紫草素促进caspase-9活化诱导大肠癌细胞凋亡的分子机制研究

目的探讨紫草素对大肠癌（CRC）细胞LoVo的抗肿瘤作用及其机制。 方法以不同紫草素浓度梯度（0、2、4、6 μmol/L）处理CRC细胞LoVo 24 h，以4 μmol/L紫草素处理不同时间梯度（0、12、24、48 h）的CRC细胞LoVo。流式细胞技术结合Annexin V-FITC/PI双染色测定细胞凋亡率，Western blot检测细胞中caspase-9蛋白的表达及切割情况。多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。 结果与0 μmol/L处理CRC细胞LoVo 24 h比较，2、4、6 μmol/L的细胞凋亡率[（6.94±1.02）﹪比（10.61±1.12）﹪、（15.55± 1.35）﹪、（36.51±1.46）﹪]均升高；与4 μmol/L紫草素处理0 h的CRC细胞LoVo比较，12、24、48 h的细胞凋亡率[（1.33±0.59）﹪比（19.23±1.24）﹪、（22.24±1.41）﹪、（28.41±1.52）﹪]均升高，差异具有统计学意义（P均< 0.001）。当紫草素剂量≥2 μmol/L，处理时间≥12 h时，caspase-9蛋白表达上调并被诱导活化，而caspase-9抑制剂（Z-LEHD-FMK）预处理后，LoVo细胞凋亡率下降38.7﹪，差异有统计学意义（P < 0.05）。 结论紫草素可以通过caspase-9蛋白的表达及其切割活性诱导CRC细胞凋亡。     

生长分化因子11对甲醛诱导的海马神经细胞凋亡的影响

目的探讨生长分化因子11（GDF11）对甲醛诱导的海马神经（HT22）细胞毒性的影响。 方法把HT22细胞分为对照组（细胞未做任何处理）、甲醛组（50、100、200 μmol/ L甲醛处理细胞）和GDF11+甲醛组（GDF11转染细胞后用100 μmol/L甲醛处理）。细胞计数试剂盒（CCK8）法检测HT22细胞的活力;蛋白免疫印迹法检测HT22细胞凋亡相关蛋白Bax以及Bcl-2的变化;caspase-3活性检测试剂盒检测HT22细胞内caspase-3活性;DCFDA染色流式细胞仪检测HT22细胞中活性氧（ROS）水平。三组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。 结果与对照组比较,甲醛组HT22细胞活力（92.23±0.20比56.12±0.61）和Bcl-2蛋白表达（220.32±2.21比150.25±0.31）水平均降低,差异具有统计学意义（P均< 0.05）;而caspase-3活性（95.36±1.74比190.17±2.14）、Bax蛋白表达（132.19±1.21比150.17±1.06）和ROS水平（1099.32±75.47比2802.17±126.49）均升高,差异具有统计学意义（P均< 0.05）。GDF11转染HT22细胞后,与甲醛组比较,GDF11+甲醛组HT22细胞活力升高（56.12±0.61比83.11±1.64）,Bax蛋白表达（270.03±0.17比150.17±1.06）降低,Bcl-2蛋白表达（150.25±0.31比187.34±1.52）升高,caspase-3活性降低（190.17±2.14比105.31±4.12）和ROS水平降低（2802.17±126.49比1305.36±68.45）,差异具有统计学意义（P均< 0.05）。 结论GDF11能够逆转甲醛对HT22细胞凋亡的诱导作用以及降低甲醛对HT22细胞ROS水平的增加作用,此机制对防治甲醛的神经毒性具有重要意义。     

替米沙坦调控miR-495-3p/心肌细胞增强因子2A通路减轻缺氧诱导的神经细胞PC12损伤

目的探讨替米沙坦（TM）调控miR-495-3p/心肌细胞增强因子2A （MEF2A）通路对缺氧诱导PC12细胞损伤的影响和机制。 方法将PC12细胞进行正常培养（对照）,缺氧（缺氧24 h）,缺氧+ 0.1、1、10 μg/mL TM、缺氧+ miR-NC （转染miR-NC）,缺氧+miR-495-3p （转染miR-495-3p模拟物）,缺氧+TM+anti-miR-NC （转染anti-miR-NC,10 μg/mL TM）和缺氧+ TM+anti-miR-495-3p （转染anti-miR-495-3p,10 μg/mL TM）处理。酶联免疫吸附实验（ELISA）检测乳酸脱氢酶（LDH）漏出量和超氧化物歧化酶（SOD）的活性,流式细胞术检测细胞凋亡,实时荧光定量PCR （RT-qPCR）和Western blot检测miR-495-3p、心肌细胞增强因子2A （MEF2A）表达水平。两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。 结果与对照比较,缺氧处理的PC12细胞LDH漏出率[（9.46±0.97）﹪比（45.69±4.31）﹪]、细胞凋亡率[（5.36±0.54）﹪比（28.36±2.41）﹪]、MEF2A mRNA（1.00±0.08比2.74±0.26）和MEF2A蛋白表达水平（0.39±0.03比0.87±0.06）均升高;SOD活性[（12.24 ±1.13）比（5.13±0.52 ）U/mL）]和miR-495-3p表达水平（1.00±0.08比0.35±0.03）均降低,差异有统计学意义（P均< 0.05）。与缺氧处理比较,缺氧+0.1、1、10 μg/mL TM干预的PC12细胞LDH漏出率[（45.69±4.31）﹪比（32.14±3.84）﹪、（23.54±3.17）﹪、（16.87±1.46）﹪]、细胞凋亡率[（28.36±2.41）﹪比（22.46±2.31）﹪、（17.14±1.65）﹪、（10.23±1.12）﹪]、MEF2A mRNA（2.74±0.26比2.26±0.23、1.87±0.19、1.34±0.18）和MEF2A蛋白表达水平（0.87±0.06比0.75±0.05、0.63±0.04、0.46±0.03）均降低;SOD活性[（5.13±0.52）比（6.87±0.69 ）、（8.01±0.81）、（10.12±1.02）U/mL]、miR-495-3p表达水平（0.35±0.03比0.49±0.04、0.61±0.06、0.83±0.07）均升高,差异有统计学意义（P均< 0.05）。与缺氧+ miR-NC比较,缺氧+ miR-495-3p的PC12细胞LDH漏出率[（46.87±4.28）﹪比（19.65±1.87）﹪]和细胞凋亡率[（28.38±2.44）﹪比（12.36±1.25）﹪]均降低,SOD活性[（5.15±0.51）比（9.67±0.97）U/mL]升高,差异有统计学意义（P均< 0.05）。与缺氧+TM+anti-miR-NC比较,缺氧+TM+anti-miR-495-3p的PC12细胞LDH漏出率[（17.64±1.79）﹪比（32.69±3.57）﹪]和细胞凋亡率[（10.98±1.75）﹪比（22.64±2.13）﹪]均升高,SOD活性[（12.63±1.27）比（7.32±0.71）U/mL]降低,差异有统计学意义（P均< 0.05）。 结论TM通过上调miR-495-3p/MEF2A通路对缺氧诱导的PC12细胞损伤具有保护作用。     

