杜仲内生真菌DZJ03发酵液生物活性的研究

测定处于不同生长期的杜仲内生真菌DZJ03胞外多糖含量、发酵液中3种核苷含量,并对其菌株发酵液抑菌效果进行了研究,按50μg/mL的浓度测定了发酵液的石油醚、乙酸乙酯和甲醇等3种提取物对水稻恶苗病菌、棉花枯萎病菌2种植物病原菌以及烟草青枯病菌、金黄色葡萄球菌的抑制活性。结果表明:内生真菌DZJ03胞外多糖含量最高可达到2.0410g/L,其发酵液中所含腺苷、尿苷以及鸟苷的含量分别为1.2647 mg/g、0.8586 mg/g、1.0493 mg/g;发酵液乙酸乙酯相具有较强的抑菌活性,其对水稻恶苗病菌的抑制率为71.92%,抗烟草青枯病菌的抑菌圈直径达到19.21 mm。     

赶黄草总黄酮分级萃取及活性分析

以赶黄草茎叶为实验材料,用乙酸乙酯、正丁醇对赶黄草乙醇粗提物(EF)进行分级萃取,依次得到乙酸乙酯相(AF)、正丁醇相(BF)和水相(WF),分别测定各相黄酮含量、体外抗氧化和抑菌活性。结果表明,乙酸乙酯相的黄酮含量最高,为133.36 mg/g,超过赶黄草总黄酮含量的50%;乙酸乙酯相的DPPH自由基、羟自由基、超氧阴离子清除能力和亚铁离子螯合能力最强,其IC_(50)值分别为0.076、0.209、0.038、0.593 mg/mL;乙酸乙酯相的抑菌效果显著,对金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度均为0.075 mg/mL。     

盘针孢菌发酵及其胞外多糖抗氧化活性

[目的]研究盘针孢菌的发酵条件及其胞外多糖(EPS)抗氧化活性.[方法]分别研究碳源、氮源、生长因子、pH值和培养时间等条件对盘针孢菌多糖产量的影响作用,并通过测定其多糖的还原能力及对羟自由基(·OH)和1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基的清除作用研究该多糖的抗氧化活性.[结果]盘针孢菌多糖发酵的最佳条件为20%的马铃薯浸汁,20g/L麦芽糖,5 g/L(NH4)2SO4,0.01 g/L L-胱氨酸,pH 5.0,25℃下培养10 d.在此条件下,多糖产量达到37.52 mg/L,与在基础发酵培养基条件下相比,其多糖产量提高了84.10%.盘针孢菌多糖对·OH和DPPH自由基均有较好的清除作用,在多糖浓度为50 mg/L时,对·OH的清除率达到50.81%;多糖浓度为20 mg/L时,对DPPH自由基的清除率达到14.21%.[结论]发酵条件对盘针孢菌多糖代谢具有重要的调控作用,且该多糖具有明显的抗氧化活性.     

利用扁桃斑鸠菊叶发酵高产粗毛纤孔菌胞外多糖的条件优化及其抗氧化活性研究

粗毛纤孔菌胞外多糖是粗毛纤孔菌液体发酵的重要活性代谢产物,但采用常规的发酵方法,粗毛纤孔菌胞外多糖的产量较低。为更好地获取粗毛纤孔菌胞外多糖,本文采用双向液体发酵的方法,通过向发酵培养基中添加适量的扁桃斑鸠菊叶粉末,来提高粗毛纤孔菌胞外多糖的产量,并对优化得到的胞外多糖抗氧化活性进行了研究。以发酵液中胞外多糖含量为指标,采用单因素实验和正交实验优化发酵条件;采用红外光谱对胞外多糖的结构特征进行分析;通过测定胞外多糖对ABTS、DPPH和羟基自由基的清除率来了解其抗氧化活性。结果表明,最优发酵条件为:扁桃斑鸠菊叶粉末添加量0.5g/L、发酵时间10d、pH 6.5、接种量5.0mL,在此条件下,粗毛纤孔菌胞外多糖的产量达到(2.34±0.25)mg/mL,与未添加扁桃斑鸠菊叶的空白组相比,其胞外多糖产量提高了约216.22%;红外分析与抗氧化活性实验结果表明,添加扁桃斑鸠菊叶后的胞外多糖与未添加扁桃斑鸠菊叶的胞外多糖红外主要吸收峰一致,并且对ABTS、DPPH以及羟基自由基清除能力相近。本研究结果表明扁桃斑鸠菊叶能够有效地提高粗毛纤孔菌胞外多糖的产量,为其他珍稀食药用菌胞外多糖的高效生产提供了新思路。     

