用高效液相色谱法测二酪氨酸、磷酸酪氨酸、磷酸丝氨酸和磷酸苏氨酸

<正> 4’—二甲氨基偶氮苯—4磺酰氯化物,是一个发色剂,通常用它测氨基酸在P级。本文研究了单柱反相高效液相色谱系统,该系统描述了几种变形氨基酸的丹磺酰氯衍生物的分离和分析。高衍生的G_8(22%和31%)柱来自phenomenex公司,在pH8.1时分离二酪氨酸;磷酸代氨基酸(磷酸丝氨酸,磷酸苏氨酸和磷酸酪氨酸)和正常存在     

固相E.Coli细胞管在L-苏氨酸分析中的应用

具有增进生物降解L-苏氨酸脱氨酶水平丙酮干燥细胞,容易而牢固地用乳胶型—光-交联树脂前聚合物固定于玻璃管内壁。用此微生物细胞管的连续流动系统,证明适合于分析发酵液中的L-苏氨酸或L-丝氨酸,并具有快速(每次分析<9分钟)、底物专-性极好(专-L-苏氨酸或L-丝氨酸)以及经重复分析(至少60次)还非常稳定等特点。本文讨论应用具有L-苏氨酸脱氨酶性的大肠杆菌细胞管对L-苏氨酸进行分光光度计分析。     

茶叶中茶氨酸及其它游离氨基酸的定量测定

本文报道了在日立835—50型氨基酸分析仪上,采用2.6×250mm 分离柱和标准分析用Na~+盐缓中液,自设120分钟分析程序,一次完成茶叶中茶氨酸及其它游离氨基酸的测定。该方法重现性好,分辨率高,茶氨酸(约占60%)并相邻氨基酸的分辨率均在95%以上,取得令人满意的分析结果。茶叶中游离氨基酸的构成和含量是决定茶叶品质优劣的重要因素之一,其中茶氨酸又是影响较大的重要非蛋白氨基酸。随着氨基酸分析仪的广泛使用,有关分析方法也在不断改进和发展。一般来说,植物中的游离氨基酸需采用生体液分析法进行测定,但生体分析时间长达240分钟,Li~+盐缓冲液价格昂贵,操作条件也较复杂,且不易与标准分析法简便地转换,使应用受到一定限制。若采用2.6×150mm 分离柱来分析,则由于茶氨酸的保留时间与较难分离的酸性氨基酸的保留时间十分接近,含量又高。对其出峰附近的其它氨基酸峰复盖严重。分离困难,不易达到理想的分离效果。为了既便分析操作,降低费用,又能满足定量分析的要求,我们对本文所述的方法进行了初步研究。现扼要介绍如下。     

高产谷氨酸菌种转产赖氨酸的定向选育

根据赖氮酸生物合成的代谢调控原理,以谷氨酸高产菌株—黄色短杆菌FM84—415为出发菌,用亚硝基胍(NTG)进行诱变,通过定向筛选获得FML—8412菌株。它具有苏氨酸和高丝氨酸双重营养缺陷,对S—2—氯基乙基—半胱氯酸(AEC)和O—甲基—L—苏氨酸(MT)有抗性。摇瓶发酵的初步试验表明它在以糖质为主的培养基中产赖氨酸盐酸盐(L—lys.HCl)达6.43％,糖酸转化率为44.9％。本文报导FML—8412菌株的选育过程。     

