一种简单而快捷的半薄切片脱树脂新方法

目前,在HE染色、特殊染色或免疫组织化学染色研究方面多采用普通石蜡包埋切片,其切片厚度可薄达4μm,若更薄的切片,切割有一定的难度.对于各种染色而言,越薄的切片,细胞与组织结构越清晰,染色效果越好.环氧树脂(Epon)包埋的组织块不仅用于透射电子显微镜超薄切片的制备,也可用于光镜半薄切片的制备[1].经典的脱树脂的方法是将半薄切片置于氢氧化钠的无水乙醇饱和溶液中浸泡24h,然后再充分水洗.该法耗时长,容易脱片,本实验中摸索出一种简单而快捷的脱树脂的方法,现介绍如下.     

腹水离心石蜡切片联合免疫组化检测CA125、CK7、Ki67对卵巢癌的诊断价值

目的:探讨腹水离心石蜡切片及免疫组织化学在卵巢癌诊断中的价值.方法:对30例腹水标本离心收集细胞沉渣,经自动脱水机脱水后石蜡包埋,切片进行免疫组织化学检测CA125、CK7、Ki67表达.结果:腹水离心石蜡切片细胞形态清晰,着色鲜艳,免疫组织化学阳性定位准确.结论:腹水离心石蜡切片联合免疫组织化学检测CA125、CK7、Ki67对卵巢癌具有临床诊断价值.     

皮肤组织神经髓鞘几种染色方法的比较

对皮肤组织神经髓鞘应用髓磷脂硷性蛋白myelin basic protein简称MBP）免疫组织化学,劳克坚牢蓝(Luxol fast blue,简称LFB）,砂罗铬花青（solochrome cyanine简称SC）,KOH-HIO4-Schiff四种不同的染色方法进行染色比较,结果显示,MBP法具有特异性强,背景干净,对比清晰等特点。SC、Schiff法髓鞘着色效果亦较好,但背景中其他组织也着色,只要分化适当,LFB法髓鞘着色鲜明,且有一定特异性。     

脱钙对鼠颅骨标本中肥大细胞组织化学与免疫组织化学染色的影响

目的:探讨脱钙对鼠颅骨标本中肥大细胞组织化学与免疫组织化学染色影响.方法:用不同脱钙液处理小鼠颅骨标本,组织切片后进行苏木素一伊红染色、甲苯胺蓝染色、醛品红染色以及免疫组织化学染色.结果:经过不同脱钙液处理后的颅骨组织切片组织结构保存完好,肥大细胞的组织化学染色(甲苯胺蓝和醛品红染色),及肥大细胞中胰蛋白酶的免疫组织化学染色清晰.结论:不同脱钙液(8%盐酸脱钙液、EDTA脱钙液、混合酸脱钙液)处理不影响鼻腔粘膜中肥大细胞的组织化学和免疫组织化学染色.     

多种特殊染色法在骨关节炎组织形态学研究中的应用比较

目的探讨多种特殊染色法在骨关节组织中的染色规律及其在骨关节炎形态学研究中的应用价值。方法 6月龄健康新西兰大白兔20只,随机分为正常组和造模组各10只,根据改良Hulth法造模,6周后膝关节取材。对标本固定、脱钙后进行石蜡包埋和切片。分别采用HE、番红-固绿、AB-PAS、甲苯胺蓝、Van Gieson染色和Mallory染色,观察骨关节组织的形态学变化,并对几种染色方法进行比较。结果 HE染色显示关节一般组织形态结构,可见模型组关节软骨和软骨下骨发生骨性关节炎病理变化;番红-固绿染色法中软骨和软骨下骨的界限（黏合线）以及潮线显示清晰,软骨基质中糖胺聚糖含量减少,纤维成分增多;AB-PAS染色显示骨关节炎软骨基质糖胺聚糖尤其是酸性糖胺聚糖含量减少;甲苯胺蓝染色显示骨关节炎软骨的酸性糖胺聚糖减少;Van Gieson染色和Mallory染色可显示骨关节组织中的胶原纤维,但组织结构界限不够清晰。结论在骨性关节炎的组织形态学研究中,通过常规HE染色,结合番红-固绿染色法和AB-PAS染色法,能较客观全面地获得关节组织形态学相关信息。     