核桃内生真菌抗氧化菌株的筛选及其代谢产物活性研究

本试验以29株核桃内生真菌为研究对象,采用总还原力(FRAP法)及DPPH·清除试验评价其代谢产物的抗氧化能力,从中筛选出高活性菌株,并对该菌株发酵液进行浓缩萃取,研究各萃取物的抗氧化活性。结果表明,供试29株菌的代谢产物都表现出一定的抗氧化活性,其中菌株LTS-6-6(Pyrenochaeta)为高活性菌株。该菌株发酵液乙酸乙酯萃取物(EAE)显示了较强的抗氧化活性,对DPPH·的EC_(50)为7μg/mL,总还原力为527.59±10.66 mg V_C/g,总酚和总黄酮含量分别达到641.14±7.50 mg没食子酸/g、100.30±8.44 mg芦丁/g。该结果表明,核桃内生真菌代谢产物具有一定的抗氧化活性,是寻找天然抗氧化活性物质的良好资源。     

蝉拟青霉代谢产物清除DPPH自由基和抗真菌活性的研究

用二苯代苦味肼基自由基(DPPH)-TLC法和酶标仪法对一株蝉拟青霉P3菌丝体和发酵液甲醇提取物的清除自由基活性进行了定性和定量测定,发现两种提取物具有较强的清除自由基活性,在浓度为5.0mg/mL,于37℃下保温10min时,两种样品对0.4mg/mL的DPPH自由基的清除率分别可达55.52%和74.86%.以一种黑曲霉菌为指示菌,采用薄层色谱法对蝉拟青霉菌丝体和发酵液甲醇提取物进行抑菌活性试验,实验中根据抑菌圈大小判定代谢物抑菌活性的大小.同时,以致病菌白色假丝酵母菌为指示菌,采用牛津杯法对提取物进行进一步抑菌活性验证,结果表明,菌丝体和发酵液提取物样品浓度为5.0mg/mL时,其抑菌圈直径分别可达11.23mm和21.42mm.     

杜仲内生球毛壳菌的抗氧化活性研究

本文研究了分离自杜仲叶片的内生真菌球毛壳菌菌株No.173发酵液提取物的抗氧化活性,采用铁氰化钾还原力测定法、β-胡萝卜素/亚油酸模型和光照核黄素体系评价了发酵液提取物的抗氧化作用,并采用Folin-Ciocalteu法测定杜仲内生球毛壳菌发酵液提取物总多酚含量。结果表明,其抗氧化能力与Vc基本相当;清除超氧阴离子的能力优于芦丁;多酚含量为255.53±1.38mg/g,是其主要的抗氧化活性成分。     

‘海螺’望春花内生真菌EF-WCH-51鉴定及其抑制葫芦科刺盘孢活性成分分析

【背景】药用植物内生真菌产生的次生代谢产物具有多种抗菌活性,因而具有生防菌开发潜力。【目的】鉴定一株对葫芦科刺盘孢(Colletotrichumorbiculare)有抑菌活性的‘海螺’望春花内生真菌EF-WCH-51,并确定其主要抑菌活性成分。【方法】根据形态特征并结合分子序列鉴定EF-WCH-51菌株,利用生长速率法确定EF-WCH-51抑菌活性,并采用半制备型HPLC、HPLC-MS/MS对其活性成分进行分离鉴定。【结果】供试菌株EF-WCH-51为丝枝蜡蚧菌(Lecanicillium aphanocladii),其发酵液粗提物对葫芦科刺盘孢菌丝生长具有较强抑制作用,EC50为0.086 2 mg/mL;抑菌活性组分A (0.085 0 mg/mL)对葫芦科刺盘孢抑制率达到76.08%,通过查询MS、MS/MS数据库以及与相关文献对比,确定该化合物为卵孢菌素(oosporein)。【结论】本研究发现丝枝蜡蚧菌对葫芦科刺盘孢具有较好的抑菌活性,其主要抑菌活性成分为卵孢菌素,具有作为瓜类炭疽病生防菌株的潜力。     