低鱼粉饲料中添加苏氨酸对三倍体虹鳟抗氧化能力、消化生理及肠道炎症因子基因表达的影响

研究低鱼粉饲料中不同水平苏氨酸对三倍体虹鳟(Oncorhynchus mykiss)生长、抗氧化能力、消化生理及肠道炎症因子基因表达的影响, 以初始体质量(18.42±0.20) g的三倍体虹鳟为研究对象, 在室内200 L流水水族箱中进行摄食生长试验56d。在基础饲料中添加L-苏氨酸, 配制苏氨酸水平分别为0.45%(对照)、0.76%、1.09%、1.29%和1.64%的5种等氮等能饲料。将450尾三倍体虹鳟随机分为5组, 每组处理3个重复, 每个重复30尾鱼。结果表明, 当添加量为1.09%、1.29%和1.64%时, 血清超氧化物歧化酶(SOD)活力显著提高, 同时显著降低了丙二醛(MDA)的含量(P<0.05), 过氧化氢酶(CAT)在1.29%组含量最高, 相比对照组差异显著(P<0.05)。在饲料中添加苏氨酸(0.76%—1.64%)时, 肠道脂肪酶(LPS)和胰蛋白酶的消化酶活性显著高于对照组(P<0.05), 但随着饲料苏氨酸水平达到1.64%时, 消化酶活性有所降低。1.09%和1.65%组的肠道组织形态最佳, 绒毛发达, 排列整齐, 无融合和脱落现象。苏氨酸水平对肠道炎症因子IL-2、IL-8、IL-10、IgM、TNF-α和PepT1都有显著影响(P<0.05), 随着苏氨酸水平的增加, IL-2、IgM和PepT1呈现先升高后降低的变化趋势, 在1.29%和1.09%组的表达量达到最高; IL-8呈逐渐升高趋势; 而IL-10和TNF-α呈下降的变化趋势。研究结果表明, 在低鱼粉饲料(15%)中添加适量水平的苏氨酸, 对提高三倍体虹鳟幼鱼生长、消化酶活性、促进肠道形态结构发育和增强免疫具有积极的作用。     

大肠杆菌TdcC、SstT和LIV-1系统缺失对胞外L-苏氨酸积累的影响

【目的】比较分析苏氨酸吸收系统TdcC、SstT和LIV-1缺失对大肠杆菌吸收和积累胞外苏氨酸的影响。【方法】从菌株E.coli W3110出发,敲除tdcC、sst T和liv J基因,构建Tdc C、SstT和LIV-1系统单缺失和多缺失菌株,将过量表达苏氨酸操纵子基因的重组质粒pKKthr AC1034TBC分别转入原始菌和重组菌,考察各菌株吸收和积累胞外苏氨酸的能力。【结果】敲除tdc C和sst T基因的重组菌T04的苏氨酸吸收能力比原始菌W3110降低了43.28%,T04(pKKthr AC1034TBC)胞外苏氨酸积累量最高达到1.09 g/L,比对照菌W3110(pKKthr AC1034TBC)高出172.5%。敲除tdcC、sstT和livJ基因的重组菌T07的苏氨酸吸收能力比T04降低了12.97%,然而T07(pKKthr AC1034TBC)胞外苏氨酸积累量最大为0.63 g/L,与T04(pKKthr AC1034TBC)相比降低了42.2%。【结论】阻断Tdc C和Sst T系统,能有效降低大肠杆菌吸收苏氨酸的能力,提高苏氨酸的胞外积累量。阻断LIV-1系统,虽然能减少大肠杆菌对苏氨酸的吸收,却不利于菌株积累胞外苏氨酸。     

同步辐射在D-甘油醛-3-磷酸脱氢酶及其系列衍生物高分辨率衍射数据收集中的应用

用气相扩散法培养出 P.Versicolor龙虾肌HOLO-D-甘油醛-3-磷酸脱氢酶(HOLO一GAPDH)、149位巯基羧甲基化的衍生物(CM—GAPDH)和紫外光激发生成的新NAD荧光衍生物(IRR—GAPDH)的晶体.用同步辐射强x光光源一磷光贮屏一Weissenberg照相机系统,选择a+b或a-b晶轴为旋转轴;收集了酶及其衍生物1.8A分辨率的三套衍射数据;用WEIS程序进行了数据处理.三套数据的Rmerge分别为4.93%、6.22%和5.77%.用CAD程序对三套数据进行了比较分析.     

同步辐射在D-甘油醛-3-磷酸脱氢酶及其系列衍生物高分辨率衍射数据收集中的应用

用气相扩散法培养出 P.Versicolor龙虾肌HOLO-D-甘油醛-3-磷酸脱氢酶(HOLO一GAPDH)、149位巯基羧甲基化的衍生物(CM—GAPDH)和紫外光激发生成的新NAD荧光衍生物(IRR—GAPDH)的晶体.用同步辐射强x光光源一磷光贮屏一Weissenberg照相机系统,选择a+b或a-b晶轴为旋转轴;收集了酶及其衍生物1.8A分辨率的三套衍射数据;用WEIS程序进行了数据处理.三套数据的Rmerge分别为4.93%、6.22%和5.77%.用CAD程序对三套数据进行了比较分析.     

