miR-29a靶向调控PDGFB促进非小细胞肺癌细胞凋亡

为了探究miR-29a对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响及分子机制,本研究通过荧光定量PCR检测肺癌组织、癌旁组织、肺癌细胞以及人正常肺支气管上皮细胞BEAS-2B中miR-29a的表达,在肺癌A549转染miR-29a mimics后,使用荧光定量PCR和CCK-8法分别检测miR-29a的表达以及各组细胞的活力,使用流式细胞术检测A549细胞凋亡;通过荧光定量PCR检测肺癌组织、癌旁组织PDGFB m RNA的表达,采用Western blot检测PDGFB蛋白的表达;使用双荧光素酶报告基因检测miR-29a可能的靶基因;在肺癌A549细胞转染miR-29a mimics后继续转染PDGFB过表达质粒,通过qPCR和Western blotting分别检测PDGFB mRNA和蛋白的表达。结果表明,与癌旁组织相比,miR-29a在肺癌组织的表达显著下调(p<0.01),PDGFB在肺癌组织的表达显著增加(p<0.01);转染miR-29a mimics后,肺癌A549细胞中miR-29a表达显著增加(p<0.01);CCK-8法结果显示miR-29a mimics组A549肺癌细胞在24 h和48 h后细胞增值率较miR-NC对照组显著降低(p<0.01);流式细胞术结果显示miR-29a mimics组的细胞凋亡率较miR-NC对照组显著增加(p<0.01);与miR-NC+PDGFB 3’UTR WT组相比,miR-29a mimics+PDGFB 3’UTR WT组的荧光强度显著降低(p<0.01);荧光定量PCR和Western blotting显示miR-29a mimics+PDGFB组PDGFB m RNA和蛋白表达量与miR-29a mimics+vector组相比显著增加(p<0.01)。本研究结果表明miR-29a在肺癌组织和肺癌细胞株中低表达,及抑制PDGFB的表达并且促进肺癌细胞凋亡。     

miRNA-181a在胃癌细胞增殖和迁移中的作用

miRNA与恶性肿瘤患者的诊断和预后密切相关,为了考察miRNA-181a在胃癌细胞增殖和迁移中的作用,本研究检测了miRNA-181a在胃癌组织中的表达,并通过对人胃癌细胞系MGC-803转染miR-181a模拟物或抑制剂来考察miR-181a对细胞迁移和增殖的影响。RT-PCR显示,miRNA-181a在胃癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织(p<0.05)。伤口愈合实验和Transwell实验显示,转染miR-181a抑制剂或TGF-β受体2(TGFβR2)过表达的pcDNA3.1质粒均可抑制MGC-803细胞的迁移。EdU实验和CCK-8实验显示,转染miR-181a抑制剂或TGFβR2过表达的pcDNA3.1质粒均可抑制MGC-803细胞的增殖。此外,miR-181a抑制剂处理可使TGFβR2蛋白表达明显升高。然而,miR-181a模拟物或抑制剂处理后TGFβR2mRNA水平没有显著变化。总之,本研究表明高表达的miR-181a通过在转录后抑制TGFβR2蛋白表达来促进胃癌细胞的迁移和增殖。miR-181a有望成为胃癌的潜在治疗靶点。     

小鼠pre-miRNA-122启动子荧光素酶报告质粒的构建及表达调控

[目的]构建小鼠pre-miRNA-122基因启动子荧光素酶报告质粒,研究血小板衍生生长因子(Platelet-derived growth factor,PDGF)对miRNA-122表达的影响。[方法]利用生物信息学分析pre-miRNA-122启动子片段并扩增,插入pGL3-basic载体中获得报告质粒pmir-122-luc。将pmir-122-luc转染小鼠Huh-7和HepG2细胞,24h后检测荧光素酶活性;同样将其转染小鼠肝星状细胞(Hepatic Stellate Cells,HSCs),PDGF处理12h后检测活性。[结果]pre-miRNA-122上游5.5~4.5 kb为启动子区域。构建的质粒经酶切、测序鉴定正确。pmir-122-luc荧光素酶活性较pGL3-basic显著增加,且在Huh-7细胞高表达(24±5.02倍)而在HepG2细胞低表达(1.8±0.34倍)。pmir-122-luc能在HSCs中表达,且PDGF处理后活性降低(P0.05)。[结论]小鼠pre-miRNA-122启动子荧光素酶活性报告质粒构建成功;PDGF抑制miRNA-122在HSCs中表达,为探索miRNA-122的表达调控机制提供了新的窗口。     