芽孢杆菌SC27胞外代谢产物的活性与成分分析

以从红树林土壤分离并经紫外线和亚硝基胍复合诱变获得的SC27突变菌株作为目标菌,对其胞外代谢产物的活性与成分进行分析。结果表明:芽孢杆菌SC27产生乳酸,产量为5.04 g/L;发酵液蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶活力分别为1 316.6、513.3和176.2 U/mL,未检测出脂肪酶;胞外代谢产物对革兰氏阳性菌的抑菌活性强,且抑菌活性物质可耐受高温及木瓜蛋白酶、蛋白酶K和胰蛋白酶处理;发酵液二氯甲烷萃取物的主要化学成分及相对含量为二丁基羟基甲苯(10.28%)、二甲基二氧基硅烷(7.87%)、2,4-二叔丁基苯酚(2.92%)和2个未确定化合物(4.47%、2.36%)。     

平菇菌粗多糖的抗氧化活性研究

采用深层发酵技术生产平菇粗多糖,时其清除DPPH自由基、羟自由基的能力、铁离子螯合能力以及还原力进行了比较分析。结果表明：菌丝体粗多糖和发酵液粗多糖均具有较强的抗氧化能力,但2种多糖的抗氧化能力存在差异;茵丝体粗多糖清除DPPH自由基的能力较强,其EC。。值为2．20mg／mL;发酵液粗多糖清除羟自由基的能力、铁离子螯合能力以及还原力较强,其EC50值分别为0．72mg／mL、3．32mg／mL和7．91mg／mL。在一定的浓度范围内,多糖的浓度增加,其抗氧化能力也随之增强,呈量效依赖关系。     

细脚拟青霉代谢产物清除自由基和抑制单胺氧化酶活性的研究

用二苯代苦味肼基自由基(DPPH)-TLC法和酶标仪法对一株细脚拟青霉RCEF0394发酵液甲醇提取物的清除自由基活性进行了定性和定量测定,发现该提取物具有较强的清除自由基活性,在浓度为5.0mg/mL,于37℃下保温10min时,它对0.4mg/mL的DPPH自由基的清除率可达75.4%。以大鼠肝脏线粒体单胺氧化酶为靶标的体外实验发现供试细脚拟青霉发酵液有较强的抑制单胺氧化酶活性,且其活性和浓度呈量效关系。该发酵液冻干品对单胺氧化酶的半数抑制浓度IC50为118.1μg/mL。其三氯甲烷提取物对单胺氧化酶的抑制活性明显强于发酵液冻干品,表明该抑制剂可能为极性较低的化合物。进一步的分型试验表明该三氯甲烷提取物对A型单胺氧化酶呈混合抑制,对B型呈竞争性抑制,其Km值分别为0.44mg/L,0.34mg/L。     

葎草多糖含量测定及其抗氧化性研究

对8月和10月采集的葎草全草、嫩头、叶和茎中多糖含量进行测定,并对各部位提取纯化的多糖进行体外抗氧化作用研究。结果表明,8月份嫩头中多糖含量最高,达到(42.897±2.996)mg/g;浓度为5mg/mL的各部位葎草多糖溶液,对Fenton反应生成的羟自由基具有较强的清除能力,达85.15%～98.52%;对邻苯三酚自氧化法产生的超氧阴离子自由基也有较好的抑制能力,达57.15%～67.54%。葎草多糖对羟自由基和超氧阴离子自由基具有较高的清除能力。     

