喂养不耐受早产儿肠道菌群的研究

目的采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)技术从微生物生态学的角度分析比较喂养不耐受(feeding intolerance,FI)早产儿与对照组早产儿肠道菌群的变化。方法以2016年3月至2017年3月于我院儿科新生儿病房确诊的FI早产儿为FI组。选择与FI组胎龄、日龄、出生体重相匹配的非FI早产儿作为对照组。采集出现FI的早产儿和同时段健康早产儿的粪便标本,进行Real-time PCR表达谱分析,比较两组早产儿肠道菌群的差异。结果临床资料统计分析显示FI组和对照组在性别构成、胎龄、出生体重、生产方式和喂养方式方面差异无统计学意义。Real-time PCR表达谱分析结果显示FI组早产儿肠道大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌明显高于对照组,粪肠球菌、乳杆菌和双歧杆菌明显低于对照组。结论肠道菌群结构的改变参与早产儿FI的发生,该研究结果从微生物学角度为临床儿科医师认识早产儿FI的发生机制和治疗提供了新的思路。     

老年上呼吸道微生态研究

目的通过研究健康老年机体上呼吸道微生态菌群构成,了解老龄人群上呼吸道优势菌群种类及数量,为从微生态学角度预防呼吸道感染的发生提供参考。方法自沈阳市选取年龄为65～70岁健康老人为研究对象,无菌咽拭法采集咽后壁粘膜表面标本,对菌群进行定量分析、定性鉴定。结果老年人群咽后壁需氧菌群与厌氧菌群数量之比为2.65∶1,检出率较高的需氧菌及厌氧菌包括唾液链球菌、口腔链球菌、缓症链球菌、微黄奈瑟菌、灰色奈瑟菌、麻疹孪生球菌等,检出率较高的菌构成比也较高。结论健康老年人群中检出率和构成比都较高的需氧菌和厌氧菌共同构成老年人上呼吸道口咽部优势菌群,在维持呼吸系统微生态平衡中起重要作用,可作为上呼吸道微生态学研究的重要指标菌。     

不同“肠型”人群肠道菌群结构

目的为了发挥饮食对肠道菌群的有益调节作用,预防代谢性疾病的发生,特研究不同肠型人群肠道微生物组成和对饮食的代谢情况。方法随机招募志愿者(n=102),排除病患和近1个月内有抗生素药物史的志愿者。剩余志愿者(n=70)收集晨便、晨尿样本,通过Illumina HiSeq 2500测序仪对粪便样本中肠道菌群V3-V4区进行16S rDNA测序,分析肠道菌群的结构;通过高分辨质谱仪开展尿液代谢组分析。结果通过肠道菌群可将志愿者分成2种肠型:A和B,A肠型志愿者F/B值(肠道优势菌厚壁菌门与拟杆菌门丰度比例)低于B肠型。A肠型志愿者结肠拟杆菌科、韦荣球菌科、肠杆菌科、消化链球菌科的丰度高于B肠型,而瘤胃菌科、普雷沃菌科、紫单胞菌科和理研菌科的丰度低于B肠型。结论结果表明研究人群肠道中至少存在着2种肠型,在菌群结构上具有显著的差异。     

1 067例不同年龄及地域人群肠道菌群特征

目的探索不同人群在不同年龄阶段的菌群结构特点,了解环境因素对肠道菌群组成及发展的影响。方法收集65例中国健康儿童粪便样本并进行16S rRNA检测,同时从已发表文献中获取来自亚洲、非洲、欧洲、北美洲及南美洲国家的1 002例健康人群肠道菌群数据,分析来自不同年龄阶段健康人群肠道菌群的特征。结果 3岁以下全球各地儿童肠道菌群的种类较为一致:拟杆菌属和双歧杆菌属在儿童肠道菌群中占据主导地位,且它们在免疫调节上有重要作用。3岁以上健康人群的肠道菌群则展示出了地域性特征:亚洲健康人群的肠道代表菌属为考拉杆菌属和巨单胞菌属,非洲健康人群的肠道代表菌属为粪杆菌属,欧洲健康人群的肠道代表菌属也是粪杆菌属,北美洲健康人群的肠道代表菌属为拟杆菌属,南美洲健康人群的肠道代表菌属为普氏菌属。另外,经济较发达的欧洲及北美洲健康人群的肠道菌群多样性显著高于其他经济较落后地区。结论本研究加深了对不同地域人群肠道菌群特点以及它们随年龄增长而发展变化的认识。     

