PCR技术战略

ＰＣＲ技术战略朱新产张涌廖祥儒（西北农业大学分子生物学研究室陕西杨陵７１２１００）ＰＣＲ技术已成为分子生物学研究领域极为重要的工具,在几小时内沙克级的ＤＮＡ,甚至单拷贝基因能在体外扩增放大。其过程的广泛性预示着ＰＣＲ技术不仅能分离ＤＮＡ片段,也能修饰...     

PCR技术的种类及其应用

ＰＣＲ技术是分子生物学技术的一场革命。本文综述多种ＰＣＲ技术及其在分子生物学领域的应用。     

人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因第3内含子的克隆 …

从端粒酶活性呈性阳的水生细胞株人肺ＳＣＰ－Ａ－１中分离了总ＲＮＡ,以此为模板,结合ＲＴ－ＰＣＲ技术和长模板ＰＣＲ技术,用ｈＴＥＲＴ基因特异性引物扩增到一长约２．２ｋｂ的ｃＤＮＡ片段。将该片纯化后克隆到通用测序本Ｔ－ｅａｓｙ ｖｅｃｔｏｒ上得到重组质粒。用测引物ＳＰ６和Ｔ７对该片段进行部分双向测序。经序列分析和同源比较推测该片段包含了ｈＴＥＲＴ基因的第３内含子。该结果提示了ＲＴ－ＰＣＲ技术和长模板Ｐ     

人癌细胞内质网分子伴侣Grp94基因近3‘端的初步分析

采用ＰＣＲ及ＲＴ－ＰＣＲ方法结合核酸分子杂交技术,首镒确定了与Ｇｒｐ９４ｃＤＮＡ２２３１－２５００碱基片段对应的Ｇｒｐ９４基因序列上有内含子。含有内含子的扩增片段长约７０８ｂｐ。对三种癌细胞系进行了ＰＣＲ和ＲＴ－ＰＣＲ反应,电泳结果显示存在差异。     

一种克隆PCR产物的新方法

一种克隆ＰＣＲ产物的新方法周复春,李学伍,吴斌,陈焕春（华中农业大学牧医系,武昌）基因克隆和分离是分子生物学和细胞生物学研究必不可少的组成部分。ＰＣＲ基因扩增可以产生微克级的特异性刀ＮＡ片段,可以简化从基因组ＤＮＡ克隆单拷贝基因片段的步骤。到达这种数...     

用于扩增较大片段DNA的PCR方法

用于扩增较大片段ＤＮＡ的ＰＣＲ方法方向东,陈淳（中科院上海生物化学研究所国家分子生物学实验室,上海２０００３１）诸江（上海第二医科大学上海血液学研究所,上海２０００２５）关键词ＤＮＡ扩增,ＰＣＲ自从Ｔａｑ（Ｔｈｅｒｍｕｓａｑｕａｔｉｃｕｓ）ＤＮＡ聚合...     

新型的NDA序列测定策略：PCR产物直接测序

ＤＮＡ序列的测定在现代分子生物学中的应用越来越广泛 ,传统的模板制备方法是将待测序列的ＤＮＡ片段插入质粒或病毒载体中 ,然后让其在宿主细菌细胞中增殖。尽管这套方法已被简化和标准化 ,但由于其涉及到活细胞的保存和使用 ,不可避免地会带来诸如载体和宿主细胞基因发生突变等不利影响。而用ＰＣＲ技术直接从基因组或克隆片段制备测序模板 ,可以完全避免细菌培养、模板提取等重复性操作 ,也克服了以上弊端 ;由于ＰＣＲ技术快速、简便 ,在检测人类遗传病的基因突变时 ,需要比较患者和正常人中的突变分布情况 ,应用ＰＣＲ直接测序技术就能…     

梅毒实验室诊断的分子生物学方法

本文综述了梅毒的实验室诊断的分子生物学方法,特别是多聚酶链反应（ＰＣＲ）和Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹等新的分子生物学检测技术在诊断早期梅毒、先天性梅毒和神经性毒素等方面的研究进展,着重讨论了ＰＣＲ诊断梅毒的多方面情况,并对ＰＣＲ、Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹技术与经典兔感染试验进行了评价。     

