ＲＣＲ）、磷氧比值（Ｐ／Ｏ）、氧化磷酸化效率（ＯＰＲ）也明显下降。表明颈髓损伤后Ｃａ２＋,Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶、Ｎａ＋,Ｋ＋－ＡＴＰ酶、ＳＯＤ活性与线粒体功能密切相关,提示颈髓线粒体的病理生理改变在颈髓损伤后继发性损害过程中起重要作用。     

败血症休克大鼠肝细胞质膜钙ATP酶磷酸化、去磷酸化的改变

本实验观察了早期、晚期败血症休克大鼠肝细胞质膜钙ＡＴＰ酶磷酸化、去磷酸化的改变。败血症休克模型由结扎大鼠盲肠并穿孔（ＣＬＰ）的方法复制,采用蔗糖密度梯度离心法分离肝细胞质膜,由聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＯＳ－ＰＡＧＥ）鉴定肝细胞质膜钙ＡＴＰ酶磷酸化中间产物。结果发现,肝细胞膜钙ＡＴＰ酶磷酸化能力在败血症休克早期降低３２．３％,晚期降低４６．６％（Ｐ＜０．０１）。动力学分析发现,早期、晚期败血症休克时,钙离子使钙ＡＴＰ酶磷酸化的最大反应速度都明显降低,而Ｋｍ值无明显变化。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析证实,肝细胞质膜钙ＡＴＰ酶磷酸化的中间产物是一个分子量为１０７ｋｕ的蛋白质。结论认为：败血症休克时,肝细胞质膜钙ＡＴＰ酶磷酸化能力明显减低,去磷酸化能力无明显变化,可能是败血症休克时肝纳胞钙稳态失衡,进而引起机体代谢改变的重要原因之一。     

热应激心肌细胞损伤的线粒体机制探讨

目的：观察热应激对大鼠凡肌细胞线粒体氧化磷酸化和钙代谢功能的影响、研究线粒体膜渗透性转移（ＰＴ）的变化及其病理学意义、探索热应激心肌细胞损伤发生机制。方法：用Ｋｌａｒｋ氧电极极谱法测定线粒体呼吸功能,用生物发光法主肌ＡＴＰ含量及线粒体Ｃａ＾２＋。ＡＴＰ酶活性;用电感耦合等离子－原子发射光谱仪测定线粒体内Ｃａ＾２＋含量,用分光光度法测定线粒体膜ＰＴ。结果：热应激大鼠心肌细胞线粒体的呼吸控制率（ＲＣＰ     

人颈淋巴结淋巴细胞酶超微结构定位与活性研究

应用电镜酶细胞化学方法研究了人颈淋巴结淋巴细胞ＡＴＰ酶、Ｇ－６－Ｐ酶、５’－Ｎａｓｅ的定位与活性。结果：ＡＴＰ酶主要定位在淋巴细胞膜及内质网、线粒体等膜相结构。Ｇ－６－Ｐ酶主要定位在内质网、线粒体等膜相结构。５’－Ｎａｓｅ主要定位在细胞膜外表面,在内质网与线粒体股外表面也可见此酶反应颗粒。３种酶定位准确、颗粒清晰,酶反应特异性强。结果提示应用此法可以检测以上酶活性,对判定机体免疫状态、对临床诊断与治疗具有一定意义。     

融合膜中PSⅡ激发的电子推动嵴膜的电子传递和磷酸化

利用毛地黄苷从菠菜叶绿体类囊体膜制备了ＰＳⅡ颗粒,氧化还原差未光谱及ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明其具备ＰＳⅡ的特征,它具有从水氧化到质醌还原的酶活性。从大豆磷脂用超声法制备了脂质体。从鼠肝线粒体分离了嵴膜,将制备的ＰＳⅡ颗粒预组装于脂体,然后将此预组装物（ＰＳⅡ－ＰＬ）再与嵴膜组合,此膜系于光下获得了相当量的ＡＴＰ合成,证明了融合膜中ＰＳⅡ电子传递可推动嵴膜的电子传递和磷酸化机构合成ＡＴＰ。     