硫化氢通过调控SIRT1抑制阿霉素诱导的H9c2细胞损伤

目的探讨硫化氢（H₂S）对阿霉素（DOX）诱导的H9c2细胞损伤的影响及其作用机制。 方法H₂S对DOX心肌毒性保护作用的实验分组为：对照组（Control组）,5?μmol/?L DOX处理组（A组）,5?μmol/L DOX和400?μmol/L NaHS共同处理组（B组）,400?μmol/L NaHS单独处理组（C组）,5?μmol/L DOX、400?μmol/L NaHS和15?μmol/L Sirtinol共同处理组（D组）,15?μmol/L Sirtinol单独处理组（E组）。SIRT1是否参与H₂S抗DOX心肌毒性作用机制的实验分组为：对照组（Control组）,5?μmol/L DOX处理组（F组）,5?μmol/L DOX和400?μmol/L NaHS共同处理组（G组）,5?μmol/L DOX、400?μmol/L NaHS和15?μmol/L Sirtinol共同处理组（H组）,15?μmol/L Sirtinol单独处理组（I组）。使用MTT法检测细胞活力;Elisa法检测细胞MDA以及SOD水平;DCFH-?DA荧光探针法检测ROS水平;采用Western Blot法检测SIRT1蛋白表达。使用单因素方差分析法进行统计学分析。 结果NaHS预处理可抑制DOX导致的H9c2细胞活力下降：Control组,A组、B组、C组细胞活力分别为100﹪、（54.58±1.58）﹪、（85.05±4.31）﹪、（100.22±4.46）﹪ （F = 134.9,P < 0.001）。NaHS预处理可减弱DOX引起的H9c2细胞ROS、MDA水平的增加以及SOD水平的降低：Control组的ROS、MDA和SOD水平分别是100﹪、（34.18±1.56） μmol/g、（53.69±1.44） U/?mg;A组的ROS、MDA和SOD水平分别是（174.90±12.65）﹪、（72.65±2.66） μmol/g、（31.80±2.05） U/?mg;B组的ROS、MDA和SOD水平分别是（126.08±6.25）﹪、（44.59±1.92） μmol/g、（48.06±1.56） U/mg;C组的ROS、MDA和SOD水平分别是（91.86±1.66）﹪、（32.93±1.56）?μmol/?g、（55.93±1.58）?U/?mg （F?= 83.26,P < 0.001;F = 271.4,P < 0.001;F = 127.0,P < 0.001）。F组（6、12、24?h）H9c2细胞SIRT1蛋白表达水平分别是（0.45±0.03）、（0.27±0.02）、（0.25±0.03）,较Control组（1.00±0.00）降低（F = 611.1,P < 0.001）。本研究还发现,NaHS预处理H9c2细胞能阻止DOX引起的SIRT1蛋白表达下调：Control组、F组、G组、H组的SIRT1蛋白表达水平分别是（1.00±0.00）、（0.31±0.03）、（0.60±0.04）、（1.09±0.09）（F = 123.4,P?2S对DOX诱导的H9c2细胞活力降低的抑制作用：Control组,F组、G组、H组、I组细胞活力分别为100﹪、（54.58±1.58）﹪、（85.37±3.62）﹪、（71.11±2.11）﹪、（97.53±1.45）﹪ （F = 238.2,P < 0.001）。Sirtinol预处理可明显逆转H₂S对DOX导致的H9c2细胞ROS和MDA含量增加及SOD水平降低的抑制作用：Control组的ROS、MDA和SOD水平分别是100﹪、（35.84±2.22）μmol/?g、（53.03±3.16） U/mg;F组的ROS、MDA和SOD水平分别是（184.6±11.33）﹪、（74.78±5.30）μmol/g、（29.26±0.85）U/mg;G组的ROS、MDA和SOD水平分别是（126.5±7.57）﹪、（41.95±3.43）μmol/g、（52.61±2.26）U/mg;H组的ROS、MDA和SOD水平分别是（174.7±5.50）﹪、（67.69±1.52） μmol/g、（35.33±1.95） U/mg,I组的ROS、MDA和SOD水平分别是（98.03±2.86）﹪、（37.66±2.49）μmol/g、51.14 U/mg（F = 112.0,P < 0.001;F = 93.73,P < 0.001;F = 84.92,P < 0.001）。 结论H₂S通过调控SIRT1抑制DOX诱导的H9c2细胞损伤。     

