两种亨廷顿蛋白相关蛋白1异构体—HAP1A和HAP1B在大鼠脊髓灰质内的分布特征

目的明确2种亨廷顿蛋白相关蛋白1(huntingtin-associated protein 1,HAP1)异构体—HAP1A和HAP1B在大鼠脊髓灰质内的分布特征。方法提取重组表达的谷胱甘肽S-转移酶(GST)-HAP1AC末端融合蛋白和GST-HAP1BC末端融合蛋白,免疫兔和豚鼠制备分别抗HAP1A和HAP1B特异性多克隆抗体,并采用免疫印迹技术对其特异性和效价进行鉴定和检测;用免疫组织化学技术检测HAP1A和HAP1B在大鼠脊髓灰质内的分布和定位特征。结果成功制备了分别特异性识别HAP1A和HAP1B的高效价多克隆抗体,应用这些抗体进行的免疫组织化学ABC法检测显示,HAP1A与HAP1B在大鼠脊髓灰质内的分布区域相似,二者均在大鼠脊髓灰质RexedⅠ-Ⅹ层表达,在RexedⅠ、Ⅱ层表达最强,中央管周围灰质(RexedX层)其次,在RexedⅢ-Ⅵ层表达水平较低,在脊髓前角(RexedⅦ-Ⅸ层)只有极微弱的或无阳性表达。HAP1A免疫反应产物主要定位在Stigmoid小体,在神经元胞质和近端突起内只有极少的弥散反应产物;HAP1B免疫反应性较强,其免疫反应产物弥散、均匀分布在神经元核周质和近端突起内,也定位在Stigmoid小体上。免疫荧光双重标记显示,约有80%的Stigmoid小体既表达HAP1A也表达HAP1B,其余的Stigmoid小体仅表达HAP1A。结论 HAP1A和HAP1B蛋白在大鼠脊髓灰质内具有相同的区域分布模式,但在神经元内的定位具有明显区别,提示二者可能具有不同的功能。     

亨廷顿蛋白相关蛋白1在成年大鼠脊髓中的分布

目的观察亨廷顿蛋白相关蛋白1(huntingtin-associated protein 1, HAP1)在成年大鼠脊髓中的分布特点.方法采用免疫组织化学ABC法和免疫印迹(Western blotting)方法.结果免疫组织化学结果显示,在成年大鼠脊髓中,以背角灰质浅层(Rexed Ⅰ,Ⅱ层)的HAP1免疫反应性最强,阳性细胞最密集,免疫反应产物除分布在胞体外,还大量弥散分布于胞体间的神经毡内;背角深层有部分HAP1免疫反应阳性细胞呈散在分布,中央管周围灰质(Rexed X)内阳性胞体密度和免疫反应性强度仅次于后角浅层,而在脊髓腹角,偶见HAP1免疫反应阳性神经元.此外, Western blotting分析显示,脊髓背角内HAP1表达水平明显高于脊髓前角.结论 HAP1主要分布于大鼠脊髓背角灰质浅层和中央管周围灰质神经元内,提示其可能与痛觉信息一级传入和/或调控有关.     

禁食促进下丘脑中摄食相关核团HAP1的表达

目的探讨下丘脑中的亨廷顿蛋白相关蛋白1（huntingtin-associated protein 1,HAP1）是否与摄食有关。方法免疫印迹法检测禁食对大鼠下丘脑HAP1表达的影响,RT-PCR法检测禁食对大鼠下丘脑HAP1 mRNA表达的影响,免疫组织化学染色法观察禁食对下丘脑与摄食调节有关核团内HAP1表达的影响。结果免疫印记分析和RT-PCR检测显示,与正常进食的大鼠比较,禁食1d、2d、3d、4d后大鼠下丘脑HAP1表达逐渐增多;免疫组织化学研究表明,弓状核、背内侧核、外侧下丘脑区内HAP1的表达在禁食后显著增多,而禁食对腹内侧核HAP1的表达无明显影响。结论下丘脑中的HAP1与摄食有关,可能参与了食欲的调节。     

