海洋链霉菌GB-2发酵产物的抗细菌活性及性质研究

从连云港海域潮间带采集的样品中筛选得到一株产高活性抗细菌物质的链霉菌GB-2。该菌的发酵产物对蜡样芽孢杆菌AS1.1846、金黄色葡萄球菌ATCC25923及6株耐药性金黄色葡萄球菌等11 株革兰氏阳性菌,大肠杆菌AS1.487、荧光假单胞菌AS1.1802等4 株革兰氏阴性菌有显著拮抗作用。纸层析对抗细菌物质分析结果表明,菌株GB-2所产抗细菌物质是中性的水溶性物质,其产生与海水的存在有显著相关性。发酵液稳定性研究表明,该物质在121℃,pH1 和pH12条件下抑菌活性均不变;紫外线照射也不影响其抑细菌活性。显示菌株GB-2产物在生防、食品及医药方面潜在的应用价值。     

越南槐内生真菌JXRPH-24的抗菌活性及其鉴定

以2株病原细菌金黄色葡萄球菌ATCC25923和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌临床分离株为靶标菌,采用琼脂块法和改良的微量肉汤稀释法测定越南槐内生真菌JXRPH-24的抗菌活性;根据形态和分子特征鉴定该菌株的分类学地位。结果表明,该菌株的活菌块对金黄色葡萄球菌ATCC25923的抑菌圈直径与阳性对照相当;其代谢产物对这2株病原细菌的最小抑菌浓度均为10μg/mL,仅为阳性对照的16倍;基于形态和ITS序列分析未能鉴定该菌株。菌株JXRPH-24可能是一个潜在的新内生真菌,对参试金黄色葡萄球菌均具有强的抗菌活性,具有较大的开发应用潜力。     

植物乳杆菌CMCC-P0002代谢产物中抑菌物质的研究

目的通过对一株植物乳杆菌代谢产物的抑菌作用以及该产物的某些物理特性的研究,为进一步发现可替代现有抗生素的抗菌物质奠定基础。方法首先利用低温离心和超滤法对植物乳杆菌培养后的上清液进行初步提取,用打孔法行抑菌试验,明确其对铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和金黄色葡萄球菌等临床分离菌株的抑菌活性;并进一步经加热、调整pH及过氧化氢酶等处理上清液后,再验证其活性变化。结果植物乳杆菌的培养上清液对铜绿假单胞菌等多株临床分离菌株均具有一定的抑菌活性,且以pH在6以内时该物质抑菌活性较好,过氧化氢酶处理后或加热至100℃、30min,上清液的抑菌活性依然存在。结论在植物乳杆菌的培养上清液中存在着具有抑菌活性的物质,对从临床标本所分离的部分革兰阴性菌及革兰阳性菌有抑菌作用,该物质对热耐受,其活性受pH变化的影响。     

分离自甘肃天祝五台岭土壤的放线菌拮抗性的初步研究

从甘肃天祝县土壤中分离到的27株放线菌,作为测试放线菌拮抗性的供试茵株.抗菌试验表明,14株放线菌对6株革兰氏阳性菌和阴性菌以及白色念殊菌等指示菌有抗性.菌株WTL-4、WTL-20和WTL-26抗菌谱最广,WTL-4能抗3种革兰氏阳性菌,WTL-20能抗革兰氏阳性的金黄色葡萄球菌和单增李斯特菌、革兰氏阴性的沙门氏菌及真菌白色念殊菌,WTL-26能抗革兰氏阳性的金黄色葡萄球菌和单增李斯特菌及革兰氏阴性的沙门氏菌.抗肿瘤试验表明,有8株菌株对肿瘤细胞有抑制作用,其中抑制率在60%以上的菌株占18.5%.对抗肿瘤活性较高的3株菌WTL-4、WTL-14和WTL-15以及没有抗菌和抗肿瘤活性的菌株WTL-27进行了系统发育分析.从系统发育树可以看出,4株菌均属于链霉菌属(Streptomyces).菌株WTL-4与Streptomyces viridochromoqenes的相似性为98%;菌株WTL-14和WTL-15的相似性达到99.2%,它们与S.flavolimosus 174457的相似性达到99.4%;WTL-27与S.mycroflavus的相似性为99%.     