HOXA-AS2靶向miR-17对人脐静脉内皮细胞生物学功能以及炎症因子的影响

目的探讨HOXA-AS2对动脉粥样硬化（AS）模型细胞生物学功能以及炎症因子的影响及分子机制。 方法本实验共分为4个实验;实验1：用100 μg/mL的ox-LDL处理EA.hy926细胞作为ox-LDL组,正常培养的细胞作为对照组;实验2：将pcDNA3.1、pcDNA3.1-HOXA-AS2转染至EA.hy926细胞中再用100 μg/mL的ox-LDL处理,记为ox-LDL+pcDNA3.1组、ox-LDL+pcDNA3.1-HOXA-AS2组;实验3：将pcDNA3.1、pcDNA3.1-HOXA-AS2、si-NC、si-HOXA-AS2分别转染至EA.hy926细胞中,记为pcDNA3.1组、pcDNA3.1-HOXA-AS2组、si-NC组、si-HOXA-AS2组;实验4：将pcDNA3.1-HOXA-AS2与miR-NC、miR-17分别共转染至EA.hy926细胞中再用100 μg/mL的ox-LDL处理,记为ox-LDL+pcDNA3.1-HOXA-AS2+miR-NC组、ox-LDL+pcDNA3.1-HOXA-AS2+miR-17组。实时荧光定量PCR （RT-qPCR）检测HOXA-AS2和miR-17的表达水平;蛋白质印迹（Western blot）法检测细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A （P21）、cleaved caspase 3蛋白表达;MTT检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA法检测白细胞介素-1 （IL-1）、白细胞介素-6 （IL-6）水平;荧光素酶报告实验检测HOXA-AS2和miR-17的靶向关系。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。 结果与对照组比较,ox-LDL组EA.hy926细胞中HOXA-AS2表达水平（0.23±0.02比1.02±0.10）,细胞增殖率[（47.83±5.01）﹪比（100.06±10.20）﹪]均降低,细胞凋亡率[（26.81±2.47）﹪比（8.23±0.80）﹪]、P21 （0.82±0.08比0.20±0.02）、cleaved caspase 3 （0.67±0.06比0.14±0.01）、IL-1[（792.34±59.37）ng/L比（326.14±34.59） ng/ L]和IL-6表达水平[（53.67±4.65）ng/L比（19.25±2.11）ng/L]均升高,差异具有统计学意义（P均< 0.05）。与ox-LDL+pcDNA3.1组比较,ox-LDL+pcDNA3.1-HOXA-AS2组EA.hy926细胞中HOXA-AS2表达水平（0.87±0.09比0.22±0.02）、细胞增殖率[（89.94±8.34）﹪比（48.21±4.86）﹪]均升高,细胞凋亡率[（12.33±1.18）﹪比（26.83±2.48）﹪]、P21 （0.33±0.03比0.81±0.08）、cleaved caspase 3 （0.24±0.02比0.69±0.06）、IL-1[ （446.25±46.84）ng/L比（802.21±60.18）ng/L]和IL-6表达水平[（25.64±2.65）ng/L比（55.21±5.10）ng/L]均降低,差异具有统计学意义（P均< 0.001）。与ox-LDL+pcDNA3.1-HOXA-AS2+miR-NC组比较,ox-LDL+pcDNA3.1-HOXA-AS2+miR-17组EA.hy926细胞中miR-17表达水平（2.14±0.21比1.05±0.10）、细胞凋亡率[（23.31±2.33）﹪比（13.75±1.44）﹪]、IL-1水平[（684.26±62.38）ng/L比（451.21±43.58）ng/L]、IL-6水平[（41.29±4.37）ng/L比（26.11±2.39）ng/L]均升高,细胞增殖率[（53.67±5.46）﹪比（90.21±9.16）﹪]降低,差异具有统计学意义（P均< 0.001）。HOXA-AS2与miR-17存在结合位点,荧光素酶报告实验显示,与miR-NC组比较,miR-17组中转染WT-HOXA-AS2的EA.hy926细胞荧光素酶活性降低（0.33±0.03比1.01±0.10,P < 0.05）,而转染MUT-HOXA-AS2的EA.hy926细胞荧光素酶活性差异无统计学意义（P > 0.05）;与anti-miR-NC组比较,anti-miR-17组中转染WT-HOXA-AS2的EA.hy926细胞荧光素酶活性升高（2.29±0.21比1.00±0.10,P < 0.05）,而转染MUT-HOXA-AS2的EA.hy926细胞荧光素酶活性差异无统计学意义（P > 0.05）。 结论过表达HOXA-AS2促进细胞增殖,抑制ox-LDL引起的细胞凋亡和炎症因子的释放,其机制可能与miR-17有关。     