慢性复合应激对大鼠胰腺HAP1表达的影响

目的探讨慢性复合应激大鼠胰腺内胰岛内分泌细胞HAP1表达的变化及其意义。方法36只大鼠随机分为两组:慢性复合应激组和正常对照组。应激组动物无规律交替暴露于垂直旋转、睡眠剥夺、捆绑(6h/d)和夜间光照等慢性复合性应激,共6周;实验结束后,采用免疫组织化学和Western-blot等方法检测两组大鼠胰腺胰岛内分泌细胞内HAP1蛋白表达的变化。结果HAP1在大鼠胰腺内选择性表达于胰岛内分泌细胞中。与对照组相比,慢性复合应激组大鼠胰腺HAP1的表达明显增强(P<0.05)。结论6周慢性复合性应激可使大鼠胰腺中胰岛内分泌细胞的HAP1表达加强,提示HAP-1在慢性复合应激促进胰腺内分泌功能中可能发挥一定作用。     

脑红蛋白在家兔视网膜中的分布

目的探讨脑红蛋白(NGB)在家兔视网膜的分布特征。方法选择健康成年家兔5只,利用免疫组织化学染色SP法,观察NGB在家兔视网膜中的分布情况。结果 NGB在家兔视网膜的视神经纤维层、节细胞层、内网状层、外网状层、光感受器内节段和色素上皮层中有强阳性表达,在视网膜的内核层有弱阳性表达,在视网膜的外核层和光感受器外节段中未见有阳性表达,内界膜、外界膜和视神经中亦发现有NGB阳性表达。家兔视网膜NGB阳性表达的细胞类型主要有节细胞、双极细胞和光感受器细胞,其中节细胞的阳性表达定位于细胞质,胞核中未见表达。结论除外核层和光感受器外节段外,NGB在家兔视网膜其它各层中均有表达,提示NGB在维持视网膜氧代谢平衡中发挥着重要作用。     

胃溃疡对大鼠胃中HAP1表达的影响

建立冰乙酸性大鼠胃溃疡模型,采用ABC法进行免疫组织化学染色,观察并探讨胃溃疡对胃壁中HAP1(huntingtin as-soc iated protein 1,HAP1)表达的影响。结果溃疡组大鼠胃壁中HAP1阳性细胞数目及光密度与正常进食的大鼠相比显著增多。     

秦岭滑蜥视网膜年龄相关的显微结构特征和胶质纤维酸性蛋白免疫组织化学定位

光学显微镜下观察了秦岭滑蜥Scincella tsinlingensis视网膜年龄相关的显微结构特征,并对胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组织化学定位及表达强度进行了统计分析。结果显示:秦岭滑蜥视网膜由内至外共分为10层,与昼行性蜥蜴类视网膜结构特征一致。亚成体和成体视网膜总厚度较幼体明显增加,但三者神经节细胞层、外界膜以及视杆视锥层厚度之间无明显差异。不同年龄组视网膜细胞核层数无差异:外核层1~2层,神经节细胞层3~4层,内核层6~8层。视网膜GFAP免疫阳性主要定位于内界膜和神经纤维层,且神经纤维层阳性最强。GFAP阳性表达呈现成体最强、幼体较强、亚成体最弱的年龄相关性,这可能与视网膜胚后发育中的生理功能调节相关。     

大鼠肝脏水通道蛋白7的表达

目的研究水通道蛋白7(AQP7)在大鼠肝脏中的表达和分布。方法选用成年健康SD大鼠,采用免疫组织化学的方法对肝脏中AQP7蛋白的表达进行定位检测。结果AQP7阳性免疫反应产物集中位于大鼠肝脏毛细胆管面的肝细胞质膜上,肝细胞的基膜面和血窦面未见阳性免疫反应产物。结论AQP7在肝脏中的表达及其空间上的分布提示其可能参与胆汁的分泌。     

强光照和全黑暗条件下荒漠沙蜥视网膜内GAP-43表达的免疫组织化学

采用免疫组织化学技术研究了在强光照和全黑暗条件下荒漠沙蜥(Phrynocephalus prezewalskic)视网膜内生长相关蛋白GAP-43的表达变化。结果表明,在正常光照条件下,视网膜内GAP-43阳性表达部位主要存在于内网层;强光照条件下,GAP-43免疫染色部位主要出现在内网层、节细胞层和内核层的部分细胞核。在全黑暗条件下,在视纤维层和内网层呈阳性染色;提示视网膜在不同环境条件下GAP-43的不同定位,可能与其在相应的环境下参与不同的视觉功能有关。     