合成苏氨酸的研究（V）─DL－别苏氨酸的光学拆分

研究了用优先结晶法对ＤＬ－别苏氨酸进行光学活性拆分的问题,在相图基础上选取适当的过饱和度,即配制成原始拆分母液。作为晶种,既可用光活性别苏氨酸,也可用光活性苏氨酸,可用对映的一对光活性晶种,还介绍用单一晶种的拆分方法,提出了Ｌ－别苏氨酸与Ｌ－苏氨酸、Ｄ－别苏氨酸与Ｄ－苏氨酸为“胶着对”,Ｌ－别苏氨酸与Ｄ－苏氨酸,Ｌ－别苏氨酸与Ｄ－苏氨酸为“离散对”的观点。     

合成苏氨酸的研究（Ⅴ）—DL—别苏氨酸的光学拆分

研究了用优先结晶法对ＤＬ－别苏氨酸进行光学活性拆分的问题，在相图基础上选取适当的过饱和度，即配制成原始拆分母液。作为品种，既可用光活性别苏氨酸，也可用光活性苏氨酸。可用对映的一对光活性晶种，还介绍用单一晶种的拆分方法，提出了Ｌ－别苏氨酸 Ｌ－苏氨酸，Ｄ－别苏氨酸与Ｄ－苏氨酸为“胶着对”Ｌ－别苏氨酸与Ｄ－苏氨酸，Ｌ－别苏氨酸与Ｄ－苏氨酸为“离散对”的观点。     

合成苏氨酸的研究(Ⅰ)

<正> 苏氨酸(Threonine)是一种必需氨基酸,因此在氨基酸输液、综合氨基酸制剂、营养强化食品以及饲料添加剂等方面具有重要意义。此外,苏氨酸还有抗脂肪肝等药用效能,又是制造一类高效低过敏广谱抗生素—单酰胺菌素—的原料,很受发达国家的青睐。     

猪毛中氨基酸含量测定

<正> 毛发角蛋白中氨基酸含量分析早已有报导,方法是脱脂毛发用6NHCl,在110℃下,按照各个氨基酸最佳水解时间,水解24—72小时。在酸水解时遭到部分破坏的氨基酸,如胱氨酸、酪氨酸、苏氨酸、丝氨酸等,则采用外推法分别计算出时间为零时的各个氨基酸含量。但是目前工业生产胱氨酸,所用原料猪毛中含有10—15%猪皮杂质,其水解条件是依     

扩大重组苏氨酸的制造能力

法国Eurolysine公司(巴黎)1991年11月宣布增强苏氨酸的发酵生产设备,将年产量扩大到2200吨。该公司从1991年1月作为饲料添加物首先在EC(除北欧之外)销售了重组苏氨酸。现在,日本和美国是用非重组短杆菌制造的,向EC销售是重组大肠杆菌生产的。各自的生产能力为20∶80。用重组大肠杆菌生产的苏氨酸生产效率高,且副产物也少,所以如果各国的政策允许的话,逐渐转换成重组过程。     

10CM短柱快速分离3-MH的实验研究

本研究在改进后短程序基础上,对氨基酸分离柱进行了改进。改进后的分离柱长为10cm。比原来20cm长柱分离3—MH的时间缩短了近1/2。实验所得的(回收率为97.59%,分离度0.89±0.02。变异系数1.17)这些指标较国外用其它方法所得的结果有良好的相关性。多次测定结果说明长柱与短柱比较无明显差异。证明了短柱对3—MH含量无影响。这一改进所建立的方法大大地缩短了样品的分析时间,节约了大量进口试剂,开展这方面的工作将有利益提高严重烧伤、创伤后蛋白质代谢和营养学等方面的研究水平。     