果蝇胚胎石蜡切片制作方法的改良

探索一种不用在卵壳上手工打孔、适用于果蝇胚胎石蜡切片制作的方法。实验前期对果蝇胚胎进行渗透化处理,后期用琼脂糖、明胶、石蜡3种包埋辅佐剂对胚胎进行聚集、包埋、切片,最后进行HE及PASM染色。渗透化处理后的胚胎用琼脂糖或石蜡聚集并包埋后所制切片HE染色均显示胚胎形态结构正常,背景干净,而琼脂糖聚集法所制切片PASM染色背景呈灰色,明胶聚集法所制切片HE染色和PASM染色背景均显杂色且胚胎出现形变。3种包埋辅佐剂中,琼脂糖和石蜡均适于果蝇胚胎结构的保存,石蜡聚集法所制切片2种染色背景均无杂色,因此最适合做包埋辅佐剂。渗透化处理和石蜡聚集法结合后的改良方法适合于大样本且高脂含量的果蝇胚胎石蜡切片的制备。     

快速褪黑色素方法在免疫组织化学染色中的应用

目的探讨在恶性黑色素瘤组织中如何快速褪除黑色素,便于进行免疫组织化学检测和观察。方法选取20例恶性黑色素瘤组织石蜡切片,分别应用0.5%高锰酸钾水浴法、0.25%高锰酸钾溶液滴入法、15%过氧化氢浸泡法和传统过氧化氢脱色法进行褪黑色素处理,处理过的切片分别进行免疫组织化学和HE染色,比较染色结果。结果以0.25%高锰酸钾溶液滴入法处理后的效果较为理想:HE染色显示切片完整,色素颗粒完全去除,组织形态和细胞形态清晰;免疫组织化学染色结果清晰易判读,具有较强的敏感性和特异性。结论 0.25%高锰酸钾溶液滴入法可作为恶性黑色素瘤去除色素颗粒的有效方法。     

冰冻切片的H&E和LFB染色技术的优化及其在自身免疫疾病中的应用

该文旨在探讨基于冰冻切片样品进行苏木素–伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色和快蓝(luxol fast blue,LFB)染色方法的优化及其在实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)组织病理分析中的应用。取正常及EAE建模后的C57BL/6小鼠脊髓样品各5份,每份脊髓样品一分为二,分别制成冰冻切片和石蜡切片样品,通过设置不同优化条件对这两组切片进行HE和LFB染色,比较两组切片染色的结果。石蜡切片经过HE染色和LFB染色后细胞的形态结构和组织结构清晰,冰冻切片HE染色和LFB染色后细胞结构清晰度几乎和石蜡切片一致,进一步将该方法应用于分析β-arrestin2基因敲除对于小鼠EAE发生中的病理变化,发现能够很好地重复出基因敲除加重EAE疾病这一现象。冰冻切片染色优化后,基于冰冻切片进行HE染色和LFB染色可以达到石蜡切片类似的效果,并且实验过程简洁快速,大大缩短了实验时间,提高了效率,可以较好地应用于分析自身免疫疾病病理变化,该优化方法将在自身免疫疾病特别是多发性硬化动物模型的研究中有广泛的应用。     

蚊虫连续石蜡切片制备及染色

本研究利用塑化石蜡进行了吸血前后白纹伊蚊整个蚊虫的石蜡包埋、制片及 HE染色 ,获得了染色清晰 ,组织完整的连续石蜡切片 ,并讨论了有关蚊虫石蜡包埋及制片染色的一些注意事项。为进一步利用免疫组化、原位 PCR等技术研究虫媒病毒在蚊虫体内的分布规律提供了可能     

一种冰冻切片漂片法免疫反应后再用石蜡切片的方法

本文采用组织冰冻切片５０μｍ进行双重标记的免疫组织化学漂片染色后,将其贴在塑料包埋盒内,脱水,经石蜡包埋切为１－３μｍ的薄片贴于载玻片上,干燥后脱水透明封片,最后进行切片观察,免疫阳性产物被准确定位于所观察的细胞或纤维上,得到满意的结果。为免疫组织化学形态学研究工作提供了新的手段。     

大鼠受损视神经早期保护的电镜观察

为了比较应用不同的干预手段对视神经及其髓鞘溃变速度的延缓作用,将成年SD雄性大鼠随机分为6组,AX组（实施视神经轴索切断术）,MP组（术后尾静脉注射甲泼尼龙）,OECs（术后移植嗅成鞘细胞）,SC组（术后移植坐骨神经）,OECs＋MP组,SC＋MP组,于术后14天、21天取材,进行常规切片染色。半薄切片甲苯胺兰染色显示,AX组髓鞘发生大量崩解变性,失去正常神经束膜的结构,束膜间的血管溃变;OECs＋MP组束膜形态较完整,可观察到完整的神经束膜,束膜间的血管较规则。     