大鼠甲状腺促性腺激素释放激素受体的免疫组织化学及原位杂交研究

目的 探讨大鼠甲状腺中是否存在促性腺激素释放激素受体（GnRH-R)及其细胞定位,方法 收集15例雄性SD大鼠甲状腺,分别制成石蜡切片和冰冻切片,采用免疫组织化学ABC法和原位杂交技术。确定GnRH-R在其中的表达与定位。结果 大鼠甲状腺中,GnRH-R呈较强的免疫反应阳性,阳性物质分布在胞持,胞核呈阴性,原位杂交也检测到较强的GnRH-RmRNA阳性杂交信号,亦分布在胞质,胞核未见表达,结论 大鼠甲状腺可能自身合成GnRH-R。由此推断GnRH可能参与大鼠甲总而言之 腺功能的调节。     

HAP-1在慢性复合应激大鼠肾上腺的表达

目的探讨慢性复合应激大鼠肾上腺髓质细胞亨廷顿蛋白相关蛋白1(Huntingtin-associated protein 1,HAP-1)表达的变化及其意义。方法36只大鼠随机分为两组:慢性复合应激组和对照组。应激组动物进行6周的垂直旋转、睡眠剥夺、捆绑(6h/d)和夜间光照等慢性复合性应激试验;实验结束后,所有动物采用免疫组织化学、Western-blot以及RT-PCR等方法检测肾上腺髓质细胞内HAP-1蛋白和mRNA水平的变化。结果与对照组相比,慢性复合应激组的大鼠肾上腺髓质中HAP-1的表达明显增强(P<0.05),HAP-1 mRNA水平明显升高(P<0.05)。结论6周慢性复合性应激大鼠HAP-1在肾上腺髓质区的表达加强,mRNA水平提高。提示HAP-1在慢性复合应激促进肾上腺功能中可能发挥一定作用。     

吡格列酮治疗STZ诱导糖尿病大鼠视网膜中TSP-1的变化

观察吡格列酮在治疗STZ诱导糖尿病大鼠视网膜中血小板反应素Ⅰ(thmmbospondin-1,TSP-1)的变化,探讨噻唑烷二酮类药物在糖尿病视网膜病变中的影响和可能作用机制。用链脲佐菌素(STZ)腹腔注射建立大鼠糖尿病模型,随机分正常对照组(C组),糖尿病安慰剂组(D组)和糖尿病吡格列酮治疗组(DP组),8周后取视网膜组织行免疫组织化学、RT-PCR半定量检测TSP- 1mRNA水平的变化,结果显示在糖尿病早期视网膜神经节细胞层、内核层中均有明显的TSP1表达,对比于糖尿病对照组,糖尿病治疗组视网膜单位面积表达TSP1的细胞数量要较二组对照组高;糖尿病治疗组、糖尿病对照组和正常对照组间TSP-1的荧光灰度值分别为528.2±47.78、493.4±39.36和417.7±28.74:内参照GAPDH的荧光灰度值分别为796.4±21.18、811.2±36.80和832.4±43.18,各组间TSP-1 mRNA表达有显著性差异,提示吡格列酮对糖尿病早期视网膜中TSP-1的表达变化有影响,吡格列酮可能在延缓糖尿病视网膜病变的发生发展中起一定的作用。     

Association of HAP1 Isoforms with a Unique Cytoplasmic Structure

Abstract: HAP1 is a neural protein and interacts with the Huntington's disease protein huntingtin. There are at least two HAP1 isoforms, HAP1-A and HAP1-B, which have different C-terminal amino acid sequences. Here we report that both HAP1 isoforms associate with a unique cytoplasmic structure in neurons of rat brain. The HAP1-immunoreactive structure appears as an inclusion that is an oval mass of electron-dense material, 0.5–3 µm in diameter, containing many curvilinear or ring-shaped segments, and often containing electron-lucent cores. This structure is very similar to those previously termed the stigmoid body, nematosome, or botrysome. Transfection of cell lines with cDNA encoding HAP1-A, but not HAP1-B, resulted in similar HAP1-immunoreactive inclusions in the cytoplasm, suggesting that HAP1-A is essential to the formation of this structure. Yeast two-hybrid and transfection studies show that both HAP1-A and HAP1-B can self-associate, implying that native HAP1 in the cytoplasmic inclusion may be a heteromultimer of HAP1-A and HAP1-B. Coexpression of HAP1-A and HAP1-B in human embryonic kidney 293 cells demonstrates that the ratio of the expressed HAP1-A to HAP1-B regulates the formation of HAP1-associated inclusions. We propose that HAP1 isoforms are involved in the formation of HAP1-immunoreactive inclusions in the neuronal cytoplasm.     