一株抗MRSA内生细菌的鉴定及其活性物质

根据生理生化特征和16S rDNA序列,对一株从新疆苦豆子Sophora alopecuroides中分离的、对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)具有较强拮抗作用的内生细菌菌株KDNB6进行鉴定;并通过硅胶柱、凝胶柱层析从该菌发酵产物中分离纯化了抗MRSA的活性物质。结果表明菌株KDNB6各项特征与粘质沙雷氏菌Serratia marcescens最为接近,鉴定为S.marcescens。从菌株KDNB6的代谢产物中分离到一个抗MRSA的活性成分。     

从虎皮鹦鹉粪便中分离产细菌素菌株及其细菌素特性分析

从虎皮鹦鹉(Melopsittacus undulatus)的粪便中分离得到一株产广谱细菌素的菌株,其细菌素产物对革兰氏阳性和阴性细菌均有较强抑制作用。经形态学、生理生化反应和16S rDNA分子方法鉴定,该菌株初步鉴定为干酪乳杆菌。用硫酸铵分级沉淀得到的细菌素粗提物,作温度、pH值、蛋白酶的敏感性测定,结果显示该细菌素经100℃处理10 min抑菌活性不变,当pH4.0时,对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌率分别达到99.06%和86.14%,并且对多种蛋白酶表现出敏感性。与Nisin标准品的抑菌效价对比,得到粗提物的效价为204.87 IU/mL。     

动物乳杆菌的分离鉴定及其抑菌蛋白的特性分析

通过滤纸片法从健康肉猪猪大肠、小肠中分离得到212株抗生物质产生菌, 以杯碟法复筛, 得到1株对溶壁微球菌(Micrococcus lysodeikticus)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)等革兰氏阳性菌和大肠杆菌(Escherichia coli)、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)等革兰氏阴性菌以及部分真菌如禾谷镰刀霉(Fusarium graminearum)均有强烈抑制作用的乳酸菌。经形态学、生理生化特征及16S rDNA序列同源性分析等手段鉴定该菌株为动物乳杆菌(Lactobacillus animalis)。排除酸和过氧化氢的干扰后, 该菌株的发酵上清液对指示菌仍有明显抑菌活性; 用蛋白酶处理该菌株的发酵上清液后, 抑菌活性丧失; 发酵液粗提物具有较好的热稳定性(经121°C处理20 min仍有较强抑菌活性)以及较宽的抑菌活性pH值范围(3.5~5.5), 因此初步认为该菌株产生一类具有广谱抑菌活性的类细菌素物质。     

利用“移树养苗”策略挖掘粤蓝链霉菌隐性活性次级代谢产物

利用适当的策略激活粤蓝链霉菌中潜在的隐性次级代谢途径,以期获得新的活性物质。以粤蓝链霉菌突变株DMR1为研究对象,该突变株的主导产物榴菌素的关键生物合成基因gra-orf1-3被敲除,不能产生榴菌素。通过改变营养条件、添加诱导物和热激等方法处理菌株,利用琼脂糖扩散法及TLC-生物显影等方法检测发酵粗提物的抑菌活性。结果显示,突变株DMR1的高氏一号和ISP3培养基发酵粗提物对枯草芽孢杆菌ATCC6633、金黄色葡萄球菌ATCC6538以及耐药的金黄色葡萄球菌ATCC43300和206具有显著抑菌活性;添加3%DMSO诱导后,高氏一号和ISP3培养基的发酵粗提物不仅对上述菌株的抑制活性增强,还具有抑制大肠杆菌ATCC8739、白色念珠菌ATCC10231以及多株耐药菌大肠杆菌和沙门氏菌的活性。粤蓝链霉菌中新发现的活性物质对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌以及酵母菌具有广泛的抗菌活性,且部分发酵粗提物对所有测试的耐药菌均具有显著活性,有可能是新型的抗生素。结果也表明"移树养苗"策略能够提高隐性活性次级代谢产物的挖掘效率。     