PepO通过上调腹腔巨噬细胞中MircroRNA-155的表达来抑制IL-6的产生

探索microRNA-155在细胞炎症反应调控中的作用机制。采用重组PepO蛋白刺激小鼠腹腔巨噬细胞(PEMs)诱导的microRNA-155(miR-155)及其对IL-6的调节。PepO刺激腹腔巨噬细胞诱导miRNA-155呈剂量和时间依赖性表达;Mimic和inhibitor转染实验显示过表达mi R-155可抑制IL-6及My D88的表达;IL-6及MyD88与PepO也呈剂量依赖性;且IL-6与MyD88存在PepO处理时间的相关性。这些结果提示,PepO刺激腹腔巨噬细胞诱导miRNA-155可能通过靶向myD88通路信号从而抑制IL-6的表达,避免宿主不至于过度炎症反应导致炎症损伤。     

miRNA-320a通过靶向水通道蛋白4抑制神经胶质瘤细胞U251迁移侵袭的分析

本研究初步探讨过表达miRNA-320a对抑制神经胶质瘤U251细胞迁移、侵袭的可能的机制。实验开始前我们利用生物信息学软件进行分析对比miRNA-320a与水通道蛋白4(AQP4)之间的靶点结合关系,然后我们用miRNA-320a mimic及Ncontrol对U251细胞株进行转染,48 h后进行下一步实验。首先用q-PCR验证过表达转染情况,以及水通道蛋白4(AQP4)m RNA的表达水平,其次用划痕和Transwell检测转染后细胞株的迁移侵袭能力,最后用Western blotting测定AQP4的表达水平。生物信息分析可得miRNA-320a在AQP4 m RNA 3'UTR区域能稳定结合,实验结果显示转染mimic后,过表达组明显升高,且过表达组AQP4 m RNA的表达明显被抑制,划痕和Transwell实验提示了过表达miRNA-320a后能抑制U251细胞株的迁移侵袭能力(p0.01)。Western blotting结果显示,过表达miRNA-320a与对照组相比能明显抑制AQP4蛋白的表达。所有研究结果提示miRNA-320a能靶向作用AQP4 m RNA 3'UTR区域,并抑制其蛋白表达,从而抑制了肿瘤细胞U251的迁移侵袭能力,为临床治疗恶性胶质瘤提供新的参考。     

SH-SY5Y神经细胞氧化损伤时microRNA-199a和Sirt1表达变化

目的:观察神经细胞氧化损伤时microRNA-199a(miRNA-199a)和Sirt1表达的变化,探讨miRNA-199a对Sirt1的调控作用。方法:不同浓度双氧水(600μmol/L,1 200μmol/L)刺激体外培养的SH-SY5Y细胞12h造成损伤。MTT检测细胞活力,DCFA-DA探针检测细胞内活性氧水平,Hochest染色分析细胞凋亡,RT-PCR检测miRNA-199a的表达,细胞免疫荧光和Western blot检测Sirt1蛋白水平。结果:600μmol/L和1 200μmol/L双氧水刺激SH-SY5Y后细胞活力显著下降,分别降低27.0%和53.6%;ROS荧光强度细胞凋亡显著上升且具有浓度依赖性;miRNA-199a的表达明显上升,分别上升23.0%和51.0%;Sirt1蛋白表达量下降具有浓度依赖性。结论:双氧水刺激SH-SY5Y神经细胞时miRNA-199a表达升高,Sirt1的表达降低。Sirt1水平降低与miRNA-199a通过调控Sirt1表达参与氧化损伤有关[1]。     

miR-30a与其靶基因在肝癌中的作用研究进展

miRNA-30a(miR-30a)在肝癌组织中表达水平显著下调,可能是肝癌发展过程中的肿瘤抑制因子。miR-30a通过调控靶基因的表达参与肝癌细胞的增殖、凋亡、侵袭、转移以及自噬反应等一系列生理病理过程,从而发挥抑癌作用。本文就近年来miR-30a在肝癌中的靶基因及其调控分子机制做一综述。     

