水痘-带状疱疹病毒Oka株和84-7株基因特征的分析

目的对水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)Oka株和84-7株的部分基因特征进行分析,为建立Oka株和84-7株的鉴别方法提供依据。方法利用PCR技术扩增相关基因,并运用生物信息学软件对水痘-带状疱疹病毒OKa株和84-7株的Pst I酶切位点、抗原蛋白基因序列(ORF14,ORF68)、高突变区域(ORF62)及84-7株复制起点进行序列比较和分析。结果 Oka株酶切位点特征为Pst I-Sma I~+Bss HII~+Nae I~+,84-7株的酶切位点特征为Pst I~+Sma I~-Bss HII~-Nae I~-;Oka株和84-7株ORF14编码的蛋白质同源性为99.8%,3个碱基的差异导致了3个氨基酸的变化,且这两株病毒株的R2可变区的串联重复单位拷贝数均为7;Oka株和84-7株ORF68编码的蛋白质同源性为100%,且存在2个低复杂性区域(LCR);ORF62编码区蛋白质的同源性为99.2%,具有14个低复杂性区域;84-7株复制起点区域包含一个13TA+19GA结构。结论 Oka株和84-7株的同源性很高,但在酶切位点方面存在差异,可用于Oka株和84-7株的鉴别,为今后确立水痘-带状疱疹病毒毒株的鉴别方法提供依据。     

1株临床分离的水痘带状疱疹病毒的生物学特性分析

目的 研究水痘带状疱疹病毒(varicella-herpeszoster virus, VZV)临床分离株WXL株的生物学特性。方法 筛选2BS细胞培养WXL株的最佳条件,对最佳培养条件下WXL株的滴度及糖蛋白E(glycoproteinE,gE)浓度进行检测,并检测所致细胞病变(cytopathic effect,CPE)直径,检测结果与Oka株进行比较。采用透射电子显微镜(transmission electron microscope, TEM)对WXL株进行病毒颗粒形态观察;通过检测其ORF22基因片段的核酸序列,对其进行基因型分型。结果 采用MOI 0.001感染2BS细胞培养WXL株时,其病毒培养液滴度最高。在此培养条件下,WXL株病毒培养液的滴度与Oka株无明显区别,但其gE浓度明显低于Oka株,同时CPE直径明显大于Oka株。WXL株病毒颗粒TEM观察到3种不同的病毒颗粒,其中,完整病毒颗粒直径约200 nm,核衣壳直径约100 nm,并呈六面体形;根据ORF22核酸序列检测结果,WXL株属于基因2型。结论 WXL株具有典型VZV野生毒株的生物学特性。     

一株临床分离的水痘带状疱疹病毒的生物学特性分析

目的研究水痘带状疱疹病毒(varicella-herpes zoster virus,VZV)临床分离株WXL株的生物学特性。方法筛选2BS细胞培养WXL株的最佳条件,对最佳培养条件下WXL株的滴度及糖蛋白E(glycoprotein E,g E)浓度进行检测,并检测所致细胞病变(cytopathic effect,CPE)直径,检测结果与Oka株进行比较。采用透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)对WXL株进行病毒颗粒形态观察;通过检测其ORF22基因片段的核酸序列,对其进行基因型分型。结果采用MOI 0.001感染2BS细胞培养WXL株时,其病毒培养液滴度最高。在此培养条件下,WXL株病毒培养液的滴度与Oka株无明显区别,但其g E浓度明显低于Oka株,同时CPE直径明显大于Oka株。WXL株病毒颗粒TEM观察到3种不同的病毒颗粒,其中,完整病毒颗粒直径约200 nm,核衣壳直径约100 nm,并呈六面体形;根据ORF22核酸序列检测结果,WXL株属于基因2型。结论 WXL株具有典型VZV野生毒株的生物学特性。     

水痘减毒活疫苗的研究进展

水痘是由水痘-带状疱疹病毒( VZV) 引起的一种高传染性疾病。接种疫苗是预防和控制VZV 流行的最有效手段。美国从1995 年开始实施儿童接种水痘疫苗的政策, 显著降低了水痘相关疾病的发病率和病死率。近年来, 水痘疫苗在我国应用越来越广泛。本文就水痘减毒活疫苗Oka 株的研发, 疫苗的有效性、安全性, 病毒减毒的分子生物学特征和免疫策略等方面进行综述, 以期能更全面地认识水痘减毒疫苗在预防和控制VZV 传播方面所起的作用。     

水痘-带状疱疹病毒分离和鉴定

本文报告了用7份水痘或带状疱疹病人的皮肤病变水泡液,在人胚肺二倍体细胞(2BS)中培养传代,分离到7株病毒分离物,第一株是由带状疱疹病例分离到的,经细胞病变、核内包涵体和电镜形态学观察,认为此分离物属于疱疹病毒科成员;经血清学鉴定,证实为水痘-带状疱疹病毒(VZV),其宿主范围与疱疹病毒(HSV)不同,余6株分离物经ELISA、IFA及CF血清学试验鉴定均为VZV。     