安捷伦和Caliper联手推出DNA1000芯片实验室(LabChip)试剂盒快速准确地测定DNA片段的大小和含量

安捷伦科技和Ｃａｌｉｐｅｒ公司日前宣布 ,推出ＤＮＡ 10 0 0芯片实验室 (ＬａｂＣｈｉｐ)试剂盒 ,用于ＤＮＡ片段的自动分析 ,测定片段大小及浓度。作为芯片实验室 (ＬａｂＣｈｉｐ)系列试剂盒中的新成员 ,可以让分子生物学研究人员使用Ｃａｌｉｐｅｒ科技公司开发的独特的芯片实验室技术 ,快速精确地分析ＰＣＲ产物和小片段限制性酶解产物。快速、简便、洁净ＤＮＡ 10 0 0芯片实验室 (ＬａｂＣｈｉｐ)试剂盒不仅是有ＤＮＡ 5 0 0芯片实验室 (ＬａｂＣｈｉｐ)试剂盒的分辨率 ,而且片段大小范围也适合于大多数ＰＣＲ片段 ( 2 5到 10 0 0个…     

生殖支原体的分子生物学诊断方法研究进展

本文综述了生殖支原体的实验室诊断的分子生物学方法,特别是基因探针和聚合酶链反应（ＰＣＲ）等新的分子生物学技术在诊断生殖支原体感染方面的研究进展,着重讨论了ＰＣＲ技术在诊断生殖支原体方面的应用。     

扩增大段靶DNA的PCR方法

扩增大段靶ＤＮＡ的ＰＣＲ方法陈尚武,王章（中山大学生命科学学院,广州）ＰＣＲ和分子克隆是扩增遗传物质的常用技术。热稳定Ｔａｑ（Ｔｈｅｒｍｕｓａｑｕａｔｉｃｕｓ）ＤＮＡ聚合酶的应用以及ＰＣＲ技术所固有的迅速、简便、廉价等优点,使ＤＮＡ片段的ＰＣＲ扩增成...     

PCR产物克隆方法的新进展

ＰＣＲ产物克隆方法的新进展陈尚武,马涧泉（中山医科大学生化教研室．广州）随着ＰＣＲ技术的发展和普及,克隆ＰＣＲ产物已广泛应用于分子生物学的各个领域。通常ＰＣＲ产物不具有粘端,只能进行平端连接的克隆,由于ＴａｑＤＮＡ聚合酶具有非模板依赖性末端转移酶活性...     

免疫聚合酶链反应技术的建立及其对甲脂蛋白的检测

免疫ＰＣＲ是一种新的具高敏感性的抗原检测技术,它类似传统的ＥＬＩＳＡ法,若与抗体连接的酶用ＤＮＡ片段代替,则该ＤＮＡ片段可用于ＰＣＲ扩增。因此,免疫ＰＣＲ有可能作为一种具高敏感性的检测手段用于临床早期诊断。     

长链逆转录PCR的研究进展

长链逆转录ＰＣＲ简称长链ＲＴ ＰＣＲ,是最近几年发展起来的一项新技术。通过采用无ＲＮａｓｅＨ活性的逆转录酶,引入具有３→５核酸外切活性的校正酶、优化缓冲液组分等方法,实现了大片段的扩增。在ＲＮＡ病毒基因组、基因作图、分离完整基因等方面的研究中发挥了重要作用。长链ＲＴ ＰＣＲ的原理、影响因素及其应用情况作了简要综述     

免疫聚合酶链反应技术的建立及其对甲胎蛋白的检测

免疫ＰＣＲ是一种新的具高敏感性的抗原检测技术,它类似传统的ＥＬＩＳＡ法,若与抗体连接的酶用ＤＮＡ片段代替,则该ＤＮＡ片段可用于ＰＣＲ扩增。以链酶亲合素搭桥将生物素标记的抗体与ＤＮＡ相连建立了免疫ＰＣＲ技术,并将其用于检测甲胎蛋白（ＡＦＰ）,其敏感性比ＥＬＩＳＡ法高１０４。因此,免疫ＰＣＲ有可能作为一种具高敏感性的检测手段用于临床早期诊断     