MiR-196a促进人非小细胞肺癌细胞NCI-H1299侵袭转移的研究

目的:非小细胞肺癌发生、发展的分子机制仍是目前研究的热点与难点,新近研究表明microRNA在肿瘤的发展过程中起着重要的作用.本研究旨在探讨miR-196a在人非小细胞肺癌组织及细胞系中的表达水平,以及抑制miR-196a对非小细胞肺癌细胞侵袭转移能力的影响.方法:通过real-time PCR技术检测人非小细胞肺癌及细胞系中miR-196a的表达水平,通过转染miR-196a inhibitors抑制miR-196a的表达水平,并通过定量PCR检测转染效率.利用transwell实验检测下调miR-196a对NCI-H1299细胞的迁移、侵袭能力的影响.结果:相对于正常肺组织及细胞,在非小细胞肺癌组织和细胞中miR-196a的表达水平出现了显著的上调,NCI-H1299细胞中转染miR-196a inhibitors能显著抑制miR-196a的表达水平且抑制miR-196a的表达能降低NCI-H1299细胞的迁移、侵袭能力.结论:定量PCR结果显示miR-196a在非小细胞肺癌组织及细胞中表达显著上调,而封闭其表达能影响非小细胞肺癌细胞的迁移和侵袭功能,提示miR-196a的表达上调可能在非小细胞肺癌的发生、发展中起着关键的作用,并有可能作为将来非小细胞肺癌诊断、预后的分子靶标.     

miRNA-21对肺癌细胞放疗敏感性调控及肺损伤的影响

[目的]探究miRNA-21对肺癌细胞放疗敏感性的调控及放疗所致肺损伤的影响。[方法]选取人小细胞肺癌细胞系NCI-H446作为肺癌细胞模型、人支气管上皮细胞HBE作为放疗所致肺损伤细胞模型，取对数生长期NCI-H446和HBE细胞，分为空白对照组(不转染细胞)、阴性对照组(转染阴性对照序列细胞)和anti-miRNA-21组(转染anti-miRNA-21序列细胞),检测各组细胞中miRNA-21表达水平细胞活率、细胞周期进程。[结果]NCI-H446中miRNA-21表达量显著高于BEAS-2B,5.0Gy组的NCI-H446和HBE细胞活率均显著低于0.0Gy组，与0.0Gy比较，2.5、5.0Gy组的NCI-H446和HBE细胞的G2/M期细胞百分比显著增高(P<0.05),G1/S期细胞百分比显著降低，5.0Gy γ照射后，在8 h前，NCI-H446细胞中的miRNA-21表达水平显著上调，8 h后逐渐回落；在12 h前，HBE细胞中的miRNA-21表达水平显著上调，12 h后逐渐回落。转染后，anti-miRNA-21组NCI-H446和HBE细胞中的miRNA-...     

hTERT启动子调控rVBMDMP基因表达载体的构建与功能研究

为了探讨端粒酶催化亚单位(hTERT)启动子调控重组血管基膜衍生多功能肽(rVBMDMP)基因表达抑制肺癌细胞生长的作用机制,采用PCR方法,克隆hTERT启动子核心区片段,并检测其功能活性.然后,构建pLNSX/hTERT/rVBMDMP逆病毒载体,获取逆病毒,感染肺癌A549细胞,检测hTERT启动子调控rVBMDMP基因表达对细胞形态、细胞生长、细胞凋亡以及Caspase-3表达的影响.另外,观察hTERT启动子调控rVBMDMP基因表达对裸鼠成瘤的抑制作用、瘤组织细胞的凋亡及Caspase-3表达情况.结果发现:a.hTERT启动子核心区能调控rVBMDMP基因的表达(n=3,P<0.05);b.hTERT启动子调控rVBMDMP基因的表达具有抑制肺癌A549细胞的生长和裸鼠成瘤作用(n=6,P<0.05);c.rVBMDMP基因表达能促进肺癌A549细胞凋亡和Caspase-3蛋白表达.以上结果说明,hTERT启动子调控rVBMDMP基因表达后,通过提高Caspase-3的表达水平,促进细胞凋亡而抑制肺癌A549细胞的生长.     