冻干水痘活疫苗的研制

Oka株水痘病毒是唯一被WHO椎荐用于生产水痘活疫苗的减毒株,1974年由日本大呢大学微生物病研究会（BIKEN）高桥博士培养成功的【人1996年从BIKEN引进o财株病毒,MRC－5人H倍体细胞在本所进行水造活疫苗研制。1材料与方法1．1细胞株24代MRC－5人H倍体细胞由BIKEN提供1．2病毒株BIKEN提供的Oka病毒减毒株母种子,批号为M2001。1．3水疡病毒标准抗血清BIKEN提供批号OAKK39－4,中和抗体滴度为1：74o000豆．4培养液细胞培养液为9％股牛血清的MEM液,维持液为3％股牛血清MEM液,疫苗液为5％蔗糖,O．5％明胶,0．1％谷氨酸…     

中国六省水痘-带状疱疹病毒糖蛋白基因特征分析

为研究中国水痘-带状疱疹病毒(Varicella Zoster Virus,VZV)gH(Glycoprotein H)、gK(Glycoprotein K)、gI(Glycoprotein I)糖蛋白基因特征,选取2007~2015年在中国六省收集的VZV疑似患者的疱疹液或咽拭子标本,经聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)方法进行阳性鉴定及3个糖蛋白的全基因片段扩增,所得序列与GenBank中已公布的疫苗株及野毒株序列进行比对分析。结果筛选出12份阳性VZV标本,gH、gK、gI与水痘疫苗株核苷酸和氨基酸同源性相比分别为99.8%~100%、99.8%~100%,99.8%~100%、99.6%~100%,99.9%~100%、99.7%~100%;与疫苗株相比在gH、gK、gI糖蛋白基因位点上12份阳性标本分别至少有一个核苷酸差异;与GeneBank中已报告的野毒株相比核苷酸和氨基酸同源性分别为99.6%~100%、99.3%~100%,99.7%~100%、99.3%~100%,99.7%~100%、99.7%~100%。本研究通过分析中国六省VZV糖蛋白gH、gK、gI的基因特征,发现这三个糖蛋白高度保守,抗原性稳定,为了解中国水痘带状疱疹病毒野毒株糖蛋白本底资料,丰富基因数据,从分子水平上为疫苗效果的评估、基因组学的研究提供基础数据。但中国地域辽阔,人口众多,还需每年连续监测并进一步扩大VZV病毒监测的地域。     

建立膜抗原荧光抗体试验评价北京株冻干水痘疫苗免疫效果

为了建立用于水痘疫苗接种后血清中特异性抗体检测的膜抗原荧光抗体(FAMA)法,并对接种水痘疫苗后儿童血清中水痘特异性抗体进行检测,评价北京株水痘疫苗的免疫效果。以水痘带状疱疹病毒(VZV)感染细胞作为抗原制备成固定抗原玻片,以异硫氰酸荧光素(FITC)标记的羊抗人IgG作为二抗建立FAMA法,并对该法的敏感性、特异性进行验证。运用此法对不同剂量北京株水痘疫苗接种后儿童血清中特异性抗体进行检测,分析儿童血清中水痘特异性抗体水平以及免后抗体阳转率,并与Oka株水痘疫苗进行比较。结果显示,FAMA法敏感性可达0.0196IU/ml,特异性好。应用此法检测300名观察者免前免后双份血清样本中抗VZVIgG,易感者中北京株水痘疫苗原苗(39810PFU/0.5ml)、2000PFU/0.5ml、500PFU/0.5ml接种组儿童血清免后抗体阳转率分别为100%、98.77%、85.42%,抗体几何平均滴度(GMT)分别为36.4、34.3、18.6,原苗与2000PFU间的抗体阳转率和GMT均无显著性差异(P>0.05),但原苗与500PFU、2000PFU与500PFU间的抗体阳转率和GMT均有显著性差异(P<0.05)。对照国产、进口Oka株水痘疫苗接种后抗体阳转率分别为95.35%、96.97%,抗体GMT分别为13.3、16.0,不同剂量北京株疫苗抗体阳转率与国产、进口Oka株疫苗相比,差别无显著性(P>0.05),但北京株疫苗原?     