鼻咽癌中Epetein－Barr病毒基因结构特点

鼻咽癌中感染的ＥＢＶ以潜伏态存在,只有少数基因得到表达。我们从分子生物学水平研究其潜伏机制。已知ＢＺＬＦｌ基因和ＢａｍＨＩＥＺ片段内部分基因对ＥＢＶ的复制激活起关键作用。我们用体外基因扩增（ＰＣＲ）法扩增ＢＺＬＦｌ基因外显子－１序列,并用序列分析法研究了该基因结构特点。此外,检测了ＢａｍＨＩＥＺ片段内缺失,结果发现２１例鼻咽癌（ＮＰＣ）组织中,ｌｌ例有ＢａｍＨＩＥＺ片段内缺失,长２．９９ｋｂ,与潜伏态存在的ＲａｊｉＥＢＶ类似。提示鼻咽癌小的ＥＢＶ以潜伏态存在,与ＮＰＣ发病有关。     

用分子生物学技术对草菇进行菌株鉴别

利用ＡＰ－ＰＣＲ和ＲＡＰＤ技术对三个草菇菌株进行鉴别,其结果与用草菇菌株Ｖ３４基因文库中的中等重复序列为探针进行限制性内切酶长度多态性分析（ＲＦＬＰ）,及对编码核糖体５．８ＳｒＲＮＡ的ＤＮＡ（ｒＤＮＡ）进行ＰＣＲ扩增后的产物进行限制性内切酶长主多态性分析（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）的结果相一致。这一结果显示出用这四种方法对草菇菌株进行鉴别具有相似的效果。同时用这四种方法构建的分子生物学标记显示出这三个菌株     

国内信息

ＤＥＧＣＭ技术中的ＲＤＡ、ＳＳＨ和ＲＳＤＤ差异表达基因分离技术 (ＤＥＧＣＭ )发展很快 ,主要是ＰＣＲ技术的发展和相应新技术的出现为ＤＥＧＣＭ注入了新的活力。ＰＣＲ引入差式筛选之中 ,可提高效力和降低假阳性率。若引入扣除杂交 ,可发展扣除扩增方案 ,并用特异引物结合于ＰＣＲ中选择扩增差异ｃＤＮＡ而形成代表性差式分析法 (ＲＤＡ)。采用抑制性ＰＣＲ选择性扩增差异基因片段 ,用ＤＮＡ链内“退火”优先于链间退火 ,使非目的序列产生“发夹”式互补结构 ,不能与引物配对 ,从而选择性抑制非目的基因片段的扩增 ,以此形成抑制性差…     

分子生物学技术在研究肠道病毒性心肌炎,赆肌病中…

肠道病毒性心肌炎、心肌炎研究是国家“九．五”攻关项目之一。本文作者结合自己在英国伦敦大学实验室的直接经验,综述了用分子生物学技术如膜相核酸杂交、原位杂交以及采用ＴａｑＤＮＡ多聚酶催化的循环ＤＮＡ序列法,免疫多聚酶链反应（ＰＣＲ）、原位ＰＣＲ等技术,进一步证明了肠道病毒是心肌炎的主要病原,并可用ＰＣＲ产物分析病毒型别。     

构建遗传图的新方法:单精子PCR分型技术

构建遗传图的新方法———单精子ＰＣＲ分型技术①赵书红李奎彭中镇（华中农业大学动物分子生物学与育种研究室,武汉４３００７０）盛志廉（东北农业大学动物科学研究所,哈尔滨１５００３０）ＲｅｖｉｅｗｏｆＳｉｎｇｌｅＳｐｅｒｍＴｙｐｉｎｇｂｙＰＣＲＭｅｔｈｏｄ...