肝细胞癌患者外周血HSF1 基因表达的检测及应用价值

目的:建立检测HSF1 mRNA的real-time PCR的方法,了解肝细胞癌患者外周血中HSF1的表达水平及其与各临床病理特征之间的关系。方法:利用real-time PCR的方法检测20例肝细胞癌患者及20例正常人群外周血中HSF1 mRNA的表达量。结果:肝细胞癌患者外周血中的HSF1 mRNA表达量显著高于正常人群(P<0.05);肝细胞癌患者外周血中HSF1 mRNA的表达水平在不同性别、肿瘤大小、门静脉侵犯情况、HbsAg水平及AFP水平的患者中的差异无统计学意义(P>0.05);在不同病理分化程度、TNM分期的患者中的差异有统计学意义(P<0.05)。结论:real-time PCR技术可以成功检测外周血中HSF1 mRNA的表达量,HSF1可能与肝细胞癌的发生发展密切相关。     

高通量 16S rRNA 标签测序法比较人与不同动物肠道微生物组多样性

收集人、大猪、小猪、大鼠、小鼠以及鸡五个不同个体的粪便样品 , 每个个体取两个平行样 , 提取总 DNA;PCR 扩增 , 获得 16S rRNA V6 标签片段 ; Illumina 测序 ; 经 BIPES 以及 QIIME 分析并比较菌群结构及多样性。研究结果发现 , 不同物种之间肠道菌群差异较大。五类物种肠道菌群均以厚壁菌门、拟杆菌门、以及变形菌门为主 , 但鸡的厚壁菌门显著减少 , 而变形菌门显著增加。从α多样性角度来看 , 猪肠道菌群种属丰富度及 Shannon 指数均显著高于人及鸡肠道菌群。从β多样性角度 , 尽管不同人之间的肠道菌群相似度较低 , 但不同物种之间相比较 , 小猪与大鼠肠道菌群与人相似性高于小鼠和鸡肠道菌群。与人类相比 , 小猪的肠道微生物组最相近 , 而鸡的肠道菌群相似度最低。     

赫哲族和汉族健康人群肠道细菌群落分析

目的对汉族和赫哲族健康人群肠道菌群进行研究,探讨遗传背景和饮食习惯对肠道菌群多样性以及组成的影响。方法以佳木斯市区20例健康汉族人群、佳木斯街津口赫哲族聚居地的20例健康赫哲族志愿者及20例健康汉族人群粪便样本为研究对象,应用基于16S rDNA V3-V4可变区的高通量测序技术测定肠道菌群多样性以及核心菌群的组成。结果获得测序序列3 080 422条,归类于2 029个OTUs。街津口地区的赫哲族人群肠道菌群多样性最丰富,而佳木斯地区的汉族人群肠道菌群多样性最低;基于bray_curtis_permanova Beta多样性分析发现,样本在组间微生物组成结构上差异具有统计学意义(F=1.481 3、2.033 5、1.622 2,P=0.045 0、0.009 0、0.025 5);属水平上,佳木斯地区的汉族人群的优势菌属为萨特菌属(Sutterella),街津口赫哲族聚居地的汉族人群的优势菌属为瘤胃球菌属(Ruminococcus),而赫哲族的优势菌属为芽殖菌属(Gemmiger)。结论赫哲族和汉族健康人群肠道菌群在多样性和菌群结构组成上存在显著差异,这种差异与遗传背景和饮食习惯有着密切联系。     

千金子制霜前后提取物对4类肠道菌影响的体外研究

目的研究并对比千金子制霜前后提取物对正常SD大鼠肠道菌群的影响。方法采用酶标比浊法,体外不同浓度千金子制霜前后提取物作用下的细菌生长曲线来研究制霜对长双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、大肠埃希菌和粪肠球菌4种代表性肠道菌的作用,分析其对4种肠道菌生长的影响。结果千金子生品提取物和霜品提取物对4种肠道菌均有抑制作用,且随着给药浓度的增大,抑制作用增强。相同生药量下,千金子生品提取物对4种肠道菌的抑制作用均大于霜品提取物,且低剂量下会使条件致病菌粪肠球菌和大肠埃希菌的数量减少。推测千金子制霜前后均会一定程度影响肠道菌群的稳态,制霜后对4种肠道菌的影响弱于生品,与千金子制霜后泻下作用缓和的研究结果相吻合。结论从肠道微生态角度为切入点,考察千金子制霜前后提取物对肠道菌群数量和生长情况的干预作用,可初步揭示千金子制霜与肠道菌群数量和结构变化可能存在的相关性,为深入揭示千金子制霜减毒微生物学机制奠定基础。     