蝉虫草菌丝体胞内和胞外多糖抗肝细胞氧化损伤比较研究

蝉虫草（蝉花）作为我国传统的中药材,是一种药食两用的虫生真菌,因含有丰富的活性物质而具有广泛的医疗保健价值。本研究以自由基清除率为指标分析蝉虫草胞内和胞外多糖的化学抗氧化活性,再以H₂O₂诱导的人肝LO2细胞氧化损伤为模型,进而分析比较二者对肝细胞氧化应激损伤的改善作用。结果表明,在化学抗氧化能力比较上,蝉虫草菌丝体胞外多糖有效清除?OH自由基、ABTS自由基和DPPH自由基的EC₅₀值分别为1.06mg/mL、0.96mg/mL和0.63mg/mL,而胞内多糖的EC₅₀值分别为3.71mg/mL、2.83mg/mL和1.70mg/mL,表明蝉虫草胞外多糖的化学抗氧化能力更强;在改善细胞氧化应激损伤比较上,与模型组对比,二者均能随着浓度递增而显著地提高细胞存活率,但胞外多糖比胞内多糖更强,当多糖浓度为5mg/mL时,胞外多糖细胞存活率达到92.36%,胞内多糖只达到82.07%;在调节细胞抗氧化酶清除ROS的机制上,与模型组对比,胞外多糖分别上调SOD酶活力2.51倍和CAT酶活力2.91倍,极显著地降低了细胞ROS水平（P<0.01）来改善细胞的氧化应激损伤作用。相应地,胞内多糖只上调了1.85倍和2.33倍,显著性地清除了ROS（P<0.05）,表明蝉虫草菌丝体胞外多糖具有更显著的抗肝细胞氧化损伤作用。本研究结果显示蝉虫草菌丝体胞外和胞内多糖均具有良好的抗肝氧化损伤活性,且胞外多糖比胞内多糖活性更好,为蝉虫草菌丝体多糖在保肝产品中的开发和应用提供了科学依据。     

桦褐孔菌发酵及其提取物清除自由基活性的研究

用1,1-diphenyl-2-picryhydrazyl(DPPH)酶标仪法,对桦褐孔菌发酵液的甲醇提取物的自由基清除率进行了测定,发现该提取物具有较强的清除自由基的活性;进一步用DPPH薄层试验,结果发现该菌的CHCL3提取物中主要含有两个具清除自由基活性的组分.在此基础上,以清除自由基活性为指标,对桦褐孔菌液体发酵条件进行优化,发现当培养条件为:葡萄糖20g/L、甘油6mL/L、蛋白胨15g/L、CuSO4 0.005g/L、酪氨酸0.05g/L;种龄为7d、装液量为50mL/250mL、转速为180r/min、接种量为10%时,桦褐孔菌发酵液提取物的清除自由基活性最强.     

中药美白成分的复配及复方中药发酵液的功效

【目的】通过中药美白成分的复配,进而研究复方中药发酵液活性成分及功效性。【方法】以酪氨酸酶抑制率为指标研究最佳复配含量,采用分光光度法测定复方中药发酵液中总酚、多糖、黄酮、蛋白质含量,通过HPLC技术进行氨基酸分析,抗氧化能力通过总还原力和自由基清除试验进行评价,通过酪氨酸酶活性抑制实验进行美白功效分析。【结果】正交实验得出4种中药美白成分中覆盆子对酪氨酸酶抑制效果最好;复方中药发酵液中多酚、多糖、黄酮和蛋白质含量分别为147.80、4.36、1.17、2.22 g/kg;复方中药发酵液具有较高的总还原力、羟自由基清除能力和DPPH自由基清除能力;5%(W/V)复方中药发酵液的酪氨酸酶活性抑制率为82.41%。【结论】复方中药发酵液中含有多种活性成分,具有一定的抗氧化和美白功效。     

Phytochemical,Free Radical Scavenging and Antifungal Profile of Cuscuta campestris Yunck. Seeds