circ_0000267靶向miR-198对急性淋巴细胞白血病细胞KOCL44增殖和凋亡的影响

目的探讨circ_0000267对急性淋巴细胞白血病（ALL）KOCL44细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。 方法选择ALL细胞株KOCL44为研究对象,分别将小干扰RNA （siRNA）阴性对照（si-NC）、circ_0000267 siRNA （si-circ_0000267）、微小RNA （miRNA）阴性对照（miR-NC）、miR-198模拟物（miR-198）、circ_0000267 siRNA+miRNA抑制剂阴性对照（si-circ_0000267+anti-miR-NC）和circ_0000267 siRNA+miR-198抑制剂（si-circ_0000267+anti-miR-198）转染细胞,48 h后通过RT-qPCR检测细胞circ_0000267和miR-198相对表达水平,采用CCK-8法检测KOCL44细胞的增殖水平,流式细胞术实验检测KOCL44细胞的凋亡水平,Western blot检测KOCL44细胞Ki-67、Bcl-2和Bax蛋白表达水平,通过双荧光素酶报告实验验证circ_0000267和miR-198靶向关系。两组间比较采用独立样本t检验。 结果与健康志愿者比较,ALL患者circ_0000267表达水平（1.00±0.06比3.19±0.21）上调,miR-198表达水平（1.00±0.07比0.41±0.03）下调,差异有统计学意义（P < 0.05）。敲低circ_0000267或者过表达miR-198可抑制KOCL44细胞增殖（0.68±0.05比0.32±0.02、0.69±0.06比0.39±0.03）、Ki-67 （0.84±0.06比0.37±0.03、0.85±0.06比0.45±0.04）和Bcl-2蛋白表达（0.63±0.05比0.22±0.02、0.65±0.04比0.29±0.02）,促进细胞凋亡[（6.53±0.51）﹪比（24.29±2.06）﹪、（7.38±0.57）﹪比（20.03±1.66）﹪]和Bax蛋白表达（0.31±0.03比0.77±0.04、0.30±0.02比0.71±0.04）,差异有统计学意义（P < 0.05）。双荧光素酶报告实验验证circ_0000267可以靶向miR-198表达,干扰miR-198表达可以逆转抑制circ_0000267表达对KOCL44细胞的增殖和凋亡的作用,差异有统计学意义（P < 0.05）。 结论circ_0000267通过调控miR-198抑制ALL细胞增殖,并促进凋亡,为临床治疗ALL提供新的依据。     

艾拉莫德增强丝裂霉素C诱导的人食管癌Eca109细胞凋亡

目的探讨艾拉莫德增强丝裂霉素C（MMC）诱导的人食管癌Eca109细胞凋亡的作用及其机制。 方法将人食管癌Eca109细胞分为五组：对照组、MMC组、25,50,100 μg/ml浓度艾拉莫德+MMC组;通过CCK-8和DCFH-DA染色法分别检测25,50,100 μg/ml浓度艾拉莫德联合MMC对人食管癌Eca109细胞活力和细胞活性氧（ROS）生成的影响,流式细胞术检测艾拉莫德联合MMC对人食管癌Eca109细胞凋亡的影响,并通过Western Blot检测艾拉莫德联合MMC对TNF-α和cleaved caspase3蛋白表达的影响。采用单因素方差分析和t检验进行统计学分析。 结果CCK-8结果显示,与0 μg/ml T-614+MMC组A450值（0.85±0.03）比较,25、50、100 μg/ml T-614+MMC组A450值（0.73±0.02,0.52±0.02,0.33±0.02）均降低,差异具有统计学意义（F = 127.60, P < 0.01）;DCFH-DA染色检测结果显示,与0 μg/ml T-614+MMC组DCFH荧光值（130.00±10.00）比较,25、50、100 μg/ml T-614+MMC组DCFH值（219.67±9.50,280.33±10.50,338.33±16.07）均升高,差异具有统计学意义（F = 170.20,P < 0.01）;流式细胞术检测结果显示,与对照组的细胞凋亡率（5.33±0.35）﹪比较,T-614和MMC组的凋亡率（20.30±2.00）﹪,（25.60±3.00）﹪均升高。与MMC组细胞凋亡率（25.60±3.00）﹪比较,艾拉莫德与MMC联用组（T-614+MMC）食管癌Eca109细胞的细胞凋亡率（56.20±3.00）﹪升高,差异均具有统计学意义（F = 247.50,P < 0.01）;Western Blot结果显示,与MMC组细胞TNF-α和cleaved caspase3蛋白表达（0.87±0.06,0.25±0.03）比较,艾拉莫德与MMC联用组（T-614+MMC）食管癌Eca109细胞的TNF-α和cleaved caspase3蛋白表达（1.28±0.08,0.59±0.03）升高,差异均具有统计学意义（F = 96.90,P < 0.01）。 结论艾拉莫德能够增强MMC对食管癌Eca109细胞活力的抑制作用,其机制可能通过促进ROS的生成,激活线粒体凋亡通路,最终导致食管癌Eca109细胞凋亡。     