非磷酸化肌球蛋白在血小板衍生生长因子诱导的血管平滑肌细胞迁移中的作用

为了阐明非磷酸化肌球蛋白在平滑肌细胞迁移中的作用,研究探讨了非磷酸化肌球蛋白是否介导了血小板衍生生长因子(PDGF)诱导豚鼠脑基底动脉平滑肌细胞(GbaSM-4)的迁移。研究结果显示,20ng/ml以下剂量的PDGF可诱导GbaSM-4细胞发生迁移,此时肌球蛋白轻链(MLC20)磷酸化水平无变化。该迁移作用可被肌球蛋白特异性抑制剂blebbistatin所拮抗。应用RNA干扰技术抑制肌球蛋白轻链激酶表达,经免疫印迹检测经果显示,MLC20的磷酸化水平发生了显著下降;但对PDGF诱导的迁移作用无影响;在RNA干扰后blebbistatin也可抑制其迁移作用。体外ATP酶活性测定结果显示,blebbistatin对从平滑肌中提取的非磷酸化肌球蛋白的ATP酶活性有明显的抑制作用,其主要作用位点位于肌球蛋白头的头部S1。上述结果提示,非磷酸化的肌球蛋白参与了PDGF诱导的平滑肌细胞迁移。     

miR-29a通过调控PTEN表达对脂多糖诱导人肺微血管内皮细胞损伤的保护作用研究*

目的:探讨miR-29a在脂多糖(LPS)诱导人肺微血管内皮细胞(HPMVECs)损伤中的作用及机制。方法:构建LPS损伤HPMVECs模型。RT-qPCR检测miR-29a表达变化;试剂盒测乳酸脱氢酶(LDH)释放量;MTT和流式细胞术分别检测细胞存活率及凋亡率;Western blot测蛋白质表达水平;Microcosm、starBase、Pictar、TargetScan软件预测 miR-29a的可能靶基因,双萤光素酶实验验证miR-29a和PTEN的靶向关系。结果:使用LPS处理HPMVECs,显著降低细胞中miR-29a的表达和细胞存活率,诱导LDH释放量和HPMVECs凋亡率增加,上调细胞中PTEN、Bim蛋白表达,下调p-Akt/Akt、p-FOXO3a/FOXO3a表达 (P<0.05);过表达miR-29a逆转LPS对HPMVECs的损伤作用。萤光素酶报告基因实验证实miR-29a 靶向PTEN,转染miR-29a mimics显著下调PTEN蛋白表达,转染miR-29a inhibitors明显上调PTEN蛋白表达 (P<0.05),但PTEN mRNA表达水平差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:过表达miR-29a可能通过抑制PTEN蛋白的表达水平、激活Akt/FOXO3a/Bim信号通路对LPS致HUVECs的损伤发挥保护作用。     

MiRNA-509-5p靶向MDM2抑制胃癌细胞的侵袭和迁移

目的明确miRNA-509-5p对胃癌细胞侵袭和迁移的作用并阐明相关的机制。方法实时定量PCR检测miRNA-509-5p在胃癌细胞株及胃癌组织中的表达。对HGC-27细胞株转染miRNA-509-5p模拟物或抑制物后,分别采用CCK-8和Transwell法检测细胞的增殖和迁移。软件预测miRNA-509-5p的靶基因,荧光素酶报告基因验证靶基因。靶基因过表达验证细胞增殖和迁移。结果 miRNA-509-5p在肿瘤组织及细胞株中的表达显著降低。转染miRNA-509-5p模拟物能够显著抑制细胞的增殖、迁移及侵袭。相反,转染miRNA-509-5p抑制物能够显著增加细胞的增殖、迁移及侵袭。此外,miRNA-509-5p能够通过靶向3'-UTR负调控鼠双微体-2(MDM2)。miRNA-509-5p能够显著抑制由MDM2过表达导致的肿瘤细胞增殖、迁移及侵袭。结论 miRNA-509-5p是通过抑制MDM2表达的新型肿瘤抑制子,能够抑制胃癌的增殖、迁移及侵袭。     