Mg~（2＋）促进线粒体H~＋－ATP酶的重建机理──H~＋－ATP酶复合体亚基水平的研究

用专一性标记蛋白质巯基（－ＳＨ）的荧光探剂ａｃｒｙｌｏｄａｎ测定含Ｍｇ２＋的Ｆ０－ＡＴＰ酶或Ｆ０－ＯＳＣＰ－Ｆ１－ＡＴＰ酶的脂酶体的构象与无Ｍｇ２＋者明显不同,前者的蛋白质的－ＳＨ基团处于疏水性更强的微环境中;在有Ｍｇ２＋和ＯＳＣＰ同时存在下重建的Ｆ０－Ｆ１－ＡＴＰ酶脂酶体较无ＯＳＣＰ者表现更高的水解活力或膜电位,表明ＯＳＣＰ增强Ｍｇ２＋的促进作用,这进一步提示Ｍｇ２＋通过改变膜脂的物理状态促进线粒体Ｈ＋－ＡＴＰ酶重建的间接作用。这些实验结果,从线粒体Ｈ＋－ＡＴＰ酶复合体的亚基水平的相关性上,对于我们提出的Ｍｇ２＋通过改变膜脂的物理状态使之具有合适的流动性,诱导嵌入脂双层的Ｈ＋－ＡＴＰ酶复合体的Ｆ０的构象发生变化并传递至复合体的催化中心Ｆ１,从而使重建Ｆ１－Ｆ０－ＡＴＰ酶具有较适合的蛋白构象,表现较高的重建酶活性的假设提供了直接的实验证据,精确地阐明了Ｍｇ２＋促进线粒体Ｆ０－Ｆ１－ＡＴＰ酶重建作用的分子机理。     

运动性骨骼肌疲劳亚细胞机制的探讨

本实验采用持续性下坡跑运动,观察大鼠骨骼肌运动后不同时相线粒体形态、代谢、机能等指标的变化,结果表明：大鼠运动后即刻线粒体钙含量、细胞膜丙二醛（ＭＤＡ）值明显增加,ＡＴＰ含量和细胞膜Ｎａ＋,Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性下降;运动后２４ｈ线粒体钙含量、ＭＤＡ值增加最明显,ＡＴＰ含量仍未恢复,细胞膜Ｎａ＋,Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性基本恢复,线粒体体密度、平均体积比运动前明显增加,比表面缩小;运动后４８ｈＡＴＰ含量完全恢复,线粒体钙含量、ＭＤＡ值开始恢复。本研究结果提示,急性运动引起的细胞膜脂质过氧化加强、线粒体形态、代谢机能异常抑制线粒体氧化磷酸化过程、减少ＡＴＰ生成可能是运动性骨骼肌疲劳的亚细胞机制之一。耐力训练可以通过改善线粒体形态、代谢、机能提高机体的运动能力。     

力竭游泳对大鼠心肌线粒体钙运输的影响

 力竭游泳对大鼠心肌线粒体钙运输的影响丁树哲,王文信,连克杰,许豪文（华东师范大学体育系运动生化实验室,上海２０００６２）线粒体钙运输在细胞功能调节方面有重要作用．线粒体通过摄取与释放钙,对其跨膜质子、不依赖底物及产物抑制的ＡＴＰ合成、磷酸化偶联等均有...     

人外周血淋巴细胞酶超微结构定位与活性研究

应用电镜酶细胞化学方法研究了人外周血淋巴细胞ＡＴＰ酶、Ｇ６Ｐ酶、５′ＮＤ酶的超微结构定位与活性。结果：１ＡＴＰ酶主要定位在淋巴细胞膜下方,在内质网及线粒体等膜相结构也见到此酶的分布。Ｇ６Ｐ酶主要定位在内质网、线粒体等膜相结构。５′ＮＤ酶主要定位在细胞膜外表面。三种酶定位准确,颗粒清晰。２此结果与我们对人体淋巴结淋巴细胞酶超微结构定位结果相同。结果提示应用电镜酶细胞化学方法可以检测人外周血淋巴细胞酶活性变化,对于判定免疫细胞功能状态,具有一定意义。