桔梗多糖通过LINC01554影响肝癌细胞增殖、凋亡的分子机制研究

目的探讨桔梗多糖对肝癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制。 方法采用低、中、高剂量（20、40、60 μg/mL）的桔梗多糖处理肝癌细胞Huh-7,二甲基亚砜（DMSO）处理的Huh-7细胞作为对照;pcDNA、pcDNA-LINC01554分别转染入Huh-7细胞;si-NC、si-LINC01554分别转染Huh-7细胞后加入桔梗多糖处理;采用MTT实验与平板克隆形成实验分别检测细胞增殖及克隆形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-qPCR法检测LINC01554的表达量。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用SNK-q检验。 结果与对照比较,低、中、高剂量的桔梗多糖干预后细胞活力（1.26±0.09比1.05±0.06,0.77±0.05,0.47±0.03）下降及集落形成数[（117.00±4.55）比（99.67±3.86） ,（71.67±2.87）,（54.67±2.05）个]减少,凋亡率[ （8.24± 0.49）﹪比（13.47±0.72）﹪,（18.20±0.84）﹪,（22.52±1.12）﹪]及LINC01554表达水平（1.00± 0.00比1.35±0.05,1.90±0.06,3.38±0.09）均升高（P均< 0.05）,且呈浓度依赖性;与转染pcDNA比较,转染pcDNA-LINC01554的细胞活力（1.24±0.08比0.56±0.03）降低,集落形成数[（116.67±4.19）比64.33±2.49）个]减少,凋亡率[（8.13±0.60）﹪比（20.45±0.97）﹪]升高（P均< 0.05）;与转染si-NC加桔梗多糖处理比较,si-LINC01554加桔梗多糖处理的细胞活力（0.48±0.03比1.12±0.06）升高,集落形成数[（55.00±2.16）比（107.67±3.40）个]增多,凋亡率[（22.51±1.10）﹪比（10.52±0.49）﹪]降低（P均< 0.05）。 结论桔梗多糖可通过上调LINC01554的表达减弱肝癌细胞增殖及克隆形成能力,并诱导细胞凋亡。     

柴胡皂苷D对甲状腺乳头状癌细胞TPC-1生物学行为的影响

目的探讨柴胡皂苷D对体外甲状腺乳头状癌（PTC）细胞TPC-1增殖、侵袭、迁移、活性氧和凋亡的影响。 方法不同浓度（0、5、10、20 μmol/L）柴胡皂苷D干预TPC-1细胞,CCK-8法检测细胞增殖率;Annexin-V-FITC/PI双染试剂盒检测细胞凋亡率;活性氧试剂盒检测细胞活性氧;Transwell小室法检测细胞侵袭、迁移能力;Western blot法检测凋亡蛋白剪切的半胱天冬酶3 （cleaved caspase 3）、B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）、Bcl2相关X蛋白（Bax）和侵袭迁移相关蛋白E钙黏蛋白（E-cadherin)和N钙黏蛋白（N-cadherin）及Wnt/β连环蛋白（β-catenin）信号通路相关蛋白Wnt3a和β-catenin的表达量。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。 结果与0 μmol/L柴胡皂苷D干预相比,（5、10、20 μmol/L）柴胡皂苷D干预TPC-1细胞存活率[24 h：（88.07±0.75）%、（76.06±0.56）%、（65.80± 1.66）%比（100.00±1.00）%;48 h：（72.40±0.35）%、（52.26± 0.22）%、（41.30±0.17）%比（100.00± 1.53）%;72 h：（56.50±0.22）%、（40.26±0.21）%、（31.10± 0.14）%比（100.00±0.14）%]、细胞侵袭率[（65.43±1.32）%、（49.46±0.31）%、（22.48±0.85）%比（100.00±1.25）%]、迁移率[（67.45±0.96）%、（52.42±0.39）%、（42.12±1.10）%比（100.00±2.00）%]、Bcl-2蛋白表达量（0.51±0.02、0.31±0.02、0.22±0.02比0.62±0.01）、Wnt3a表达量（0.56±0.06、0.37±0.01、0.26±0.02比0.72±0.03）、β-catenin表达量（0.59±0.02、0.40±0.03、0.14±0.03比0.82±0.03）和N-cadherin表达量（0.49±0.05、0.34 ±0.03、0.14± 0.03比0.62±0.05）均降低,细胞活性氧含量增加,凋亡率[（12.36±1.32）%、（23.15±2.27）%、（36.65±3.22）%比（7.32±1.25）%]、Bax蛋白表达量（0.45±0.02、0.51±0.01、0.79±0.02比0.32±0.01）、cleaved caspase-3蛋白表达量（0.26±0.02、0.37±0.02、0.40±0.02比0.13±0.01）和E-cadherin表达量（0.20±0.02、0.37±0.02、0.46±0.05比0.12±0.01）均增加（P均< 0.05）。 结论柴胡皂苷D能够抑制PTC细胞的生物学行为。     

CHOP双重调控衣霉素诱导的DU-145细胞凋亡及自噬的研究

目的研究内质网应激分子CHOP调控细胞凋亡与自噬的作用和机制。 方法利用衣霉素诱导DU-145细胞产生内质网应激,Western Blot法检测内质网应激相关分子Grp78、Grp94、p-eIF2α和CHOP及自噬蛋白LC3Ⅱ、Atg5和Beclin1的表达;用流式细胞术检测细胞凋亡水平;沉默CHOP基因,用Western Blot法检测凋亡蛋白PARP、Caspase3的表达,流式细胞术检测细胞凋亡;并利用免疫荧光检测自噬标志性蛋白LC3B的表达。 结果衣霉素诱导DU-145细胞内质网应激能诱导一定程度的细胞凋亡,衣霉素处理8、12、24?h的细胞凋亡率分别为3.27﹪±1.02﹪,8.97﹪±0.71﹪和11.67﹪±1.41﹪,处理12?h及24?h的细胞凋亡率与对照组相比差异具有统计学意义（P < 0.01）。同时也能通过抑制PI3K/AKt/mTOR信号通路激活DU-145细胞自噬。CHOP基因沉默抑制细胞凋亡,shCtrl组细胞凋亡率为32.17﹪±3.93﹪,shCHOP-1组细胞凋亡率为23.53﹪±3.41﹪,两组相比差异具有统计学意义（P < 0.05）。且CHOP基因沉默能促进细胞自噬分子LC3B的表达。 结论衣霉素诱导DU-145细胞内质网应激状态下,CHOP在细胞凋亡与自噬之间发挥双重调控作用。     

lncRNA MAGI2-AS3下调miR-31-5p抑制肺腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭并促进凋亡