一株盐湖芽孢杆菌LG的鉴定及其抗金黄色葡萄球菌活性研究

【目的】从运城盐湖中分离获得一株耐盐细菌LG,对其进行分类鉴定及抗菌特性研究。【方法】利用16S rRNA基因序列分析对菌株进行分类鉴定。以金黄色葡萄球菌为指示菌,采用杯碟法对菌株LG发酵上清液进行抗菌活性检测,利用扫描电镜和透射电镜观察其抗菌效果。研究不同因素对上清液抗菌活性的影响,并采用PCR技术对菌株基因组进行功能基因筛查。【结果】系统发育分析表明该菌为Bacillus属成员,在0–25%的NaCl浓度范围内生长良好,为耐盐细菌。电镜观察发现,菌株LG发酵上清液处理金黄色葡萄球菌可导致细胞结构明显出现异常,细胞质泄漏。抗菌稳定性研究表明,菌株LG发酵上清液活性稳定,表现出了良好的对紫外光、温度、pH和NaCl的耐受性。采用特异性引物,通过PCR筛查发现菌株LG基因组中含有聚酮合酶(PKS I)基因和非核糖体肽合成酶(NRPS)基因,表明该菌具有产多种代谢产物的潜力。【结论】极端环境中的微生物资源可作为抗菌活性物质的潜在新来源。     

湛江沿海潮间带产胞外抗菌活性海洋细菌的分离鉴定及生物多样性分析

从硇洲岛和徐闻珊瑚礁自然保护区潮间带采集海水和沉积物标本,采用纯培养的方法分离其中的海洋细菌;以金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌和大肠埃希菌等为指示菌,以氨苄青霉素、青霉素-链霉素为阳性对照,采用琼脂扩散法筛选抗菌活性菌株;采用基于16S rDNA序列比对及其系统发育分析对分离培养的阳性海洋细菌进行分类鉴定和生物多样性分析;为进一步从海洋细菌资源中发掘新型抗菌药物奠定基础。结果从106株海洋细菌中筛选出了44株抗细菌活性菌株,阳性率为41.5%。其中,11株具有抗金黄色葡萄球菌作用,31株有抗枯草芽孢杆菌作用,13株有抗大肠埃希菌作用。抗菌活性菌株分布于31属,优势属为芽孢杆菌属(Bacillus)和弧菌属(Vibrio)。这表明分离自硇洲岛和徐闻珊瑚礁自然保护区潮间带的海洋细菌中的抗菌活性菌株具有丰富的生物多样性。     

Characterization and Identification of a Novel Marine Streptomyces sp. Produced Antibacterial Substance

Strain GB-2 is a marine microbe with broad-spectrum antimicrobial activity, isolated from soil taken from the coastal city Lianyungang in the JiangSu province of China. Analysis of its morphological, physiological, and biochemical characteristics as well as chemical components of the cell wall strongly suggested that the strain GB-2 belonged to the Streptomyces sp. Analysis of the nucleotide sequence of the 16S rRNA gene of Streptomyces sp. GB-2 strain showed a strong similarity (98%) with the 16 rRNA gene of Streptomyces fradiae. Application to antibacterial substance of strain Streptomyces sp. GB-2 by various separation steps led to isolation of one active molecule having a retention time of 9.495 min, P _9.495 min, which possessed antibacterial activity against Bacillus cereus and Escherichia coli. Through analysis by liquid chromatography–mass spectrometry and mass/mass spectrometry of the peak, the molecular weight of the antibacterial substance (P _9.495 min sample) was 447.5 Da and it was determined to be sisomicin according to the analysis of ion fragments. Nuclear magnetic resonance spectrum of the peak also demonstrated that the antibacterial substance was sisomicin. This study is the first to introduce the finding of sisomicin produced from marine Streptomyces sp. This work provides a preference for the production of sisomicin in pharmaceutical industries and a probability for studying the biodiversity of marine microbe.     

产抑菌物质乳杆菌的筛选及性质的研究

从健康成年人的口腔中筛选出一株产抑菌物质的菌株HO-69,经API系统鉴定为植物乳杆菌。排除酸性末端产物与过氧化氢的影响后,HO-69的发酵上清液对变形链球菌等革兰氏阳性菌、大肠杆菌等革兰氏阴性菌具有抑制作用。抑菌物质经初步提取,推测其分子量在10kDa以下,胰蛋白酶处理后抑菌活性部分损失,100℃水浴加热20min依然保持较高的抑菌活力,显示活性的pH范围是3.0~7.0,活力随pH的降低而增强。     