PHOSPHOLIPID METABOLISM IN LIGHT AND DARK ADAPTED EXCISED RETINA

Abstract— The phospholipid composition of, and the incorporation of labelled phosphorus into the different phospholipids of rat and calf retina have been studied. The influence of various conditions, such as dark and light adaptation, during the preparation of retina, lipid extraction and incubation of retina with radioactive phosphorus was investigated.
The phospholipid composition of rat retina did not differ significantly from that of calf retina and the different conditions of preparation and incubation did not modify the distributions.
The specific radioactivities of the different phospholipids of calf and rat retina, incubated in the presence of ³²P, distinguished in both species two groups of components characterized by the rate of labelling. Phosphatidic acid (PA) and inositol glycerophospholipids (PI) belonged to the first group and showed the highest uptake of labelled phosphorus; the second group, comprising choline glycerophospholipids (PC), serine glycerophospholipids (PS), sphingomyelin (SP), ethanolamine glycerophospholipids (PE) and cardiolipin (CL) showed low incorporation activities. Only SP was labelled differently in rat and calf retina. With the exception of PS, there was no evidence for the influence of light on the turnover of individual phospholipids. The finding that PS showed higher specific radioactivities when adaptation and incubation proceeded in the dark, seems to be of interest and needs further study.     

RCS大鼠和Wistar大鼠视网膜酸性磷酸酶活性的动态观察

本实验观察了不同年龄组ＲＣＳ大鼠和Ｗｉｓｔａｒ大鼠视网膜中酸性磷酸酶的动态变化及其与ＲＰＥ细胞消化功能的关系。运用偶氮偶联法显示１２ｄ、２１ｄ、２ｍ的ＲＣＳ大鼠和７ｄ、２ｍ的Ｗｉｓｔａｒ大鼠视网膜中的酸性磷酸酶;通过图像分析仪测定ＲＰＥ细胞层和光感受器外节部分的酸性磷酸酶含量,并进行统计学分析。结果：酸性磷酸酶阳性反应呈暗红色,主要位于ＲＰＥ细胞层,视网膜外核层、内核层,节细胞层亦有少量阳性反应颗粒。２ｍ的ＲＣＳ大鼠视细胞内、外节的酸性磷酸酶含量则明显高于其它组（Ｐ＜０．０１）,其余结构的酸性酶各组间无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。结论：ＲＣＳ大鼠和Ｗｉｓｔａｒ大鼠的视网膜色素上皮细胞可能具有相同的消化功能。     

川芎嗪联合氨胍治疗对糖尿病大鼠视网膜血管内皮生长因子表达的影响

目的 观察川芎嗪联合氨胍治疗对糖尿病大鼠视网膜血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。探讨川芎嗪联合氨胍治疗糖尿病视网膜病变（DR）的机制。方法 应用链尿佐菌素（STZ）制作糖尿病大鼠模型。分为正常对照组,糖尿病未治疗组,川芎嗪治疗组,氨胍治疗组和川芎嗪联合氨胍治疗组,分别于第4周,第12周和第20周应用免疫组化方法观察各组大鼠视网膜组织VEGF表达的变化。结果 正常大鼠视网膜组织VEF表达仅见于内核层,糖尿病大鼠视网膜组织VEGF阳性表达随周龄的延长而增强,且在毛细血管内和节细胞层可见VEGF表达,治疗12周和20周后,川芎嗪治疗组和氨胍治疗组大鼠视网膜组织VEGF阳性表达比未治疗组明显减弱,但仍高于正常对照组,而川芎嗪联合氨胍治疗组视网膜组织VEGF表达接近正常。结论 川芎嗪联合氨胍治疗可抑制糖尿病大鼠视网膜VEGF的过度表达。是川芎嗪联合氨胍治疗糖尿病视网膜病变（DR）的机制之一。