目的研究lncRNA MAGI2-AS3对肺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响和潜在的分子机制。方法根据转染载体不同将A549细胞分为pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1)、pcDNA3.1-MAGI2-AS3组(转染pcDNA3.1-MAGI2-AS3)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-31-5p组(转染anti-miR-31-5p)、pcDNA3.1-MAGI2-AS3+miR-NC组(共转染pcDNA3.1-MAGI2-AS3和miR-NC)、pcDNA3.1-MAGI2-AS3+miR-31-5p组(共转染pcDNA3.1-MAGI2-AS3和miR-31-5p mimics)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-31-5p和MAGI2-AS3 RNA的表达,四氮唑蓝(MTT)法测定A549细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告系统验证MAGI2-AS3与miR-31-5p的调控关系,流式细胞术检测细胞凋亡与周期。两组间比较采用独立样本t检验进行分析;多组间比较采用单因素方差分析,组内多重比较采用SNK-q检验。结果与人正常肺细胞HBE相比,肺癌细胞A549中的MAGI2-AS3表达量(0.48±0.03比1.29±0.06)降低,miR-31-5p表达量(1.01±0.05比0.25±0.02)升高;与pcDNA3.1组比较,pcDNA3.1-MAGI2-AS3组A549细胞活力(0.48±0.04比0.77±0.06)、迁移[(81.33±2.87)个比(124.33±3.09)个]和侵袭[(32.00±2.83)个比(53.00±3.27)个]细胞数、S期细胞所占比例(23.01﹪±1.00﹪比32.95﹪±1.06﹪)均降低,凋亡率(19.95﹪±1.25﹪比7.23﹪±0.51﹪)、G0-G1期细胞所占比例(43.58﹪±2.15﹪比33.56﹪±1.23﹪)均升高;与anti-miR-NC组比较,anti-miR-31-5p组A549细胞活力(0.53±0.04比0.78±0.06)、迁移[(76.00±3.74)个比(108.33±2.87)个]和侵袭[(30.00±1.63)个比(42.33±2.05)个]细胞数、S期细胞所占比例(24.43﹪±1.13﹪比32.91﹪±1.08﹪)降低,凋亡率(18.21﹪±1.24﹪比7.29﹪±0.51﹪)、G0-G1期细胞所占比例(41.56﹪±2.19﹪比33.53﹪±1.27﹪)升高,差异有统计学意义(P均<0.05);双荧光素酶报告系统结果显示,MAGI2-AS3靶向负调控miR-31-5p的表达。与pcDNA3.1-MAGI2-AS3+miR-NC组比较,pcDNA3.1-MAGI2-AS3+miR-31-5p组A549细胞活力(0.68±0.06比0.50±0.04)、迁移[(91.00±1.63)个比(52.67±2.62)个]和侵袭[(62.67±2.49)个比(31.67±4.03个)]细胞数升高,凋亡率(10.59﹪±1.0﹪比21.11﹪±1.14﹪)降低,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论lncRNA MAGI2-AS3通过靶向miR-31-5p抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。lncRNA MAGI2-AS3是肺癌潜在分子治疗靶点。     

miR-652-3p靶向同源异型核基因1对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞凋亡的影响

目的探讨miR-652-3p靶向同源异型核基因1（PRRX1）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌细胞凋亡的影响。 方法大鼠心肌细胞H9c2细胞采用正常培养基培养为对照组细胞，用含1 μmol/L AngⅡ的培养基培养为AngⅡ组细胞；分别转染miR-652-3p阳性对照序列（NC）和转染miR-652-3p mimics后用含1 μmol/L AngⅡ的培养基培养为AngⅡ+NC组和AngⅡ+miR-652-3p组细胞；将miR-652-3p mimics分别与PRRX1阳性对照质粒和PRRX1过表达质粒转染至H9c2细胞中用含1 μmol/L AngⅡ的培养基培养，分别为AngⅡ+miR-652-3p+ Vctor组和AngⅡ+miR-652-3p+PRRX1组细胞。实时荧光定量PCR （RT-qPCR）检测H9c2细胞中miR-652-3p表达水平，流式细胞术检测细胞凋亡，用Western blot检测细胞中PRRX1、Bax和Bcl-2蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证H9c2细胞中miR-652-3p与PRRX1调控关系。两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用SNK-q检验。 结果与对照组比较，AngⅡ组H9c2细胞中miR-652-3p水平（1.00±0.08比0.21±0.05）、Bcl-2蛋白水平（0.83±0.08比0.40±0.04）均较低，而PRRX1蛋白水平（0.06±0.01比0.41±0.04）、凋亡率（5.02﹪±1.41﹪比25.33﹪±3.75﹪）、Bax蛋白水平（0.46±0.05比0.96±0.10）均较高，差异具有统计学意义（P均< 0.05）。与AngⅡ+NC组比较，AngⅡ+miR-652-3p组H9c2细胞中miR-652-3p的表达水平（0.24±0.06比0.98±0.07）、Bcl-2蛋白水平（0.38±0.04比0.72±0.07）均较高，而PRRX1蛋白水平（0.39±0.04比0.13±0.01）、凋亡率（27.02﹪±4.11﹪比12.19﹪±1.63﹪）、Bax蛋白水平（0.95±0.09比0.53±0.05）均较低，差异具有统计学意义（P均< 0.05）。与AngⅡ+miR-652-3p+Vctor组比较，AngⅡ+miR-652-3p+PRRX1组H9c2细胞凋亡率（12.88﹪±1.84﹪比25.45﹪±3.58﹪）、PRRX1蛋白水平（0.13±0.01比0.35±0.04）和Bax蛋白水平（0.54±0.05比0.82±0.08）均较高，差异具有统计学意义（P均< 0.05），而Bcl-2蛋白表达水平（0.72±0.07比0.46±0.05）降低，差异具有统计学意义（P < 0.05）。 结论AngⅡ能够下调心肌细胞中miR-652-3p的表达，上调miR-652-3p可通过靶向抑制PRRX1的表达减少AngⅡ诱导的H9c2细胞凋亡。     