人参皂苷Rh2对肺癌A549细胞miR-16和Bcl-2表达与生长的影响研究

目的探讨人参皂苷Rh2(G-Rh2)诱导人肺癌细胞A549凋亡作用及机制研究。方法采用2.5、5.0、10.0、20.0、40.0μmol/L的G-Rh2处理A549细胞,MTT法于不同时间点测定G-Rh2对A549的生长抑制作用;倒置显微镜观察G-Rh2对A549细胞作用后的形态改变;Annexin-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况;Real-time PCR和Western-blot法分别检测G-Rh2对A549细胞中miR-16和Bcl-2蛋白表达的影响。结果与阴性对照组相比,不同浓度G-Rh2能够抑制A549肺癌细胞增殖并呈时间-浓度依赖性;GRh2作用后,A549细胞凋亡率明显增加,miR-16的表达显著增加,而Bcl-2蛋白表达显著降低。结论G-Rh2能够显著抑制A549肺癌细胞增殖并通过上调miRNA-16,下调Bcl-2的表达发挥治疗肺癌的作用。     

大蒜素诱导结肠癌HT-29细胞凋亡

本实验的目的是观察大蒜素(allicin)对人结肠癌HT-29细胞凋亡和增殖的影响,并对其作用机制做初步的探讨。通过利用倒置显微镜、荧光显微镜、透射电镜、流式细胞术以及Real time PCR等方法,对大蒜素处理后的HT-29细胞的形态、存活率、细胞周期分布、细胞凋亡率、线粒体膜电位(驻追m)以及Bax/Bcl-2基因表达比例的变化进行了研究。结果显示,大蒜素可抑制HT-29细胞增殖,且呈剂量依赖性关系。大蒜素作用于HT-29细胞48 h的最佳药物浓度是6滋g/m L。在此条件下,细胞出现明显的凋亡现象。早期和晚期细胞凋亡率分别为(7.48依0.38)%和(10.07依0.78)%,驻追m显著下降(p0.01),细胞被阻滞于S期和G2期,Bax/Bcl-2的比值显著升高(p0.01)。因此,我们推测大蒜素可能通过调节Bax和Bcl-2两个基因的表达比例,诱导人结肠癌HT-29细胞的凋亡,进而抑制癌细胞的增殖。     

miRNA-132抑制人骨肉瘤细胞的增殖和侵袭能力

目的观察miRNA-132在不同骨肉瘤细胞系中的表达及对骨肉瘤细胞生物学行为的影响,探讨miRNA-132在人骨肉瘤发生发展中的作用。方法通过荧光定量PCR技术检测不同骨肉瘤细胞系U2OS、MG63、143B中miRNA-132的表达情况,使用pRFP-miRNA-132-down质粒转染U2OS细胞、pRFP-miRNA-132-up质粒转染143B细胞,使用EdU检测肿瘤细胞增殖状态,Transwell小室检测肿瘤细胞迁移和侵袭能力。结果在3种骨肉瘤细胞系U2OS、MG63、143B中,miRNA-132的表达依次下降(U2OSMG63143B);降低miRNA-132在U2OS细胞中的表达促进细胞的增殖和侵袭能力,增加miRNA-132在143B细胞中的表达抑制细胞的增殖和侵袭能力。结论 miRNA-132可能通过抑制肿瘤细胞的增殖和侵袭调节骨肉瘤的发生发展。     

pEGFP-N1-IRF3a重组质粒通过调节STAT1的活化诱导非小细胞肺癌细胞的凋亡

干扰素调节因子3(interferon regulatory factor 3,IRF3)在固有免疫激活的过程中发挥重要作用,其中IRF3a是由IRF3可变剪接形成的一个亚型,目前几乎没有研究报道该蛋白对肿瘤细胞凋亡的影响。在该研究中,首先通过qRT-PCR检测IRF3a基因在肺癌组织以及癌旁组织中的表达水平;然后通过PCR从人外周血细胞中获取IRF3a基因,与质粒pEGFP-N1成功构建重组质粒pEGFP-N1-IRF3a。重组质粒转染非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞A549、H1299后,细胞凋亡比例明显升高,cleaved caspase8、cleaved caspase3水平也显著升高。此外,过表达IRF3a能激活STAT1,以p-STAT1抑制剂Nifuroxazide抑制STAT1的活性能显著抑制IRF3a诱导的细胞凋亡。因此,该研究成功构建了pEGFP-N1-IRF3a重组质粒,并进一步证明了IRF3a通过激活STAT1诱导NSCLC细胞的凋亡。     