This work was conceptualized with the goal to investigate the phytochemical, free radical scavenging and antifungal profile of Cuscuta campestrisYunck . seeds. Total phenolics, amino acid and carbohydrate contents were evaluated in ethanolic, acetone and chloroform extract. Effective antioxidant activity was evaluated throughout seven antioxidant methods. The antifungal activity was assessed against eight fungal strains and Candida albicans. The results showed total phenol, flavonoid, flavonols and phenolic acids contents in amount of 1.51 – 6.35 mg GAE/mL, 78 – 425 μg RU/mL, 1.04 – 2.98 mg QU/g and 12.01 – 30.58 μg CAE/mL, respectively. The total amino acids and carbohydrates content ranged from 8.29 to 185.45 μg Gly/mL and from 0.05 to 0.12 μg Glu/mL. The ethanolic extract showed the best antioxidant activity in phosphomolybdenum, DPPH free radical scavenging, ferric reducing power and lipid peroxidation assays. The best activity in ferrous ion chelating and H₂O₂ assays had the acetone extract, whereas the best hydroxyl radical scavenging activity was observed with the chloroform extract. The ethanolic extract at a concentration of 6 mg/mL proved to be the most effective antimycotic, since it inhibited the growth of all tested fungi except Penicillium verrucosum. The obtained results indicate that C. campestris seeds could be attributed to a potential source of natural antioxidants in food and pharmaceutical products.     

朱砂根抑制α-葡萄糖苷酶与抗氧化活性研究

对朱砂根抑制α-葡萄糖苷酶与抗氧化活性进行研究.利用96微孔板法筛选α-葡萄糖苷酶抑制活性;采用DPPH、ABTS和FRAP方法分析抗氧化活性.结果表明,乙酸乙酯部位抑制α-葡萄糖苷酶的活性最高(IC50=39.27 μg/mL),石油醚部位次之(IC50 =56.11 μg/mL),正丁醇部位活性最弱(IC50=62.05μg/mL),但均远大于阳性对照Acarbose(IC50=1081.27 μg/mL);乙酸乙酯部位抗氧化能力最强,正丁醇部位次之.乙酸乙酯部位清除DPPH自由基(IC50=38.55 mg/L)的能力比BHT( IC50=18.71 mg/L)低1/2,清除ABTS自由基的能力(IC50=3.60 mg/L)比BHT(IC50=7.44 mg/L)强,但比BHA(IC50=1.74 mg/L)弱,还原Fe3+的能力(FRAP=512.99 ±6.80 μmoTE/g)为BHT(FRAP=1581.68±97.41μmol TE/g)的1/3.结果显示朱砂根乙酸乙酯部位抑制α-葡萄糖苷酶和抗氧化活性最好.     

迷宫栓孔菌生物学特性、驯化栽培及抗氧化活性

迷宫栓孔菌在药用上具有降血糖的功效,分布广泛,对采自吉林省白山市露水河镇红松王景区的迷宫栓孔菌Trametes gibbosa进行组织分离,得到菌株ZT-055,对其菌丝体最适培养条件和子实体驯化栽培进行研究,并测定栽培子实体的多糖抗氧化活性。在单因素试验基础上的正交试验结果表明：迷宫栓孔菌最适生长条件是碳源为果糖、氮源为酵母浸粉、温度为30℃、pH值为5.0;栽培试验中,通过17d的发菌,于30d左右开始形成原基,44d原基分化成菇蕾,57d左右形成成熟子实体;采用水提醇沉法提取多糖,苯酚-硫酸法测定多糖含量,结果表明迷宫栓孔菌ZT-055子实体多糖含量约为(80.51±5.1)mg/g,在多糖浓度为1.26mg/mL条件下,羟自由基清除率达到45%,超氧氢离子清除率达到48%,表明该菌具有较高的抗氧化活性。     

Antioxidant activity of novel chitin derivative

Novel water-soluble chitin derivative was prepared by chemical modification to evaluate antioxidant activities by free radical scavenging potential using electron spin resonance spin trapping technique. Aminoethyl-chitin (AEC) exhibited free radical scavenging activities against 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH), hydroxyl, superoxide, and peroxyl radicals. AEC quenched DPPH and peroxyl radical over 55% and 59% at 4mg/mL, and also suppressed superoixde radical over 58% at 2mg/mL. Especially, AEC was more active against hydroxyl radical, and scavenging ratio was 92.2% at 0.12mg/mL. These results suggested that free amino group in the -CH(2)CH(2)NH(2) plays an important role in the free radical scavenging activity. In addition, cytotoxic effect of AEC was assessed using human lung fibroblast (MRC-5) cell line, and AEC showed less toxic against MRC-5.