基于实时定量PCR技术的育龄期细菌性阴道病患者 阴道菌群结构分析及其临床应用

摘要：目的 探讨育龄期女性细菌性阴道病（bacterial vaginosis,BV）患者阴道优势菌群变化及其与临床指标的相关性。方法 选择本院门诊确诊的育龄期BV患者35例和同期入院体检的健康体检女性37例,无菌拭子采集阴道中段壁分泌物,提取细菌基因组DNA,采用实时定量PCR技术（real-time quantitative PCR,qPCR）进行阴道优势细菌检测,并进行其与临床指标如阴道pH和Nugent评分相关性分析。结果 乳杆菌属细菌及其种水平的细菌如惰性乳杆菌、卷曲乳杆菌、詹氏乳杆菌等在BV患者中均显著下降,BV相关阴道致病细菌如加德纳菌属、奇异菌属、埃格特菌属、巨型球菌I型菌属、纤毛菌属和普氏菌属显著升高（P<0.05）。阴道致病菌群与阴道pH和Nugent评分呈显著正相关,而阴道卷曲乳杆菌和惰性乳杆菌与其呈负相关。结论 育龄期BV患者阴道优势菌群显著失衡,并与阴道pH和Nugent评分显著相关,提示阴道优势菌群改变参与BV发生发展。     

HBV相关肝癌组织中微生物宏蛋白质组特征分析

越来越多的证据表明微生物菌群和肝脏疾病有着密切联系,但是HBV相关肝细胞癌(hepatitis B virus(HBV)-related hepatocellular carcinoma,HCC)人群肝脏组织内的微生物菌群种类和数量仍不清楚.本研究对来自165个HCC人群的肝癌组织和对应癌旁组织的质谱数据进行宏蛋白质组学层面的鉴定.结果显示,在肝癌组织中,绿弯菌门(Chloroflexi)、芽单胞菌门(Gemmatimonadetes)、黄单胞菌目(Xanthomonadales)、军团菌目(Legionellales)、颤藻目(Oscillatoriales)等微生物菌群数量出现显著上调.通过将鉴定的微生物蛋白质比对到COG(Clusters of Orthologous Groups)数据库来进行注释,本研究还发现了许多在肝癌组织中高表达的微生物功能分类.对比健康人群的肝脏组织的宏蛋白质组鉴定结果,本研究发现在HCC人群的肝脏组织中,变形菌门(Proteobacteria)的含量降低,厚壁菌门(Firmicutes)的含量升高.这项研究可以对肝脏微生物菌群的失调与HCC发生之间的研究提供更多启发.     

Determination of stoichiometry of radioiodination of proteins

A sensitive method for the detection of small quantities of hydrophobic antioxidant free radical scavengers such as butylatedhydroxytoluene (BHT) and butylatedhydroxyanisole (BHA) in aqueous samples is described. The procedure involves extraction of the hydrophobic free radical scavenger into an organic solvent phase, followed by the subsequent reaction of an aliquot of this extract with the stable cation radical tris(p-bromophenyl)amminium hexachloroantimonate (TBACA). In experiments with BHT and BHA, the loss of TBACA absorbance at 730 nm was found to be linearly proportional to the amount of antioxidant added, with quantities of BHT as small as 200 pmol being easily detectable. In aqueous suspensions of dimyristoylphosphatidylcholine vesicles, assays of the aqueous BHT concentration showed that BHT partitioned strongly into the membrane phase, achieving very high BHT/phospholipid ratios. For a given concentration of BHT, partitioning into the membrane phase was greater in large, multilamellar liposomes than in either small, single-walled vesicles or in purified rat brain synaptic vesicle membranes. Direct assay of BHT and BHA in phospholipid membranes, however, was complicated by a nonspecific interaction between TBACA and the phospholipid.