马尾松毛虫肠道产细菌素细菌的筛选及抑菌特性

【背景】细菌素是一类由细菌产生的抗菌肽活性物质,对多种致病菌有抑制和杀灭作用。昆虫是世界上种类最多、肠道菌群资源最为丰富且多样的动物类群之一。昆虫肠道很可能蕴含着丰富的产细菌素菌种资源。【目的】以马尾松毛虫(Dendrolimus punctatu)幼虫为研究材料,对其肠道细菌进行分离、培养和鉴定,获得对典型致病菌有明显抑制作用的产细菌素细菌,推测其抑菌物质,并对产高活性细菌素细菌的抑菌特性进行研究,进一步丰富产细菌素细菌的资源。【方法】采用传统细菌纯培养方法分离细菌,利用牛津杯法检测抑菌物质活性,结合菌落形态特征及16SrRNA基因序列确定产细菌素细菌种类;进一步排除有机酸和过氧化氢的干扰,初步证实抑菌物质有类蛋白性质。【结果】从马尾松毛虫肠道中筛选得到13株产细菌素细菌,隶属于芽孢杆菌属(Bacillus)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、嗜冷杆菌属(Psychrobacte)和肠杆菌属(Enterobacter)。抑菌实验结果显示:13株产细菌素细菌对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和大肠杆菌(Escherichia coli)两种重要病原指示菌有一定程度的抑制效果,尤其是解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)MW-1产生的细菌素经不同温度和酸碱性处理后仍保持较好的抑菌活性,而且经单因素方差分析发现在pH 7.0和37℃时抑菌活性最佳。【结论】马尾松毛虫肠道内存在多种产细菌素细菌且对重要病原菌有抑制作用。菌株MW-1细菌素具有高效的病原菌抑菌能力,所产细菌素对热和酸碱处理稳定性较好,显示了替代抗生素的应用潜力。     

粤蓝链霉菌代谢产物的抗菌抗肿瘤活性及相关基因的初步研究

粤蓝链霉菌(Streptomyces vietnam ensis)是新近报道的物种,能在多种培养基中产生水溶性紫罗兰蓝色素。本研究发现发酵液乙酸乙酯粗提物对革兰氏阳性细菌有较强的广谱抗菌活性,对部分革兰氏阴性菌也有不同程度的抑制作用,TLC生-物显影试验进一步表明,两个蓝色组分B1、B2是主要的抗菌活性成分;同时,粗提物在20μg/mL的浓度下对HeLa细胞的生长抑制率达96.7%,显示了极强的抗肿瘤活性。利用简并引物扩增PKS/NRPS基因保守区域,获得相关序列4条,其中两条所代表的PKS基因簇有可能是粤蓝链霉菌产生次级代谢产物的重要途径,这些新基因的发现为组合生物合成提供了更多的基因资源。     

昂立植物乳杆菌及其抑菌物质的特性研究

该文研究了昂立植物乳杆菌(LP-Onlly)菌体及其代谢产物的抑菌性能,并对其代谢产物中的抑菌物质进行了部分理化特性的考察,发现LP-Onlly菌体对部分肠道有害菌有抑制作用,代谢产物中的抑菌物质对常见的肠道致病菌和食品腐败微生物具有广谱抑菌作用,对嗜酸乳杆菌及双歧杆菌等益生菌无抑制作用.该物质具有热稳定性,但抑菌活性受pH值的影响较大.     

地衣芽孢杆菌类细菌素的分离、鉴定及其原核表达

目前,我国饲料中全面禁止添加抗生素,寻找新型的抗生素替代物成为科学研究的热点之一。为获得新的细菌素,本研究以大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、藤黄微球菌和单增李斯特氏菌为指示菌,通过牛津杯扩散法从羊驼粪便中筛选到高产抑菌物质的芽孢杆菌。基于菌落特征、革兰氏染色和16S rRNA的鉴定结果,将分离到的产抑菌物质菌株命名为地衣芽孢杆菌SXAU06株。采用硫酸铵沉淀、氯仿抽提、分子截留和SDS-PAGE等技术对所产抑菌物质进行分离纯化,经LC-MS/MS和生物信息学分析发现,抑菌物质为分子量约14 kDa的类细菌素,将其命名为BLIS_SXAU06。耐受性试验结果显示,BLIS_SXAU06具有耐高温、耐酸碱和耐蛋白酶K的特性。利用大肠杆菌表达系统对BLIS_SXAU06进行重组表达,所获得的重组BLIS_SXAU06具有抑制金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、藤黄微球菌和单增李斯特氏菌生长的活性。综上所述,BLIS_SXAU06具有优良的特性,可进一步在农业生产、生物医药和食品加工领域开展研究。     