青年猫和老年猫视神经超微结构观察比较

目的探讨青年猫和老年猫视神经年龄相关的形态学变化及可能造成的生理影响。方法取4只青年猫(2-3岁,2-2.5kg)和4只老年猫(10-13岁,2.5-3.5kg)颅内相对应部分视神经,制作横向半薄切片和超薄切片,半薄切片用甲苯胺蓝硼砂溶液染色,光镜观察、测量视神经的直径(不含外层神经膜);超薄切片标本用醋酸和柠檬酸铅染色,电镜观察、计数视神经纤维密度、测量视神经纤维外径D(含髓鞘)和内径d(不含髓鞘),按一定分级范围算出各种直径的纤维及各种d/D比值的纤维所占百分比,分别画出直方图,对实验结果进行统计学分析并绘制纤维直径谱。结果与青年猫相比,老年猫视神经直径显著增大(P0.05);纤维数量显著下降(P0.05)。纤维直径谱分析结果显示,青、老年猫纤维直径分布范围相似,但老年猫纤维的峰直径及纤维平均直径比青年猫的显著减小(P0.05),老年猫视神经纤维的d/D比值亦明显降低。另外,老年猫视神经中部分轴突肿胀,髓鞘疏松、结构紊乱,板层脱离、空泡化,有的轴索髓鞘溶解。结论在衰老过程中,老年猫视神经纤维丢失,纤维直径减小,d/D比值下降,以及纤维髓鞘的松散解体,这些变化均可能导致视神经纤维对视觉信息的传导速度减慢,是老年个体视觉分析速度下降的重要原因。     

尘螨连续石蜡切片的制备及染色技术

研究尘螨连续石蜡切片的制备技术。利用琼脂预包埋后再以塑化石蜡包埋,经切片和HE染色,获得结构完整、定位准确、染色清晰的连续切片。探讨制片过程中一些步骤的改进和注意事项,为尘螨显微结构的形态学研究提供可能,也为免疫组化、原位PCR及过敏性疾病尘螨特异性变应原的定位等研究奠定良好的基础。     

褪色HE染色切片ALK基因融合检测可行性探索

目的 探索利用HE染色切片褪色样本进行ALK基因融合检测的可行性。方法 选取3例ALK基因融合阳性的福尔马林固定石蜡包埋（formalin fixed and paraffin embedded,FFPE）组织样本的HE染色切片,分别经盐酸乙醇褪色法和高锰酸钾草酸氧化漂白法褪色后,提取RNA,采用荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)技术,检测ALK基因融合。结果 从经盐酸乙醇褪色法或高锰酸钾草酸氧化漂白法褪色的HE染色切片中提取的RNA的纯度与从对照切片中提取者无显著差异,但其浓度较从对照切片中提取者显著降低。在模板量相同的条件下,经盐酸乙醇褪色的HE染色切片与对照组切片均检测到明确的ALK基因融合阳性,而经高锰酸钾草酸褪色的HE染色切片无任何曲线升起。从经盐酸乙醇褪色的HE染色切片中提取的RNA的完整性与从对照切片中提取的RNA的完整性无差异,但显著高于从经高锰酸钾草酸褪色的HE染色切片中提取者。为保证研究的准确性,本研究采用免疫组织化学与荧光原位杂交法对选取的ALK基因融合阳性样本进行验证,结果发现所选样本均为明确阳性。结论 HE染色切片经盐酸乙醇褪色后提取的RNA可以用于ALK...     