应用指示剂提高生长谱法测定发酵液中L—苏氨酸含量的准确性

在应用生长谱法测定发酵液中L—苏氨酸含量时,增强培养基上指示菌生长圈的清淅度,提高检测的准确性,是苏氨酸发酵上的一个重要方面。我们在测定培养基中添加一定量的溴甲酚紫,结晶紫或两者的混合物,生长圈清淅可见。在L—苏氨酸一定浓度范周内,生长圈的大小与L—苏氨酸的含量成线性关系。与传统纸层析测定法相比有更高的准确性。本文就添加指示剂的浓度、培养条件、指示菌浓度等因素进行了叙述。     

单柱法分离L-缬氨酸的工艺研究

本文用离子交换树脂从发酵液中分离中性(支链)氨基酸——L-缬氨酸,进行了一些探讨。将双柱串联分离(Ⅰ—号工艺)改为单柱一次分离(Ⅱ—号工艺) 本工艺的小试与放大试验(65L柱)的数据基本吻合,均达到了:离交周期<30小时。单斑收率约90%,具有降低成本、提高收率,减少投资等优点。还介绍了,以线性梯度洗脱为依据的Ⅲ—号工艺,具有单斑收率也较高,更快速的优点。     

紫外线诱变原生质体选育苏氨酸高产菌株

以黄色短杆菌T6-13的苏氨酸产生菌GSR8-25为出发菌株,利用溶菌酶制备其原生质体后进行紫外线(UV)诱变处理,从再生株中筛选出苏氨酸高产菌株。经多次连续诱变处理得到一苏氨酸高产菌株25-20,在含10%葡萄糖的培养基中摇瓶发酵60小时可积累苏氨酸19.5mg/ml。分离纯化后得菌株25-202,其苏氨酸产量可达21.5mg/ml,比出发菌株提高43.3%。     

HPLCMS/MS法检测中华鳖中磺胺类药物残留

建立了一种液相色谱-电喷雾串联质谱同时测定中华鳖中21种磺胺类药物残留的方法。均质样品先后用乙腈、二氯甲烷提取,合并提取液,取部分提取液经氮吹浓缩。残渣用1mL流动相溶解,饱和正己烷脱脂净化。采用ZORBAX Ec lipse XDB-C8色谱柱,以含0.2%乙酸的水溶液和甲醇（7∶3）为流动相,梯度洗脱,在电喷雾-多反应监测离子模式下,进行定量定性分析。方法的定量限为4μg/kg;以标准加入法计算回收率,在4—40μg/kg添加范围内,平均回收率为75.2%—104%;相对标准偏差为0.16%—9.98%。     

日立835-50型氨基酸自动分析仪蛋白质水解液分析新方法

本文报道了在日立835—50型氨基酸自动分析仪上,采用4×150mm 柱代替2.6×150mm 柱进行蛋白质水解液分析的方法。本法与仪器说明书提供的标准分析相比,具有分离率高,费用低等优点。各氨基酸峰位复现性和峰面积复现性均优于仪器的规定指标。日立835—50型氨基酸自动分析仪是目前应用广泛,性能较好的氨基酸分析装置。但仪器说明书提供的标准分析(蛋白质水解液分析)法分离率较低,若采用高分离平方法进行分析则所需时间又太长。为了能适应某些工作的要求,需研究分析速度快又具有较高分离率的方法。参照日立公司有关技术资料,我们探讨了采用4×150mm 柱代替2.6×150mm 柱,分析周期为62分钟的蛋白质水解液分析方法,现简要报道如下。     

基于代谢计量分析的L-苏氨酸发酵过程优化

目的:以L-苏氨酸生产菌株TRFC为供试菌株,基于代谢计量分析对发酵过程中底物葡萄糖、蔗糖的影响做理论分析并对发酵过程进行优化.方法:利用代谢计量学方法对L-苏氨酸生产菌株代谢途径进行分析,以碳源优化及5、10 L发酵实验进行过程优化.结果与结论:发酵过程中,生物量及苏氨酸的产率取决于由葡萄糖转化的生物量占总量的摩尔比率,及转化的苏氨酸占总量的摩尔比率,最大理论值分别为24.1%、17.89%;种子及发酵培养基中葡萄糖与蔗糖的添加比例分别为2:8、8:2时得到最优值,L-苏氨酸最终产量为70 g/L.