榕树根际土壤广谱拮抗菌株的筛选、鉴定及特性

于江西省吉安市内一株明万历年间植下的古榕树下,采集根际土样并使用23种指示菌通过管碟法和菌丝生长速率法对土壤内放线菌进行拮抗筛选,最终得到一株传代稳定的广谱拮抗菌株AHF-20.根据对菌株的形态观察、生理生化特性以及分子生物学鉴定,将该拮抗菌株鉴定为链霉菌,并对该菌株的抑菌活性物质进行了研究.结果表明:链霉菌AHF-20的发酵产物对23种测试指示菌全部具有拮抗效果,且抑菌能力稳定性较好,对温度、光照、紫外线、酸碱都有一定的耐受性,于121 ℃下加热20 min后依然存在抑菌活性.根据活性物质的极性使用正丁醇萃取发酵产物,获得的正丁醇粗提物稀释至1 μg·mL^-1后,对大肠杆菌仍有抑制效果,可见具有较好的生防利用潜力和开发成新型微生物药物的可能性.     

Partial purification and characterization of the bacteriocin produced by Lactobacillus acidophilus YIT 0154

One strain of Lactobacillus acidophilus was found to produce a bacteriocin-like substance in the culture filtrate. The substance was produced in a growth-associated manner, showed heat stability at neutral and acidic pH and exhibited antibacterial activity against various species of Lactobacillus including L. acidophilus itself. The molecular weight of the substance was in the range of 6.2-95 kDa. N-terminal amino acid sequence analysis suggests that the substance may belong to class IIb bacteriocin.     

Patterns of antimicrobial activities from soil actinomycetes isolated under different conditions of pH and salinity

AIMS: To evaluate the patterns of the production of antimicrobial compounds by diverse collection of actinomycetes isolated from different geographies under alternative conditions of pH and salinity in the media. METHODS AND RESULTS: Actinomycetes were grouped based on their method of isolation and their phenotype diversity was determined by total fatty acid analysis. A total of 335 representative isolates, including 235 Streptomyces species and 100 actinomycetes from other taxa, were screened for the production of antimicrobial activities against a panel of bacteria, filamentous fungi and yeasts, including some of clinical relevance. Production of antimicrobial activities was detected in 230 strains. In the case of the genus Streptomyces, 181 antimicrobial activities (77% of the tested isolates) were recorded. The activities observed among the other actinomycetes taxa were lower (49% of the tested isolates). CONCLUSIONS: The results of this study support the idea that species of actinomycetes isolated in alternative selective conditions of pH and salinity present a significant capacity to produce compounds with antibacterial or antifungal activity. The best group of isolates in terms of production of active secondary metabolites was the one isolated in saline conditions. SIGNIFICANCE AND IMPACT OF THE STUDY: The results demonstrate that these actinomycetes strains isolated in alternative selective conditions of pH and salinity and collected from diverse geographical locations present a significant capacity to produce compounds with antibacterial or antifungal activity.     

Isolation and Characterization of Two Novel Antibacterial Cyclic Hexapeptides from Streptomyces alboflavus 313

Two novel cyclic hexapeptides, designated NW-G08 (1) and NW-G09 (2), were isolated from the fermentation broth of Streptomyces alboflavus 313. Their structures were elucidated on the basis of extensive spectroscopic analysis, MS experiments, and chemical analysis. Their antibacterial activities against several strains of bacteria were evaluated by micro-broth dilution method. NW-G08 (1) and NW-G09 (2) were highly antibacterial against Gram-positive but not active against Gram-negative bactaria. The minimum inhibitory concentrations (MICs) of 1 against Bacillus cereus, Bacillus subtilis, and Staphylococcus aureus were 6.25, 6.25, and 1.56?μg/ml, respectively. It is worth noting that 1 and 2 exhibited much higher activities against methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) than ampicillin, which implies that they might be potential candidates for the development of novel drugs against resistant pathogenic bacteria.