用于光学显微镜研究的塑料半薄切片

本文介绍了以环氧树脂为包埋介质的用于光学显微镜的塑料半薄切片的制备技术和部分实验结果。叙述了固定、脱水、渗透、包埋、聚合、切片、染色及封片各程序。作为对石蜡切片技术的补充和发展。塑料半薄切片能充分发挥光学显微镜的分辨能力,能观察到许多在石蜡切片上看不清或看不到的细胞内部结构,如:花粉的外粉壁,萌发孔;细胞的微核,液泡和液泡问的原生质丝等。可用同一包埋材料在半薄切片基础上进行超薄切片,所以半薄切片技术是一种把光学显微镜水平的研究和电子显微镜水平的研究联系在一起的一种过渡性技术。因此,它无论对植物学工作者或其它生物学工作者都是很有用的一项技术。     

改良透射电镜方法观察小鼠ICSI胚胎核仁超微结构

小鼠植入前胚胎的发育过程中,核仁经历从简单到复杂、从致密结构到网状结构的变化。对核仁超微结构的观察有助于揭示早期胚胎发育过程中核仁结构的动态变化及其特定阶段的功能。但由于核仁结构微小,数目较少,并且在胚胎中只处于卵裂球细胞核的内部,难以定位,因而给核仁的超微结构观察带来很大的困难。本实验探索了透射电镜观察小鼠植入前胚胎核仁的方法:先用琼脂对小鼠胚胎进行预包埋,在经过常规的透射电镜样品制备流程后,将整个胚胎先切成半薄切片;经过甲苯胺蓝染色后,选取含核仁结构的切片进行重包埋;最后再对回收来的半薄切片进行超薄切片,醋酸铀染色后上电镜观察;最终成功获得小鼠胚胎植入前发育不同时期核仁清晰的透射电镜图像。     

特殊染色及免疫组化双重染色在恒河猴糖尿病模型中的应用

目的在链脲佐菌素（STZ）诱导恒河猴糖尿病动物模型基础上,用特殊染色、免疫组化双染方法显示胰腺等组织中的特征性病变。方法健康恒河猴5只,小剂量（30mg／kg）多次静脉注射STZ,濒死状态时将动物安乐死。取胰腺、心脏、肾脏、脾脏、肝脏、眼球、脑等器官制成石蜡切片,用HE、PAS、Masson、天狼星红和甲苯胺蓝等方法进行特殊染色,用免疫组化双重染色法同时显示胰岛A、B细胞。结果模型动物的胰岛萎缩,数量减少。Masson染色见外分泌部间质内纤维增生。局灶性慢性肾炎,病变区肾间质纤维组织增生,部分肾小球及肾小管萎缩。天狼星红染色见脾脏中央动脉管壁增厚。免疫组化双染见胰岛A胰高血糖素表达增多,胞浆呈棕褐色。B胰岛素表达减少,胞浆粉红色。结论HE染色结合特殊染色和免疫组化双重染色可较好地对STZ诱导糖尿病动物模型进行组织学评价。     

培养细胞免疫组化方法的改进

本介绍了一种培养细胞免疫组织化学的方法,即利用琼脂糖预包埋培养细胞,制成富含细胞的琼脂块,再按一般组织块处理程序制成石蜡切片,进行免疫组织化学检测,获得了较满意的结果,并解决了培养细胞进行免疫组织化学检测的某些问题。     

选择性敲除小鼠神经细胞adam10基因导致胼胝体和海马联合发育不全

目的探讨adam 10基因在小鼠神经系统发育的作用。方法将gfapcre转基因鼠和adam10loxlox转基因鼠杂交,得到神经细胞特异性adam10基因敲除鼠(gfapcre-adam10loxlox);在出生后第14d对小鼠大脑切片行HE染色和免疫组织化学染色,观察adam10基因敲除后神经系统发育情况。结果选择性敲除小鼠神经细胞adam10基因(gfapcre-adam10loxlox)后,小鼠可存活至出生后3w左右;HE染色发现胼胝体缺失,海马发育不全,髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)免疫荧光染色发现髓鞘发育异常。结论 Adam10基因在小鼠神经系统发育中具有重要作用,选择性敲除小鼠神经细胞adam10基因导致胼胝体和海马联合发育不全,髓鞘发育异常。     

病理组织芽生菌感染的特殊染色方法分析

目的分析比较显示真菌的4种特殊染色方法 ,旨在寻找一种显示芽生菌并适合于临床病理诊断的染色方法。方法对病理石蜡组织芽生菌感染标本进行PAS染色、PASM染色、抗酸染色及爱尔新蓝染色(p H2.5),光学显微镜下观察染色效果。结果 HE染色切片上见多数圆形、厚壁、棕色的硬壳小体,PAS染色呈红色,PASM染色呈黑色,抗酸染色个别菌体呈红色,爱尔新蓝染色呈阴性。结论 PAS染色和PASM染色均可用于显示芽生菌,但改良后的PAS染色时间最短,结构清晰、对比明显,是检测芽生菌效果最佳的染色方法。