水痘-带状疱疹病毒ORF43蛋白的单克隆抗体制备及初步研究

水痘-带状疱疹病毒(Varicella-zoster virus,VZV)是引起水痘和带状疱疹这两种临床表现不同病症的共同致病原,其基因组中ORF43是VZV在宿主细胞中复制的必需基因,但目前尚无针对VZV ORF43编码蛋白性质与功能的研究报道.本研究目的 是制备抗VZV ORF43单克隆抗体,以初步研究该蛋白在细胞内的表达与分布情况.本研究构建了VZV ORF43蛋白的原核表达质粒并在大肠杆菌中进行了该蛋白的表达,纯化蛋白免疫小鼠后,使用杂交瘤技术及克隆化筛选,获得一株特异性强、反应性好的抗VZV ORF43单克隆抗体2D3.本研究使用该抗体鉴定出VZV ORF43蛋白在质粒转染细胞与病毒感染细胞中表达的分子量大小均约为70kD,但分别呈现出细胞质和细胞核的不同亚细胞定位.以上工作为后续进一步探究该蛋白在VZV感染与致病过程中的作用奠定了基础.     

我国不同基因型水痘-带状疱疹病毒流行毒株gE基因序列分析

为进一步了解我国不同地区流行的水痘—带状疱疹病毒(VZV)病毒株的基因型分布和分析代表性病毒株gE基因序列。于2010年12月至2011年6月期间,收集来自北京市、长春市、拉萨市和乌鲁木齐市4个地区水痘和带状疱疹患者的疱疹液拭子和皮肤痂片,共计18份。用单个核苷酸多态性(SNP)谱的方法确定病毒株的基因型。然后采用聚合酶链反应(PCR)方法扩增gE基因的全长片段,并进行测序分析。SNP分析显示18个病毒株的基因型共为4种,其中有7株属于clade2遗传支,1株属于clade3遗传支,4株为clade5遗传支。另有6株病毒兼有不同遗传支的特征,按照目前国际通用的分型方法不能归属于任何明确的遗传支。对不同病毒株gE基因序列分析,除了发现3个国外已有报道的1个同义突变(T660C)和2个反义突变(C119T、C1606A),还发现了3个新的反义突变(C56T、C1109T和C917A)和4个同义突变(C54T、T1075C、T816C和G279A)。首次在我国新疆自治区发现了clade5遗传支的VZV,在长春市还发现了目前尚未能分型的6株病毒。对部分病毒株gE基因序列分析,在gE的e1和c1抗原表位的编码区内中检出1个新型反义突变(C917A),需要进一步研究该突变对该病毒免疫原性和致病性的影响。     

Mycotoxin production from fungi isolated from grapes

AIMS: In order to assess the potential for producing mycotoxins, fungi were isolated from wine producing grapes. METHODS AND RESULTS: The isolates were identified and Penicillium expansum, the most well recognized mycotoxin producer, was analysed for mycotoxin production by TLC. Many of the strains produced patulin and/or citrinin, often depending on whether they were grown on a grape or yeast extract sucrose media. CONCLUSION: Citrinin was produced by all strains grown in the yeast extract sucrose medium, but only one strain (from 51) was able to produce this compound in grape juice medium. Patulin was produced in the yeast extract medium by 20 strains and in grape juice medium by 33 strains. SIGNIFICANCE AND IMPACT OF THE STUDY: The presence of mycotoxins in wine producing grapes is discussed. Grapes contamination with patulin seems not to contribute to wine contamination, and no ochratoxin producing fungi was identified.     

Diterpenes derived from clerodanes from Pulicaria angustifolia

The investigation of Pulicaria angustifolia afforded, in addition to known triterpenes and caryophyllene epoxide, four methyl esters of diterpenes, all derived from clerodane. Three of them are derivatives of seco-nidoresedic acid. The structures were elucidated by spectroscopic methods.     

Genotyping Echinococcus granulosus from dogs from Western Iran

Cystic echinococcosis is a zoonotic infection caused by the dog tapeworm, Echinococcus granulosus. In the present study, adults of E. granulosus (n = 20) were collected from 71 dogs from Western Iran and were genetically characterized using DNA sequencing of the partial mitochondrial cytochrome c oxidase subunit 1 (cox1) and NADH dehydrogenase 1 (nad1). Consensus sequences were obtained for cox1 (366) and nad1 (471) genes. Phylogenetic analysis of concatenated nad1 and cox1 nucleotide sequence data was performed using Bayesian Inference approach. Overall, the dog isolates indicated nine different sequences in cox1 and seven in nad1 genes. Three genotypes (G1 [75%], G2 [10%] and G3 [15%]) were identified from the isolates. The G2 sequences indicated 100% homology with reference G2 sequence in both cox1 (Genbank accession number M84662) and nad1 (AJ237633) genes. G3 sequences showed 100% homology with G3 reference sequence in nad1 (AJ237633), but displayed two different cox1 profiles, each having 99% homology with reference G3 sequence (M84663). In the phylogenetic tree all of the isolates were grouped into a distinct cluster corresponding to the G1–G3 complex with relevant reference sequences. The presence of G1 genotype (sheep strain) of E. granulosus sensu stricto as dominant genotype in dogs is emphasized. To the best of our knowledge, this study established the first record of E. granulosus sensu stricto, G2 genotype in Iran.