阿加曲班对急性脑梗死大鼠脑组织细胞凋亡的影响

目的探讨阿加曲班对急性脑梗死大鼠脑组织细胞凋亡数量、caspase-3、Bcl-2和Bax表达的影响。方法建立SD大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)模型,将大鼠分为假手术组(Sham组,不插入MCAO拴线)、脑中动脉缺血模型组(MCAO组)和阿加曲班处理组(Argatroban组)。分别选取0、6和12 h共3个时间窗的样本进行检测,TUNEL法细胞凋亡检测试剂盒检测大鼠脑部神经细胞凋亡,Western blot和ELISA法检测大鼠脑部caspase-3、Bax和Bcl-2水平。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。结果TUNEL法结果显示,与MCAO组比较,Sham组和Argatroban组在0、6、12 h的细胞凋亡指数均降低[0 h(14.91±4.11)﹪比(2.13±0.58)﹪、(4.22±1.01)﹪;6 h(24.75±3.88)﹪比(3.19±0.28)﹪、(12.14±1.90)﹪;12 h(48.22±2.69)﹪比(5.75±1.21)﹪、(28.45±7.84)﹪,P均<0.05]。ELISA结果显示:与Sham组比较,MCAO组0、6、12 h的大鼠脑组织细胞caspase-3、Bax表达均升高,而Bcl-2表达在6、12 h时升高(P均<0.05);与MCAO组比较,Argatroban组的脑组织细胞caspase-3、Bax表达均降低,而Bcl-2表达在6、12 h时升高[caspase-3表达:0 h(2.32±0.12)比(1.25±0.06)、6 h(5.91±0.60)比(3.26±0.22)、12 h(7.31±0.27)比(6.42±0.18)ng/ml;Bax表达:0 h(0.82±0.08)比(0.45±0.03)、6 h(1.00±0.05)比(0.66±0.04)、12 h(1.56±0.11)比(1.09±0.07)ng/ml;Bcl-2表达:6 h(1.07±0.08)比(1.56±0.05)ng/ml,12 h(0.67±0.08)比(1.45±0.06)ng/ml,P均<0.01]。Western blot结果显示,大鼠脑组织细胞caspase-3、Bax蛋白表达趋势与ELISA结果一致;而Bcl-2蛋白表达在Argatroban组高于Sham组和MCAO组,差异有统计学意义(P均<0.01)。结论阿加曲班可通过减少急性脑梗死诱导的大鼠脑组织细胞凋亡、抑制caspase-3和Bax表达,并上调Bcl-2水平而产生神经保护作用。     

超声引导下前列腺穿刺联合外周血循环肿瘤细胞检测对前列腺癌预后分析

目的探讨超声引导下前列腺穿刺联合外周血循环肿瘤细胞(CTCs)检测对前列腺癌预后的预测效果。方法选取2011年1月至2017年12月期间于郑州大学第二附属医院收治的83例前列腺癌患者为研究对象,全部患者均根据超声引导下经直肠前列腺穿刺活检术确诊为前列腺癌,检测病理标本中CK34BE12、p63、α-甲酰基辅酶A消旋酶(AMACR)等免疫标志物的表达状况,并采用Cell Search细胞搜索系统检测外周血CTCs的数量,据此分为阳性组(≥5个/7.5 ml)和阴性组(<5个/7.5 ml)。分析穿刺组织中免疫标志物表达状况、外周血CTCs计数与患者临床病理特征、生存状况的相关性。各标志物的阳性例数、Gleason评分>7分的比例、TNM分期等定性资料的比较采用x^2检验或Fisher确切概率法,年龄、血常规、凝血功能、肝功能、PSA水平等定量资料的比较采用t检验。采用Kaplan-Meier法进行生存分析,采用多因素Cox比例风险回归模型分析患者预后的预测因素。结果(1)全部患者中外周血CTCs、穿刺组织中CK34BE12、p63、AMACR的阳性率分别为31.33、3.61、3.61、86.75。CTCs阳性组的AMACR阳性率为100.00,高于CTCs阴性组的80.70,差异有统计学意义(x^2=4.227,P<0.05)。(2)AMACR阳性组患者的血红蛋白(HB)低于AMACR阴性组[(123.66±13.33)g/L比(134.89±20.08)g/L,t=2.420,P=0.018],血小板(PLT)、血清谷丙转氨酶、D-二聚体(DD)、前列腺特异抗原(PSA)水平、Gleason评分>7分的比例均高于AMACR阴性组[(197.23±36.98)×10^9/L比(172.83±33.33)×10^9/L,t=2.062,P=0.042;(38.80±10.03)U/L比(31.46±7.83)U/L,t=2.317,P=0.023;(255.00±38.80)μg/L比(220.81±30.99)μg/L,t=2.785,P=0.007;(26.60±12.23)ng/ml比(17.90±8.88)ng/ml,t=2.263,P=0.026;45.83比9.09,x^2=3.916,P=0.048],差异有统计学意义(P<0.05)。CTCs阳性组患者的HB低于CTCs阴性组[(121.69±15.89)g/L比(132.73±18.85)g/L,t=2.767,P=0.007],血清碱性磷酸酶、DD、PSA水平、Gleason评分>7分、T3~T4期、M1期的比例均高于CTCs阴性组[(105.69±30.56)U/L比(88.89±35.58)U/L,t=2.205,P=0.030;(256.63±35.86)μg/L比(236.98±33.30)μg/L,t=2.368,P=0.020;(30.09±11.89)ng/ml比(23.33±10.99)ng/ml,t=2.533,P=0.013;57.69比33.33,x^2=4.381,P=0.036;30.77比8.77,x^2=4.981,P=0.026;50.00比17.54,x^2=9.390,P=0.002],差异有统计学意义(P<0.05)。(3)全部患者的中位生存时间为58.33个月,1、3、5年的生存率分别为88.95、51.81、30.12。AMACR阳性组、CTCs阳性组患者的中位生存时间为40.93、36.93个月,低于AMACR阴性组、CTCs阴性组的66.66、69.56个月,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Cox比例风险回归模型分析结果表明,Gleason评分>7分、M1期、AMACR阳性、CTCs阳性是患者死亡的独立危险因素(HR=1.883、3.666、2.009、2.923,P<0.05)。结论超声引导下前列腺穿刺联合外周血CTCs检测对前列腺癌患者的预后具有重要的预测价值,临床上可根据穿刺组织中AMACR表达水平和外周血CTCs计数进行预后的综合分析。     