布雷菲德菌素A通过线粒体凋亡途径增强顺铂抗肺癌细胞的作用

本研究证明了线粒体凋亡途径在布雷菲德菌素A (brefeldin A,BFA)联合顺铂(cisdichlorodiamine platinum,CDDP)抗非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的作用。MTT结果显示,BFA对肺癌GLC-82和NCI-H1299细胞的半数有效抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))分别是100 ng/mL和400 ng/mL,CDDP对GLC-82和NCI-H1299细胞的IC_(50)分别是4μg/mL和15μg/mL;而分别采用半量的BFA和CDDP联合处理GLC-82或NCIH1299细胞后,抑制作用均进一步加强。DAPI染色结果进一步证明了二者的协同作用——与单独用药组相比,细胞核染色质固缩加剧,核裂解碎片增多,乃至形成凋亡小体,表明细胞凋亡的发生。与单药组比较,联合用药导致肺癌GLC-82细胞线粒体膜电位显著下降; q-RT-PCR及Western印迹结果显示,在联合用药早期(24 h),GLC-82细胞可能通过提高Bcl2表达以促进存活;而在联合用药晚期(48 h),细胞已发生不可逆转的凋亡,Bcl2表达受抑制,同时二者通过促进Bax表达来诱导细胞色素C释放,使胱天蛋白酶3发生剪切激活,最终诱导细胞凋亡发生。提示线粒体凋亡途径可能是BFA协同CDDP抗非小细胞肺癌的分子机制之一,为肺癌的临床治疗方案提供了更多的理论依据。     

MicroRNA-98促进猪圆环病毒2型在3D4/21细胞中的复制

【目的】通过高通量测序的方法获得PCV2感染3D4/21细胞的miRNAs表达谱,并探讨miRNA-98在PCV2复制中的作用。【方法】本研究以猪肺泡巨噬细胞系3D4/21细胞为细胞模型,对PCV2感染过程中的3D4/21细胞进行miRNAs差异表达分析,筛选与病毒复制相关的特异性miRNAs,并探讨其在PCV2复制中的作用。【结果】经高通量测序,获得PCV2感染3D4/21细胞的miRNAs表达谱,结合实验室前期研究筛选获得miRNA-98。实验表明,miRNA-98的表达量随PCV2感染时间的延长而持续升高,其变化趋势与Cap蛋白表达变化基本一致,由此推测miRNA-98与PCV2复制正相关。过表达miRNA-98可显著上调Cap蛋白的表达量和PCV2的复制。进一步的研究表明,miRNA-98参与调节宿主免疫相关细胞因子的表达和PCV2的复制。【结论】miRNA-98可通过调节免疫相关细胞因子的表达调控宿主免疫功能,帮助PCV2逃逸宿主免疫,促进PCV2在3D4/21细胞中的复制。这些发现不仅为深入了解PCV2与宿主之间的关系提供了新视角,还有望为猪圆环病毒相关疾病的防控提供新的抗病毒策略。     

DNMT3a通过提升基因内部甲基化介导紫杉醇诱导的LINE-1异常表达

药物诱导的长散在重复序列LINE-1异常激活可促进细胞基因组不稳定,而基因组不稳定是促进肿瘤发生发展和耐药表型形成的重要因素。因此,探索LINE-1异常激活的分子机制具有重要的理论和临床意义。DNA甲基化是调控基因表达的重要方式,已知DNA甲基转移酶家族成员DNMT3a不仅能通过促进基因启动子甲基化抑制基因表达,还可通过增强基因内部甲基化上调基因表达。本实验室前期研究发现,将乳腺癌细胞暴露于化疗药物可诱导LINE-1异常高表达,但LINE-1启动子甲基化水平并无显著改变。本研究进一步探讨了在化疗药物压力下DNMT3a是否可通过增强LINE-1基因内部甲基化水平促进LINE-1在乳腺癌细胞中的异常高表达。ChIP实验和甲基分析结果显示,用化疗药物紫杉醇(PTX)处理乳腺癌细胞,不仅可以诱导DNMT3a表达,而且可以促进DNMT3a与LINE-1基因内部区域的结合,提升其基因内部甲基化水平,进而上调LINE-1的表达水平。利用表达载体增加细胞内DNMT3a的表达水平,可显著上调LINE-1基因内部的甲基化及基因的表达水平,而下调DNMT3a的表达可有效抑制LINE-1表达。上述研究结果表明,DNMT3a介导的基因非启动子区甲基化在药物诱导的LINE-1异常激活中发挥重要作用,为认识LINE-1在乳腺癌化疗耐药性形成过程中异常激活的机制提供了新思路。