过表达DNALI1抑制低氧环境中鼻咽癌细胞株CNE-2z侵袭与迁移

目的探讨模拟肿瘤内低氧微环境下，动力蛋白轴突轻链中间体1 （DNALI1）对鼻咽癌细胞株CNE-2z增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。 方法R语言软件分析GEO数据库中鼻咽癌组织的3个数据集，分析其差异基因（DEGs）。低氧是肿瘤微环境基本特征，体外细胞研究均在低氧工作站（1﹪O₂）中进行，以模拟体内低氧微环境。将DNALI1过表达质粒和空载体质粒包装成慢病毒后感染CNE-2z细胞，构建DNALI1基因稳定过表达的CNE-2z细胞株。将CNE-2z细胞分别进行正常培养（空白对照，BC），感染空载体慢病毒（阴性对照，NC）和感染过表达DNALI1慢病毒（过表达DNALI1，DNALI1-OE）。实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）和Western blot检测DNALI1 mRNA和蛋白表达水平；集落形成实验检测细胞增殖能力；Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力；流式细胞术检测细胞凋亡水平。多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。 结果生物信息学分析发现，与健康人鼻咽组织相比，鼻咽癌组织中DNALI1基因低表达。在低氧环境中，BC组与NC组细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭比较，差异均无统计学意义；与BC组和NC组比较，DNALI1-OE组细胞增殖能力和凋亡水平比较，差异均无统计学意义（P均> 0.05）。与BC组和NC组比较，DNALI1-OE组细胞迁移能力[（198.67±3.22），（199.00±3.00）比（75.00±7.55）个]和侵袭能力[（240.67±16.01），（259.67±3.06）比（83.33±9.50）个]降低，差异具有统计学意义（P均< 0.001）。 结论低氧环境中，DNALI1过表达可抑制CNE-2z细胞侵袭与迁移能力，但对细胞增殖、凋亡无明显影响。     

骨髓间充质干细胞对重症急性胰腺炎胰腺组织修复的促进作用研究

目的观察骨髓间充质干细胞（BMSCs）抑制坏死性凋亡促进修复重症急性胰腺炎（SAP）的可能机理。 方法（1）分离、培养和鉴定大鼠BMSCs;（2）构建牛磺胆酸钠（NaT）诱导的SAP大鼠模型,并分成正常组（NC）、假手术组（Sham）、SAP模型组（SAP）、PBS治疗组（PBS）、BMSCs治疗组和Necrostain-1 （Nec-1）治疗组,并检测胰腺病理评分和血淀粉酶水平;（3）运用Western Blot和qRT-PCR方法检测各组受损胰腺组织内RIPK1、RIPK3、Caspase-8、MLKL蛋白及mRNA表达,各组均数间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验。 结果BMSCs可以被诱导分化成骨、软骨、脂肪,并高表达CD44 （99.82﹪）、CD73 （99.87﹪）、CD90 （99.99﹪）、CD105 （99.78﹪）,低表达CD11b （0.65﹪）、CD19 （0.85﹪）、CD34 （0.70﹪）和CD45 （1.20﹪）。SAP组胰腺病理评分（12.90±1.79）及血淀粉酶水平（1052.41±183.12） mU/ ml均高于NC组[评分：0.40±0.52,淀粉酶水平：（236.62±33.21） mU/ ml]和Sham组[评分：0.50±0.53,淀粉酶水平：（242.31±27.94） mU/ ml]（F = 200.275,F = 143.245,P均< 0.001）,且SAP组受损胰腺组织内RIPK1、RIPK3、MLKL表达升高、Caspase-8表达降低（F = 179.905,P < 0.001）;BMSCs组和Nec-1治疗组胰腺病理评分及血淀粉酶水平均低于PBS治疗组[评分：7.20±1.23、7.00±1.05比12.60±1.65,F = 200.275,P < 0.001;淀粉酶水平：（452.21±101.68）mU/ml、（570.18±148.47） mU/ml比（972.77±204.29） mU/ml,F = 143.245,P < 0.001],同时受损胰腺组织内RIPK1、RIPK3、MLKL表达下调、Caspase-8表达升高（F = 179.905,P < 0.001）。 结论BMSCs可能通过抑制坏死性凋亡通路活化来修复SAP。